Report Centro 2005 - Centro Regionale Veneto Fibrosi Cistica
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<strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> - Regione <strong>Veneto</strong><br />
REPORT DELLE ATTIVITA’ <strong>2005</strong><br />
PROGRAMMA 2006<br />
Relazione annuale delle attività a cura di<br />
BM. Assael, direttore del <strong>Centro</strong><br />
P. Iansa, Servizio Informatica<br />
Questo testo è pubblico e i dati riportati possono essere citati come appartenenti al<br />
Database Cfcverona, <strong>2005</strong>.<br />
Il contenuto è accessibile e scaricabile attraverso il sito web www.cfcverona.it<br />
Non sono disponibili versioni cartacee oltre a quelle direttamente inviate dal <strong>Centro</strong>.<br />
1
INDICE<br />
INTRODUZIONE E STRATEGIE DI SVILUPPO DEL CENTRO FIBROSI CISTICA DI<br />
VERONA...................................................................................................................................................... 3<br />
STRUTTURA ORGANIZZATIVA E ORGANIGRAMMA.................................................................. 4<br />
DATI STATISTICI GENERALI DEL CENTRO................................................................................. 5<br />
Distribuzione dei pazienti per caratteristiche demografiche................................................... 5<br />
Distribuzione dei pazienti per caratteristiche cliniche .............................................................. 7<br />
SERVIZIO INFORMATICA................................................................................................................... 8<br />
STRUTTURA FUNZIONALE SEMPLICE DI PEDIATRIA.............................................................11<br />
ATTIVITA’ DI TRAPIANTO D’ORGANO......................................................................................... 12<br />
PROGETTI DI COLLABORAZIONE INTERNAZIONALE............................................................ 13<br />
Rotterdam ............................................................................................................................................ 13<br />
Sidney.................................................................................................................................................... 13<br />
Minneaplis-Toronto-Londra .............................................................................................................. 13<br />
Toronto-Chappel Hill.......................................................................................................................... 13<br />
CENTRO ITALIANO PER LA DIAGNOSI DI FORME ATIPICHE DI FIBROSI CISTICA .13<br />
SERVIZIO DI GASTROENETROLOGIA .......................................................................................... 14<br />
Progetti 2006 ...................................................................................................................................... 15<br />
TEAM NUTRIZIONALE PEDIATRICO DELL’ AZIENDA OSPEDALIERA .................................................... 15<br />
SERVIZIO SOCIALE............................................................................................................................. 15<br />
Progetti 2006 ...................................................................................................................................... 16<br />
SERVIZIO DI PSICOLOGIA CLINICA ............................................................................................ 19<br />
Progetti 2006 ......................................................................................................................................20<br />
SERVIZIO CONSULENZA GENETICA............................................................................................. 21<br />
Attività di ricerca legata alla consulenza genetica..................................................................... 21<br />
Progetti 2006 ......................................................................................................................................22<br />
PROGETTI COLLABORATIVI INTERNAZIONALI E ATTIVITA’ NELL’AMBITO DI<br />
SOCIETA’ INTERNAZIONALI ..........................................................................................................22<br />
CF aging group .....................................................................................................................................22<br />
ECFS Neonatal Screening Working Group....................................................................................22<br />
Ruolo della risonanza magnetica nucleare nell’imaging del polmone ........................................23<br />
LABORATORIO DI PATOLOGIA MOLECOLARE...........................................................................23<br />
Attività di diagnostica genetico-molecolare. ...............................................................................23<br />
Progetti di ricerca..............................................................................................................................24<br />
2
INTRODUZIONE E STRATEGIE DI SVILUPPO DEL CENTRO<br />
FIBROSI CISTICA DI VERONA<br />
Nel corso del <strong>2005</strong> il <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> di Verona si è confermato <strong>Centro</strong> di<br />
riferimento nazionale per la <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> proseguendo l’aumento della casistica,<br />
anche per pazienti provenienti da fuori regione. Il <strong>Centro</strong> si propone di continuare a<br />
rappresentare un programma avanzato di assistenza per i pazienti italiani e di<br />
rafforzare, con programmi collaborativi, la propria collocazione a livello internazionale.<br />
Il prossimo anno sarà quello della ristrutturazione del <strong>Centro</strong> che prevede:<br />
• Completo rifacimento del settore delle degenze con stanze singole dotate, tutte,<br />
di servizi<br />
• Creazione di un’area pediatrica autonoma per ricoveri e ambulatori<br />
• Spostamento del laboratorio di Patologia Molecolare nel Laboratorio Centrale<br />
dell’Ospedale<br />
• Ristrutturazione e ammodernamento della rete informatica<br />
Il rinnovamento logistico permetterà di sostenere importanti innovazioni dal punto di<br />
vista sanitario e scientifico. In particolare gli obiettivi sono:<br />
• Rafforzamento della struttura assistenziale al bambino con programmi autonomi di<br />
ricerca clinica<br />
• Sviluppo di un processo di screening-patologia molecolare-genetica a cavallo fra<br />
diverse Unità Operative nell’ambito dell’Azienda Ospedaliera<br />
• Miglioramento delle modalità di follow-up dei pazienti ambulatoriali con il<br />
potenziamento dell’informatica<br />
• Creazione di un <strong>Centro</strong> per la diagnosi delle forme atipiche<br />
• Creazione e sviluppo di un <strong>Centro</strong> per la ricerca clinica in <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong><br />
• Creazione di due nuove aree assistenziali:<br />
- Paziente adolescente<br />
- Ambulatorio nutrizionale/metabolico per pazienti diabetici, con<br />
problemi nutrizionali o con osteoporosi<br />
Progetto di particolare importanza è quello della creazione di un <strong>Centro</strong> per la diagnosi<br />
di forme atipiche che si baserà su una sinergia fra diagnostica molecolare e<br />
introduzione di nuove forme di diagnostica elettrofisiologia di cui il nostro <strong>Centro</strong><br />
sarà dotato nei primi mesi del 2006. Questo progetto permetterà di inserire il <strong>Centro</strong><br />
di Verona in una rete di Centri europei e mondiali in grado di valutare l’efficacia a<br />
livello clinico di nuove terapie. Il progetto viene presentato in maggior dettaglio<br />
separatamente. Strategicamente, questo dovrebbe rappresentare il nucleo di un<br />
programma di ricerca clinica di interfaccia fra ricerca di base e sviluppo di protocolli<br />
di fase 2-3 nel paziente per ora molto carenti in Europa.<br />
3
La necessità di un <strong>Centro</strong> simile è sottolineata dal fatto che la ricerca di base si<br />
appresta a rendere disponibili vari farmaci di nuova concezione in grado di attivare o<br />
potenziare la proteina CFTR. Parallelamente, sono disponibili nuovi antibiotici e nuovi<br />
farmaci antinfiammatori con potenziale uso nella <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>. Manca, tuttavia, una<br />
corrispondente capacità dei Centri <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> europei di reclutare pazienti e di<br />
sviluppare ricerca clinica. Ciò rende difficili e prolunga notevolmente gli studi clinici.<br />
Negli Stati Uniti la Cystic <strong>Fibrosi</strong>s Foundation ha promosso la creazione di una rete di<br />
Centri Clinici per la sperimentazione sul paziente di nuovi farmaci. A livello europeo,<br />
malgrado l’interesse dimostrato da alcuni Centri, la situazione resta particolarmente<br />
critica e carente. Con questo nuovo progetto, il nostro <strong>Centro</strong> potrà entrare a far<br />
parte di una rete di Centri per la sperimentazione clinica, avendo a disposizione tutti<br />
gli strumenti, dalla diagnostica molecolare alle strumentazioni elettrofisiologiche e<br />
radiologiche, per monitorare l’effetto di terapie.<br />
STRUTTURA ORGANIZZATIVA E ORGANIGRAMMA<br />
Cogliendo la richiesta dell’Azienda Ospedaliera di Verona, il <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> ha<br />
adeguato la propria struttura organizzativa con l’istituzione di una Struttura Semplice<br />
Funzionale, affidata al dott. D’Orazio per il settore pediatrico e di due posizioni di<br />
alta specialità, assegnate a Marco Cipolli e Carlo Castellani per il programma di followup<br />
dei pazienti ambulatoriali e per la genetica.<br />
L’organigramma del <strong>Centro</strong> viene così modificato rispetto agli anni precedenti ed è<br />
riportato nella Figura 1.<br />
Figura 1. Organigramma del <strong>Centro</strong><br />
4
Le scelte organizzative pregnanti degli anni scorsi sono state ulteriormente sostenute<br />
nel corso di quest’anno e possono così essere riassunte:<br />
• Continuità assistenziale e separazione di un ambulatorio pediatrico 0-15 anni con la<br />
creazione di una Struttura Semplice Funzionale<br />
• Sviluppo e sostegno del programma di trapianto polmonare<br />
• Sviluppo di poli esterni - Servizio di Treviso<br />
• Consulenza a distanza – Collaborazione con il Servizio Di Supporto di Cerignola<br />
DATI STATISTICI GENERALI DEL CENTRO<br />
Distribuzione dei pazienti per caratteristiche demografiche<br />
La casistica di pazienti seguiti dal <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> di Verona è in costante<br />
aumento, proseguendo lo storico andamento in crescita. Stazionario il numero di<br />
pazienti da fuori Regione. Tuttavia, per un accordo con il Servizio di supporto di<br />
Cerignola, il nostro <strong>Centro</strong> fornisce una consulenza a distanza, arrivando a ridurre<br />
sostanzialmente il numero di pazienti provenienti dalla Puglia.<br />
Aumenta sostanzialmente il numero di pazienti adulti e vi è un aumento di pazienti di<br />
oltre 30 anni di età che complessivamente superano il 25% della casistica (Fig. 2).<br />
Figura 2 - Distribuzione per gruppi di età dei pazienti seguiti dal <strong>Centro</strong><br />
5
Figura 3 - Affluenza dei pazienti per Regione di provenienza<br />
Fig. 4 - Distribuzione percentuale dei pazienti provenienti da altre Regioni<br />
6
Fig.5 - Nuove diagnosi di pazienti veneti per anno dal 1990 al <strong>2005</strong><br />
Distribuzione dei pazienti per caratteristiche cliniche<br />
La Figura 6 mostra la distribuzione percentuale dei pazienti per gravità funzionale. A<br />
partire dal periodo 1995-2000 si assiste a una caduta tendenziale del numero di<br />
pazienti con funzione respiratoria più compromessa.<br />
Fig.6 – Distribuzione percentuale pazienti per gravità funzionale. Anni 1990-<strong>2005</strong><br />
7
SERVIZIO INFORMATICA<br />
L’informatizzazione al <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> è un aspetto essenziale del <strong>Centro</strong> per la<br />
gestione organizzativa, l’assistenza al malato e l’elaborazione di dati clinici ed<br />
epidemiologici. Il sistema informativo del <strong>Centro</strong> viene perciò arricchito ogni anno con<br />
nuove procedure software e acquisizione o aggiornamenti hardware.<br />
Nel corso del <strong>2005</strong> si è reso operativo il programma di cartella clinica elettronica<br />
CAMILLA e a tale scopo è stato effettuato un lavoro accurato di aggiornamento e<br />
sostituzione dei PC del <strong>Centro</strong> e di manutenzione della rete informatica.<br />
La nuova cartella clinica è pratica e versatile nell’utilizzo e permetterà di<br />
implementare nuove utili funzionalità per le pratiche amministrative del paziente,<br />
come la possibilità di inviare i fax per le farmacia tramite il PC e le lettere di<br />
dimissione via e-mail.<br />
Progetti informatici 2006<br />
1. Collegamento telematico con gli Ambulatori di supporto di Treviso e Trento per la<br />
condivisione della cartella clinica informatizzata<br />
2. Ristrutturazione della rete informatica del <strong>Centro</strong><br />
3. Acquisizione delle radiografia on-line dall’UO Radiologia e potenziamento delle<br />
macchine poste negli ambulatori e in biblioteca<br />
4. Upgrade software statistici<br />
5. Rinnovo parco macchine <strong>Centro</strong><br />
6. Acquisizione referti di laboratorio on-line<br />
7. Implementazione CAMILLA per invio fax alle farmacie di riferimento tramite PC e<br />
lettera di dimissione tramite e-mail<br />
8. Inserimento degli articoli di Bibliografia del <strong>Centro</strong> (articoli sulla malattia raccolti<br />
negli ultimi 20 anni) su supporto informatico (CD)<br />
9. Ricerca epidemiologico-statistica e informatica.<br />
Condivisione cartella clinica informatizzata tra gli Ambulatori di supporto di<br />
Treviso e Trento<br />
Per migliorare il servizio al Paziente è stato concordata la disponibilità di un<br />
ambulatorio all’interno del Presidio Ospedaliero di Treviso cui gli utenti possono<br />
rivolgersi in caso di necessità. Poiché gli stessi pazienti possono afferire<br />
indistintamente sia a Treviso che a Verona si rende necessaria la condivisione dello<br />
strumento di lavoro utilizzato dal <strong>Centro</strong> da ben 15 anni: la cartella clinica elettronica<br />
che raccoglie i dati del paziente e gestisce tutta la parte clinico-amministrativa,<br />
dall’invio della lettera di dimissione, alla spedizione dei fax alle farmacie di<br />
riferimento, ai futuri appuntamenti.<br />
Il progetto è stato approvato nel corso del <strong>2005</strong>, ma crediamo sia operativo all’inizio<br />
del 2006. In seguito tale sistema potrà essere utilizzato da qualsiasi ambulatorio<br />
decentrato. Sono necessarie a tale progetto alcune modifiche strutturali della<br />
8
cartella clinica, oltre all’intervento del Sistema Informativo aziendale per il<br />
collegamento tra Verona e Treviso.<br />
Ristrutturazione della rete informatica del <strong>Centro</strong>. Acquisizione lastre rx<br />
on-line dall’UO Radiologia e potenziamento delle macchine poste negli<br />
ambulatori e in Biblioteca<br />
La rete informatica del <strong>Centro</strong> risale al 1990 circa e ormai non offre più le necessarie<br />
garanzie di affidabilità e soprattutto riparabilità.<br />
La ristrutturazione della rete sarà dunque l’obiettivo principale del 2006 e sarà in<br />
parte sostenuta dall’Azienda anche perché da questo dipende l’acquisizione delle<br />
lastre on-line, servizio che faciliterà il medico e tutti gli operatori del <strong>Centro</strong>,<br />
riducendo notevolmente i tempi di visione dei referti.<br />
È importante che nelle aree operative (ambulatori di DH, per cominciare), siano<br />
presenti monitor a buona risoluzione e PC di media potenza. Per avere una buona<br />
visione, al momento riteniamo opportuno proporre semplici monitor LCD, a 20” di<br />
grandezza, collegati a PC di media potenza. Un unico monitor medicale per quanto con<br />
prestazioni limitate sarà posto in Biblioteca per valutare casi che necessitino di un<br />
controllo più accurato.<br />
Upgrade software statistici<br />
• Presso il <strong>Centro</strong> vengono utilizzati da anni i software di analisi statistica<br />
SigmaPlot e SigmaStat. La versione attuale dei software è ormai incompatibile<br />
con i nuovi sistemi operativi dei nuovi PC ed è necessario un aggiornamento.<br />
• Il programma Banca DNA viene utilizzato da circa 10 anni dal Laboratorio di<br />
Patologia Molecolare per archiviare i test genetici. Esso è stato creato con una<br />
vecchia versione di Paradox, non più compatibile con gli standard attuali (SO<br />
Windows 2000): per questo motivo è necessario aggiornarlo. Si prevede una<br />
nuova versione con Access 2000, standard in uso presso il Servizio Informatica<br />
del <strong>Centro</strong>, quindi facilmente aggiornabile e riparabile.<br />
Rinnovo parco macchine del <strong>Centro</strong> secondo le tempistiche aziendali<br />
Nel corso del <strong>2005</strong> è stata fatta richiesta all’Azienda Ospedaliera di sostituire alcuni<br />
PC (10 ca) ormai obsoleti (risalgono al 1997). È stato garantito l’arrivo di 10 macchine.<br />
Acquisizione referti di laboratorio on-line<br />
Dovremo affrontare questo impegno con il Servizio Sistemi Informativi aziendale<br />
all’inizio del 2006.<br />
9
Implementazione CAMILLA per invio fax alle farmacie di riferimento<br />
tramite PC e lettera di dimissione tramite e-mail<br />
Configurando opportunamente il software Camilla è possibile inviare le lettere di<br />
dimissione tramite e-mail e i fax alle farmacie di riferimento.<br />
Nel 2006 si implementerà questo processo di semplificazione dell’invio dei documenti,<br />
al fine di ottimizzare il lavoro di segreteria.<br />
Inserimento degli articoli di Bibliografia del <strong>Centro</strong> (articoli sulla malattia<br />
raccolti negli ultimi 20 anni) su supporto informatico (CD)<br />
Il progetto ha lo scopo di inserire in un CD tutta la Bibliografia del <strong>Centro</strong> dall’inizio<br />
ad oggi (21000 articoli specialistici sulla <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> e patologie affini). Tramite un<br />
database di archiviazione degli articoli, che permetta una ricerca parametrizzata dei<br />
singoli titoli, sarà possibile la lettura e la stampa degli articoli full text in<br />
formato .pdf direttamente dal CD stesso. Questa operazione permetterà di eliminare<br />
tutto il cartaceo ora archiviato nella biblioteca del <strong>Centro</strong>, e di offrire un servizio<br />
pratico, veloce e all’avanguardia a chi avesse necessità di consultare gli articoli<br />
raccolti dal <strong>Centro</strong> nel corso degli ultimi 20 anni.<br />
Per tale progetto è necessaria la creazione di un database ad hoc e la possibilità di<br />
caricarlo su un supporto CD autoinstallante. Gli articoli cartacei saranno convertiti in<br />
formato pdf, dopo scannerizzazione e collegati al DB su supporto CD.<br />
Ricerca epidemiologico-statistica e informatica<br />
Il DB del <strong>Centro</strong> viene usato per ricerche epidemiologico-statistiche e sono<br />
periodicamente create procedure informatiche utilizzate nel lavoro quotidiano dagli<br />
operatori del <strong>Centro</strong>.<br />
Sono in corso le seguenti ricerche epidemiologiche collaborative<br />
• Fattori che influenzano la sopravvivenza dei pazienti con FC. Collaborazione con<br />
Professoressa Valsecchi (Monza)<br />
• Aging Group Internazionale. Epidemiologia dei pazienti FC che hanno superato i<br />
40 anni di vita (Collaborazione con i Centri Adulti di Toronto, Minneapolis,<br />
Londra)<br />
• Registro italiano FC. Vengono periodicamente inviati i dati richiesti dal registro<br />
• Registro Europeo FC. Il nostro <strong>Centro</strong> si è proposto come <strong>Centro</strong> collaborativo<br />
italiano indipendentemente dal Registro italiano<br />
• Ricerca collaborativa italiana sulle diagnosi FC in età adulta (Collaborazione con<br />
dottoressa Bossi, Milano e dottoressa Padoan, Brescia)<br />
• Ricerca collaborativa sull’voluzione della funzione epatica in pazienti trattati<br />
con ac ursodeossicolico (Collaborazione con Professoressa Colombo, Milano)<br />
• Ricerca collaborativa sull’accrescimento somatico in pazienti con FC<br />
(Collaborazione con Prof. Milani, Istituto di Statistica Milano)<br />
10
• Ricerca collaborativa sull’evoluzione dell’epatopatia in pazienti con FC<br />
(Responsabile Dott Cipolli, collaborazione con il <strong>Centro</strong> FC di Sidney, dott<br />
Gaskin)<br />
STRUTTURA FUNZIONALE SEMPLICE DI PEDIATRIA<br />
Responsabile dott. Ciro D’Orazio<br />
La creazione di una struttura dedicata al paziente pediatrico rappresenta una scelta<br />
strategica degli ultimi anni.<br />
Il bambino con fibrosi cistica viene seguito da una équipe dedicata con esperienza in<br />
campo pediatrico.<br />
Obiettivi principali<br />
• Garantire al bambino e alla famiglia un’assistenza continuativa<br />
• Garantire una segregazione stretta dei casi con infezione da Pseudomonas<br />
• Mettere in atto programmi di eradicazione delle prime infezioni da<br />
Pseudomonas aeruginosa<br />
• Controllare in maniera costante l’insorgenza di infezioni e di complicanze<br />
precoci della malattia<br />
• Sviluppare metodi per la individuazione precoce dei casi a rischio,<br />
• Sviluppare un programma di trapianto polmonare pediatrico.<br />
I dati riportati nella Figura 7 mostrano che il numero di bambini a cui viene garantita<br />
una continuità assistenziale da parte dell’équipe è in costante aumento.<br />
La percentuale di pazienti non affetti da Pseudomonas aeruginosa è in continuo<br />
aumento, e questo deve essere considerato un importante successo del programma<br />
(Figura 8).<br />
Fig.7 – Numerosità pazienti pediatrici. Anni 2002-<strong>2005</strong><br />
11
Fig.8 – Riscontri di Pseudomonas aeruginosa nei pazienti pediatrici. Anni 2002-<strong>2005</strong><br />
ATTIVITA’ DI TRAPIANTO D’ORGANO<br />
Responsabile dott.ssa Marisol Barao Ocampo<br />
Il <strong>Centro</strong> FC di Verona pone fra le sue massime priorità la collaborazione con Centri di<br />
trapianto. I pazienti vengono orientati nella scelta del <strong>Centro</strong> trapianti e viene dato un<br />
pieno supporto sia nella fase pre-trapianto che post-trapianto (Tab. I).<br />
Il <strong>Centro</strong> di Verona è prevalentemente collegato ai Centri chirurgici di Padova (Prof.<br />
Rea), Bergamo (Dott. Colledan), Pavia (Dott. D’Armini), ma si prospettano<br />
collaborazioni con l’ISMET di Palermo e con Centri Trapianto all’estero.<br />
Tabella I. Attività di trapianto polmonare effettuata dal <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> negli anni 1999-<strong>2005</strong><br />
<strong>Centro</strong> <strong>Regionale</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> Verona-Attività trapianto polmonare 1999-<strong>2005</strong><br />
Anno Inseriti in lista Trapiantati<br />
Polm. CF Polm. Non CF Feg/ feg-polm<br />
1999 10 - - 5<br />
2000 14 1 1 fegato 7<br />
2001 8 - 2 fegato-polmone 10 polmone + 1 fegato<br />
2002 4 1 - 4 polmone + 1 fegato-polmone<br />
2003 8 - - 5<br />
2004 12 1 fegato-polmone 3<br />
<strong>2005</strong> 14 11<br />
TOTALE 70 2 4 46<br />
12
PROGETTI DI COLLABORAZIONE INTERNAZIONALE<br />
Il <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> di Verona è fortemente orientato alla collaborazione con<br />
Centri di livello mondiale ed è attualmente impegnato in programmi collaborativi con i<br />
seguenti Centri.<br />
Rotterdam<br />
Sviluppo della diagnostica per immagini nella <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> (tomografia ad alta<br />
risoluzione- Risonanza magnetica nucleare) Questo progetto prevede la presenza di<br />
uno specializzando in radiologia di Verona a Rotterdam per un anno.<br />
Sidney<br />
Collaborazione con K. Gaskin sull’evoluzione della malattia epatica.<br />
Minneaplis-Toronto-Londra<br />
Studio multicentrico sui pazienti di oltre 40 anni per descriverne le caratteristiche e<br />
ricercare i fattori che favoriscono la longevità nella <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>.<br />
Toronto-Chappel Hill<br />
È stata richiesta la collaborazione del nostro <strong>Centro</strong> per un allargamento dello studio<br />
internazionale sui geni modificatori.<br />
CENTRO ITALIANO PER LA DIAGNOSI DI FORME ATIPICHE DI<br />
FIBROSI CISTICA<br />
Responsabili Paola Melotti e Carlo Castellani<br />
L’ aumento progressivo del numero di mutazioni ricercate insieme alla disponibilità di<br />
nuove tecniche diagnostiche ha considerevolmente ampliato lo spettro clinico della<br />
<strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> (FC), consentendo di identificare un numero non trascurabile di forme<br />
atipiche o monosintomatiche. Queste risultano spesso caratterizzate da espressione<br />
clinica respiratoria modesta, sufficienza pancreatica e concentrazioni di elettroliti nel<br />
sudore normali o comunque non francamente patologici.<br />
Tre esempi di queste forme sono l’atresia congenita dei dotti deferenti, le pancreatiti<br />
croniche ed acute ricorrenti idiopatiche e le ipertripsinemie in neonati con test del<br />
sudore negativo o borderline. Tutte e tre possono essere l’espressione fenotipica di<br />
mutazioni del gene CFTR responsabile della FC. In tali casi la diagnosi, abitualmente<br />
semplice da porre nelle forme classiche della malattia, può essere molto complessa. Il<br />
ritardo nella diagnosi, o anche l’obiettiva impossibilità a formularla per mancanza di<br />
mezzi, pesano negativamente nella storia del paziente, e possono impedire la messa in<br />
atto di cure adeguate o di consulenza genetica.<br />
13
In seguito a tali considerazioni presso il <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> di Verona si è deciso di<br />
creare un <strong>Centro</strong> per la Diagnosi di <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> e Patologie Correlate. In<br />
particolare a tale scopo si sta attuando un progetto mirato all’allestimento di tecniche<br />
di diagnosi elettrofisiologica, per mettere a disposizione mezzi diagnostici in grado di<br />
identificare tra i pazienti afferenti al <strong>Centro</strong> una popolazione con caratteristiche<br />
atipiche di malattia. Questa verrà poi valutata clinicamente, al fine di meglio definire<br />
lo spettro di manifestazioni di malattia.<br />
L’obiettivo è creare una struttura in grado di gestire, a livello locale ma anche<br />
nazionale, tutti gli aspetti della diagnosi, anche con risvolti di ricerca.<br />
Si sta procedendo perciò ad acquisire competenze specifiche per diagnostica con<br />
metodiche elettrofisiologiche. Per mettere a punto la misurazione di differenze di<br />
potenziali elettrici nasali (NPD) sono in corso collaborazioni con i gruppi della dr.ssa<br />
Pamela Zeitlin (Johns Hopkins Hospital, Baltimore, USA) e del dr. Maarten<br />
Sinaasappel (Sophia Children Hospital, Erasmus Medical Center, Rotterdam, Olanda)<br />
presso i quali la dr.ssa Paola Melotti è stata ospitata per periodi di formazione. Grazie<br />
alla collaborazione con il gruppo olandese si apre inoltre la prospettiva di poter<br />
effettuare presso il <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> di Verona anche misurazioni<br />
elettrofisiologiche su mucosa intestinale.<br />
Si sta procedendo all’acquisizione degli apparecchi necessari per l’allestimento e la<br />
validazione della metodica di misurazione NPD presso il <strong>Centro</strong>. Si potrà poi procedere<br />
al suo utilizzo per definizione diagnostica in pazienti del <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> di<br />
Verona ai quali, per le loro caratteristiche, non è stato ancora possibile attribuire una<br />
diagnosi adeguata.<br />
L’attuazione del progetto apre la prospettiva di adeguarsi a linee guida e protocolli<br />
stabiliti a livello internazionale per procedure diagnostiche non ancora disponibili in<br />
Italia. Inoltre si considera rilevante che il conseguimento degli obiettivi di questo<br />
progetto possa fornire nuove competenze per la ricerca clinica sulla FC, anche a livello<br />
multicentrico. Risulterebbe infatti possibile valutare elettrofisiologicamente l’effetto<br />
di terapie, nuove o già disponibili, per la FC. Questi nuovi approcci permetterebbero<br />
anche di indagare nei pazienti possibili meccanismi d’azione di farmaci utilizzati o<br />
proposti per la cura della FC.<br />
SERVIZIO DI GASTROENETROLOGIA<br />
Responsabile Marco Cipolli<br />
Il Servizio di gastroenterologia del <strong>Centro</strong> conduce un ambulatorio comune con la<br />
Clinica Pediatrica dell’Università in collaborazione con il dott. E. Valletta. Questo<br />
ambulatorio segue pazienti pediatrici con patologia gastrointestinale (celiachia, MICI,<br />
pancreas). Si è sviluppato un database comune dei pazienti e un sito web<br />
gastroenterologia pediatrica (www.gastroped.it) in collaborazione con la Clinica<br />
Pediatrica del Policlinico “G.B. Rossi”. Il sito è funzionante da quasi un anno e<br />
comprende il data base dei pazienti celiaci seguiti dai due Centri.<br />
14
Progetti 2006<br />
An evaluation of liver involvement in a screened cystic fibrosis population<br />
over a 15-year period. A multicentre study.<br />
Progetto collaborativo con il Department of Gastroenterology, Royal Alexandra<br />
Hospital for Children, Camperdown, Sydney, Australia.<br />
Responsabile per il <strong>Centro</strong>: Marco Cipolli<br />
Collaboratori: Marina Bestini<br />
Obiettivo: valutare la frequenza dell’epatopatia in una popolazione screenata alla<br />
nascita e descriverne l’evoluzione clinica.<br />
La raccolta dati è iniziata nei primi mesi <strong>2005</strong>. Il progetto ha ricevuto finanziamento<br />
da parte dell’Associazione <strong>Veneto</strong> FC. La dott.ssa Bertini si occupa della individuazione<br />
dei pazienti da inserire nello studio, della raccolta dei dati e della creazione di un data<br />
base. Tempi previsti: termine raccolta dati Febbraio-Marzo 2006; termine<br />
elaborazione dati Estate 2006. Invio manoscritto per pubblicazione dati fine 2006-<br />
inizio 2007.<br />
Team Nutrizionale Pediatrico dell’Azienda Ospedaliera<br />
Dal 2003 il TNP è attivo sui problemi della nutrizione artificiale domiciliare.<br />
Nell’ Ottobre 2004 in collaborazione con la Direzione Sanitaria dell’ Az Osp si è<br />
tenuto il 1° meeting del TNP. Nel <strong>2005</strong> si è discusso il progetto collaborativo con la<br />
Direzione Infermieristica dell’Az Osp per la definizione di protocolli di lavoro<br />
infermieristici comuni, in campo nutrizionale, tra le varie realtà pediatriche dell’Az<br />
Ospedaliera. I dati del TNP di Verona sono stati esposti in due convegni a Ravenna e<br />
Padova (Maggio-Giugno <strong>2005</strong>).<br />
SERVIZIO SOCIALE<br />
Attività Servizio Pediatrico<br />
Il servizio svolge attività di inquadramento-orientamento alla diagnosi Presa in carico<br />
di casi “sociali” con elaborazione di progetti di sostegno al nucleo familiare in rete coi<br />
servizi territoriali<br />
Collaborazione con il Team per la NADP<br />
Valutazione eleggibilità logistica per l’attivazione di NADP domiciliare e<br />
organizzazione intervento a domicilio in collaborazione con le strutture territoriali<br />
competenti<br />
Consulenza sulla normativa vigente e le agevolazioni ottenibili dai familiari di minori<br />
con necessità di interventi di nutrizione artificiale a domicilio<br />
Elaborazione progetti di sostegno al nucleo in rete coi servizi territoriali e<br />
volontariato<br />
15
Attivita’ rivolta ai pazienti adulti<br />
Attività di consulenza sulla tematica del lavoro (inserimenti protetti, agevolazioni<br />
per portatori di handicap, forme pensionistiche/previdenziali a<br />
sostituzione/integrazione del reddito ecc.) Elaborazione di progetti di inserimento<br />
lavorativo mirato in rete coi servizi territoriali Organizzazione cure domiciliari<br />
(terapia antibiotica endovenosa; nutrizione artificiale, ossigenoterapia, NIV ecc)<br />
Attività di consulenza ambulatoriale.<br />
Progetti 2006<br />
Pogetto 1 (Bortolameazzi – Bonomelli)<br />
Pubblicazione di un libretto informativo per pazienti e familiari.<br />
Premessa<br />
Nel corso del <strong>2005</strong> si è proceduto alla sistematizzazione di tutte le informazioni di<br />
carattere sociale di principale interesse per gli utenti del <strong>Centro</strong> nell’ambito di un<br />
libretto di facile consultazione. Nel 2006 si ultimerà il progetto attraverso la<br />
pubblicazione e la distribuzione del manuale.<br />
Obiettivi<br />
Diffondere informazioni corrette sulle agevolazioni cui, in base alla normativa vigente,<br />
i pazienti con <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> e loro familiari hanno diritto, sugli iter burocratici da<br />
seguire per ottenerle e sugli uffici territoriali cui rivolgersi (nel <strong>Veneto</strong>)<br />
Materiali e metodologie<br />
• Ricerca sul territorio veneto volta all’individuzione di tutti i punti di<br />
riferimento principali (Uffici Protesi, Uffici Invalidi Civili, UOIC, INPS,<br />
Farmacie Ospedaliere, SIL ecc)<br />
• Raccolta di tutte le informazioni in una pubblicazione suddivisa in 4 parti:<br />
− Agevolazioni per pazienti con <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong><br />
− Agevolazioni specifiche per pazienti in età pediatrica<br />
− Agevolazioni specifiche per pazienti adulti<br />
− Principali riferimenti territoriali (Regione <strong>Veneto</strong>).<br />
Risultati attesi<br />
• Maggiore consapevolezza da parte di tutti gli utenti del <strong>Centro</strong> in merito<br />
ai propri diritti<br />
• Incremento qualità di vita del paziente e dei familiari<br />
• Riduzione dei tempi di consulenza telefonica del Servizio.<br />
Progetto 2 (Bortolameazzi)<br />
Studio su scolarità - attività lavorativa – stato civile della popolazione CF adulta<br />
residente in <strong>Veneto</strong> in carico al <strong>Centro</strong>.<br />
Premessa<br />
In seguito ai crescenti progressi ottenuti nella cura della <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> ed al<br />
conseguente innalzamento dell’aspettativa di vita dei pazienti, da qualche anno si<br />
16
egistra un progressivo aumento nell’inserimento lavorativo delle persone affette da<br />
tale patologia nonché nelle scelte di vita volte ad un processo di emancipazione dalla<br />
famiglia di origine. Vivere da soli (o in coppia) e, soprattutto, lo svolgimento di attività<br />
lavorative regolari pongono, tuttavia, il difficile problema della conciliazione delle<br />
esigenze di terapia con una presenza produttiva nel mercato del lavoro ed una<br />
soddisfacente vita affettiva e di relazione. Nel corso del <strong>2005</strong>, sulla base dei dati<br />
sociali pubblicati dalla Cystic <strong>Fibrosi</strong>s Foundation, si sono raccolti e analizzati i dati<br />
sulla scolarità, l’occupazione e lo stato civile dei pazienti adulti residenti in <strong>Veneto</strong> in<br />
carico al <strong>Centro</strong>. Nel 2006 ci si propone di continuare lo studio confrontando i dati<br />
raccolti con quelli relativi alla popolazione veneta generale (fonte: Istat) nonché con<br />
dati di ricerche sociali condotti all’estero su popolazioni CF.<br />
Obiettivi<br />
• Individuare eventuali distanze tra le scelte di vita dei pazienti con FC<br />
rispetto ai coetanei ed analizzarne cause e significati.<br />
• Elaborare linee guida condivise per il counselling sociale al paziente<br />
adolescente e adulto (su cui confrontarsi coi Servizi Sociali degli altri Centri<br />
CF italiani)<br />
Materiali e metodologie<br />
• Ricerca e studio dei dati ISTAT o di eventuali altre fonti (ancora da<br />
individuare)<br />
• Verifica ed eventuale ricerca nuove risorse normative per una migliore<br />
gestione esigenze malattia / vita sociale<br />
Risultati attesi<br />
• Miglior orientamento del counselling fornito dal Servizio Sociale.<br />
Progetto 3 (Bonomelli)<br />
Indagine su eventuale rapporto tra situazione socio-economico-culturale-familiare del<br />
paziente con <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> in età pediatrica (0-6 anni) e l’andamento clinico della<br />
malattia – III parte.<br />
Premessa<br />
Nel corso del 2003-2004 si è condotta una ricerca bibliografica volta<br />
all’individuazione di indicatori che consentano di rapportare l’andamento clinico della<br />
malattia col retroterra familiare, sociale, culturale ed economico degli assistiti. Dato<br />
che la letteratura sulla <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> contiene scarsissimi studi di matrice<br />
esclusivamente sociale, si è dovuto prendere spunto anche da indagini condotte su<br />
altre patologie croniche (tumore, AIDS ecc.). Sulla base degli esiti di tale ricerca è<br />
stato elaborato un questionario da sottoporre ai genitori dei pazienti in età pediatrica.<br />
Nel corso del <strong>2005</strong> il questionario è stato somministrato a tutti i genitori dei pazienti<br />
attualmente seguiti dal settore Pediatrico di età compresa tra gli 0 e i 6 anni. Nel<br />
2006 lo studio sarà concluso attraverso il confronto tra dati sociali raccolti e<br />
andamento clinico dei pazienti.<br />
Obiettivi<br />
17
• Individuare eventuali fattori di rischio di tipo sociale rispetto alla<br />
compliance terapeutica<br />
• Migliorare il monitoraggio di situazioni sociali che tendenzialmente<br />
potrebbero portare ad evoluzioni peggiorative della malattia<br />
Materiali e metodologie<br />
• Questionario da somministrare ai genitori di pazienti seguiti in Settore<br />
Pediatrico<br />
• Studio ed elaborazione dei dati raccolti<br />
Risultati attesi<br />
• Individuazione di fattori di rischio di tipo sociale rispetto alla compliance<br />
terapeutica nel nucleo familiare del paziente<br />
• Progettazione di interventi sociali di tipo preventivo, basati sul monitoraggio<br />
costante dei fattori di rischio individuati nell’indagine, nell’ambito di una<br />
presa in carico globale del paziente.<br />
Progetto 4 (Bortolameazzi – Bonomelli)<br />
PC portatili con accesso alla rete internet per pazienti ricoverati in regime di<br />
isolamento.<br />
Premessa<br />
I pazienti ricoverati in regime di isolamento, impossibilitati a prendere parte alle<br />
attività sociali organizzate all’interno del reparto, possono percepire, più degli altri, il<br />
bisogno di mantenere i contatti con la propria realtà di vita quotidiana (scuola, lavoro,<br />
rete amicale, affetti ecc.), inevitabilmente interrotti dalla degenza. Nel corso del<br />
<strong>2005</strong> si sono ricercate aziende disposte a donare pc portatili e, soprattutto, si è<br />
tentato di sensibilizzare la Direzione dell’Azienda Ospedaliera al fine di ottenere<br />
l’autorizzazione ad attivare la messa in rete dei pc donati. Non essendo possibile<br />
ottenere tale autorizzazione, nel 2006 si tenterà di perseguire lo scopo attraverso<br />
l’utilizzo di carte pre-pagate, gestite da vari operatori di telefonia mobile, da inserire<br />
nei singoli pc portatili.<br />
Obiettivi:<br />
• Facilitare la comunicazione del paziente ricoverato con l’ambiente esterno<br />
• Offrire momenti di svago ai pazienti ospedalizzati<br />
• Permettere al paziente studente o lavoratore di mantenere i contatti<br />
necessari con la propria attività scolastica o lavorativa<br />
Materiali e metodologie:<br />
• Avvio e gestione contatti con operatori di telefonia mobile<br />
• Coinvolgimento dei medici del <strong>Centro</strong> nello studio di metodologie che<br />
riducano il rischio di diffusione di germi patogeni in reparto a mezzo dei pc,<br />
spostati di stanza in stanza<br />
Risultati attesi<br />
• Miglioramento della qualità della degenza in ospedale<br />
18
SERVIZIO DI PSICOLOGIA CLINICA<br />
Responsabile: Sandra Perobelli<br />
L’attività del Servizio di Psicologia Clinica si può suddividere in tre aree principali:<br />
1. l’attività clinica con interventi sia di follow up periodico, a scopo preventivo, sia<br />
di risposta a richieste espresse dal paziente/famiglia di fronte a comparsa di<br />
sintomi di disturbo psichico;<br />
2. l’attività di ricerca su tematiche specifiche;<br />
3. l’attività di formazione per il personale di assistenza.<br />
In sintesi, qui di seguito è riassunto lo stato di realizzazione del programma formulato<br />
per il <strong>2005</strong><br />
Attività <strong>2005</strong> - <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong><br />
Attività clinica<br />
Nel corso del <strong>2005</strong> sono stati finora circa 130 i pazienti/genitori che si sono rivolti<br />
spontaneamente al Servizio per situazioni problematiche di vario tipo (Tabella I). Si<br />
tratta di un dato piuttosto costante nel tempo (all’incirca 140-150 pazienti/anno).<br />
Tab. I – Numero ed età dei pazienti/famiglie che hanno richiesto spontaneamente le prestazioni del<br />
Servizio di Psicologia Clinica<br />
pazienti settore pediatrico<br />
n.° 45<br />
In età prescolare<br />
n.° 25<br />
In età scolare<br />
n.° 20<br />
pazienti settore adulti<br />
n.° 75<br />
Adolescenti<br />
n.° 15<br />
Adulti<br />
n.° 60<br />
Un terzo di queste richieste è stata posta da famiglie afferenti al settore pediatrico,<br />
che presentavano difficoltà di adattamento alla diagnosi da parte di uno o entrambi i<br />
membri della coppia genitoriale, disturbi emotivi e/o del comportamento nel bambino,<br />
problemi di compliance terapeutica.<br />
Per quanto riguarda i pazienti adolescenti/adulti, la valutazione clinica ha messo in<br />
evidenza situazioni patologiche compatibili con una diagnosi secondo DSMIV in circa la<br />
metà dei casi, con una prevalenza di disturbi di tipo depressivo. In due casi (un<br />
adolescente e un adulto) si è reso necessario il ricovero in struttura specialistica in<br />
seguito a gravi comportamenti autolesivi. Circa il 15% ha avuto bisogno anche di una<br />
terapia farmacologica ansiolitica/antidepressiva, dopo consulenza psichiatrica.<br />
Progetti specifici<br />
Cartella informatizzata → Avviata con l’inserimento dei dati dell’archivio cartaceo.<br />
Area pediatrica<br />
19
Clinica: identificazione casi a rischio di disagio psicosociale, con particolare<br />
attenzione per i disturbi del comportamento alimentare (V. in “attività clinica”).<br />
Elaborato il protocollo diagnostico e le scale di valutazione sia dello sviluppo generale<br />
che relative al comportamento alimentare.<br />
Ricerca: studio sulle problematiche del comportamento alimentare → non realizzato<br />
per interruzione borsa di studio.<br />
Area adolescenti<br />
Clinica: consulenza alle famiglie e ai ragazzi in età adolescenziale limitatamente alle<br />
richieste spontanee di intervento (V. in “attività clinica”)<br />
Ricerca: validazione strumento di Qualità di vita (in collaborazione con <strong>Centro</strong> Cesena)<br />
→ sospesa l’attività a Cesena.<br />
Area trapianti<br />
Clinica: attività di valutazione, presa in carico e supporto dei casi da avviare al Tx : nel<br />
<strong>2005</strong> inseriti in lista d’attesa n. 15 pazienti<br />
Ricerca: Impatto del Tx polmonare sulla qualità di vita → raccolta dati su nuovi<br />
pazienti inseriti in lista d’attesa e su pazienti trapiantati dopo 6-12 mesi<br />
dall’intervento.<br />
Ricerca “EXERCISE”<br />
A ottobre <strong>2005</strong> sono stati inseriti 16 pazienti.<br />
Attività di supporto alle Associazioni di volontariato FC<br />
Partecipazione al Direttivo Associazione Veneta + incontri divulgativi sulle attività del<br />
<strong>Centro</strong> con comitati locali.<br />
Nutrizione artificiale<br />
Componente del Team Aziendale per la Nutrizione Artificiale Pediatrica a Domicilio:<br />
• partecipazione alle riunioni mensili del team<br />
• valutazioni psicologiche dei casi segnalati.<br />
Malattie rare<br />
Sindrome di Shwachman e sviluppo psicologico: valutazione psicocognitiva dei casi in<br />
carico al <strong>Centro</strong> (n. 15).<br />
Progetti 2006<br />
Espansione del database psicologico su pazienti/famiglie. L’obiettivo è di arrivare a<br />
raccogliere nella cartella informatizzata CAMILLA dati su sviluppo psicologico,<br />
presenza di disturbi emotivi, livello di adattamento alla malattia e alle cure, condizioni<br />
psicologiche familiari, qualità di vita, sia attraverso l’attività clinica che con apposito<br />
follow up e con progetti di ricerca su tematiche specifiche. In particolare nel 2006, vi<br />
saranno collegati due progetti di studio:<br />
20
• Come crescono i bambini con FC nei primi anni di vita (collaborazione da<br />
parte operatori medici e infermieri del settore pediatrico)<br />
• L’adolescenza è un’età a rischio (collaborazione da parte del dr. R.<br />
Palminteri)<br />
• Trapianto polmonare e qualità di vita<br />
Si prevede di organizzare un ulteriore follow up al 2006 e una elaborazione<br />
dei dati preliminare alla possibilità di pubblicazione (in collaborazione con la<br />
dr.ssa M. Ocampo).<br />
La ricerca Exercise dovrebbe ultimare la raccolta della casistica nel 2006<br />
(coordinatore della ricerca dr. C. Braggion): sarà così possibile l’elaborazione dei dati.<br />
Nell’ambito della SDS, prosegue l’applicazione del protocollo di ricerca per la<br />
valutazione dello sviluppo psico-cognitivo, progetto di collaborazione ad una<br />
pubblicazione su proposta del Prof. P. Durie.<br />
SERVIZIO CONSULENZA GENETICA<br />
Responsabili: Carlo Castellani- Paola Melotti<br />
Il <strong>Centro</strong> offre consulenza genetica e orientamento per la diagnosi pre e post natale<br />
della <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> a singole persone o copie. Il Servizio di consulenza genetica si<br />
avvale delle strutture diagnostiche del laboratorio di patologia molecolare, con cui<br />
sviluppa il programma di screening neonatale della Regione del <strong>Veneto</strong>.<br />
Nel corso dell’anno 2006 verrà intrapreso lo sviluppo di un <strong>Centro</strong> per la diagnosi di<br />
forme atipiche di <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>.<br />
Attività di ricerca legata alla consulenza genetica<br />
• Demo programma per computer interattivo che possa fornire informazioni sulla<br />
<strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>, il suo rischio genetico ed il test per il portatore<br />
• Richiesta finanziamento per il sovracitato progetto a EuroGeneTest;<br />
approvazione del progetto da parte di CF Worldwide<br />
• Progetto inviato ed accettato da Fondazione Italiana <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>: A NEW<br />
APPROACH FOR NONINVASIVE PRENATAL DIAGNOSIS OF CYSTIC<br />
FIBROSIS BY FETAL DNA ANALYSIS IN MATERNAL PLASMA<br />
• Presentazione: Genotipo vs fenotipo: a che punto siamo. Convegno Le molte<br />
facce della <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>: confronto tra specialisti, Trieste 9-10 settembre<br />
<strong>2005</strong>.<br />
• Presentazione Consulenza genetica per <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>: la verifica della diagnosi,<br />
l’informazione sulla clinica e sulla prognosi, I° congresso nazionale SIFC, Roma<br />
1-3 dicembre <strong>2005</strong>.<br />
• Presentazione Mutazioni del gene CFTR e sterilità maschile, I° congresso<br />
nazionale SIFC, Roma 1-3 dicembre <strong>2005</strong><br />
21
• Poster Prospettive terapeutiche per la <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> da cellule staminali:<br />
raccolta dedicata di sangue di cordone ombelicale VIII° Congresso Nazionale<br />
Società Italiana di Genetica Umana, Chia Laguna, Cagliari, 28-30 settembre<br />
<strong>2005</strong>.<br />
Progetti 2006<br />
• Sviluppo del programma Computerized Interactive Genetic Counselling (se<br />
finanziato), ed eventuale valutazione con studio randomizzato dell’efficacia,<br />
paragonandolo con sessioni classiche di consulenza genetica.<br />
PROGETTI COLLABORATIVI INTERNAZIONALI E ATTIVITA’<br />
NELL’AMBITO DI SOCIETA’ INTERNAZIONALI<br />
Il <strong>Centro</strong> di Verona privilegia i rapporti con Centri di eccellenza a livello mondiale e<br />
sono in corso collaborazioni con i Centri di Toronto, Sidney, Londra, Rotterdam,<br />
Minneapolis.<br />
Il <strong>Centro</strong> partecipa attivamente all’attività di Società Scientifiche internazionali come<br />
la European Respiratory Society e la European Society for Cystic <strong>Fibrosi</strong>s.<br />
Carlo Castellani fa parte del Board della European Cystic <strong>Fibrosi</strong>s Society.<br />
Marco Cipolli è Chairman del Medical and Scientific Advisory Board (MSAB) dell’<br />
Associazione N. Americana della Sindrome di Shwachman (SDSFound).<br />
CF aging group<br />
Responsabile per il <strong>Centro</strong> Carlo Castellani<br />
Su iniziativa di un gruppo internazionale promosso dai Prof. Warwick (Minneapolis) e<br />
Dodge (Inghilterra) si è costituito un gruppo collaborativo a cui hanno dapprima<br />
aderito Londra (Dott. Hodson), Toronto (Dott. Corey) e Verona. Questo gruppo si<br />
propone di descrivere le caratteristiche genetiche e cliniche dei pazienti con FC che<br />
hanno superato i 40 anni di vita.<br />
Lo studio verrà successivamente allargato a chi, nel mondo, volesse parteciparvi.<br />
Le dottoresse Corey e Hodson stanno estendendo un primo rapporto del Gruppo da<br />
sottoporre per la pubblicazione.<br />
ECFS Neonatal Screening Working Group<br />
Responsabile per il <strong>Centro</strong> Carlo Castellani<br />
Azioni/Prodotti<br />
• Censimento dati europei<br />
• creazione sottogruppi di lavoro application EuroCFCare, 6 th European<br />
framework, in veste di leader per il sottogruppo di ricerca clinica sullo<br />
screening neonatale<br />
22
• Presentazione A survey on CF neonatal screening practice around Europe, 28 th<br />
ECFS Conference, Crete 22-25 June<br />
• Presentazione A survey on CF neonatal screening practice around Europ,e 4 th<br />
European meeting of the International Society for Neonatal Screening, Paris<br />
5-6 September <strong>2005</strong><br />
• Poster L’analisi di mutazioni nello screening neonatale per <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>:<br />
censimento europeo, VIII° Congresso Nazionale Società Italiana di Genetica<br />
Umana, Chia Laguna, Cagliari, 28-30 settembre <strong>2005</strong>.<br />
Sviluppo<br />
• 2006 Organizzazione di meeting dell’ECFS NBS WG a Verona nella prima metà<br />
dell’anno.<br />
Ruolo della risonanza magnetica nucleare nell’imaging del polmone<br />
Responsabile BM Assael<br />
Il progetto viene condotto in collaborazione con l’Istituto di Radiologia dell’Università<br />
di Verona e con Harm Tiddens del <strong>Centro</strong> FC di Rotterdam. Si propone di ottimizzare<br />
l’uso della RMN per lo studio della progressione del danno nel paziente con FC.<br />
Uno specializzando in pediatria dell’Università di Verona sta sviluppando il protocollo e<br />
ottenendo dati preliminari. Il protocollo sarà presentato entro gennaio 2006 e la<br />
ricerca sarà sviluppata in parte a Verona e in parte a Rotterdam.<br />
LABORATORIO DI PATOLOGIA MOLECOLARE<br />
Attività di diagnostica genetico-molecolare<br />
Negli ultimi 12 mesi, i test standard per la ricerca delle mutazioni CF più comuni<br />
(analisi genetiche di primo livello) sono stati circa 1140, di questi: 600 nell'ambito<br />
dello screening neonatale e 540 per la diagnostica tradizionale nei pazienti e nei loro<br />
familiari.<br />
Continua lo sviluppo dei nuovi protocolli per le analisi genetiche di livello superiore, che<br />
in futuro comprenderanno: analisi D-HPLC e sequenziamento diretto dell’intera<br />
porzione codificante, ricerca dei riarrangiamenti del gene e analisi dell’mRNA.<br />
La messa a punto dell’analisi D-HPLC è già stata realizzata in tutti gli esoni,<br />
utilizzando circa 120 controlli positivi per altrettante mutazioni.<br />
Per stimare il detection rate del test, basato sul D-HPLC, è stato studiato un<br />
campione di pazienti originario del nostro territorio (160 soggetti per il veneto e 90<br />
per le province di Trento e Bolzano). Per i pazienti di origine veneta, il detection rate<br />
è stato stimato di poco superiore al 95%, per quelli del Trentino Alto Adige è<br />
prossimo al 100%.<br />
In generale, è possibile affermare che il detection rate dipende, sia dalla sensibilità<br />
della metodica D-HPLC, sia dalla frequenza dei riarrangiamenti del gene CFTR nelle<br />
23
diverse aree geografiche e quindi, per i soggetti originari di altre regioni non è ancora<br />
stato determinato.<br />
La frequenza dei riarrangiamenti del gene CFTR nei pazienti veneti è stata studiata in<br />
modo approfondito e i dati sono stati pubblicati sulla rivista European Journal of<br />
Human Genetics. Nel nostro laboratorio sono state messe a punto le metodiche per<br />
l’analisi diretta dei riarrangiamenti più frequentemente osservati (Dele17a-18, Dele1,<br />
Dele2-3).<br />
Progetti di ricerca<br />
1. Ruolo dei recettori adenovirali nell’attivazione di segnali intracellulari coinvolti<br />
nella risposta infiammatoria precoce, in cellule di origine epiteliale.<br />
Role of Adenovirus receptors in the activation of Mitogen-Activated Protein Kinase<br />
pathways and Nuclear factor –kB in human airway epithelial cells<br />
Progetto finanziato dalla Fondazione <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> # 4/2004<br />
Responsabile: A. Tamanini<br />
Collaboratori: P. Melotti, A. Bonizzato, E. Nicolis, C. Cigana (Laboratorio di Patologia<br />
Molecolare - <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>)<br />
Uno dei principali ostacoli alla applicazione della terapia genica della FC riguarda<br />
l’induzione di una risposta immunitaria indesiderata. Abbiamo precedentemente<br />
evidenziato che cellule respiratorie esposte ad Ad resi incapaci di trascrivere geni<br />
vettoriali sono comunque in grado di indurre segnali pro-infiammatori. Obiettivo del<br />
progetto è identificare quali delle componenti del vettore (esone, base pentonica,<br />
fibra) e quali recettori cellulari (CAR, eparan solfati, integrine) sono responsabili della<br />
fase iniziale della risposta immunitaria. Nella prima fase del progetto sono state<br />
preparate e purificate le diverse componenti del vettore e la parte extracellulare del<br />
recettore CAR. Nella seconda fase del progetto, sono state studiate le principali vie<br />
di trasmissione del segnale intracellulare (MAPKs) ed un fattore chiave per la<br />
regolazione della trascrizione di geni coinvolti nella risposta infiammatoria (NF-kB). I<br />
risultati hanno evidenziato che la fibra del vettore induce segnali pro-infiammatori,<br />
precoci ed indipendenti dalla espressione di geni vettoriali, tramite il legame al<br />
recettore CAR, mentre questo non avviene per gli altri componenti e recettori. Questi<br />
risultati sono utilizzabili sia per disegnare nuovi vettori sia per studiare differenti<br />
vettori che utilizzano gli stessi recettori cellulari degli Ad, allo scopo di correggere il<br />
difetto genetico nella FC ottimizzando il rapporto tra efficienza e sicurezza.<br />
2. Interazioni in vitro tra batteri patogeni della <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> e cellule<br />
epiteliali che esprimono la proteina CFTR<br />
Interaction in vitro between cystic fibrosis pathogens and epithelial cells expressing<br />
the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)<br />
Progetto finanziato dalla Fondazione <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> # 14/2004<br />
24
Responsabile: M.C. Dechecchi<br />
Collaboratori: Elena Nicolis, Federica Quiri, Gabriella Bertaso (Laboratorio di<br />
Patologia Molecolare - <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>), Maria Grazia Giri (Servizio di Fisica<br />
Sanitaria, Azienda Ospedaliera di Verona), Frederic Becq (Università di Poitiers,<br />
Francia).<br />
Scopo del progetto<br />
Studiare la relazione tra difetto di maturazione di CFTR mutata e risposta<br />
infiammatoria all’infezione da Pseuomonas Aeruginosa (PA) in cellule epiteliali<br />
respiratorie FC.<br />
Metodologia<br />
È stato precedentemente messo a punto un modello di studio che utilizza linee<br />
cellulari esprimenti la proteina CFTR normale o mutata, infettate con il ceppo PAO1.<br />
La risposta delle cellule all’infezione è stata studiata analizzando con PCR real-time,<br />
l’espressione di mRNA di ICAM-1 e di IL-8 dopo 4 ore d’infezione. Precedentemente<br />
abbiamo dimostrato che PAO1 attiva una risposta marcatamente più elevata in cellule<br />
FC IB3 (genotipo DF508/W1282X), in confronto con quelle corrette con CFTR w/t,<br />
S9. Abbiamo esteso lo studio ad un altro modello respiratorio: le cellule CuFi-1,<br />
ottenute da epitelio bronchiale di un paziente FC (genotipo DF508/DF508) e le cellule<br />
NuLi-1, ottenute da un soggetto non FC. Queste linee cellulari ci sono state fornite da<br />
A. Klingelhutz e J. Zabner (University of Iowa Research Foundation). La relazione tra<br />
difetto di maturazione di CFTR e risposta infiammatoria è stata studiata sia in cellule<br />
IB3 che in cellule CuFi-1, utilizzando MPB-07, un composto appartenente alla famiglia<br />
dei benzo(c)chinolizinici (MPB), che sono stati descritti essere sia attivatori<br />
funzionali [ Becq F. et al, J. Biol. Chem. 1999, 274, 39, 27415-27425] che potenti<br />
correttori della localizzazione di CFTR [Dormer R.L. et al, J Cell Science 2001, 114,<br />
4073-4081], in collaborazione con F. Becq dell’Università di Poitiers in Francia.<br />
Abbiamo studiato l’effetto del trattamento con MPB-07 sulla risposta all’infezione<br />
con PAO1 in cellule IB3, CuFi-1 e NuLi-1. Parallelamente abbiamo testato gli effetti<br />
sulla funzione di CFTR, con analisi d’immagine in singola cellula, utilizzando una sonda<br />
fluorescente sensibile al potenziale di membrana DiSBAC2(3) [Renier M. et al, Human<br />
Gene Ther. 6: 1275-1283, 1994].<br />
Risultati<br />
a) nelle cellule FC CuFi-1 abbiamo dimostrato che l’infezione con PAO1 attiva una<br />
risposta marcatamente più elevata in confronto con quella osservata in cellule non FC,<br />
NuLi-1, confermando il difetto di risposta infiammatoria esagerata rispetto allo<br />
stimolo, in presenza di CFTR DF508, come già avevamo osservato in cellule IB3 e C127<br />
b) sia in cellule IB3 che in cellule CuFi-1, MPB-07 riduce significativamente<br />
l’espressione di mRNA di ICAM-1 e di IL-8, indotta da PAO-1. Non si osservano<br />
effetti apparenti in cellule NuLi-1<br />
c) il trattamento delle cellule FC con MPB-07 ripristina la funzione di trasporto di<br />
cloro CFTR-dipendente.<br />
25
Conclusioni<br />
Nei modelli cellulari FC, MPB-07 ha un effetto anti-infiammatorio e corregge il<br />
difetto funzionale di CFTR. Non è noto, al momento, il suo meccanismo d’azione, ma<br />
riteniamo che MPB-07 possa essere uno strumento utile per approfondire la relazione<br />
tra difetto di maturazione di CFTR DF508 e risposta infiammatoria all’infezione con<br />
PA nelle cellule FC.<br />
3. Strategie innovative per la diagnosi e terapia della <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong><br />
Novel diagnostic and therapeutic approaches for cystic fibrosis<br />
Sottoprogetto: Utilizzo di molecole decoy, specifiche per NF-kB, per inibire la<br />
risposta infiammatoria all’infezione da PAO1, in cellule FC<br />
Responsabile: R. Gambari (Dip. di Biochimica e Biologia Molecolare, Università di<br />
Ferrara)<br />
Responsabile Sottoprogetto: G. Cabrini<br />
Progetto finanziato dalla Fondazione <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> # 15/2004<br />
Collaboratori: V. Bezzerri, M.C. Dechecchi, E. Nicolis, F. Quiri, (Laboratorio di<br />
Patologia Molecolare - <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>), M. Borgatti e R. Gambari (Dip. di<br />
Biochimica e Biologia Molecolare - Università di Ferrara).<br />
Include Tesi di Laurea in Biotecnologie Farmaceutiche – Università di Ferrara di<br />
Valentino Bezzerri (relatore R. Gambari, correlatore G. Cabrini) da discutere nella<br />
sessione autunnale <strong>2005</strong><br />
Scopo del progetto<br />
Studiare se molecole decoy per NF-kB sono in grado di inibire la risposta<br />
infiammatoria attivata da esposizione a PA, in cellule FC.<br />
Metodologia: è stato utilizzato il modello cellulare FC, IB3, che abbiamo<br />
precedentemente dimostrato esprimere livelli molto elevati di mRNA di ICAM-1 e di<br />
IL-8, dopo infezione con PAO1. Le cellule sono state trasfettate con decoy per NF-kB,<br />
30 ore prima dell’infezione. L’efficacia del protocollo di trasfezione è stata testata<br />
con decoy fluorescente.<br />
Risultati<br />
a) la procedura di trasfezione utilizzata permette l’internalizzazione del decoy<br />
fluorescente e quindi si considera efficiente;<br />
b) molecole decoy per NF-kB, inibiscono in cellule IB3 l’espressione di IL-8 indotta da<br />
PAO1.<br />
Conclusioni<br />
Abbiamo dimostrato che decoy specifici possono inibire l’attività del fattore di<br />
trascrizione NF-kB. Questi risultati rappresen tano una premessa molto importante<br />
per sostenere lo sviluppo di nuove molecole nella terapia delle manifestazioni proinfiammatorie<br />
associate a FC<br />
26
4. Dissezione di processi di conformazione della proteina CFTR in cellule<br />
CFTR normali e con mutazione DF508. Uso di tossine disarmate per colpire<br />
le molecole “chaperones” ed assistere la conformazione e l’espressione di<br />
DF508<br />
Dissection of folding/defolding processes in CFTR and F508-CFTR cells. Use of<br />
disarmed toxins to target chaperones and assist refolding and expression of F508-<br />
CFTR.<br />
Progetto finanziato dalla Fondazione <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> # 1/2004<br />
Responsabile: M. Colombatti (Dip. Patologia, Sezione di Immunologia, Università di<br />
Verona)<br />
Sottoprogetto: Controllo funzionale di trasporto del cloro CFTR-dipendente dopo<br />
trattamento di cellule FC con correttori del traffico intracellulare<br />
Responsabile Sottoprogetto: G. Cabrini<br />
Collaboratori: Maria Cristina Dechecchi, Federica Quiri (Laboratorio di Patologia<br />
Molecolare - <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> ), Matteo Pasetto e Marco Colombatti<br />
(Dipartimento di Patologia, Sezione di Immunologia, Università di Verona)<br />
Scopo del progetto<br />
Lo studio propone di utilizzare correttori del traffico di CFTR, coniugati a speciali<br />
proteine per superare le barriere della membrana cellulare e concentrare in<br />
compartimenti cruciali le sostanze farmacologicamente attive.<br />
Metodologia: la fase preliminare dello studio ha visto la valutazione dell’effetto dei<br />
correttori sulla funzione di CFTR, con analisi d’immagine in singola cellula, utilizzando<br />
una sonda fluorescente sensibile al potenziale di membrana DiSBAC2(3) [Renier M. et<br />
al, Human Gene Ther. 6: 1275-1283, 1994], in cellule FC IB3 e CuFi-1.<br />
Risultati<br />
a) il trattamento delle cellule CuFi-1 è con DSG (desossispergualina) per 48 ore,<br />
ripristina la funzione di trasporto del cloro CFTR-dipendente;<br />
b) risultati molto preliminari con coniugati DSG-HSA (human serum albumin) sembrano<br />
indicare un effetto più consistente che non con DSG. I risultati necessitano ulteriori<br />
conferme.<br />
4. Un bio-sensore molecolare dell’immunità delle vie respiratorie:<br />
applicazioni per la sicurezza di terapie innovative nella <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong><br />
Progetto Fondazione Cariverona (ex Bando ricerca scientifica del <strong>2005</strong> nell’ambito<br />
della salute)<br />
Responsabile Scientifico: G. Cabrini (Laboratorio di Patologia Molecolare - <strong>Centro</strong><br />
<strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>)<br />
27
Il progetto intende mettere a punto un nuovo modello di studio molecolare della<br />
immunità innata ed acquisita delle vie respiratorie FC utilizzando un sistema cellulare<br />
sensore umano costituito da cellule respiratorie umane FC e cellule dell’immunità, sul<br />
quale verificare la sicurezza di vettori per il trasferimento del gene normale e di<br />
molecole organiche correttrici della proteina FC mutata.<br />
L’attività sperimentale sarà rivolta allo studio della risposta infiammatoria ed<br />
immunitaria nel trasferimento genico polmonare e nella correzione farmacologica della<br />
FC.<br />
Collaboratori: M.C. Dechecchi, A. Tamanini, E. Nicolis, F. Quiri (Laboratorio di<br />
Patologia Molecolare - <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>), M. Colombatti, G. Bellisola, A. Vella, M.<br />
Pasetto, R. Trani (Dip. di Patologia, Sezione di Immunologia, Università di Verona)<br />
5. Vettori lentivirali di nuova generazione per la terapia genica della<br />
<strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>: valutazione del potenziale infiammatorio<br />
Novel generation lentiviral vectors: evaluation of inflammatory potential in human<br />
respiratory cells.<br />
Progetto finanziato dalla Fondazione <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> # 4/<strong>2005</strong><br />
Responsabile: G. Cabrini<br />
Collaboratori: Anna Tamanini, Elena Nicolis, Federica Quiri (Laboratorio di Patologia<br />
Molecolare - <strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>), Elena Copreni, Lucia Palmieri, Stefano Castellani,<br />
Massimo Conese (Institute for Experimental Treatment of Cystic <strong>Fibrosi</strong>s, H. S.<br />
Raffaele, Milano)<br />
Lo scopo del progetto è di studiare la sicurezza di vettori lentivirali di nuova<br />
generazione disegnati per il trasferimento del gene corretto in cellule respiratorie<br />
differenziate e progenetrici dei polmoni di pazienti CF.<br />
Verrà studiata l’espressione proteica di molecole coinvolte nell’induzione della risposta<br />
infiammatoria come ICAM-1 e IL-8 e i meccanismi intracellulari che potrebbero<br />
essere coinvolti in tale induzione dopo l’esposizione delle cellule ai vettori lentivirali.<br />
Gli adenovirus ricombinnati saranno usati come controlli di riferimento positivi.<br />
6. The long pentraxin PTX3 in host resistance to infection and as a<br />
candidate diagnostic and therapeutic agent in cystic fibrosis<br />
Progetto Telethon <strong>2005</strong> # GGP05095<br />
Responsabile: A. Mantovani (Dip. Immunologia e Biologia Cellulare – Ist. Mario Negri -<br />
Milano)<br />
Partner 2 - Responsabile: B.M. Assael (<strong>Centro</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>)<br />
Collaboratore Partner 2: G. Cabrini<br />
28
7. Inibizione di NF-kB: un approccio anti-infiammatorio alla <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong><br />
Responsabile: Paola Melotti<br />
Collaboratori: Cristina Cigana, Elena Nicolis, Gabriella Bergamini, Anna Tamanini,<br />
Alberto Bonizzato, Federica Quiri, Baroukh Assael,;<br />
Collaboratori esterni:<br />
- <strong>Centro</strong> Interdipartimentale per la Ricerca sul Cancro - Università di<br />
Ferrara: Massimo Negrini, Manuela Ferracin<br />
- Istituto Tecnologie Biomediche, CNR- Segrate (MI): Pierluigi Mauri, Louise<br />
Benazzi, FabrizioBasilico, Enrico Rosti<br />
- Sez. Patologia Generale - Università di Verona: Claudio Sorio, Marzia<br />
Vezzalini, Marco Della Peruta, Andrea Mafficini.<br />
E’ stato descritto che l'eccessiva risposta infiammatoria nei pazienti affetti da<br />
<strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> (FC) correla con un’eccessiva attivazione del fattore di trascrizione<br />
nuclear factor-kB (NF-kB) associata ad uno squilibrato rapporto tra molecole proinfiammatorie,<br />
come l'interleuchina 8 (IL-8), ed anti-infiammatorie, come<br />
l'interleuchina 10 (IL-10), considerata una molecola anti-infiammatoria endogena<br />
carente in FC.<br />
Abbiamo verificato con saggi mediante “gene-reporter”, in cellule di epitelio<br />
respiratorio FC, che la trascrizione di IL-8 è regolata da NF-kB oltre che da un altro<br />
fattore di trascrizione, Activatory Protein-1 (AP-1). Si è intrapresa la messa a punto<br />
dell’utilizzo, in modelli cellulari FC, del vettore adenovirale esprimente un inibitore<br />
molecolare specifico del fattore di trascrizione NF-kB (ottenuto dal dr. Chettibi,<br />
University di Aberdeen, UK). Dopo aver evidenziato che l’IL-10 riduce la produzione di<br />
IL-8 a livello trascrizionale e proteico, abbiamo osservato che essa riduce anche<br />
l’attivazione di NF-kB. Si stanno definendo stimoli pro-infiammatori rilevanti in FC.<br />
Esperimenti preliminari stanno evidenziando effetti inibitori dell’IL-10 sulla<br />
trascrizione di IL-8 indotta da Tumor Necrosis Factor alfa.<br />
La validazione mediante real-time PCR dei dati ottenuti con cDNA microarrays per<br />
identificare geni regolati da IL-10, ha portato all’identificazione di 5 geni come<br />
bersagli cellulari, alcuni dei quali potrebbero supportare gli effetti anti-infiammatori<br />
di questa molecola.<br />
I nostri risultati stanno indicando possibili meccanismi degli effetti anti-infiammatori<br />
dell’ IL-10, oltre al razionale per un suo eventuale utilizzo terapeutico per la FC.<br />
8. Ruoli non battericidi dell’azitromicina: rilevanza per la terapia della<br />
<strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong><br />
Responsabile: Paola Melotti<br />
Collaboratori: Cristina Cigana, Elena Nicolis, Cinzia Bersani, Gabriella Bergamini,<br />
Federica Quiri, Ugo Pradal, , Baroukh Assael<br />
Collaboratori esterni:<br />
29
− <strong>Centro</strong> Interdipartimentale per la Ricerca sul Cancro - Università di Ferrara:<br />
Massimo Negrini, Manuela Ferracin (FFC#3/2002)<br />
− Istituto Tecnologie Biomediche, CNR- Segrate (MI): Pierluigi Mauri, Louise<br />
Benazzi, FabrizioBasilico, Enrico Rosti (FFC#10/<strong>2005</strong>)<br />
− Sez. Patologia Generale - Università di Verona: Claudio Sorio, Marzia Vezzalini,<br />
Marco Della Peruta, Andrea Mafficini (FFC#10/<strong>2005</strong>)<br />
− Istituto per la Terapia Sperimentale della <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>, Istituti Scientifici<br />
San Raffaele, Milano: Alessandra Bragonzi (FFC#10/<strong>2005</strong>).<br />
Finanziato dalla Fondazione per la Ricerca sulla <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong><strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>, grants<br />
FFC#3/2002, FFC#10/<strong>2005</strong> e dal Comitato di Vicenza dell’Associazione Veneta per la<br />
Lotta contro la <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong>.<br />
Sono crescenti le evidenze sugli effetti terapeutici dell’azitromicina (AZM) in<br />
pazienti affetti da <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong> (FC). Si stanno indagando i meccanismi non<br />
battericididi questo macrolide rilevanti per i suoi effetti terapeutici in tale patologia.<br />
Avendo dimostrato che questo macrolide riduce l’espressione della molecola proinfiammatoria<br />
IL-8 in linee di epitelio respiratorio FC, si è cercato di approfondire il<br />
meccanismo di questo effetto, avendo così evidenziato inibizione dell’attivazione di<br />
fattori di trascrizione pro-infiammatori come NF-kB, AP-1 e Specificity Protein 1<br />
(Sp1). Questi risultati sono stati confermati utilizzando diversi approcci sperimentali.<br />
In particolare questi effetti sono risultati specifici avendo utilizzato come controllo<br />
la iosamicina, un macrolide simile all’AZM da un punto di vista chimico, ma privo di<br />
effetti clinici anti-infiammatori. Inoltre l’effetto inibitorio è risultato selettivo per i<br />
tre fattori descritti, in quanto l’attività di un altro fattore di trascrizione, FosB, non<br />
è risultata regolata da AZM. La validazione mediante real-time PCR dei risultati<br />
ottenuti in precedenza dall’analisi con cDNA microarrays ha permesso l’identificazione<br />
di nove geni regolati dall’AZM, tra i quali alcuni potrebbero essere coinvolti<br />
nell’antività anti-infiammatoria del farmaco. Si stanno definendo le condizioni in linee<br />
di epitelio respiratorio FC per determinare effetti dell’AZM mediante analisi<br />
proteomica. Si sta mettendo a punto un modello murino con infezione delle vie<br />
respiratorie da parte di Pseudomonas aeruginosa per poter stabilire l’effetto del<br />
farmaco sulla risposta infiammatoria così indotta.<br />
Considerando la variabilità della risposta alla terapia con AZM tra i pazienti con FC, si<br />
è cercato di individuare eventuali caratteristiche genetiche, in particolare il<br />
polimorfismo nella ripetizione di triplette GCC del gene multidrug resistanceassociated<br />
protein 1 (MRP-1), omologo al gene responsabile della FC, CFTR. L’utilizzo di<br />
questa variante genetica, analizzata in 36 pazienti FC, non si è rivelato appropriato<br />
per distinguere i pazienti che possono trarre benefici dalla terapia con AZM. I<br />
risultati ottenuti a questo proposito non permettono quindi per ora di proporre<br />
un’analisi genetica utile allo scopo ma stanno gettando le basi per interessanti<br />
collaborazioni.<br />
30
10. Cystic fibrosis: characterization of the unknown mutations in Italian<br />
patients and assessment of their pathogenic role<br />
Progetto collaborativo finanziato dalla Fondazione per la Ricerca sulla <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong><br />
Prof. Maria Cristina Rosatelli (Cagliari), Prof. Franca Dagna-Bricarelli, Dott. Maria<br />
Baffico (Genova), Dott. Carlo Castellani (Verona), Dott. Manuela Seia (Milano), Prof.<br />
Antonio Amoroso, Dott. Marcello Morgutti (Trieste).<br />
Responsabile per il <strong>Centro</strong> di Verona: Alberto Bonizzato<br />
Il nostro contributo ha comportato l’analisi D-HPLC dell’intera porzione codificante di<br />
45 pazienti CF, che risultavano non completamente caratterizzati dopo l’analisi<br />
genetica di primo livello. Dei 47 alleli CF ignoti, 36 sono stati caratterizzati. Cinque<br />
degli 11 candidati ad effettuare l’analisi dell’mRNA hanno collaborato alla ricerca, il<br />
loro RNA è stato estratto da brushing nasale e retrotrascritto prima dell’invio al<br />
laboratorio di Cagliari per l’analisi genetica. Lo studio dell'mRNA è in fase di<br />
completamento.<br />
11. Screening of CFTR gene rearrangements in Italian CF patients.<br />
Progetto collaborativo finanziato dalla Fondazione per la ricerca sulla <strong>Fibrosi</strong> <strong>Cistica</strong><br />
Prof. Giuseppe Castaldo (Napoli),<br />
Dott. Carlo Castellani, Dott. Cristina Bombieri, Prof. Pier Franco Pignatti (Verona),<br />
Prof. Federica Sangiuolo (Roma).<br />
Responsabile per il <strong>Centro</strong> di Verona: Alberto Ionizzato<br />
Il campione considerato fino ad ora per l’analisi D-HPLC e per la ricerca dei<br />
riarrangiamenti più frequenti (Dele17a-18, Dele1, Dele2-3) comprende 56 pazienti CF<br />
con 59 alleli non caratterizzati dopo l’analisi di primo livello. Nel corso del primo anno<br />
di studio, 47 alleli sono stati caratterizzati.<br />
E’ previsto che i lavori relativi al progetto durino 2 anni e quindi proseguano per un<br />
altro anno.<br />
12. Studio genetico dei pazienti CF con sopravvivenza superiore ai 40 anni<br />
Responsabile: Alberto Bonizzato<br />
Questo progetto si aggiunge, a livello del <strong>Centro</strong> di Verona, al progetto Aging project<br />
a cui il nostro <strong>Centro</strong> partecipa assieme ai Centri di Minneapolis, Toronto, Londra<br />
adulti.<br />
L’analisi genetica di secondo livello ha permesso di ottenere la caratterizzazione del<br />
96% degli alleli CF in un campione costituito da 41 pazienti con sopravvivenza<br />
31
superiore ai 40 anni. Due terzi circa di tale campione presenta un genotipo<br />
caratterizzato da almeno una mutazione mild. Il terzo rimanente dei casi, invece, ha<br />
genotipo classico con entrambe le mutazioni associate ad insufficienza pancreatica. In<br />
quest’ultimo gruppo andrebbero ricercati eventuali fattori genetici o ambientali in<br />
grado di favorire la sopravvivenza anche in presenza di un genotipo sfavorevole.<br />
13. Analisi del gene SBDS in pazienti con la sindrome di Shwachman<br />
Diamond (SDS)<br />
Responsabili: Elena Nicolis e Alberto Bonizzato<br />
Dalla scoperta del gene della sindrome di Shwachman Bodian Diamond (SBDS) nel<br />
2002 ad oggi sono state identificate molte mutazioni diverse associate alla malattia,<br />
almeno 33, dai dati emersi durante il 3° Congresso Internazionale della Sindrome di<br />
Shwachman: il gene è composto di 5 esoni, ha un trascritto di 1,6 kb e codifica per una<br />
proteina di 250 amino acidi, la cui funzione potrebbe essere implicata nel metabolismo<br />
dell’RNA ribosomiale.<br />
E’ convinzione unanime l’importanza di una precisa ed accurata diagnosi clinica della<br />
SDS: l’analisi genetica fornisce, al momento attuale, un importante completamento<br />
diagnostico.<br />
Obiettivo 1 - Ci proponiamo di proseguire l’analisi genetica su altri pazienti SDS allo<br />
scopo di definire ulteriormente lo spettro di mutazioni associate alla sindrome.<br />
Risultati<br />
l’analisi genetica ha finora permesso di identificare il 100% delle mutazioni SDS, 3<br />
delle quali mai descritte precedentemente, in un gruppo di 20 pazienti. La strategia<br />
finora adottata prevede che, dopo la diagnosi clinica, si ricerchino le due mutazioni più<br />
frequenti (258+2C>T e K62X) mediante PCR-RFLP. Se vengono trovate, la diagnosi è<br />
confermata; in caso contrario si procede con il sequenziamento dell’intero gene. La<br />
possibilità di non trovare alcuna mutazione tuttavia esiste; non è da escludere da un<br />
lato la presenza di mutazioni in regioni geniche non codificanti la proteina, ad esempio<br />
nel promotore, dall’altro l’esistenza di un secondo gene coinvolto nella sindrome.<br />
Obiettivo 2 - Allo scopo di indagare, in parte, sul meccanismo patogenetico delle<br />
diverse mutazioni, abbiamo intenzione di studiare l’RNA messaggero (mRNA) del gene<br />
SBDS. Per ciascuna mutazione è possibile stabilire gli effetti a livello di quantità e<br />
qualità dell’mRNA rispetto alla forma normale.<br />
Risultati<br />
È in corso la raccolta di sangue intero dei pazienti e dei loro genitori in occasione della<br />
loro visita di controllo presso il <strong>Centro</strong>. L’RNA totale deve infatti essere estratto<br />
immediatamente dopo il prelievo. Al momento sono stati raccolti 5 campioni di RNA di<br />
pazienti SDS e dei rispettivi genitori.<br />
32
Obiettivo 3 - Si ritiene che tra i pazienti affetti da sindrome mielodisplasica (MDS),<br />
possibile complicanza della SDS, vi possano essere dei casi non diagnosticati di SDS.<br />
Pertanto, ricercare nei pazienti MSD mutazioni SDS, aprirebbe una interessante<br />
strada verso la scoperta e caratterizzazione di forme atipiche di SDS.<br />
Risultati<br />
Abbiamo ricevuto dal prof. Andrea Biondi e dalla dott.ssa Daniela Longoni (Clinica<br />
Pediatrica, Monza) 6 prelievi midollari di pazienti con MDS. E’ stato estratto il DNA e<br />
mediante PCR-RFLP è stato analizzato l’esone 2 per la ricerca delle due mutazioni più<br />
frequenti (258+2C>T e la K62X), con risultato negativo.<br />
14. Banca del DNA di pazienti con malattia di Parkinson e con distonie<br />
primarie<br />
Responsabile: Alberto Bonizzato<br />
Questo progetto si inquadra nell’ambito delle collaborazioni interne all’Azienda<br />
ospedaliera di Verona,<br />
Esso si sviluppa in collaborazione con il Dott. Michele Tinazzi del reparto di<br />
Neurologia e sono stati finore raccolti oltre 120 campioni di DNA ed è stato creato un<br />
database apposito.<br />
I soggetti affetti da malattia di Parkinson comprendono le categorie in cui i fattori di<br />
tipo genetico sono più rilevanti, ossia i pazienti con insorgenza prima dei 50 anni e<br />
quelli con familiarità per la malattia. Il materiale ottenuto ha permesso di avviare dei<br />
progetti collaborativi con il Dott. Vincenzo Bonifati a Rotterdam (casi con familiarità)<br />
e con la Dott.ssa Enza Maria Valente dell’Istituto Mendel di Roma (casi ad esordio<br />
precoce). Con il gruppo guidato dal Dott. Bonifati sono stati realizzati due articoli che<br />
recentemente sono apparsi sulle riviste Lancet e Neurology.<br />
In collaborazione con il Dott. Mattia Gambarin del reparto di Rieducazione Funzionale<br />
del Policlinico di Borgo Roma, è stata raccolta una famiglia molto numerosa,<br />
comprendente vari soggetti affetti da distonia primaria. L’analisi genetica, in corso di<br />
ultimazione, è stata svolta presso l’Istituto Mendel di Roma.<br />
33
PUBBLICAZIONI CENTRO FIBROSI CISTICA – ANNO <strong>2005</strong><br />
1. Nicolis E, Bonizzato A, Assael BM, Cipolli M. Identification of Novel Mutations in<br />
Patients with Shwachman-Diamond Sindrome. Human Mutations <strong>2005</strong>; 795: 1-8.<br />
2. Bombieri C, Bonizzato A, Castellani C, Assale BM, Pignatti PF. Frequency of large<br />
CFTR gene rearrangements in Italian CF patients. European Journal of Human<br />
Genetics <strong>2005</strong>; 13:687-689.<br />
3. Valletta E, Gelio S, Fontana E, Ibba MV, Piccoli R, Cipolli M. La somministrazione di<br />
farmaci nel bambino con grave patologia neurologica in nutrizione enterale. Rivista<br />
Italiana di Nutrizione Parenterale ed Enterale <strong>2005</strong>; 2:62-69.<br />
4. Bodini A, D'Orazio C, Peroni D, Corradi M, Folesani G, Baraldi E, Assael BM, Boner<br />
A, Piacentini GL. Biomarkers of neutrophilic inflammation in exhaled air of cystic<br />
fibrosis children with bacterial airway infections Pediatric Pulmonology <strong>2005</strong><br />
Dec;40(6):494-9.<br />
5. Castellani C, Picci L, Scarpa M, Dechecchi MC, Zanolla L, Assael BM, Zacchello F.<br />
Cystic fibrosis carriers have higher neonatal immunoreactive trypsinogen values<br />
than non-carriers. American Journal Medical Genetic A. <strong>2005</strong> Jun 1;135(2):142-4.<br />
6. Pradal U, Delmarco A, Morganti M, Cipolli M, Mini E, Cazzola G. Long-term<br />
azithromycin in cystic fibrosis: another possible mechanism of action Journal of<br />
Chemotherapy. <strong>2005</strong> Aug;17(4):393-400.<br />
7. Nicolis E, Pasetto M, Cigana C, Pradal U, Assael BM, Melotti P. The GCC repeat<br />
length in the 5’UTR of MRP1 gene is polymorphic: a functional characterization of<br />
its relevance for cystic fibrosis. BiomedCentral Medical Genetics (In press).<br />
34