Capitolo 11 - Omero
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Le analisi constano di due fasi fondamentali:<br />
l’immobilizzazione del ligando sul sensor chip, e lo studio<br />
vero e proprio dell’interazione ligando-analita.<br />
Immobilizzazione del ligando<br />
La fase in cui il LIGANDO viene immobilizzato sulla<br />
superficie del chip viene detta COUPLING.<br />
Le reazioni chimiche coinvolte nel processo di<br />
immobilizzazione del ligando sul chip CM5, che è<br />
rappresentato da tre eventi fondamentali:<br />
‣ 1. ATTIVAZIONE: i gruppi carbossilici vengono attivati<br />
chimicamente tramite N-etil-N’-(3 dimetilaminopropil)<br />
carbodimide cloridrato (EDC) e N-idrossisuccinimmide<br />
(NHS).<br />
‣ 2. COUPLING: il ligando reagisce coi gruppi carbossilici<br />
attivati della matrice. I gruppi funzionali della molecola<br />
di ligando coinvolto in questa reazione possono essere<br />
diversi, nel caso delle proteine si forma un legame<br />
amidico con i gruppi amminici degli amminoacidi basici<br />
(AMINE COUPLING).<br />
‣ 3. INATTIVAZIONE: la succinimmide che non ha reagito<br />
con il ligando viene sostituita con ETANOLAMINA.