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临 床 肿 瘤 学 杂 志 2011 年 6 月 第 16 卷 第 6 期 ChineseClinicalOncology,Jun.2011,Vol.16,No.6
单 核 细 胞 趋 化 蛋 白 在 肾 盂 尿 路 上 皮 癌
中 的 表 达 及 临 床 意 义
266071 山 东 青 岛 青 岛 市 市 立 医 院 东 院 泌 尿 外 科
白 鑫 , 高 健 刚 1 , 侯 四 川 , 孙 小 庆 , 朱 磊 一
【 摘 要 】 目 的 探 讨 肾 盂 尿 路 上 皮 癌 组 织 单 核 细 胞 趋 化 蛋 白 (MCP1) 及 其 基 因 表 达 情 况 , 以 及 它 们 与 临 床 病 理 特 征
的 相 关 性 。 方 法 收 集 2007 年 1 月 至 2008 年 1 月 肾 盂 尿 路 上 皮 癌 患 者 20 例 , 男 性 12 例 , 女 性 8 例 , 分 别 取 其 血 液 、 癌 及 癌 旁
组 织 标 本 。 同 期 选 取 30 例 非 肿 瘤 患 者 , 男 性 18 例 , 女 性 12 例 , 取 血 液 标 本 。ELISA 方 法 测 定 血 浆 MCP1 含 量 , 免 疫 组 化 法 检
测 组 织 MCP1 的 表 达 。 实 时 荧 光 定 量 PCR 检 测 MCP1RNA 水 平 。 结 果 肾 盂 尿 路 上 皮 癌 患 者 血 浆 MCP1 浓 度 为 (1734±
821)pg/ml, 高 于 非 肿 瘤 患 者 的 (918±346)pg/ml(P

临 床 肿 瘤 学 杂 志 2011 年 6 月 第 16 卷 第 6 期
ChineseClinicalOncology,Jun.2011,Vol.16,No.6
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presionislikelytoplayanimportantroleintheincidenceandmetastasisoftheurothelialcarcinomaofrenalpelvis.
【KeyWords】 Urothelialcarcinomaofrenalpelvis; Monocytechemoatractantprotein; Gene
单 核 细 胞 趋 化 蛋 白 (monocytechemoatractant
protein1,MCP1) 是 一 种 细 胞 趋 化 因 子 , 对 细 胞 间 的
连 接 和 相 互 作 用 具 有 关 键 作 用 [1] 。 近 年 研 究 发 现 ,
一 些 肿 瘤 细 胞 也 可 直 接 分 泌 该 因 子 , 其 作 用 是 诱 导
肿 瘤 血 管 新 生 , 与 肿 瘤 生 长 有 一 定 的 关 系 [2] 。 对 于
尿 路 上 皮 肿 瘤 , 特 别 是 肾 盂 肿 瘤 ,MCP1 表 达 情 况 及
其 与 肿 瘤 的 关 系 仍 不 十 分 清 楚 。 本 研 究 通 过 检 测 肾
盂 尿 路 上 皮 癌 MCP1 的 表 达 情 况 , 分 析 其 与 肿 瘤 发
生 、 发 展 的 相 关 作 用 。
1 资 料 与 方 法
11 一 般 资 料 收 集 2007 年 1 月 至 2008 年 1 月
20 例 经 病 理 组 织 学 确 诊 肾 盂 尿 路 上 皮 癌 患 者 的 血
液 、 癌 组 织 及 癌 旁 组 织 标 本 , 其 中 低 级 别 16 例 , 高 级
别 4 例 ; 男 性 12 例 , 女 性 8 例 ; 年 龄 40~75 岁 , 平 均
67 岁 。 同 期 选 取 非 肿 瘤 对 照 组 30 例 , 其 中 腺 性 膀
胱 炎 5 例 、 前 列 腺 增 生 13 例 、 尿 路 结 石 12 例 ; 男 性
18 例 , 女 性 12 例 ; 年 龄 45~71 岁 , 平 均 63 岁 。 两 组
患 者 在 年 龄 、 性 别 等 方 面 差 异 无 统 计 学 意 义 。 患 者
均 已 签 署 知 情 同 意 书 。 收 集 两 组 血 液 标 本 -20℃ 保
存 , 肾 盂 尿 路 上 皮 癌 组 取 患 者 术 后 新 鲜 癌 组 织 及 癌
旁 组 织 各 约 200mg, 迅 速 置 于 -85℃ 保 存 。
12 主 要 试 剂 人 MCP1ELISA 试 剂 盒 购 自 上 海
晶 美 生 物 工 程 公 司 ,SP 免 疫 组 化 试 剂 盒 购 自 福 州 迈
新 生 物 技 术 公 司 , 鼠 抗 人 MCP1 单 克 隆 抗 体 购 自 北
京 中 杉 生 物 技 术 公 司 ,RTPCR 试 剂 盒 购 自 美 国 Pro
mega 公 司 。
13 MCP1 检 测
131 ELISA 法 检 测 MCP1 取 外 周 静 脉 血 2~
3ml,8000r/min 离 心 15min, 取 血 浆 保 存 在 -70℃ 冰
箱 备 用 。 在 去 RNase 处 理 后 的 净 化 台 取 肾 盂 尿 路
上 皮 癌 组 织 及 其 癌 旁 组 织 各 1mg, 加 入 1ml 冰 磷 酸
盐 缓 冲 液 PBS, 电 动 匀 浆 后 ,4℃ 1500r/min 离 心
10min, 取 上 清 液 500μl。 用 双 抗 夹 心 ELISA 法 测 定
外 周 血 浆 和 组 织 的 MCP1 浓 度 。
132 SP 法 检 测 MCP1 表 达 及 判 定 一 抗 为 鼠 抗
人 上 皮 性 钙 粘 连 素 单 克 隆 抗 体 , 二 抗 为 生 物 素 标 记
的 羊 抗 鼠 IgG, 三 抗 为 链 霉 亲 和 素 过 氧 化 物 酶 混 合
液 。 结 果 判 定 参 照 文 献 [3], 以 细 胞 浆 或 胞 核 有 明
确 棕 黄 或 棕 褐 色 着 色 为 阳 性 细 胞 。 判 定 标 准 :50% 靶 细 胞 中 等 程 度 着
色 或 >5% 靶 细 胞 呈 深 棕 色 着 色 为 (++)。
14 组 织 MCP1RNA 测 定
141 组 织 总 RNA 制 备 精 确 称 取 肾 盂 尿 路 上 皮
癌 组 织 和 癌 旁 组 织 , 置 于 经 DEPC 水 处 理 去 除 核 糖
核 酸 酶 的 匀 浆 器 中 , 立 即 加 入 Trizol 抽 提 试 剂 , 按 快
速 抽 提 法 制 备 总 RNA。 用 紫 外 分 光 光 度 计 (Beck
man64) 测 A 260 及 A 280 的 吸 光 值 (A), 确 定 RNA 浓
度 。RNA 浓 度 =(A 260 -A 320 )× 稀 释 倍 数 ×004
μg/μl, 换 算 出 肾 组 织 中 总 RNA 浓 度 。
142 实 时 荧 光 定 量 PCR 检 测 MCP1 引 物 和
TaqmanMGB 探 针 参 照 文 献 [4], 由 鼎 安 生 物 生 物 科
技 合 成 与 修 饰 。MCP1 上 游 引 物 :5’TCTGTGCCTG
CTCATCG3’, 下 游 引 物 :5’GATTCTTGGGTTGTGG
AGTGA3’;Oligo(dT) 荧 光 探 针 MCP1:5’FAM TG
CCGCCCTTCTGTGCCTGC3’ (LOCUS:NM00298
2);βactin:TTCCAGCCTTCCTTCCTGGTTGCGCT
C。 应 用 TaqMan 一 步 法 RTPCR 试 剂 盒 。1μgRNA
与 Oligo(dT) 引 物 混 合 ,70℃ 2min, 加 入 TaqMan
MasterMix42℃1h。 荧 光 定 量 PCR 在 PE5700 聚 合
酶 链 反 应 荧 光 定 量 检 测 仪 上 进 行 ; 反 应 体 积 为
25μl, 包 括 05μlcDNA 样 本 、1×buferA(50mmol/L
TrisHClpH83,10mmol/LEDTA,60nmol/Lpasive
reference1)、200μmol/LdNTPs、3~9mmol/LMgCl 2 、
100~900nmol/L 的 各 种 引 物 、100nmol/L 的 Taq
manMGB 探 针 ,Taq 酶 为 25U。PCR 反 应 条 件 :
94℃ 10min, 然 后 35 次 双 温 循 环 (94℃ 15s,60℃
1min)。60℃ 延 伸 时 采 集 荧 光 信 号 , 检 测 结 果 根 据
标 准 曲 线 由 计 算 机 软 件 自 动 计 算 。 见 图 1。
15 统 计 学 分 析 应 用 SPSS115 软 件 处 理 数 据 ,
组 间 计 量 资 料 采 用 t 检 验 , 计 数 资 料 采 用 χ 2 检 验 比
较 。 以 P

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临 床 肿 瘤 学 杂 志 2011 年 6 月 第 16 卷 第 6 期 ChineseClinicalOncology,Jun.2011,Vol.16,No.6
图 1 MCP1 荧 光 定 量 PCR 的 标 准 曲 线
盂 尿 路 上 皮 癌 组 中 高 级 别 者 MCP1 浓 度 为 (2541
±1258)pg/ml, 高 于 低 级 别 者 的 (1513±795)
pg/ml。
22 肾 盂 尿 路 上 皮 癌 组 织 MCP1 的 表 达 肾 盂 尿
路 上 皮 癌 组 织 中 MCP1 阳 性 表 达 率 为 900%(18/
20), 癌 旁 组 织 为 650%(13/20), 两 者 差 异 有 统 计
学 意 义 (P

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映 肿 瘤 细 胞 远 处 转 移 的 能 力 。
MCP1 有 促 炎 性 反 应 作 用 ,MCP1 吸 引 的 巨 噬
细 胞 是 血 管 生 成 因 子 ( 包 括 血 管 内 皮 生 长 因 子 在
[9]
内 ) 的 有 力 来 源 。Kuroda 等 将 人 类 MCP1 基 因 克
隆 到 BCMGSNeo 表 达 载 体 , 再 转 导 人 类 胃 癌 TMK1
细 胞 株 发 现 ,MCP1 转 染 子 可 诱 导 肿 瘤 生 长 , 增 强 致
肿 瘤 性 , 促 进 淋 巴 转 移 和 腹 水 产 生 , 同 时 观 察 到 肿 瘤
及 周 围 组 织 有 大 量 巨 噬 细 胞 浸 润 ,MCP1 转 染 子 产
生 的 肿 瘤 微 血 管 密 度 明 显 增 高 。 由 此 可 见 MCP1
可 能 参 与 巨 噬 细 胞 聚 集 , 促 进 血 管 发 生 和 肿 瘤 发
展 [10] 。 另 外 , 有 文 献 报 道 MCP1 促 进 血 管 新 生 存
在 直 接 途 径 , 即 MCP1 可 以 直 接 作 用 于 内 皮 细 胞 上
的 特 异 性 受 体 CCR2 [11] , 促 进 血 管 新 生 。MCP1 在
肾 盂 肿 瘤 中 可 能 也 通 过 此 途 径 发 挥 作 用 , 具 体 机 制
有 待 进 一 步 探 讨 。
本 研 究 结 果 提 示 , 高 级 别 肾 盂 尿 路 上 皮 癌 患 者
的 血 浆 MCP1 水 平 、 组 织 中 MCP1 阳 性 表 达 率 均 高
于 低 级 别 肾 盂 尿 路 上 皮 癌 患 者 , 提 示 肿 瘤 的 分 化 程
度 可 能 与 MCP1 表 达 差 异 有 关 。 目 前 对 肿 瘤 转 移
过 程 的 认 识 , 包 括 癌 细 胞 转 移 潜 能 获 得 、 无 序 增 殖 、
细 胞 外 基 质 破 坏 、 侵 入 血 液 循 环 、 逃 避 免 疫 杀 伤 、 靶
组 织 粘 附 、 诱 导 新 生 血 管 生 成 、 存 活 与 增 殖 等 多 个 环
节 。 有 研 究 表 明 ,MCP1 一 方 面 通 过 趋 化 肿 瘤 相 关
巨 噬 细 胞 (tumorasociatedmacrophages,TAMs) 进 入
肿 瘤 组 织 , 分 泌 VEGF、TGFβ、TNFα 等 细 胞 因 子 ,
促 进 肿 瘤 细 胞 生 长 与 血 管 生 成 , 同 时 还 分 泌 基 质 金
属 蛋 白 酶 MMP2、MMP9, 参 与 细 胞 外 基 质 破 坏 与
重 构 , 促 进 肿 瘤 细 胞 侵 袭 和 转 移 [12] 。 本 实 验 对
MCP1 与 肾 盂 尿 路 上 皮 肿 瘤 的 临 床 病 理 资 料 进 行 相
关 性 统 计 , 发 现 MCP1 与 肿 瘤 发 生 、 分 化 程 度 等 有
相 关 性 , 而 对 MCPl 在 肾 盂 尿 路 上 皮 肿 瘤 中 的 详 细
机 制 及 能 否 作 为 控 制 肿 瘤 生 长 的 靶 点 , 还 需 进 行 更
深 入 的 研 究 。
参 考 文 献
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收 稿 日 期 :2010-12-10; 修 回 日 期 :2011-02-09