West Nile Virus V 1-deu - virion\serion

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Institut Virion\Serion GmbH
Институт Вирион\Серион ООО
Friedrich-Bergius-Ring 19
Кольцевая ул. Фридриха Бергиюса 19
D - 97076 Würzburg, Germany
D - 97076 Вюрцбург, Германия
Telefon/Телефон: +49 (0) 9 31 / 30 45 0
Fax/Факс: +49 (0) 9 31 / 30 45 100
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Internet/Интернет: www.virion-serion.de
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
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DIAGNOSTICS
SERION ELISA classic
West Nile Virus IgG/IgM
Gebrauchsanweisung - Deutsch
Instructions - English
Mode d´emploi - Français
Istruzioni per l´uso - Italiano
Инструкция по применению – русский язык
(Version 1.13/04-1)
KAL141-1

SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
DE
INHALTSVERZEICHNIS
1 ANWENDUNGSBEREICH
2 DIAGNOSTISCHE BEDEUTUNG
3 TESTPRINZIP SERION ELISA classic
4 INHALT UND ZUSAMMENSETZUNG
FR EN
5 ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE MATERIALIEN
6 LAGERUNG UND HALTBARKEIT
7 DURCHFÜHRUNG DES SERION ELISA classic
7.1 Allgemeine Hinweise
7.2 Probenvorbereitung und Lagerung
7.3 Reagenzienvorbereitung
7.4 Übersicht - Testablauf
7.5 Manuelle Testdurchführung
7.6 Automatische Testdurchführung
7.7 Positivkontrolle / Richtigkeitskontrolle
RU IT
8 TESTAUSWERTUNG
8.1 Ein-Punkt-Quantifizierung nach der 4PL-Methode
8.2 Testgültigkeitskriterien
8.3 Auswertung SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
8.4 Quantifizierungsgrenzen
8.5 Grenzwertbereiche
8.6 Interpretation der Ergebnisse
8.7 Referenzbereiche gesunder Probanden
9 LEISTUNGSMERKMALE
9.1 Sensitivität und Spezifität
9.2 Präzision
10 SICHERHEITSMASSNAHMEN
10.1 Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen
10.2 Entsorgung
11 LITERATUR
vorliegende Version: V 1.13/04-1
Vorversion: --

Pos: 3 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift " Anwendungsber eich" @ 0\mod_1177351044007_6.doc @ 168 @ 1
Pos: 5 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_6.doc @ 219 @ 1
Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Einl eitung " Enzymimmunoassay" @ 4\mod_1255336385816_6.doc @ 21164 @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
Enzymimmunoassay zur Bestimmung von humanen Antikörpern
für die in vitro-Diagnostik
Dokument/Bestellnummern/West 12\mod_1366958469615_6.doc Pos: 2 /Arbeitsanleitungen ELISA @ Nile 56005 classic/Gültig Virus @ Bestellnummern für nur ein @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG Best.-Nr.: ESR141G
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM Best.-Nr.: ESR141M
1 ANWENDUNGSBEREICH
Pos: 4 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Anwendungsber eich/West Nile Vir us Anwendungsbereich @ 12\mod_1366957860138_6.doc @ 55971 @
Die SERION ELISA classic West Nile Virus IgG und IgM sind qualitative und quantitative
Immunoassays für den Nachweis von humanen Antikörpern in Serum oder Plasma gegen
das West Nil Virus. Der SERION ELISA classic West Nile Virus IgM erlaubt die Erfassung
akuter Infektionen. Der SERION ELISA classic West Nile Virus IgG dient zur Bestätigung
eines Erregerkontakts, zur Bestimmung des Immunstatus sowie zur Unterstützung
epidemiologischer Studien.
2 DIAGNOSTISCHE BEDEUTUNG
Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Di agnostische Bedeutung/West Nile Virus Diagnostische Bedeutung @ 12\mod_1366958140940_6.doc @ 55988 @
Das Nil Virus zählt neben dem Dengue Virus, dem Gelbfieber Virus und dem FSME
Virus zu den humanpathogenen Flaviviren. Erregerreservoire für das Arbovirus
(arthropode borne virus) sind Vögel wie Raben und Sperlinge. Das West Nil Virus kann
durch Stechmücken der Gattungen Culex, Aedes und Ochlerotatus auf Menschen
übertragen werden.
Das RNA-Genom des West Nil Virus ist von einem sphärischen Kapsid mit ikosaedrischer
Symmetrie umgeben. Das Kapsid wird von einer Lipidmembran umhüllt. Besonders das
Envelope Protein E auf der Oberfläche des Virus wirkt stark immunogen.
Das West Nil Virus wurde im Jahr 1937 im West Nil Distrikt von Uganda entdeckt. Durch
das West Nil Virus hervorgerufene Infektionen sind in großen Teilen Afrikas, Osteuropas
sowie in Asien seit langem bekannt. Seit Mitte der 1990er Jahre treten Epidemien
vermehrt in Europa, Australien und Nordamerika auf.
Die Inkubationszeit beträgt zwischen drei und 14 Tagen. Infektionen mit dem West Nil
Virus verlaufen in den meisten Fällen asymptomatisch oder mit milden, grippeähnlichen
Symptomen wie Fieber, Kopfschmerzen, Muskel- und Gelenkschmerzen sowie Magen-
Darm-Symptomen (West Nil Fieber). Das Virus ist in der Lage, die Blut-Hirn-Schranke zu
passieren und kann in seltenen Fällen Enzephalitis, Meningitis oder akute, schlaffe
Lähmung (AFP; Paralysen) hervorrufen. Mit Ausbreitung des Virus auf Europa, Australien
und Amerika treten zunehmend Epidemien auf, bei denen es gehäuft zu schweren
Krankheitsverläufen kommt. Das Risiko einer neurologischen Verlaufsform nimmt mit dem
Alter zu. Die Infektion kann, insbesondere bei Beteiligung des ZNS, zu schweren
bleibenden Behinderungen oder bei älteren oder immungeschwächten Personen sogar
zum Tod führen.
deutsch 2

Pos: 7 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/T estprinzip/Testpri nzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_6.doc @ 21207 @ 1
Pos: 8 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für mehr ere D okumente/Inhal t und Z usammensetzung/Inhal t und Z usammensetzung ( alle außer Bor,EBV,Hanta,Par vo, Coxi ella) @ 4\mod_1255342923549_6.doc @ 21223 @ 1
Zur labordiagnostischen Bestätigung einer West Nil Virus Infektion wird der serologische
Nachweis von IgM Antikörpern empfohlen. IgM Antikörper treten zum Ende der ersten
Woche nach Einsetzen der Symptome auf und werden in mehr als 90 % aller infizierten
Personen gebildet. IgM Antikörper können über eine Zeitspanne von mehreren Wochen
oder Monaten detektiert werden. IgG Antikörper treten frühestens acht Tage nach Beginn
der Symptome auf und können über Monate oder lebenslang persistieren.
DE
3 TESTPRINZIP SERION ELISA classic
Der ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) ist ein immunologisches Verfahren,
das sich insbesondere in der Infektionsserologie zur Erfassung von Antikörpern bewährt
hat. Die Nachweisreaktion basiert auf der spezifischen Interaktion von Antikörpern und
Antigenen. Zu diesem Zweck wurden die Teststreifen der Mikrotiterplatten des SERION
ELISA classic mit spezifischen Antigenen von Infektionserregern zur Bindung der in der
Patientenprobe vorhandenen Antikörper beschichtet. Weitere, mit Alkalischer
Phosphatase markierte Sekundärantikörper detektieren die so gebildeten Immunkomplexe.
Das Enzym katalysiert eine Reaktion, in deren Verlauf das farblose Substrat
p-Nitrophenylphosphat in das farbige Produkt p-Nitrophenol umgewandelt wird. Die
Signalstärke des Reaktionsprodukts ist proportional zur Antikörperkonzentration in der
Probe und wird photometrisch erfasst.
deutsch 3

Pos: 9 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für mehr ere D okumente/Z usätzlich benötigte Materiali en/Z200 Z usätzlich benötigte M aterialien ( für T este mi t IgM-Nachweis) @ 9\mod_1316422545600_6.doc @ 36489 @ 1
4 INHALT UND ZUSAMMENSETZUNG
Testkomponenten Stück /
Volumen
Brechbare Mikrotiterstreifen mit je acht antigenbeschichteten Einzelkavitäten
(insg. 96) MTP ,
1 Testrahmen.
Das Beschichtungsmaterial ist inaktiviert.
12 Stück
Standardserum (gebrauchsfertig) STD ,
Humanserum in proteinhaltigem Phosphatpuffer;
negativ getestet für anti-HIV-Ak, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen)
und anti-HCV-Ak;
Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid;
Farbstoff: Amaranth O.
Negatives Kontrollserum (gebrauchsfertig) NEG ,
Humanserum in proteinhaltigem Phosphatpuffer;
negativ getestet für anti-HIV-Ak, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen)
und anti-HCV-Ak;
Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid;
Farbstoff: Lissamin-Grün V.
Anti-Human IgA, IgG oder IgM Konjugat (gebrauchsfertig) APC ,
Gegen humanes IgG, IgA oder IgM gerichteter, polyklonaler Antikörper,
konjugiert mit Alkalischer Phosphatase, stabilisiert in proteinhaltiger Lösung;
Konservierungsmittel: 0,01 % Methylisothiazolon und 0,01 % Bromnitrodioxan.
Waschlösungskonzentrat (ausreichend für 1000 ml) WASH ,
Natriumchlorid Lösung mit Tween 20 und 30 mM Tris/HCl, pH 7,4;
Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid.
Verdünnungspuffer DILB ,
Proteinhaltiger Phosphatpuffer mit Tween 20;
Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid;
Farbstoff: 0,01 g/l Bromphenolblau.
Stopplösung STOP ,
1,2 N Natronlauge.
Substrat (gebrauchsfertig) pNPP ,
Para-Nitrophenylphosphat in lösungsmittelfreiem Puffer;
Konservierungsmittel: < 0,1 % Natriumazid.
(Eine leichte Gelbfärbung des ungeöffneten Substrats ist möglich.
Hieraus ergibt sich keine Qualitätsminderung!)
Qualitätskontrollzertifikat mit Standardkurve und Wertetabelle INFO ,
(Quantifizierung der Antikörper in IU/ml bzw. U/ml).
2 x 2 ml
2 ml
13 ml
33,3 ml
2 x 50 ml
15 ml
13 ml
2 Seiten
deutsch 4

Pos: 10 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Lag erung und Hal tbar kei t/Lager ung und Haltbar keit @ 4\mod_1255343176800_6.doc @ 21239 @ 1
5 ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE MATERIALIEN
DE
- Übliche Laborausrüstung
- Für den IgM Nachweis: SERION Rf-Absorbens (Best. Nr. Z200 (20 ml))
- Spektralphotometer für Mikrotiterplatten mit Filter, Wellenlänge 405 nm,
empfohlene Referenzwellenlänge im Bereich von 620 nm - 690 nm (z. B. 650 nm)
- Inkubator 37 °C
- feuchte Kammer
- Aqua dest.
- Click-Clips (Best.-Nr. VT120)
deutsch 5

6 LAGERUNG UND HALTBARKEIT
Reagenz Lagerung Haltbarkeit
Mikrotiterstreifen
(mit Antigen
beschichtet)
ungeöffnet
nach Anbruch bei 2 – 8 °C in Gegenwart von
Trockenmittel und wieder verschlossen gelagert
Die unbenutzten Kavitäten sollen trocken und
luftdicht im verschlossenen Aluminiumbeutel
gelagert werden.
bis Verfallsdatum;
Mindesthaltbarkeit:
4 Wochen;
Haltbarkeit bei
sachgerechter
Lagerung: bis zum
Verfallsdatum
Kontrollseren /
Standardseren
nach Anbruch bei 2 – 8 °C
bis Verfallsdatum;
24 Monate ab
Herstellungsdatum
Konjugat Gebrauchsfertige Lösung bei 2 – 8 °C
Kontaminationen sind u. a. durch den Gebrauch
steriler Pipettenspitzen unbedingt zu vermeiden.
bis Verfallsdatum;
28 Monate ab
Herstellungsdatum
Verdünnungspuffer
ungeöffnet
nach Anbruch bei 2 – 8 °C
Eingetrübte Lösungen bitte verwerfen.
bis Verfallsdatum;
36 Monate ab
Herstellungsdatum
24 Monate
Waschlösung Konzentrat nach Anbruch bei 2 – 8 °C
Gebrauchsverdünnung bei 2 – 8 °C
Gebrauchsverdünnung bei Raumtemperatur
Behälter für Gebrauchsverdünnung regelmäßig
reinigen! Eingetrübte Lösungen bitte verwerfen.
bis Verfallsdatum;
2 Wochen;
1 Woche
Substrat
gebrauchsfertige Lösung bei 2 – 8 °C,
lichtgeschützt gelagert
Kontaminationen sind u. a. durch den Gebrauch
steriler Pipettenspitzen unbedingt zu vermeiden.
Bei stärkerer Gelbfärbung (Extinktion gegen
Aqua dest. > 0,25 OD) bitte verwerfen.
bis Verfallsdatum;
36 Monate ab
Herstellungsdatum
Stopplösung nach Öffnung bei Raumtemperatur bis Verfallsdatum
Pos: 11 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA
classic/Testdurchführung/Überschrift: Durchführung @ 0\mod_1184679699953_6.doc @
2472 @ 1
deutsch 6

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Allgemeine Hi nweise ELISA cl assic @ 4\mod_1255343318159_6.doc @ 21255 @ 2
7 DURCHFÜHRUNG DES SERION ELISA classic
DE
7.1 Allgemeine Hinweise
Für die sachgemäße Anwendung der SERION ELISA classic sind ausschließlich die
SERION ELISA classic Komponenten zu verwenden. Letztere können nicht durch
Reagenzien anderer Hersteller ersetzt werden. Die Standard- und Kontrollseren der
SERION ELISA classic sind chargenspezifisch für jeden Testkit optimal eingestellt und
können nicht in anderen Chargen eingesetzt werden. Verdünnungspuffer, Waschlösung,
Substratlösung und Stopplösung können mit allen SERION ELISA classic chargen- und
kitunabhängig angewendet werden.
Für jede Immunglobulinklasse gibt es drei verschiedene Konjugatkonzentrationen:
NIEDRIG-, MITTEL- und HOCH-KONZENTRIERT. Die Einstufung der Konjugate erfolgt
durch folgende Kennzeichnung auf dem Etikett:
z.B. IgG + niedrig-konzentriertes IgG Konjugat
IgG ++ mittel-konzentriertes IgG Konjugat
IgG +++ hoch-konzentriertes IgG Konjugat
Um die hohe Qualität unserer SERION ELISA classic zu gewährleisten, ist in seltenen
Fällen der Einsatz von Sonderkonjugaten notwendig. Diese haben eine Sondercharge und
sind nicht mit Symbol "+" gekennzeichnet. Sonderkonjugate sind nicht gegen andere
Konjugate austauschbar.
Bitte beachten Sie immer die Beschriftung der Etiketten!
Unter Voraussetzung einer sachgerechten Lagerung sind alle Komponenten des SERION
ELISA classic ungeöffnet bis zum angegebenen Verfallsdatum (siehe Etikett) verwendbar.
Die Reagenzien sollen nicht über das Verfallsdatum hinaus benutzt werden.
Die unsachgemäße Verdünnung der Reagenzien kann zum Verlust an
Nachweisempfindlichkeit führen.
Die Testreagenzien sollen während der Lagerung und Inkubation vor hellem Licht
geschützt werden. Nach Gebrauch sind die Komponenten gut zu verschließen, um deren
Austrocknung und Kontamination zu vermeiden.
Der Verschlussbeutel für die Kavitäten der Mikrotiterplatte soll nur an der Schweißnaht
aufgeschnitten werden, um ein Wiederverschließen zu gewährleisten. Bei Beschädigung
sowie nach unsachgemäßem Verschließen des Verschlussbeutels zur Aufbewahrung der
nicht benutzten Kavitäten sollen die Mikrotiterstreifen nicht mehr verwendet werden.
Um Kontamination zu vermeiden, sollten immer aseptische Techniken zur Entnahme von
Reagenzienaliquots angewendet werden. Zur Vermeidung verfälschter Ergebnisse darf die
Pipettenspitze bei der Konjugatpipettierung keinesfalls den oberen Rand der Kavitäten
berühren und benetzen. Beim Verschließen der Fläschchen ist darauf zu achten, wieder
den entsprechenden, zur Flasche gehörenden Deckel einzusetzen.
deutsch 7

Die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse ist u. a. von der sorgfältigen Mischung der
angesetzten Reagenzien abhängig. Aus diesem Grund sollen die Behältnisse von
Kontrollseren und Konjugaten vor Entnahme gut geschüttelt werden. Auch die
Probenverdünnungen sollen vor dem ersten Pipettierschritt mit einem Monomixer (z. B.
Vortex) gut durchmischt werden.
Weiterhin ist auf eine sorgfältige Pipettierung und die Einhaltung der vorgegebenen
Inkubationszeiten und -temperaturen zu achten. Große Zeitdifferenzen zwischen der
Pipettierung der ersten und der letzten Kavität bei der Zugabe von Proben- und
Kontrollseren, Konjugat und Substrat führen zu unterschiedlichen Inkubationszeiten,
welche die Präzision und Reproduzierbarkeit der Messwerte beeinflussen können.
Nur die strikte Einhaltung der Arbeitsvorschrift gewährleistet korrekte Ergebnisse.
Der SERION ELISA classic kann nur ausgewertet werden, wenn die chargenspezifischen
Validitätswerte des im Kit enthaltenen Qualitätskontrollzertifikates erfüllt wurden.
Korrektes Waschen verhindert Testunspezifitäten. Aus diesem Grund sollten die
Gebrauchsanleitungen der verwendeten Waschgeräte befolgt werden. Wichtig sind die
gleichmäßige Befüllung der Kavitäten der Flachbodenplatten mit Waschlösung und deren
vollständige Entfernung, um unkontrollierbare Verdünnungseffekte auszuschließen.
Schaumbildung ist in jedem Fall zu vermeiden!
Die Beschriftung der Mikrotiterstreifen mit Kürzeln von Erreger und Antikörperklasse sollte
nicht zerkratzt werden, um ein Verwechseln zu vermeiden.
Pos: 13 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenvor ber. und Lager ung (für ALLE Err eger auß er Borreli a, CM V, FSM E, H SV,Masern,Mumps,R öteln,VZ V) @ 8\mod_1263998040982_6.doc @ 28428 @ 2
7.2 Probenvorbereitung und Lagerung
Lipämische, hämolytische sowie ikterische Proben (Serum oder Plasma) sollten nur unter
Vorbehalt eingesetzt werden. Bakteriell kontaminierte Proben sollten nicht verwendet
werden. Geeignete Untersuchungsmaterialien sind nach Standardlabortechniken
gewonnene Seren oder Plasmen (EDTA, Citrat, Heparin). Die Proben dürfen nicht
thermisch inaktiviert werden.
classic/Testdurchführung/Kapitelüberschrift 0\mod_1184679414434_6.doc Pos: 14 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 2312 classic/Gültig @ 3 Probenverdünnung für alle Dokumente/ELISA
@
7.2.1 Probenverdünnung
Vor Testbeginn die Proben (V 1 ) in Verdünnungspuffer (V 2 ) verdünnen:
Pos: 15 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Ni kle Virus T eil 1 @ 12\mod_1366959098552_6.doc @ 56022 @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
V 1 + V 2 = 1 + 100 je 10 µl Patientenprobe
zu je 1000 µl
Verdünnungspuffer
Pos: 16 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_6.doc @ 21287 @
Nach jeder Verdünnung und vor dem Pipettierschritt sollten die Proben mit einem
Monomixer (z. B. Vortex) gut durchmischt werden, um eine homogene Lösung
herzustellen.
Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Nile Virus Teil 2 Ü berschrift @ 12\mod_1366959209524_6.doc @ 56039 @
deutsch 8

Pos: 21 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenlager ung @ 4\mod_1255343526141_6.doc @ 21271 @ 3
Pos: 22 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 1 @ 4\mod_1255343795606_6.doc @ 21303 @ 233
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
DE
Pos: 18 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenver dünnung: R (für T ests mit IgM-Nachweis) @ 9\mod_1316422765852_6.doc @ 36506 @
Rheumafaktor-Interferenz
Rheumafaktor-Antikörper sind vorwiegend Autoantikörper der IgM Klasse, die bevorzugt
an IgG Immunkomplexe binden. Der spezifische Nachweis von IgM Antikörpern kann
durch diese Rheumafaktoren zu falsch-positiven Ergebnissen führen. Ferner besteht die
Möglichkeit, dass bindungsschwächere erregerspezifische IgM Antikörper durch
bindungsstärkere IgG Antikörper verdrängt werden. Ein IgM Nachweis kann dann falschnegativ
ausfallen. Aus diesem Grund ist es erforderlich, die Proben für die IgM
Bestimmung mit Rheumafaktor-Absorbens vorzubehandeln. (SERION Rf-Absorbens,
Best.-Nr. Z200 (20 ml/100 Bestimmungen)). Die Rf-Absorption erfolgt durch Inkubation der
Patientenprobe im Rf-Verdünnungspuffer über 15 Minuten bei Raumtemperatur oder über
Nacht bei 4° C. Die Anwendung ist in einer speziellen Arbeitsanleitung beschrieben.
Pos: 19 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Nile Virus Teil 3 @ 12\mod_1366959279193_6.doc @ 56056 @
Zunächst erfolgt eine 1+4 Verdünnung von Rheumafaktor-Absorbens (V 1 ) mit
Verdünnungspuffer (V 2 ).
V 1 + V 2 = V 3 (1 + 4) je 200 µl Rf-Absorbens
zu je 800 µl
Verdünnungspuffer
Nun werden die Patientenproben (V 4 ) in diesem Rf-Verdünnungspuffer (V 3 ) verdünnt:
V 4 + V 3 = 1 + 100 je 10 µl Patientenprobe
zu je 1000 µl
Rf-Verdünnungspuffer
Pos: 20 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_6.doc @ 21287 @
Nach jeder Verdünnung und vor dem Pipettierschritt sollten die Proben mit einem
Monomixer (z. B. Vortex) gut durchmischt werden, um eine homogene Lösung
herzustellen.
7.2.2 Probenlagerung
Die Patientenproben sollten nicht länger als 7 Tage bei 2 – 8 °C aufbewahrt werden. Eine
längere Lagerung der Proben ist bei ≤ -20 °C möglich. Mehrmaliges Auftauen und
Wiedereinfrieren soll vermieden werden. Verdünnte Proben können bei 2 – 8 °C eine
Woche aufbewahrt werden.
deutsch 9

Pos: 24 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 2 @ 4\mod_1255343884183_6.doc @ 21319 @ 33333
7.3 Reagenzienvorbereitung
Alle Testreagenzien müssen vor dem Testansatz auf Raumtemperatur erwärmt
werden.
7.3.1 Mikrotiterstreifen
Die Teststreifen bzw. Kavitäten sind zusammen mit einem Trockenmittel verpackt.
Nicht benötigte Teststreifen bzw. Kavitäten sollten wieder mit dem Trockenmittel im
Aluminiumbeutel luftdicht eingeschlossen werden.
7.3.2 Kontrollseren / Standardseren
Kontroll- und Standardseren sind gebrauchsfertig und müssen nicht verdünnt
werden. Bei jedem Testlauf müssen unabhängig von der Anzahl der eingesetzten
Teststreifen Kontrollseren in Einfach-, Standardseren in Doppelbestimmung
mitgeführt werden.
Pos: 23 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/R eagenzienvorbereitung: Rf- Absorbens (für T este mit IgM-Nachweis) @ 0\mod_1184741119299_6.doc @ 2868 @
Kontrollseren nicht mit Rheumafaktor-Absorbens behandeln!
7.3.3 Anti-Human IgA, IgG bzw. IgM AP-Konjugat (gebrauchsfertig)
Konjugate sind innerhalb der jeweiligen Konjugatkonzentration und
Immunglobulinklasse austauschbar. Kontaminationen der gebrauchsfertigen
Konjugate sind u. a. durch den Gebrauch steriler Pipettenspitzen unbedingt zu
vermeiden.
7.3.4 Waschlösung
Das Waschlösungskonzentrat (V 1 ) ist im Verhältnis 1:30 mit Aqua dest. auf ein
Endvolumen (V 2 ) zu verdünnen.
Beispiel:
Waschlösungskonzentrat (V 1 ) Endvolumen (V 2 )
33,3 ml 1000 ml
1,0 ml 30 ml
7.3.5 Verdünnungspuffer für Proben (gebrauchsfertig)
7.3.6 Substrat (gebrauchsfertig)
Kontaminationen der gebrauchsfertigen Substratlösung sind u. a. durch den
Gebrauch steriler Pipettenspitzen unbedingt zu vermeiden.
7.3.7 Stopplösung (gebrauchsfertig)
deutsch 10

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/T establauf/West Nile Virus: T establauf @ 12\mod_1366959390780_6.doc @ 56073 @
Pos: 27 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/T establ auf @ 12\mod_1365489408139_6.doc @ 55709 @
Pos: 28 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/M anuelle Testdurchführ ung (für ALLE Erreg er auß er C oxiella) @ 5\mod_1255349441824_6.doc @ 21510 @ 2
Pos: 25 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA
classic/Testdurchführung/Testablauf/Überschrift Testablauf @
0\mod_1180955922843_6.doc @ 732 @ 2
7.4 Übersicht - Testablauf
SERION ELISA classic
West Nile Virus IgG / IgM
quantitativ
DE
Für den IgM Nachweis mit den Proben eine Rf-Absorption durchführen, siehe Punkt 7.2.1.;
Inkubation 15 Minuten bei Raumtemperatur oder über Nacht bei 4°C.
Probenverdünnung 1
(Patientenproben)
1+100
Zugabe der verdünnten Proben und der
gebrauchsfertigen Kontroll-/ Standardseren (100 µl)
INKUBATION 60 Min./ 37 °C
feuchte Kammer
WASCHEN (4 x 300 µl DIL WASH )²
Zugabe der Konjugatlösung APC (100 µl)
INKUBATION 30 Min./ 37 °C
feuchte Kammer
WASCHEN (4 x 300 µl DIL WASH )²
Zugabe der Substratlösung pNPP (100 µl)
INKUBATION 30 Min./ 37 °C
feuchte Kammer
Zugabe der Stopplösung STOP (100 µl)
EXTINKTIONSMESSUNG bei 405 nm
1 Sonderverdünnungspuffer bei folgenden SERION ELISA classic:
Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG sowie Hantavirus Puumala IgG, IgM.
²Bei manueller Abarbeitung:
Platte nach dem Waschvorgang auf Papiertüchern gründlich ausklopfen.
deutsch 11

7.5 Manuelle Testdurchführung
1. Erforderliche Anzahl Kavitäten in den Testrahmen einsetzen und Protokollblatt
anlegen.
2. Je 100 µl der verdünnten Proben bzw. der gebrauchsfertigen Kontrollen in die
benötigten Kavitäten der Teststreifen pipettieren. Eine Kavität für den
Substratleerwert freilassen, z. B.:
IgG/IgM quantitativ
Antigen-Kavitäten
Kavität A1
Kavität B1
Kavität C1
Kavität D1
Substratleerwert
Negative Kontrolle
Standardserum
Standardserum
Kavität E1 Patient 1....
3. Probeninkubation für 60 Minuten (+/- 5 Min) bei 37 °C (+/- 1 °C) in der feuchten
Kammer.
4. Am Ende der Inkubationszeit die Kavitäten waschen (mit Waschgerät oder
manuell):
- Inkubationsflüssigkeit aus den Kavitäten absaugen oder ausschütten
- in jede Kavität 300 µl Waschlösung füllen
- Waschlösung absaugen oder ausschütten
- Vorgang 3 x wiederholen (also insgesamt 4 x waschen)
- die Platte auf Papiertüchern ausklopfen
5. Konjugatzugabe
100 µl des gebrauchsfertigen IgG/IgM Konjugates in die entsprechenden Kavitäten
pipettieren (ohne Substratleerwert).
6. Konjugatinkubation für 30 Minuten (+/- 1 Min)* bei 37 °C (+/- 1 °C) in der feuchten
Kammer.
7. Am Ende der Inkubationszeit die Kavitäten waschen (wie oben).
8. Substratzugabe
Je 100 µl gebrauchsfertige Substratlösung in alle Kavitäten (auch Substratleerwert)
pipettieren.
9. Substratinkubation für 30 Minuten (+/- 1 Min)* bei 37 °C (+/- 1 °C) in der feuchten
Kammer.
10. Stoppen der Reaktion
Je 100 µl Stopplösung in alle Kavitäten pipettieren, Mikrotiterplatte zum Mischen
leicht schütteln.
11. Extinktionsmessung
Innerhalb 60 Minuten bei 405 nm gegen den Substratleerwert messen,
Referenzwellenlänge im Bereich zwischen 620 nm und 690 nm (z. B. 650 nm).
_____________________
* Bitte beachten Sie, dass unter speziellen Arbeitsbedingungen laborinterne Anpassungen
der Inkubationszeiten notwendig sein können.
deutsch 12

Pos: 29 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_6.doc @ 21541 @ 2
Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Positi vkontroll e / Richtigkeitskontroll e @ 8\mod_1260286311409_6.doc @ 27528 @ 2
Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: TESTAU SWER TUNG + Erreg er @ 1\mod_1197038305478_6.doc @ 11384 @ 1
7.6 Automatische Testdurchführung
DE
Die SERION ELISA sind validiert für die Anwendung auf Immunomat TM sowie auf DYNEX
DSX ® und DS2 ® und geeignet für die Anwendung auf baugleichen Automaten. Die
automatische Prozessierung erfolgt analog zur manuellen Bearbeitung. Bitte beachten Sie,
dass unter speziellen Arbeitsbedingungen laborinterne Anpassungen der Substratinkubationszeiten
notwendig sein können.
7.7 Positivkontrolle / Richtigkeitskontrolle
Zur periodischen Überprüfung der Untersuchungsmethode im Rahmen des laborinternen
Qualitätsmanagements empfehlen wir die Anwendung unserer SERION ELISA control.
Die Positivkontrollen dienen als Richtigkeitskontrollen sowie zur Überprüfung der Präzision
der angewandten Methode. Der Gebrauch ist in einer separaten Arbeitsanleitung
beschrieben.
deutsch 13

Pos: 33 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Testgültig kei tskriterien @ 4\mod_1255348317229_6.doc @ 21431 @ 2
8 TESTAUSWERTUNG
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
Pos: 32 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Ei n-Punkt-Quantifizi erung @ 4\mod_1255348099107_6.doc @ 21399 @ 2
8.1 Ein-Punkt-Quantifizierung nach der 4PL-Methode
Die größtmögliche Genauigkeit der Zuordnung von Messsignalen zu quantitativen Werten
bieten nichtlineare Funktionen, die sigmoidale Kurven direkt, ohne jede weitere
Transformation, der OD-Skala anpassen. Die Konzentrationsbestimmung der Antikörper
im SERION ELISA classic erfolgt nach dem “4-Parameter logistic-log-Modell“ (4PL),
dessen mathematische Funktion durch folgende Formel beschrieben wird:
OD = A +
1 + e
D - A
B(C - ln Konz.)
Die Parameter A, B, C und D geben den Kurvenverlauf exakt wieder und definieren
1. die untere Asymptote Parameter A
2. die Steigung der Kurve im Wendepunkt Parameter B
3. den Wendepunkt der Kurve Parameter C
4. die obere Asymptote Parameter D
Die Institut Virion\Serion GmbH (Würzburg) ermittelt für jede Kitcharge die Standardkurven
in mehrfachen Testläufen unter Einhaltung optimaler Bedingungen. Auf diese Weise
entfällt die kosten- und zeitintensive Konstruktion der Standardkurve durch den Anwender.
Zur Auswertung der Testläufe wird jedem SERION ELISA classic ein chargenspezifisches
Qualitätskontrollzertifikat mit Standardkurve und Wertetabelle beigelegt. Die Software
SERION evaluate sowie die Excel-basierte Auswertehilfe SERION activity werden auf
Anfrage gerne zur Verfügung gestellt.
Zum Ausgleich von Testschwankungen und um die Qualität des Testlaufes zu überprüfen,
wird das so genannte Standardserum mitgeführt. Diesem Standardserum werden in der
Qualitätsendkontrolle ein Sollwert sowie ein Gültigkeitsbereich zugeordnet, innerhalb
dessen Grenzen eine sichere und zuverlässige Bewertung der Testergebnisse garantiert
wird.
deutsch 14

Pos: 34 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Auswertung: Ü berschrift @ 0\mod_1180968661538_6.doc @ 968 @ 2
Pos: 35 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Nichtautomatisierte Auswertung @ 4\mod_1255348011764_6.doc @ 21383 @ 3
8.2 Testgültigkeitskriterien
DE
- Der Substratleerwert sollte einen OD-Wert < 0,25 aufweisen.
- Die negative Kontrolle muss in der Testauswertung als negativ bewertet werden.
- Bei quantitativen SERION ELISA classic muss der OD-Mittelwert des
Standardserums nach Abzug des Substratleerwertes innerhalb des
Gültigkeitsbereiches liegen, welcher auf dem chargenspezifischen
Qualitätskontrollzertifikat angegeben ist.
- Die OD-Werte des Standardserums dürfen nicht mehr als 20 % differieren.
Sind diese Kriterien nicht erfüllt, ist der Testlauf ungültig und muss wiederholt werden.
8.3 Auswertung SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
8.3.1 Nichtautomatisierte Auswertung
Zur Auswertung der Testläufe wird jedem SERION ELISA classic ein chargenspezifisches
Qualitätskontrollzertifikat mit Standardkurve und Wertetabelle beigelegt. Der
Substratleerwert (blank) muss vor den Auswertungen von allen Messergebnissen
abgezogen werden.
Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Testauswertung: M ethode 1 (für all e T ests auß er T etanus & Di phtherie) @ 5\mod_1255349684243_6.doc @ 21526 @
Methode 1: Qualitative Auswertung
Zur Festlegung des cut-off Bereiches in OD multipliziert man den Mittelwert der
gemessenen OD des Standardserums mit dem angegebenen Zahlenwert auf dem
Qualitätskontrollzertifikat (siehe Formeln für spezielle Auswertesysteme), z. B.:
OD = 0,502 x MW(STD) bei oberer cut-off Grenze
OD = 0,352 x MW(STD) bei unterer cut-off Grenze
Wird beispielsweise ein Extinktionmittelwert des Standardserums von OD 0,64 gemessen,
ergibt sich ein cut-off Bereich von OD 0,225 bis 0,321.
deutsch 15

Pos: 38 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_6.doc @ 21351 @ 3
Methode 2:
Pos: 37 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Methode 2 (für alle T ests) @ 4\mod_1255348201981_6.doc @ 21415 @
Stufenlose Bestimmung der Antikörperaktivitäten mittels Standardkurve:
Testschwankungen, die von Tag zu Tag sowie von Labor zu Labor auftreten können, so
genannte Interassay-Varianzen, werden durch Multiplikation des aktuellen Messwerts der
Patientenproben mit dem Korrekturfaktor F ausgeglichen:
F =
OD-Sollwert (des Standardserums)
OD-Tageswert (des Standardserums)
Dieses Verfahren ist notwendig, um das aktuelle Testniveau des Anwenders an die
chargenspezifische Standardkurve anzugleichen bzw. zu normalisieren. Auf diese Weise
werden Tagesschwankungen korrigiert.
1. Mittelwert aus den beiden Extinktionswerten des Standardserums bilden und
prüfen, ob der ermittelte Wert im angegebenen Gültigkeitsbereich liegt.
2. Berechnung des Faktors F: Der angegebene Sollwert des Standards wird durch den
Mittelwert der Extinktion des Standardserums geteilt:
F = Sollwert Extinktion Standardserum / Mittelwert Extinktion Standardserum.
3. Alle Messwerte der Patientenproben werden mit F multipliziert.
4. Über die korrigierten Messwerte können anhand der Standardkurve
Antikörperaktivitäten in IU/ml bzw. U/ml abgelesen werden.
deutsch 16

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Quantifi zierungsgrenzen @ 6\mod_1258098664276_6.doc @ 24398 @ 2
Pos: 41 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Interpretation der Ergebnisse @ 0\mod_1190013774869_6.doc @ 9938 @ 2
8.3.2 Automatische Testauswertung mit der Software SERION evaluate
DE
Durch Eingabe der vier Parameter und des Sollwertes des Standardserums werden
Antikörperaktivitäten nach Prozessierung und Messung des SERION ELISA classic durch
das Auswerteprogramm SERION evaluate errechnet.
Falls ein Wert außerhalb des Gültigkeitsbereiches liegt, werden folgende
Fehlermeldungen in englischer Sprache angezeigt:
„Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” bzw.
„Standard values differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.”
In diesen Fällen ist der Testlauf ungültig und muss wiederholt werden.
Die vier Kurvenparameter und der Sollwert müssen nur bei Chargenwechsel geändert
werden (Parameter und Sollwert sind auf der Wertetabelle angegeben). Die korrekte
Eingabe dieser chargenspezifischen Daten kann anhand der dem Standardserum
zugeordneten Aktivität (in IU/ml bzw. U/ml) überprüft werden. Der erhaltene Mittelwert der
Antikörperaktivität muss mit der auf dem chargenspezifischen Qualitätskontrollzertifikat
angegebenen Bewertung übereinstimmen. Eine Messwertkorrektur erfolgt automatisch. Im
Ausdruck der Messergebnisse erscheint:
Probenbezeichnung
OD-Wert
IU/ml bzw. U/ml
Bewertung
8.4 Quantifizierungsgrenzen
Die Quantifizierungsgrenzen sind auf dem Kontrollzertifikat des SERION ELISA classic
angegeben. Im Rahmen der Leistungsbewertungsstudie wurde die Verdünnungslinearität
über diesen Bereich nachgewiesen. Sollten Patientenproben Messwerte oberhalb dieses
Bereichs erzielen, können die Proben in einer höheren Verdünnung analysiert werden. Die
erhaltenen Antikörperkonzentrationen sind dann mit dem zusätzlichen Verdünnungsfaktor
zu multiplizieren.
Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Grenzwertber eich ( für T este mehrerer Ig-Klassen) @ 9\mod_1276070736543_6.doc @ 32153 @ 2
8.5 Grenzwertbereiche
Die Grenzwertbereiche der SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM sind auf den
Qualitätskontrollzertifikaten angegeben und kennzeichnen die Bereiche grenzwertiger
Messergebnisse. Die Bewertung einer Patientenprobe unterhalb des Grenzwertbereichs
charakterisiert ein negatives Testergebnis; die Bewertung einer Patientenprobe oberhalb
des Grenzwertbereichs wird als positives Testergebnis interpretiert. Im Falle eines
grenzwertigen Ergebnisses ist keine sichere Bewertung der Patientenprobe möglich. In
einem solchen Fall sollte der Test parallel mit einer, im Abstand von ein bis zwei Wochen
entnommenen, neuen Serumprobe (Serumpaar) wiederholt werden.
deutsch 17

os: 42 /Arbeitsanleitung en ELISA classic/Gültig für nur ein Dokument/T estauswertung/Dengue/D eng ue: Interpr etation der Ergebnisse @ 9\mod_1316176473188_6.doc @ 36426 @
8.6 Interpretation der Ergebnisse
Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/West Nile Virus/West Nile Virus Interpretation der Ergebnisse @ 12\mod_1366959586560_6.doc @ 56091 @
Serologische Testergebnisse sollten nur im Zusammenhang mit der Patientenanamnese
und im Kontext zur klinischen Symptomatik sowie eventuell zu weiteren Laborbefunden
interpretiert werden.
Positive Ergebnisse in den SERION ELISA classic West Nile Virus IgM und IgG
korrelieren mit dem Vorhandensein von Antikörpern gegen das West Nil Virus. Ein
positives Ergebnis im SERION ELISA classic West Nile Virus IgM bei negativem IgG
Befund deutet auf eine kürzlich erfolgte Infektion im akuten Krankheitsstadium hin. Da IgM
Antikörper mitunter über mehrere Wochen oder Monate persistieren, können positive
Ergebnisse in den SERION ELISA classic West Nile Virus IgM und IgG bei akuten oder
zurückliegenden Infektion erzielt werden. Isoliert positive Ergebnisse im SERION ELISA
classic West Nile Virus IgG sind als Hinweis auf bereits länger zurückliegende Infektionen
zu interpretieren. Serokonversionen bei paralleler Untersuchung von Serumpaaren, die im
Abstand von ein bis zwei Wochen entnommen wurden, sind ein deutlicher Hinweis auf
eine frische Infektion.
Ein negatives Ergebnis in den SERION ELISA classic West Nile Virus IgG und IgM
schließt eine frisch erworbene Infektion nicht aus. Bei begründetem Verdacht mit
entsprechender Symptomatik und anamnestischer Hinweise ist die Untersuchung einer
weiteren Serumprobe, die in einem zeitlichen Abstand von ein bis zwei Wochen
entnommen wird, oder die Untersuchung der vorliegenden Probe in einem anderen
Testverfahren (z.B. PCR), anzuraten.
Ergebnisse im Grenzwertbereich können nicht interpretiert werden. Sie sind durch
Untersuchung einer weiteren Serumprobe, die im Abstand von ein bis zwei Wochen
entnommen wird oder durch Untersuchung der vorliegenden Probe in einem anderen
Testverfahren (z.B. PCR) abzuklären.
In der folgenden Tabelle sind das Auftreten möglicher Antikörperkonstellationen und ihre
diagnostische Aussage zusammenfassend dargestellt.
Grundinterpretationsschema
IgM IgG Bewertung
- -
keine Anzeichen für eine Infektion; bei Verdacht auf eine akute
Infektion: Verlaufskontrolle nach ein bis zwei Wochen
+ -/+ Hinweis auf Frühstadium einer Infektion
+ + Hinweis auf eine akute Infektion
- + Hinweis auf eine zurückliegende Infektion
Antikörper gegen weitere Flaviviren wie das FSME Virus, das Japanische Enzephalitis
Virus, das Dengue Virus oder das Gelbfieber Virus können auf Grund der großen
Homologie zwischen den einzelnen Mitgliedern der Familie der Flaviviridae und dadurch
bedingter Kreuzreaktivitäten zu falsch positiven Ergebnissen führen.
Pos: 43 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Refer enzbereiche gesunder Pr obanden @ 8\mod_1258644290978_6.doc @ 26748 @ 2
deutsch 18

Pos: 45 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Leistungsmer kmale @ 0\mod_1184676089844_6.doc @ 2101 @ 1
8.7 Referenzbereiche gesunder Probanden
Pos: 44 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/West Nile Virus/West Nile Virus Refenrenzber eiche g esunder Probanden @ 12\mod_1366959813962_6.doc @ 56108 @
Die Untersuchung von Seren unselektierter Blutspender aus dem süddeutschen Raum mit
den SERION ELISA classic West Nile Virus IgG und IgM ergab folgende Verteilungen:
Von 105 untersuchten Seren wurden 93 (88,6 %) mit dem SERION ELISA classic West
Nile Virus IgG negativ bewertet, drei Seren (2,9 %) lieferten einen positiven Befund und
neun Seren (8,6 %) wurden grenzwertig bewertet. Im SERION ELISA classic West Nile
Virus IgM erzielten 103 von 105 Blutspendern (98,1 %) ein negatives Ergebnis, zwei
Seren (1,9 %) wurden grenzwertig eingestuft, kein Serum lieferte einen positiven Befund.
DE
9 LEISTUNGSMERKMALE
classic/Leistungsmerkmale/Kapitelüberschrift: 0\mod_1190013251494_6.doc Pos: 46 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 9923 classic/Gültig @ 2 Sensitivität für alle Dokumente/ELISA
und Spezifität @
9.1 Sensitivität und Spezifität
Pos: 47 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/West Nile Virus/West Nile Virus Sensiti vität und Spezifität @ 12\mod_1366960055337_6.doc @ 56126 @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
Für die Bestimmung der Sensitivität des SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
wurden 30 Proben von Patienten mit Verdacht auf eine West Nil Virus Infektion untersucht,
die in zwei kommerziell erhältlichen Enzymimmunoassays übereinstimmend positiv
bewertet wurden. 25 der 30 Proben erzielten im SERION ELISA classic West Nile Virus
IgG ein positives Ergebnis, drei reagierten grenzwertig. In zwei Proben konnte keine
Antikörperaktivität nachgewiesen werden.
Die Spezifität des SERION ELISA classic West Nile Virus IgG wurde mit 69 Seren
gesunder Blutspender aus dem süddeutschen Raum bestimmt, die in zwei kommerziell
erhältlichen Enzymimmunoassays übereinstimmend negative Ergebnisse erzielten. Von
den 69 negativ vorbewerteten Seren wurden 62 im SERION ELISA classic West Nile Virus
IgG ebenfalls negativ bewertet, fünf wurden grenzwertig eingestuft und mit zwei Seren
wurden positive Ergebnisse erzielt.
Sensitivität
Spezifität
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG 92,6 % 96,9 %
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
Die Bestimmung der Leistungsparameter des SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
erfolgte durch die Analyse von 103 negativ vorbewerteten Seren gesunder Blutspender
sowie von 30 Proben von Patienten mit Verdacht auf eine West Nil Virus Infektion, die
zuvor in zwei kommerziell erhältlichen Enzymimmunoassays übereinstimmend positive
Ergebnisse erzielt hatten. 28 von 30 postiv vorbewerteten Proben erzielten im SERION
ELISA classic West Nile Virus IgM ebenfalls positive Resultate, zwei Proben wurden
grenzwertig getestet. 101 der 103 Seren gesunder Blutspender wurden mit dem SERION
ELISA classic West Nile Virus IgM negativ bewertet, bei zwei Seren wurde eine
grenzwertige Antikörperaktivität nachgewiesen.
Sensitivität
Spezifität
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM >99 % >99 %
Zur Berechnung der Sensitivitäten und Spezifitäten wurden die grenzwertig eingestuften
Ergebnisse nicht berücksichtigt.
deutsch 19

Pos: 48 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Präzisi on @ 0\mod_1184676568397_6.doc @ 2116 @ 2
Pos: 50 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_6.doc @ 21189 @ 122
9.2 Präzision
Pos: 49 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/West Nile Virus/West Nile Virus Pr äzision @ 12\mod_1366960347929_6.doc @ 56143 @
Die intraserielle Präzision wurde mit unterschiedlich reaktiven Seren im Mehrfachansatz
(n = 20) innerhalb einer antigenbeschichteten Platte ermittelt. Für die Bestimmung der
interseriellen Präzision wurden Serumproben mit unterschiedlicher Reaktivität in 10
unabhängig voneinander durchgeführten Ansätzen geprüft.
Standardabweichung
Variationskoeffizient (VK %) = x 100
Mittelwert
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG:
Probe
Mittlere
Extinktion (OD)
Intraassay
(VK %)
Mittlere
Extinktion (OD)
Interassay
(VK %)
Serum 1 0,396 3,0 0,413 8,0
Serum 2 0,611 2,2 0,626 7,6
Serum 3 1,259 6,2 1,355 3,6
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM:
Probe
Mittlere Intraassay Mittlere Interassay
Extinktion (OD) (VK %) Extinktion (OD) (VK %)
Serum 1 0,532 3,7 0,434 14,2
Serum 2 1,035 5,0 0,888 6,0
Serum 3 1,542 2,1 1,394 3,6
deutsch 20

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Liter atur/Kapitelüberschrift: Liter atur @ 0\mod_1190013903728_6.doc @ 9954 @ 1
10 SICHERHEITSMASSNAHMEN
DE
10.1 Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen
Der SERION ELISA classic ist nur für die Anwendung durch Fachpersonal vorgesehen,
welches die Arbeitstechniken einwandfrei beherrscht.
Für die Handhabung der Testreagenzien und der Patientenproben gelten die anerkannten
Laborregeln:
- Die Testpackung enthält Verdünnungen humaner Seren. Obwohl alle eingesetzten
Seren negativ auf anti-HIV-Ak, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen) und anti-
HCV-Ak getestet wurden, müssen sie als potentiell infektiös betrachtet werden.
- Nicht mit dem Mund pipettieren.
- In Bereichen, in denen mit Testreagenzien oder mit Patientenproben gearbeitet wird,
nicht essen, trinken oder rauchen.
- Beim Umgang mit Testreagenzien und Patientenproben direkten Kontakt durch das
Tragen von Laborkittel, Einweghandschuhen und Schutzbrille vermeiden. Hände
anschließend gründlich reinigen.
- Die Patientenproben und alle potentiell infektiösen Materialien sind nach der Testdurchführung
zu dekontaminieren.
- Die Reagenzien sind unzugänglich für Kinder aufzubewahren.
- Stopplösung:
Ätzend (C); R34: verursacht Verätzungen,
Schutzbrille, Handschuhe und Laborkittel sind zu tragen.
10.2 Entsorgung
Bitte beachten Sie die jeweils geltenden gesetzlichen Vorschriften!
deutsch 21

11 LITERATUR
Pos: 52 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Literatur /West Nile Virus Li ter atur @ 12\mod_1366961104707_0.doc @ 56177 @
[1] Beasley DWC., Holbrook MR., Travassos da Rosa A., Coffey L., Carrara AS.,
Philippi-Falkenstein K., Bohm Jr RP., Ratterree MS. Lillibridge KM., Ludwig GV.,
Estrada-Franco J., Weaver SC., Tesh RB., Shope RE., Barrett ADT. Use of a
Recombinant Envelope Protein Subunit Antigen for Specific Serological Diagnosis
of West Nile Virus Infection Journal of Clinical Microbiology; 42 2759-2765; 2004
[2] Campell GL., Marfin AA., Lanciotti RS., Gubler DJ. West Nile Virus Lancet Infect.
Dis.; 2 519-529; 2002
[3] Chávez JH., Silva JR., Amarilla AA., Figueiredo LTM. Domain III peptides from
flavivirus envelope protein are useful antigens for serologic diagnosis and targets
for immunization Biologicals; 38 613-618; 2010
[4] Dauphin G. & Zientara S. West Nile Virus: Recent trends in diagnosis and vaccine
development Vaccine; 25 5563-5576; 2007
[5] Diamond MS., Pierson TC., Fremont DH. The Structural Immunology of Antibody
Protection against West Nile Virus Immunol Rev.; 225 212-225; 2008
[6] Kemmerly SA. Diagnosis and Treatment of West Nile Infections The Ochsner
Journal; 5 16-17; 2003
[7] Marr J. & Calisher C. Alexander the Great and West Nile Virus Encephalitis Emer.
Infect. Diseases; 9 1599-1603; 2003
[8] Monini M., Falcone E., Busani L., Romi R., Ruggeri FM. West Nile Virus:
Characteristics of an African Virus Adapting to the Third Millennium World The
Open Virology Journal; 4 42-51; 2010
[9] Niedrig M., Sonnenberg K., Steinhagen K., Paweska JT. Comparison of ELISA and
immunoassays for measurement of IgG and IgM antibody to West Nile Virus in
human sera against virus neutralisation Journal of Virological Methods; 139 103-
105; 2007
[10] Oliphant T., Engle M., Nybakken GE., Doane C., Johnson S., Huang L., Gorlatov S.,
MehlhopE., Marri A., Chung KM., Ebel GD., Kramer LD., Fermont DH., Diamond
MS. Development of a Humanized monoclonal Antibody with Therapeutic Potential
against West Nile Virus Nat. Med.; 11 522-530; 2005
[11] Oliphant T., Nybakken GE., Engle M., Xu Q., Nelson CA., Sukupolvi-Petty S., Marri
A., Lachmi BE., Olshevsky U., Fremont DH., Pierson TC., Diamond MS. Antibody
Recognition and Neutralization Determinants on Domains I and II of West Nile Virus
Envelope Protein Journal of Virology; 80 12149-12159; 2006
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[13] Zhang W., Wu J., Li Y., Li F., Njoo H. Rapid and Accurate in Vitro Assays for
Detection of West Nile Virus in Blood and Tissues Transfusion Medicine Reviews;
23 146-154; 2009
deutsch 22

SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
EN
CONTENTS
1 INTENDED USE
2 DIAGNOSTIC RELEVANCE
3 TEST PRINCIPLE SERION ELISA classic
4 KIT COMPONENTS
EL EN
5 MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
6 STORAGE AND STABILITY
7 TEST PROCEDURE SERION ELISA classic
7.1 Evidence of Deterioration
7.2 Sample Preparation and Storage
7.3 Preparation of Kit Reagents
7.4 Overview - Test Procedure
7.5 Manual Test Procedure
7.6 Automated Test Procedure
7.7 Positive Control / Accuracy Control
CS PT
8 TEST EVALUATION
8.1 Single-Point Quantification with the 4PL Method
8.2 Criteria of Validity
8.3 Calculation SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
8.4 Limits of Quantification
8.5 Borderline Ranges
8.6 Interpretation of Results
8.7 Reference Range of healthy Individuals
9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS
9.1 Sensitivity and Specificity
9.2 Reproducibility
10 SAFETY MEASURES
10.1 Statements of Warning
10.2 Disposal
11 REFERENCES
current version No.: V 1.13/04-1
previous version: --

Pos: 5 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_18.doc @ 221 @ 1
Pos: classic/Allgemeine @ 4\mod_1255336385816_18.doc 1 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ classic/Einleitung classic/Gültig 21165 @ für "Enzymimmunoassay"
alle Dokumente/ELISA
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
Enzyme-immunoassay for determination of human antibodies
for in vitro diagnostic use
Dokument/Bestellnummern/West 12\mod_1366958469615_18.doc Pos: 2 /Arbeitsanleitungen ELISA @ Nile classic/Gültig 56007 Virus @ Bestellnummern für nur ein @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG Order Nr.: ESR141G
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM Order Nr.: ESR141M
classic/Allgemeine 0\mod_1177351044007_18.doc Pos: 3 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ 170 classic/Kapitelüberschrift classic/Gültig @ 1 für alle Dokumente/ELISA
"Anwendungsbereich" @
1 INTENDED USE
Pos: 4 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Anwendungsber eich/West Nile Vir us Anwendungsbereich @ 12\mod_1366957860138_18.doc @ 55973 @
The SERION ELISA classic West Nile Virus IgG and IgM tests are quantitative and
qualitative immunoassays for the demonstration of human antibodies in serum or plasma
directed against West Nile virus. The SERION ELISA classic West Nile Virus IgM test
allows for the detection of acute infections. The SERION ELISA classic West Nile Virus
IgG is recommended for demonstration of contact with the pathogen, determination of the
immune status and epdimemiological studies.
2 DIAGNOSTIC RELEVANCE
Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Di agnostische Bedeutung/West Nile Virus Diagnostische Bedeutung @ 12\mod_1366958140940_18.doc @ 55990 @
Besides the Dengue virus, the Yellow Fever virus and the TBE virus, the West Nile virus
belongs to the human pathogenic species among the flaviviruses. Birds such as ravens
and sparrows represent the natural reservoires for the arbovirus (arthropode borne virus).
Mosquitos of the genus Culex, Aedes and Ochlerotatus are the main vectors of the West
Nile virus to humans.
The RNA-genome of the West Nile virus is surrounded by a spherical capsid of icosaedral
symmetry. The capsid is enclosed into a lipid membrane. In particular the envelope protein
E, embedded in the outer membrane, is highly immunogenic.
The West Nile virus was discovered in 1937 in the West Nile district of Uganda. In large
parts of Africa, eastern Europe and Asia, infections caused by the West Nile virus have
long been recorded. Since the 1990s, an increased number of epidemic outbreaks have
occured in Europe, Australia and Northern America.
The incubation period ranges from three to 14 days. Infections with the West Nile virus are
usually asymptomatic. In mild courses of disease, flu-like symptomes such as fever,
headaches, myalgia and arthralgia as well as gastrointestinal symptoms may be present
(West Nile fever). The virus is able to pass the blood-brain barrier and therefore, in rare
cases a West Nile virus infection can be accompanied by encephalitis, meningitis or acute
paralysis. Connected with the virus expansion over Europe, Australia and America, severe
courses of disease are appearing in increasing numbers. These severe, neurological
disease forms mainly occur in elderly or immunocompromized patients and can lead to
death or result in permanent damage.
For the laboratory confirmation of West Nile virus infections the serological analysis of IgM
antibodies is recommended. IgM antibodies appear by the end of the first week after the
onset of symptoms and are produced by more than 90 % of all infected persons. IgM
antibodies can be detected for several weeks or months. IgG antibodies appear not before
eight days after disease onset and can persist for months or lifelong.
Pos: 7 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/T estprinzip/Testpri nzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_18.doc @ 21208 @ 1
english 2

3 TEST PRINCIPLE SERION ELISA classic
The ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) is an immunoassay, which is
particularly suited to the determination of antibodies in the field of infectious serology. The
reaction is based on the specific interaction of antibodies with their corresponding antigen.
The test strips of the SERION ELISA classic microtiter plate are coated with specific
antigens of the pathogen of interest. If antibodies in the patient´s serum sample are
present, they bind to the fixed antigen. A secondary antibody, which has been conjugated
with the enzyme alkaline phosphatase, detects and binds to the immune complex. The
colourless substrate p-nitrophenylphosphate is then converted into the coloured product
p-nitrophenol. The signal intensity of this reaction product is proportional to the
concentration of the analyte in the sample and is measured photometrically.
Pos: 8 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für mehrere Dokumente/Inhalt und
Zusammensetzung/Inhalt und Zusammensetzung (alle außer Bor,EBV,Hanta,Parvo,
Coxiella) @ 4\mod_1255342923549_18.doc @ 21224 @ 1
EN
EL EN
CS PT
english 3

4 KIT COMPONENTS
Test Components Pieces /
Volume
Break apart microtiter test strips each with eight antigen coated single wells,
(altogether 96) MTP ,
1 frame.
The coating material is inactivated.
12 pieces
Standard serum (ready-to-use) STD ,
Human serum in protein containing phosphate buffer;
negative for anti-HIV Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus surface antigen) and anti-HCV Ab;
preservative: < 0.1 % sodium azide;
colouring: Amaranth O.
Negative control serum (ready-to-use) NEG ,
Human serum in protein containing phosphate buffer;
negative for anti-HIV Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus surface antigen) and anti-HCV Ab;
preservative: < 0.1 % sodium azide;
colouring: Lissamin Green V.
Anti-human IgA, IgG or IgM conjugate (ready-to-use) APC ,
Anti-human IgA, IgG or IgM polyclonal antibody,
conjugated to alkaline phosphatase, stabilised with protein stabilisation solution;
preservative: 0.01 % methylisothiazolone, 0.01 % bromnitrodioxane.
Washing solution concentrate (sufficient for 1000 ml) WASH ,
Sodium chloride solution with Tween 20 and 30 mM Tris/HCl, pH 7,4;
preservative: < 0.1 % sodium azide.
Dilution buffer DILB ,
Protein containing phosphate buffer with Tween 20;
preservative: < 0.1 % sodium azide;
colouring: 0.01 g/l Bromphenol blue.
Stopping solution STOP ,
1.2 N sodium hydroxide.
Substrate (ready-to-use) pNPP ,
Para-nitrophenylphosphate in solvent free buffer;
preservative: < 0.1 % sodium azide
(Substrate in unopened bottle may have a slightly yellow coloring, which does not
reduce the quality of the product!)
Quality control certificate with standard curve and evaluation table INFO ,
(quantification of antibodies in IU/ml or U/ml).
2 x 2 ml
2 ml
13 ml
33,3 ml
2 x 50 ml
15 ml
13 ml
2 pages
Pos: 9 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für mehrere Dokumente/Zusätzlich
benötigte Materialien/Z200 Zusätzlich benötigte Materialien (für Teste mit IgM-
Nachweis) @ 9\mod_1316422545600_18.doc @ 36490 @ 1
english 4

5 MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
- common laboratory equipment
- for the IgM detection: SERION Rf-Absorbent, Order Nr.: Z200 (20 ml)
- photometer for microtitre plates with filter, wavelength 405 nm,
recommended reference wavelength 620 nm - 690 nm (e.g. 650 nm)
- incubator 37 °C
- moist chamber
- distilled water
- Click-Clips (order no. VT120)
Pos: 10 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA
classic/Lagerung und Haltbarkeit/Lagerung und Haltbarkeit @
4\mod_1255343176800_18.doc @ 21240 @ 1
CS PT
EN
EL EN
english 5

Pos: 11 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Überschrift: Durchführ ung @ 0\mod_1184679699953_18.doc @ 2473 @ 1
6 STORAGE AND STABILITY
Reagent Storage Stability
Microtiter strips
(coated with antigen)
unopened
see expiry date;
after opening at 2 – 8 °C in closed aluminum bag with
desiccant
minimum shelf-life:
four weeks;
Control sera /
Standard sera
Strips which are not used must be stored dry in the
closed aluminum bag.
after opening at 2 – 8 °C
shelf-life in case of
proper use and
storage until expiry
date
see expiry date;
24 months as of
production
Conjugate ready-to-use solution at 2 – 8 °C
Avoid contamination e.g. by using sterile tips.
see expiry date;
28 months as of
production
Dilution buffer
Unopened
after opening at 2 – 8 °C
Discard cloudy solutions.
see expiry date;
36 months as of
production;
24 months
Washing solution Concentrate after opening at 2 – 8 °C
working dilution at 2 – 8 °C
working dilution at room temperature
Bottles used for the working dilution should be
cleaned regularly. Discard cloudy solutions.
see expiry date;
2 weeks;
1 week
Substrate
ready-to-use solution at 2 – 8 °C,
stored protected from light
Avoid contamination e.g. by using sterile tips.
Discard if solution turns yellow (extinction against
aqua dest. > 0.25 OD).
see expiry date;
36 months as of
production
Stopping solution After opening at room temperature see expiry date
english 6

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Allgemeine Hi nweise ELISA cl assic @ 4\mod_1255343318159_18.doc @ 21256 @ 2
7 TEST PROCEDURE SERION ELISA classic
EN
7.1 Evidence of Deterioration
Only use SERION ELISA classic reagents when using SERION ELISA classic
immunoassays. The components must not be exchanged for reagents of other
manufacturers. Standard and control sera of SERION ELISA classic immunoassays are
defined exclusively for the test kit to be used and must not be used in other lots. Dilution
buffer, washing solution, substrate and stop solution can be used for all SERION ELISA
classic immunoassays irrespective of the lot and the test.
There are three different conjugate concentrations for each immunoglobulin class: LOW,
MEDIUM, HIGH. The classification is written on each label as follows:
e.g. IgG + low concentrated IgG conjugate
IgG ++ medium concentrated IgG conjugate
IgG +++ high concentrated IgG conjugate
In rare cases the use of special conjugate is necessary to guarantee consistent quality of
our products. Special conjugates are produced in a separate lot and do not carry the “+”
sign and are not exchangeable with other conjugates.
EL EN
CS PT
Please pay close attention to information on labels!
Unopened, all components of the SERION ELISA classic tests may, if stored accordingly,
be used up to the expiry dates given on the labels. Reagents may not be used after date of
expiry.
Dilution or alteration of the reagents may result in a loss of sensitivity.
Avoid exposure of reagents to strong light during storage and incubation. Reagents must
be tightly closed after use to avoid evaporation and contamination.
To open the aluminum bag of the microtiter plate please cut off the top of the marked side
only, in order to guarantee proper reclosing. Do not use the strips if the aluminum bag is
damaged or if the bag with remaining strips and desiccant was not properly reclosed.
Use aseptic techniques when removing aliquots from the reagent tubes to avoid
contamination. To avoid false positive results ensure not to contact or splash the top-walls
of wells while pipetting conjugate. Take care not to mix the caps of the bottles and/or vials.
Reproducibility of test results is dependent on thorough mixing of the reagents. Agitate the
flasks containing control sera before use and also all samples after dilution (e.g. by using a
vortex mixer).
Be sure to pipette carefully and comply with the given incubation times and temperatures.
Significant time differences between pipetting the first and last well of the microtiter plate
english 7

Pos: 14 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Kapi tel überschrift Probenverdünnung @ 0\mod_1184679414434_18.doc @ 2313 @ 3
Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Nile Virus Teil 2 Ü berschrift @ 12\mod_1366959209524_18.doc @ 56041 @
when dispensing samples and control sera, conjugate or substrate can result in different
pre-incubation times, which may influence the precision and reproducibility of the results.
Optimum results can only be achieved if the instructions are strictly followed.
The SERION ELISA classic immunoassay is only valid if the lot-specific validation criteria
on the quality control certificate are fulfilled.
Adequate washing avoids test unspecificities. Therefore, the washing procedure should be
carried out carefully. All of the flat bottom wells should be filled with equal volumes of
washing buffer. At the end of the procedure ensure that the wells are free of all washing
buffer in order to avoid uncontrolled dilution effects. Avoid foaming!
Take care not to damage the inscription (pathogen / antibody class) on the microtiter test
strips during washing and aspiration to avoid confusion.
Pos: 13 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenvor ber. und Lager ung (für ALLE Err eger auß er Borreli a, CM V, FSM E, H SV,Masern,Mumps,R öteln,VZ V) @ 8\mod_1263998040982_18.doc @ 28430 @ 2
7.2 Sample Preparation and Storage
Lipaemic, hemolytic or icteric samples (serum or plasma) should only be tested with
caution. Obviously contaminated samples should not be tested. Serum or plasma (EDTA,
citrate, heparin) collected according to standard laboratory methods are suitable samples.
Samples must not be thermally inactivated.
7.2.1 Dilution of Samples
Before running the test, patient samples (V 1 ) must be diluted in dilution buffer (V 2 ) as
follows:
Pos: 15 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Ni kle Virus T eil 1 @ 12\mod_1366959098552_18.doc @ 56024 @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
V 1 + V 2 = 1 + 100 add 10 µl patient’s sample
each to 1000 µl
dilution buffer
Pos: 16 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_18.doc @ 21288 @
After dilution and before pipetting into the microtiter plate the samples must be mixed
thoroughly to prepare a homogenous solution.
english 8

SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
Pos: Dokumente/Testdurchführung/Probenverdünnung: mit IgM-Nachweis) 18 /Arbeitsanleitungen @ 9\mod_1316422765852_18.doc ELISA classic/Gültig für @ Rheumafaktor-Interferenz mehrere 36507 @
(für Tests
Interference with rheumatoid factors
Rheumatoid factors are autoantibodies mainly of the IgM class, which preferably bind to
IgG immune complexes. The presence of non-specific IgM antibodies (rheumatoid factors)
can lead to false-positive results in the IgM assay. Furthermore, the possibility exists, that
weak-binding pathogen-specific IgM antibodies may be displaced by stronger-binding IgG
antibodies leading to a false negative IgM result. Therefore it is necessary to pretreat
samples with rheumatoid factor-absorbens prior to IgM detection (SERION Rf-Absorbent,
Order Nr.: Z200 (20 ml/100 tests)). Rf-absorption is performed by incubation of the
patient’s sample in Rf-dilution buffer for 15 minutes at room temperature or over night at
4 °C. The test procedure is described in a separate instruction manual.
Pos: 19 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Nile Virus Teil 3 @ 12\mod_1366959279193_18.doc @ 56058 @
Before running the test, rheumatoid factor-absorbent (V 1 ) must be diluted 1+4 in dilution
buffer (V 2 ).
V 1 + V 2 = V 3 (1 + 4) add 200 µl Rf-absorbent
each to 800 µl dilution buffer
EN
EL EN
CS PT
Patient’s samples (V 4 ) must be diluted in this Rf-dilution buffer (V 3 ):
V 4 + V 3 = 1 + 100 add 10 µl patient’s sample
each to 1000 µl
Rf-dilution buffer
Pos: 20 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_18.doc @ 21288 @
After dilution and before pipetting into the microtiter plate the samples must be mixed
thoroughly to prepare a homogenous solution.
Pos: 21 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenlager ung @ 4\mod_1255343526141_18.doc @ 21272 @ 3
7.2.2 Sample Storage
The patient’s samples should not be stored for more than 7 days at 2 – 8 °C. Extended
storage is possible at ≤ -20 °C. Avoid repeated freezing and thawing of samples. Diluted
samples can be stored at 2 – 8 °C for one week.
Pos: 22 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA
classic/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung, Teil 1 @
4\mod_1255343795606_18.doc @ 21304 @ 233
english 9

Pos: 24 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 2 @ 4\mod_1255343884183_18.doc @ 21320 @ 33333
Pos: 25 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/Ü berschrift Testablauf @ 0\mod_1180955922843_18.doc @ 733 @ 2
7.3 Preparation of Kit Reagents
Bring all reagents to room temperature before testing.
7.3.1 Microtiter Test Strips
The microtiter test strips in frames are packed with a desiccant in an aluminum bag.
Take unrequired cavities out of the frame and put them back into the aluminum bag.
Close bag carefully to ensure airtight conditions.
7.3.2 Control Sera / Standard Sera
Control and standard sera are ready-to-use and must not be diluted any further. For
each test run - independent of the number of microtiter test strips to be used -
control and standard sera must be included. The standard sera should be set up in
duplicate.
Pos: 23 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/R eagenzienvorbereitung: Rf- Absorbens (für T este mit IgM-Nachweis) @ 0\mod_1184741119299_18.doc @ 2870 @
Do not treat control sera with Rf-absorbent.
7.3.3 Anti-human IgA, IgG or IgM AP-Conjugate (ready-to-use)
Conjugates with the same concentration and of the same immunoglobulin class are
interchangeable. Avoid contamination of ready-to-use conjugates e. g. by using
sterile tips.
7.3.4 Washing Solution
Dilute washing buffer concentrate (V 1 ) 1:30 with aqua dest. to a final volume of V 2 .
Example:
Buffer concentrate (V 1 ) Final volume (V 2 )
33,3 ml 1000 ml
1,0 ml 30 ml
7.3.5 Dilution Buffer for Samples (ready-to-use)
7.3.6 Substrate (ready-to-use)
Avoid contamination of the ready-to-use substrate solution e. g. by using sterile tips.
7.3.7 Stopping Solution (ready-to-use)
english 10

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/T establauf/West Nile Virus: T establauf @ 12\mod_1366959390780_18.doc @ 56075 @
Pos: 27 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/T establ auf @ 12\mod_1365489408139_18.doc @ 55710 @
Pos: 28 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/M anuelle Testdurchführ ung (für ALLE Erreg er auß er C oxiella) @ 5\mod_1255349441824_18.doc @ 21511 @ 2
7.4 Overview - Test Procedure
EN
SERION ELISA classic
West Nile Virus IgG / IgM
quantitative
In case of IgM detection absorption of rheumatoid factor, see No. 7.2.1;
Incubation 15 minutes at room temperature or over night at 4°C
EL EN
sample dilution 1
(patient´s samples)
1+100
Pipette diluted samples and ready-to-use control /
standard sera into the microtest wells (100 µl)
INCUBATION 60 Min./ 37 °C
moist chamber
WASH (4 x 300 µl DIL WASH )²
Pipette conjugate solution APC (100 µl)
INCUBATION 30 Min./ 37 °C
moist chamber
WASH (4 x 300 µl DIL WASH )²
Pipette substrate solution pNPP (100 µl)
INCUBATION 30 Min./ 37 °C
moist chamber
Pipette stopping solution STOP (100 µl)
READ EXTINCTION at 405 nm
CS PT
1 Special dilution buffers for the following SERION ELISA classic tests:
Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG and Hantavirus Puumala IgG, IgM
2 For manual use:
tap plate at the end of the wash procedure on paper towel.
english 11

Pos: 29 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_18.doc @ 21543 @ 2
7.5 Manual Test Procedure
1. Place the required number of cavities in the frame and prepare a protocol sheet.
2. Add each 100 µl of diluted sample or ready-to-use controls into the appropriate
wells of microtiter test strips. Spare one well for substrate blank, e.g.:
IgG/IgM quantitative
well no.
well A1
well B1
well C1
well D1
Substrate blank
Negative control
Standard serum
Standard serum
well E1 Patient 1....
3. Sample incubation for 60 minutes (+/- 5 min) at 37 °C (+/- 1°C) in moist chamber
4. After incubation wash all wells with washing solution (by automated washer or
manually):
- aspirate or shake out the incubation solution
- fill each well with 300 µl washing solution
- aspirate or shake out the washing buffer
- repeat the washing procedure 3 times (altogether 4 times!)
- dry by tapping the microtiter plate on a paper towel
5. Addition of conjugate
Add 100 µl of the ready-to-use IgG/IgM conjugate to the appropriate wells (except
substrate blank)
6. Conjugate incubation for 30 minutes (+/- 1 min)* at 37 °C (+/- 1 °C) in moist
chamber.
7. After incubation wash all wells with washing solution (see above)
8. Addition of substrate
Add 100 µl of ready-to-use substrate solution to each well (including well for
substrate blank!)
9. Substrate incubation for 30 minutes (+/- 1 min)* at 37 °C (+/- 1 °C) in moist
chamber.
10. Stopping of the reaction
Add 100 µl stopping solution to each well, shake microtiter plate gently to mix.
11. Read extinction
Read optical desity (OD) within 60 minutes at 405 nm against substrate blank,
reference wave length between 620 nm and 690 nm (e.g. 650 nm).
_____________________
* Please note, that under special working-conditions internal laboratory adaptations of the
incubation times may be necessary.
english 12

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Positi vkontroll e / Richtigkeitskontroll e @ 8\mod_1260286311409_18.doc @ 27530 @ 2
Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: TESTAU SWER TUNG + Erreg er @ 1\mod_1197038305478_18.doc @ 11386 @ 1
7.6 Automated Test Procedure
EN
SERION ELISA are suited for processing on automats and evaluated for use with
Immunomat TM as well as with DYNEX DSX ® and DS2 ® . The automated processing is
performed analogous to manual use. Please note, that under special working-conditions
internal laboratory adaptations of the incubation times may be necessary.
7.7 Positive Control / Accuracy Control
For the periodic verification of the test method, in order to fulfil the requirements of
laboratory internal quality management systems, we recommend using SERION ELISA
controls to determine precision and accuracy of SERION ELISA classic test runs. The use
of SERION ELISA controls is described in specific instruction manuals.
EL EN
CS PT
english 13

Pos: 33 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Testgültig kei tskriterien @ 4\mod_1255348317229_18.doc @ 21432 @ 2
8 TEST EVALUATION
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
Pos: 32 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Ei n-Punkt-Quantifizi erung @ 4\mod_1255348099107_18.doc @ 21400 @ 2
8.1 Single-Point Quantification with the 4PL Method
Optimised assignment of extinction signals to quantitative values is guaranteed by using
non-linear functions, which adjust a sigmoide curve without any further transformation to
OD-values. Determination of antibody concentrations with the SERION ELISA classic is
carried out by the 4 parameter logistic-log-model (4 PL) which is ideal for exact curvefitting.
It is based on the formula:
OD = A +
1 + e
D - A
B(C - ln Conc.)
The parameters A, B, C, and D are representative for the exact shape of the curve:
1. lower asymptote parameter A
2. slope of the curve parameter B
3. turning point parameter C
4. upper asymptote parameter D
For each lot the standard curve is evaluated by Institut Virion\Serion GmbH (Würzburg,
Germany) in repeated test runs under optimal conditions. Time consuming and cost
intensive construction of the standard curve by the user is not necessary.
For evaluation of antibody concentrations a lot specific standard curve as well as a lot
specific evaluation table is included with each SERION ELISA classic test kit. The
evaluation software SERION evaluate as well as the Microsoft ® Excel-based software tool
SERION activity are available on request.
To compensate for normal test variations and also for test run control a standard serum is
used in each individual test run. For this control serum a reference value with a validity
range is determined by the quality control of the producer. Within this range a correct
quantification of antibody concentration is ensured.
english 14

Pos: 34 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Auswertung: Ü berschrift @ 0\mod_1180968661538_18.doc @ 970 @ 2
Pos: 35 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Nichtautomatisierte Auswertung @ 4\mod_1255348011764_18.doc @ 21384 @ 3
8.2 Criteria of Validity
EN
- The substrate blank must be < 0.25 OD.
- The negative control must produce a negative test result.
- By use of quantitative SERION ELISA classic tests the mean OD-value (after
subtraction of the substrate blank!) of the standard serum must be within the validity
range, which is given on the lot specific quality control certificate.
- The variation of OD-values of the standard serum may not be higher than 20 %.
EL EN
If these criteria are not met, the test is not valid and must be repeated.
8.3 Calculation SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
8.3.1 Non-automated Evaluation
CS PT
For the SERION ELISA classic test evaluation a lot-specific quality control certificate with
standard curve and an evaluation table is included in the test kit so that the obtained OD
values may be assigned to the corresponding antibody activities. The substrate blank must
be substracted from all OD values prior to evaluation.
Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Testauswertung: M ethode 1 (für all e T ests auß er T etanus & Di phtherie) @ 5\mod_1255349684243_18.doc @ 21527 @
s
Method 1: Qualitative Evaluation
To fix the cut-off ranges multiply the mean value of the measured standard OD with the
numerical data of the quality control certificate (see special case formulas), e.g.:
OD = 0.502 x MW(STD) with upper cut-off
OD = 0.352 x MW(STD) with lower cut-off
If the measured mean absorbance value of the standard serum is 0.64 OD, the range of
the cut-off is in between 0.225-0.321 OD.
english 15

Pos: 38 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_18.doc @ 21352 @ 3
Method 2:
Pos: 37 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Methode 2 (für alle T ests) @ 4\mod_1255348201981_18.doc @ 21416 @
Continuous Determination of Antibody Activities using the Standard Curve
So called interassay variations (day to day deviations and laboratory to laboratory
deviations) are compensated by multiplication of the current measured value obtained with
a patient’s sample with the correction factor F. This factor is calculated as follows:
F =
OD-reference value (of standard serum)
OD-current value (of standard serum)
The procedure is necessary to adjust the current test level of the user with the lot-specific
standard curve. First, daily deviations have to be corrected by calculating the correction
factor F.
1. The mean of the two OD-values of the standard serum has to be calculated and
checked that it is within the given validity range.
2. Calculation of the factor F: the given reference value is divided by the mean of the
extinction of the standard serum:
F = reference value extinction STD serum / mean value extinction STD serum.
3. All measured values of patient’s samples are multiplied by F.
4. Antibody activities in IU/ml or U/ml can be determined from the standard curve with
the corrected values.
english 16

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Quantifi zierungsgrenzen @ 6\mod_1258098664276_18.doc @ 24400 @ 2
Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Grenzwertber eich ( für T este mehrerer Ig-Klassen) @ 9\mod_1276070736543_18.doc @ 32155 @ 2
Pos: 41 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Interpretation der Ergebnisse @ 0\mod_1190013774869_18.doc @ 9940 @ 2
8.3.2 Automatic Test Evaluation with Software SERION evaluate
EN
After input of the four parameters and the reference value of the standard serum, antibody
activities are calculated online from processed and measured SERION ELISA classic test
runs by the evaluation software SERION evaluate.
If the optical density of the standard is out of the validity range, the following message will
appear.
„Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” or
„Standard values differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.”
EL EN
In these cases the test run is invalid and should be repeated.
Parameters and reference value need to be changed only if there is a change of lot
(evaluation table shows parameters and reference values). Correct input of the lot specific
data can be checked on the basis of the standard serum activity (in IU/ml or U/ml)
assigned to the standard serum. The calculated mean value of the units has to correspond
to the unit value indicated on the lot specific certificate. There is an automatic correction of
the measured values. In the standard version the printout displays the following:
CS PT
Sample code
OD-value
IU/ml or U/ml
Evaluation
8.4 Limits of Quantification
The limits of quantification are specified on the quality control certificate of the SERION
ELISA classic test. The linearity of dilution within this range has been demonstrated in
comprehensive evaluation studies. In case a patient sample shows a test result above the
upper limit of quantification, the sample may be tested at a higher dilution. The thereby
determined antibody activity must be multiplied by the additional dilution factor.
8.5 Borderline Ranges
The borderline ranges of the SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM tests are
specified on the quality control certificates and indicate the range for borderline test
results. Values obtained, when testing a patient’s sample, which fall below this range
indicate a negative test result; values above the borderline range are interpreted positive.
In cases where the results are within the borderline range a definitive interpretation of the
result is not possible. In such cases, the test should be repeated in parallel with a follow-up
sample taken one to two weeks later (serum pair).
english 17

Pos: 43 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Refer enzbereiche gesunder Pr obanden @ 8\mod_1258644290978_18.doc @ 26750 @ 2
8.6 Interpretation of Results
Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/West Nile Virus/West Nile Virus Interpretation der Ergebnisse @ 12\mod_1366959586560_18.doc @ 56093 @
Serological test results should only be interpreted in combination with information about
the patient’s case history and in the context of clinical symptoms or additional laboratory
test results if available.
Positive results obtained with SERION ELISA classic West Nile Virus IgM and IgG indicate
the presence of antibodies directed against the West Nile Virus. A positive result obtained
with SERION ELISA classic West Nile Virus IgM accompanied by a negative result with
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG indicates an acute stage of disease. Since IgM
antibodies can persist for several weeks or months, positive results obtained with SERION
ELISA classic West Nile Virus IgM and IgG demonstrate an acute or recent infection.
Positive results obtained only by the SERION ELISA classic West Nile Virus IgG indicate
past infection. Seroconversions detected by the analysis of paired serum samples, taken
within a period of two weeks, are a clear indicator of acute infections.
The absence of antibodies resulting in negative test results obtained with the SERION
ELISA classic West Nile Virus, does not exclude an acute infection. In the case of a
suspected West Nile Virus infection due to a patient’s case history, a second serum
sample, taken within two weeks, should be analyzed. Alternatively, it is recommended to
analyze the submitted sample by an alternative assay method (e.g. PCR).
Results within the borderline range cannot be interpreted. Analysis of follow-up samples,
taken within two weeks, or the application of an alternative assay method (e.g. PCR) are
recommended for interpretation of such test results.
The diagnostic value of different occurring antibody constellations are listed in the
following table.
Basic Interpretation Scheme
IgM IgG Evaluation
- -
No evidence for an infection; in the case of suspicion for an
acute infection: examination of a follow-up sample after one to
two weeks
+ -/+ Evidence for an early stage of infection
+ + Evidence for an acute, recent or past infection
- + Evidence for a past infection
os: 42 /Arbeitsanleitung en ELISA classic/Gültig für nur ein Dokument/T estauswertung/Dengue/D eng ue: Interpr etation der Ergebnisse @ 9\mod_1316176473188_6.doc @ 36426 @
Antibodies directed against Flaviviruses such as the TBE virus, the Japanese Encephalitis
Virus, the Dengue Virus or the Yellow Fever Virus can cause positive results due to the
extensive homology within the family of Flaviviridae.
english 18

Pos: 45 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Leistungsmer kmale @ 0\mod_1184676089844_18.doc @ 2103 @ 1
Pos: 46 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift: Sensiti vität und Spezi fität @ 0\mod_1190013251494_18.doc @ 9925 @ 2
Pos: 47 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/West Nile Virus/West Nile Virus Sensiti vität und Spezifität @ 12\mod_1366960055337_18.doc @ 56128 @
8.7 Reference Range of healthy Individuals
Pos: 44 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/West Nile Virus/West Nile Virus Refenrenzber eiche g esunder Probanden @ 12\mod_1366959813962_18.doc @ 56110 @
Testing of randomly selected blood donor sera, collected in the region of southern
Germany, with the SERION ELISA classic West Nile Virus IgG and IgM tests resulted in
the following distribution. From 105 sera tested with the SERION ELISA classic West Nile
Virus IgG, 93 (88.6 %) were negative, three sera (2.9 %) reacted positive and nine sera
(8.6 %) were classified as borderline. When using the SERION ELISA classic West Nile
Virus IgM test, 103 out of 105 sera (98.1 %) were negative, no sample reacted positive
and two sera (1.9 %) were classified as borderline.
9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS
EN
EL EN
9.1 Sensitivity and Specificity
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
To determine the sensitivity of the SERION ELISA classic West Nile Virus IgG test, 30
samples from patients with suspected West Nile Virus infection, which yielded positve
results in two commercially available immunoassays, were analyzed. 25 of the 30 samples
reacted positve when tested in the SERION ELISA classic West Nile Virus IgG test, three
samples were classified as borderline and two samples reacted negative.
CS PT
The specificity of the SERION ELISA classic West Nile Virus IgG test was assessed by
analyzing 69 sera from healthy blood donors, which were pretested as negative in two
commercially available immunoassays. 62 out of those 69 specimens also gave negative
results when using SERION ELISA classic West Nile Virus IgG test, five were classified as
borderline and two samples reacted positive.
Sensitivity
Specificity
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG >92.6 % >96.9 %
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
The determination of the performance parameters of the SERION ELISA classic West Nile
Virus IgM test was determined by the analysis of 103 sera from healthy blood donors and
30 sera from patients with suspected West Nile Virus infection. The concordant results
obtained with two commercially available immunoassays were used as a reference. When
using SERION ELISA classic West Nile Virus IgM, positive test results were obtained in 28
out of 30 positively classified specimens and two samples were classified as borderline.
Additionally, 101 of the 103 blood donor sera reacted negative and two sera were
classified as borderline when using SERION ELISA classic West Nile Virus IgM test.
Performance Characteristics Sensitivity Specificity
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM >99 % >99 %
Sera classified as borderline were not included in the calculations of sensitivities and
specificities.
Pos: 48 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Präzisi on @ 0\mod_1184676568397_18.doc @ 2118 @ 2
english 19

Pos: 50 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_18.doc @ 21190 @ 122
9.2 Reproducibility
Pos: 49 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/West Nile Virus/West Nile Virus Pr äzision @ 12\mod_1366960347929_18.doc @ 56145 @
Intraassay reproducibility was determined by testing sera of different reactivities 20 times
in one test run. Interassay reproducibility was determined by testing sera of different
reactivities in 10 independent test runs.
Standard deviation
Coefficient of Variation (CV %) = x 100
Mean value
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG:
Sample
Mean Value
Intraassay
Mean Value
Interassay
(OD)
(CV %)
(OD)
(CV %)
Serum 1 0.396 3.0 0.413 8.0
Serum 2 0.611 2.2 0.626 7.6
Serum 3 1.259 6.2 1.355 3.6
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM:
Sample Mean Value
(OD)
Intraassay
(CV %)
Mean Value
(OD)
Interassay
(CV %)
Serum 1 0.532 3.7 0.434 14.2
Serum 2 1.035 5.0 0.888 6.0
Serum 3 1.542 2.1 1.394 3.6
english 20

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Liter atur/Kapitelüberschrift: Liter atur @ 0\mod_1190013903728_18.doc @ 9956 @ 1
10 SAFETY MEASURES
EN
10.1 Statements of Warning
The SERION ELISA classic is designed for use by qualified personnel who are familiar
with good laboratory practice.
EL EN
All kit reagents and human specimens should be handled carefully, using established good
laboratory practice.
- This kit contains human blood components. Although all control- and cut-off sera
have been tested and found negative for anti-HIV-ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virussurface
Antigen) and anti-HCV-ab, they should be considered potentially infectious.
- Do not pipette by mouth.
- Do not smoke, eat or drink in areas in which specimens or kit reagents are handled.
- Wear disposable gloves, laboratory coat and safety glasses while handling kit
reagents or specimens. Wash hands thoroughly afterwards.
- Patient’s material and other potentially infectious material should be
decontaminated after the test run.
- Reagents should be stored safely and be unaccessible to unauthorized access e.g.
children.
- Stopping solution: corrosive (C); causes acid burn (R34)
Use safety glasses, gloves and laboratory coat while handling!
CS PT
10.2 Disposal
Please observe the relevant statutory requirements!
english 21

11 REFERENCES
Pos: 52 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Literatur /West Nile Virus Li ter atur @ 12\mod_1366961104707_0.doc @ 56179 @
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Philippi-Falkenstein K., Bohm Jr RP., Ratterree MS. Lillibridge KM., Ludwig GV.,
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Recombinant Envelope Protein Subunit Antigen for Specific Serological Diagnosis
of West Nile Virus Infection Journal of Clinical Microbiology; 42 2759-2765; 2004
[2] Campell GL., Marfin AA., Lanciotti RS., Gubler DJ. West Nile Virus Lancet Infect.
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flavivirus envelope protein are useful antigens for serologic diagnosis and targets
for immunization Biologicals; 38 613-618; 2010
[4] Dauphin G. & Zientara S. West Nile Virus: Recent trends in diagnosis and vaccine
development Vaccine; 25 5563-5576; 2007
[5] Diamond MS., Pierson TC., Fremont DH. The Structural Immunology of Antibody
Protection against West Nile Virus Immunol Rev.; 225 212-225; 2008
[6] Kemmerly SA. Diagnosis and Treatment of West Nile Infections The Ochsner
Journal; 5 16-17; 2003
[7] Marr J. & Calisher C. Alexander the Great and West Nile Virus Encephalitis Emer.
Infect. Diseases; 9 1599-1603; 2003
[8] Monini M., Falcone E., Busani L., Romi R., Ruggeri FM. West Nile Virus:
Characteristics of an African Virus Adapting to the Third Millennium World The
Open Virology Journal; 4 42-51; 2010
[9] Niedrig M., Sonnenberg K., Steinhagen K., Paweska JT. Comparison of ELISA and
immunoassays for measurement of IgG and IgM antibody to West Nile Virus in
human sera against virus neutralisation Journal of Virological Methods; 139 103-
105; 2007
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MehlhopE., Marri A., Chung KM., Ebel GD., Kramer LD., Fermont DH., Diamond
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against West Nile Virus Nat. Med.; 11 522-530; 2005
[11] Oliphant T., Nybakken GE., Engle M., Xu Q., Nelson CA., Sukupolvi-Petty S., Marri
A., Lachmi BE., Olshevsky U., Fremont DH., Pierson TC., Diamond MS. Antibody
Recognition and Neutralization Determinants on Domains I and II of West Nile Virus
Envelope Protein Journal of Virology; 80 12149-12159; 2006
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Detection of West Nile Virus in Blood and Tissues Transfusion Medicine Reviews;
23 146-154; 2009
english 22

SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
SOMMAIRE
1 UTILISATION PRÉVUE
2 PERTINENCE DU DIAGNOSTIC
3 PRINCIPE DU TEST SERION ELISA classic
4 COMPOSANTS DE LA TROUSSE
FR
5 PRODUITS NÉCESSAIRES MAIS NON FOURNIS
6 STOCKAGE ET STABILITÉ
7 PRINCIPLE DU TEST SERION ELISA classic
7.1 Signe de détérioration
7.2 Préparation et stockage de l'échantillon
7.3 Préparation des réactifs de la trousse
7.4 Aperçu général - Procédure de test
7.5 Procédure de test manuelle
7.6 Procédure de test automatisée
7.7 Contrôle positif / Contrôle de la précision
8 ÉVALUATION DU TEST
8.1 Quantification en un point selon la méthode 4PL
8.2 Critères de validité
8.3 Calcul SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
8.4 Limites de la quantification
8.5 Fourchettes limites
8.6 Interprétation des résultats
8.7 Fourchette de références des personnes en bonne santé
9 CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE
9.1 Sensibilité et Spécificité
9.2 Reproductibilité
10 MESURES DE SÉCURITÉ
10.1 Mises en garde
10.2 Élimination
11 RÉFÉRENCES
Version actuelle nr.: V 1.13/04-1
version précédente: --

Pos: 5 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_23.doc @ 222 @ 1
Pos: classic/Allgemeine @ 4\mod_1255336385816_23.doc 1 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ classic/Einleitung classic/Gültig 21166 @ für "Enzymimmunoassay"
alle Dokumente/ELISA
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
Test immuno-enzymatique pour la détection des anticorps humains
pour le diagnostic in vitro
Dokument/Bestellnummern/West 12\mod_1366958469615_23.doc Pos: 2 /Arbeitsanleitungen ELISA @ Nile classic/Gültig 56008 Virus @ Bestellnummern für nur ein @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
N o de commande: ESR141G
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
N o de commande: ESR141M
classic/Allgemeine 0\mod_1177351044007_23.doc Pos: 3 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ classic/Kapitelüberschrift 171 classic/Gültig @ 1 für alle Dokumente/ELISA
"Anwendungsbereich" @
1 UTILISATION PRÉVUE
Pos: 4 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Anwendungsber eich/West Nile Vir us Anwendungsbereich @ 12\mod_1366957860138_23.doc @ 55974 @
Les tests SERION ELISA classic West Nile Virus IgG et IgM sont des immunoessais
quantitatifs et qualitatifs permettant de mettre en évidence la présence, dans le sérum ou
le plasma, d’anticorps humains dirigés contre le virus de West Nile. Le test SERION
ELISA classic West Nile Virus IgM permet de détecter les infections aiguës. Le test
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG est recommandé pour mettre en évidence un
contact avec le pathogène, déterminer le statut immunitaire d’un individu et dans les
études épidémiologiques.
2 PERTINENCE DU DIAGNOSTIC
Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Di agnostische Bedeutung/West Nile Virus Diagnostische Bedeutung @ 12\mod_1366958140940_23.doc @ 55991 @
Avec le virus de la dengue, le virus de la fièvre jaune et le virus de l'encéphalite à tiques,
le virus du Nil occidental fait partie des espèces du genre Flavivirus qui sont pathogènes
pour l’homme. Les réservoirs naturels des arbovirus sont les oiseaux tels que les
corbeaux et les moineaux. Les principaux vecteurs de transmission du virus du Nil
occidental à l’homme sont les moustiques des genres Culex, Aedes et Ochlerotatus.
Le génome à ARN du virus du Nil occidental est protégé par une capside sphérique à
symétrie icosaédrique qui est entourée par une membrane lipidique. La protéine
d’enveloppe E, présente au niveau de la membrane externe, est hautement immunogène.
Le virus du Nil occidental a été découvert en 1937 dans le district de West Nile en
Ouganda. Des infections dues au virus du Nil occidental ont été recensées depuis
longtemps dans de nombreuses régions d’Afrique, d’Europe de l’Est et d’Asie. Depuis les
années quatre-vingt-dix, le nombre de flambées épidémiques a augmenté en Europe, en
Australie et en Amérique du Nord.
La période d’incubation est comprise entre 3 et 14 jours. Généralement, les infections par
le virus du Nil occidental sont asymptomatiques. Dans les cas d’intensité légère, des
symptômes pseudo-grippaux, tels que fièvre, maux de tête, myalgie et arthralgie, ainsi que
des symptômes gastro-intestinaux peuvent être présents (fièvre du Nil occidental). Le
virus est capable de traverser la barrière hémato-encéphalique et par conséquent, dans
de rares cas, l’infection par le virus du Nil occidental peut s’accompagner d’une
encéphalite, d’une méningite ou d’une paralysie aiguë. En raison de l’expansion du virus
en Europe, en Australie et en Amérique, les cas graves sont de plus en plus nombreux.
Ces formes neurologiques graves de la maladie surviennent principalement chez les
personnes âgées ou les patients immunocompromis, et peuvent conduire au décès ou
entraîner des lésions permanentes.
français 2

Pour confirmer biologiquement les infections par le virus du Nil occidental, il est
recommandé de procéder à une analyse sérologique des anticorps IgM. Les anticorps IgM
apparaissent d’ici la fin de la semaine qui suit l’apparition des symptômes et sont produits
par plus de 90 % des personnes infectées. Les anticorps IgM peuvent être détectés
pendant plusieurs semaines à plusieurs mois. Les anticorps IgG n'apparaissent pas avant
huit jours après le début de la maladie et peuvent persister pendant des mois, voire à vie.
Pos: 7 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/T estprinzip/Testpri nzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_23.doc @ 21209 @ 1
3 PRINCIPE DU TEST SERION ELISA classic
Le test ELISA (test utilisant un immunoadsorbant lié à une enzyme) est un test
immunologique qui convient particulièrement à la détermination d'anticorps dans le
domaine de la sérologie infectieuse. La réaction est basée sur l'interaction spécifique
d‘anticorps avec les antigènes correspondants. Les puits de la microplaque de dosage des
coffrets SERION ELISA classic sont coatés avec l’antigène spécifique du pathogène
concerné. Si les anticorps contenus dans l'échantillon de sérum du patient sont présents,
ils se lient à l'antigène fixé. Un anticorps secondaire, qui a été préalablement conjugué
avec l'enzyme phosphatase alcaline, détecte le complexe immun et s'y lie. Le substrat
incolore p-nitrophénylphosphate est ensuite transformé en un produit coloré, le p-
nitrophénol. L'intensité du signal de ce produit de réaction est proportionnelle à la
concentration de l'analyte dans l'échantillon et elle est mesurée par une méthode
photométrique.
Pos: 8 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für mehrere Dokumente/Inhalt und
Zusammensetzung/Inhalt und Zusammensetzung (alle außer Bor,EBV,Hanta,Parvo, Coxiella) @
4\mod_1255342923549_23.doc @ 21225 @ 1
FR
français 3

Pos: 9 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für mehr ere D okumente/Z usätzlich benötigte Materiali en/Z200 Z usätzlich benötigte M aterialien ( für T este mi t IgM-Nachweis) @ 9\mod_1316422545600_23.doc @ 36491 @ 1
4 COMPOSANTS DE LA TROUSSE
Composants pour le test Pièces /
Volume
Barrettes de huit puits unitaires coatés avec un antigéne (au total 96) MTP ,
1 cadre.
Le produit de coating est inactivé.
12 pièces
Sérum standard (prêt à l'emploi) STD ,
Protéine sérique humaine contenant du tampon phosphate;
négatif pour l'Ac anti-VIH, HBs-Ag (antigène de surface du virus de l'hépatite B) et l'Ac
anti-VHC;
agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium;
colorant : Amaranth O.
Sérum pour le contrôle négatif (prêt à l'emploi) NEG ,
Protéine sérique humaine contenant du tampon phosphate;
négatif pour l'Ac anti-VIH, HBs-Ag (antigène de surface du virus de l'hépatite B) et l'Ac
anti-VHC;
agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium;
colorant : Vert de lissamine V.
Conjugué anti IgA, anti IgG ou anti IgM humain (prêt à l'emploi) APC ,
IgA Anti-humain, IgG ou anticorps polyclonal IgM,
conjugué à la phosphatase alcaline, stabilisé avec une solution contenant des
protéines;
agent de conservation : 0,01 % méthylisothiazolone, 0,01 % bromnitrodioxane.
Concentré de solution de lavage (en quantité suffisante pour 1000 ml) WASH ,
Solution de chlorure de sodium avec Tween 20 et 30 mM Tris/HCl, pH 7,4;
agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium.
Tampon de dilution DILB ,
Protéine contenant du tampon phosphate avec Tween 20;
agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium;
colorant : 0,01 g/l bleu de bromophénol.
Solution d'arrêt STOP ,
Hydroxyde de sodium 1,2 N.
Substrat (prêt à l'emploi) pNPP ,
Para-nitrophénylphosphate dans un solvant ne contenant pas de tampon;
agent de conservation : < 0,1 % azoture de sodium
(Le substrat, dans le flacon non ouvert, peut avoir une coloration légèrement jaunâtre,
qui ne réduit pas la qualité du produit!)
Certificat de contrôle de la qualité avec courbe d'étalonnage et tableau
d'évaluation INFO ,
(quantification des anticorps en IU/ml ou U/ml).
2 x 2 ml
2 ml
13 ml
33,3 ml
2 x 50 ml
15 ml
13 ml
2 pages
français 4

5 PRODUITS NÉCESSAIRES MAIS NON FOURNIS
- équipement général de laboratoire
- pour la détection d'IgM : SERION Rf-Absorbent, n o de commande Z200 (20 ml)
- photomètre pour plaques de microtitration avec filtre, longueur d'onde 405 nm,
longueur d'onde de référence recommandée 620 nm à 690 nm (par ex. 650 nm)
- incubateur à 37 °C
- chambre humide
- eau distillée
- Agrafes (n o de commande VT120)
Pos: 10 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA classic/Lagerung und
Haltbarkeit/Lagerung und Haltbarkeit @ 4\mod_1255343176800_23.doc @ 21241 @ 1
FR
français 5

Pos: 11 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Überschrift: Durchführ ung @ 0\mod_1184679699953_23.doc @ 2474 @ 1
6 STOCKAGE ET STABILITÉ
Réactif Stockage Stabilité
Barrettes de
microtitration (coatées
avec un antigène)
Avant ouverture
voir la date
d'expiration;
Sérum de contrôle /
Sérum standard
après ouverture, entre 2 °C et 8 °C dans sachet en
aluminium fermé avec déshydratant
Les barrettes non utilisées doivent être stockées dans
un endroit sec, dans des sachets en aluminium
fermés.
après ouverture entre 2 °C et 8 °C
Conjugué solution prête à l'emploi entre 2 °C et 8 °C
Tampon de dilution
Évitez les contaminations, par ex., en utilisant des
barrettes stériles.
Avant ouverture
Après ouverture entre 2 °C et 8 °C
Jetez les solutions troubles.
durée minimale de
stockage : quatre
semaines;
durée de stockage en
cas d'utilisation selon
les consignes et
stockage jusqu'à la
date d'expiration
voir la date
d'expiration;
24 mois à partir de la
date de fabrication
voir la date
d'expiration;
28 mois à partir de la
date de fabrication
voir la date
d'expiration;
36 mois à partir de la
date de fabrication;
24 mois
Solution de lavage Concentrée, après ouverture entre 2 °C et 8 °C
Substrat
Diluée , entre 2 °C et 8 °C
Diluée à température ambiante
Les flacons utilisés pour effectuer la dilution
d'utilisation doivent être régulièrement nettoyées.
Jetez les solutions troubles.
solution prête à l'emploi entre 2 °C et 8 °C,
stockez à l'abri de la lumière
Évitez les contaminations, par ex., en utilisant des
barrettes stériles.
Jetez la solution si elle devient jaunâtre (Différence
de DO comparée à l’eau distillée : > 0,25 DO).
voir la date
d'expiration;
2 semaines
1 semaine
voir la date
d'expiration;
36 mois à partir de la
date de fabrication
Solution d'arrêt Après ouverture à température ambiante voir la date d'expiration
français 6

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Allgemeine Hi nweise ELISA cl assic @ 4\mod_1255343318159_23.doc @ 21257 @ 2
7 PRINCIPLE DU TEST SERION ELISA classic
7.1 Signe de détérioration
Seuls les réactifs SERION ELISA classic doivent être utilisés avec les coffrets SERION
ELISA classic. Les composants ne doivent pas être échangés avec des réactifs provenant
d'autres fabricants. Le sérum standard etle sérum contrôle des tests SERION ELISA
classic sont définis exclusivement pour la trousse les contenant et ne doivent pas être
utilisés avec d'autres lots. Le tampon de dilution, la solution de lavage, le substrat et la
solution d'arrêt sont communs aux réactifs SERION ELISA classic indépendamment du lot
ou l'analyse.
FR
Il existe trois concentrations de conjugués pour chaque classe d'immunoglobuline :
FAIBLE, MOYENNE, ÉLEVÉE Cette classification est indiquée sur chaque étiquette de la
façon suivante :
ex., IgG + conjugué IgG à faible concentration
IgG ++ conjugué IgG à concentration moyenne
IgG +++ conjugué IgG à concentration élevée
Dans de rares cas, l'utilisation d'un conjugué spécial est nécessaire pour garantir la même
qualité pour tous nos produits. Les conjugués spéciaux sont préparés dans des lots
distincts et ne portent pas le signe « + » et ne sont pas interchangeables avec les autres
conjugués.
Veuillez faire très attention aux informations figurant sur les étiquettes!
S'ils sont toujours emballés et stockés selon les consignes, tous les composants du test
SERION ELISA classic peuvent être utilisés jusqu'à la date d'expiration indiquée sur les
étiquettes. Les réactifs ne doivent pas être utilisés après la date d'expiration.
La dilution et la modification des réactifs peuvent entraîner une perte de sensibilité.
Évitez d'exposer les réactifs à une lumière trop forte lors du stockage et l'incubation. Les
réactifs doivent être bien fermés après utilisation pour éviter l'évaporation et la
contamination.
Pour ouvrir le sachet en aluminium de la plaque de microtitration, veuillez découper le haut
du sachet à l'endroit indiqué, pour que vous puissiez fermer le sachet correctement après
utilisation. Il ne faut pas utiliser les barrettes si le sachet en aluminium est endommagé ou
si le sachet, contenant le reste des barrettes et le dessicant, n'a pas été correctement
refermé.
Prélevez le plus stérilement possible dans les tubes de réactif afin d'éviter toute
contamination. Afin d'éviter les faux positifs, il faut s'assurer de ne pas toucher les parois
supérieures des puits ou de les éclabousser lors du pipetage du conjugué. Il faut faire
attention de ne pas mélanger les bouchons des bouteilles et/ou des flacons.
français 7

Pos: 14 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Kapi tel überschrift Probenverdünnung @ 0\mod_1184679414434_23.doc @ 2314 @ 3
Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Nile Virus Teil 2 Ü berschrift @ 12\mod_1366959209524_23.doc @ 56042 @
Pour assurer la reproductibilité des résultats des tests, il faut bien mélanger les réactifs.
Agitez les flacons contenant les sérums de contrôle avant de les utiliser, mais également
tous les échantillons après dilution (par ex., à l'aide d'un mélangeur vortex).
Assurez-vous de pipeter soigneusement et respectez les durées et températures
d'incubation. S'il existe une différence de temps importante entre le pipetage du premier et
du dernier puits de la plaque de microtitration, lors de la distribution des échantillons et
des sérums de contrôle, du conjugué ou du substrat, on peut avoir des durées de pré
incubation différentes qui influenceront la précision et la reproductibilité des résultats.
Des résultats optimaux ne seront obtenus que si les consignes sont scrupuleusement
respectées.
Le test SERION ELISA classic n'est valable que si les critères de validation, spécifiques
au lot en question, et figurant sur le certificat de contrôle de la qualité sont respectés.
Un nombre suffisant de lavages permet d'éviter les résultats non spécifiques. Il est donc
recommandé de soigneusement effectuer la procédure de lavage. Tous les puits à fond
plat doivent être remplis avec un volume égal de tampon de lavage. À la fin de la
procédure, assurez-vous que les puits ne contiennent plus de tampon de lavage afin
d'éviter les effets de dilutions incontrôlées. Évitez de faire des bulles!
Prenez soin de ne pas endommager l'inscription (pathogène/classe d'anticorps) figurant
sur la plaque de microtitration au cours des étapes de lavage et d'aspiration afin d'éviter
les confusions.
Pos: 13 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenvor ber. und Lager ung (für ALLE Err eger auß er Borreli a, CM V, FSM E, H SV,Masern,Mumps,R öteln,VZ V) @ 8\mod_1263998040982_23.doc @ 28431 @ 2
7.2 Préparation et stockage de l'échantillon
Les échantillons lipémique, hémolytique ou ictérique (sérum ou plasma) doivent être
analysés avec réserve seulement. Les échantillons qui sont à l'évidence contaminés ne
doivent pas être analysés. Le sérum ou le plasma (EDTA, citrate, héparine) recueillis
selon les procédés standard de laboratoire sont des échantillons convenables. Les
échantillons ne doivent pas être inactivés thermiquement.
7.2.1 Dilution des échantillons
Avant d'effectuer le test, les échantillons patient (V 1 ) doivent être dilués dans le tampon de
dilution (V 2 ) comme suit :
Pos: 15 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Ni kle Virus T eil 1 @ 12\mod_1366959098552_23.doc @ 56025 @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
V 1 + V 2 = 1+100 ajouter 10 µl d'échantillon patient
chacun à 1000 µl de tampon de dilution
Pos: 16 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_23.doc @ 21289 @
Après dilution et avant le pipetage dans la plaque de microtitration, les échantillons doivent
être bien mélangés pour obtenir une solution homogène.
français 8

SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
Pos: 18 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenver dünnung: R heumafaktor-Interferenz (für T ests mit IgM-Nachweis) @ 9\mod_1316422765852_23.doc @ 36508 @
Interférence avec les facteurs rhumatoïdes
Les facteurs rhumatoïdes sont des auto-anticorps appartenant principalement à la classe
des IgM, qui se lient préférentiellement aux complexes immunitaires IgG. La présence des
anticorps IgM non spécifiques (facteurs rhumatoïdes) peut entraîner des faux-positifs lors
des tests IgM. En outre, la possibilité existe que des anticorps IgM à faible pouvoir de
liaison et spécifiques à un pathogène donné peuvent être déplacés par des anticorps IgG
qui se lient plus fortement. Ceci nous donne des faux-négatifs pour les résultats d'IgM. Il
est donc nécessaire de pré-traiter les échantillons avec des absorbants de facteurs
rhumatoïdes avant la détection des IgM (SERION Rf-Absorbent, n o de commande : Z200
(20 ml/100 tests)). L'absorption Rf est effectuée par incubation avec l'échantillon du patient
dans le tampon de dilution Rf pendant 15 minutes, à température ambiante, ou pendant
toute une nuit à 4 °C. La procédure du test est décrite dans un autre mode d'emploi.
FR
Pos: 19 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Nile Virus Teil 3 @ 12\mod_1366959279193_23.doc @ 56059 @
Avant d'effectuer le test, l'absorbant du facteur rhumatoïde (V 1 ) doit être dilué, 1+4, dans
le tampon de dilution (V 2 ).
V 1 + V 2 = V 3 (1 + 4) ajouter 200 µl Rf-absorbent
chacun à 800 µl de tampon de dilution
Échantillon patient (V 4 ) doit être dilué dans ce tampon de dilution Rf (V 3 ) :
V 4 + V 3 = 1 + 100 ajouter 10 µl échantillon de patient
chacun à 1000 µl
Rf-tampon de dilution
Pos: 20 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_23.doc @ 21289 @
Après dilution et avant le pipetage dans la plaque de microtitration, les échantillons doivent
être bien mélangés pour obtenir une solution homogène.
Pos: 21 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenlager ung @ 4\mod_1255343526141_23.doc @ 21273 @ 3
7.2.2 Stockage de l'échantillon
Les échantillons des patients ne doivent pas être stockés pendant plus de 7 jours entre 2
et 8 °C. Un stockage plus long peut se faire à ≤ -20 °C. Évitez les cycles de
congélation/décongélation répétés. Les échantillons dilués peuvent être stockés entre 2 et
8 °C pendant une semaine.
Pos: 22 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA
classic/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung, Teil 1 @ 4\mod_1255343795606_23.doc @
21305 @ 233
français 9

Pos: 24 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 2 @ 4\mod_1255343884183_23.doc @ 21321 @ 33333
Pos: 25 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/Ü berschrift Testablauf @ 0\mod_1180955922843_23.doc @ 734 @ 2
7.3 Préparation des réactifs de la trousse
Tous les réactifs doivent être à température ambiante avant leur utilisation.
7.3.1 Barrettes de tests
Les barrettes sont emballées dans un sachet en aluminium avec un produit
dessicant. Enlevez seulement les puits dont vous avez besoin de la plaque et
replacez le reste dans le sachet en aluminium. Refermez soigneusement le sachet
pour qu'il soit étanche à l'air.
7.3.2 Sérum de contrôle / Sérum standard
Le sérum de contrôle et le sérum standard sont prêts à l'emploi et ne doivent pas
être dilués. Pour chaque cycle de tests, indépendamment du nombre de barrettes
devant être utilisées, les sérums de contrôle et standard doivent être mis dans la
plaque. Le sérum standard doit être mis en double.
Pos: 23 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/R eagenzienvorbereitung: Rf- Absorbens (für T este mit IgM-Nachweis) @ 0\mod_1184741119299_23.doc @ 2871 @
Il ne faut pas traiter le sérum de contrôle avec l'absorbant Rf.
7.3.3 IgA anti-humain, IgG ou conjugué IgM (prêt à l'emploi)
Les conjugués ayant la même concentration et la même classe d'immunoglobuline
sont interchangeables. Il fait éviter de contaminer les conjugués prêt à l'emploi, par
ex., en utilisant des embouts stériles.
7.3.4 Solution de lavage
Diluez le concentré de tampon de lavage (V 1 ) 1:30 avec de l'eau distillée jusqu'à un
volume final de V 2 .
Exemple :
Concentré de tampon (V 1 ) Volume final (V 2 )
33,3 ml 1000 ml
1,0 ml 30 ml
7.3.5 Tampon de dilution pour les échantillons (prêt à l'emploi)
7.3.6 Substrat (prêt à l'emploi)
Il fait éviter de contaminer la solution de substrat prêt à l'emploi, par ex., en utilisant
des embouts stériles.
7.3.7 Solution d'arrêt (prête à l'emploi)
français 10

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/T establauf/West Nile Virus: T establauf @ 12\mod_1366959390780_23.doc @ 56076 @
Pos: 27 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/T establ auf @ 12\mod_1365489408139_23.doc @ 55711 @
Pos: 28 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/M anuelle Testdurchführ ung (für ALLE Erreg er auß er C oxiella) @ 5\mod_1255349441824_23.doc @ 21512 @ 2
7.4 Aperçu général - Procédure de test
SERION ELISA classic
West Nile Virus IgG / IgM
quantitatif
Dans le cas de détection d'IgM de facteur rhumatoïde, voir No. 7.2.1;
Incubation de 15 minutes à température ambiante ou toute une nuit à 4°C
dilution d'échantillon 1
(échantillon de patient)
1+100
FR
Déposez les échantillons dilués et les sérums contrôle/
standard prêts à l'emploi dans les puits (100 µl)
INCUBATION 60 min à 37 °C
chambre humide
LAVAGE (4 x 300 µl DIL WASH )²
Déposez le conjugué APC (100 µl)
INCUBATION 30 min à 37 °C
chambre humide
LAVAGE (4 x 300 µl DIL WASH )²
Déposez le substrat pNPP (100 µl)
INCUBATION 30 min à 37 °C
chambre humide
Déposez la solution d'arrêt STOP (100 µl)
LECTURE D'EXTINCTION à 405 nm
1 Les tampons spéciaux pour les tests SERION ELISA classic suivants :
Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG et Hantavirus Puumala IgG, IgM
2 Pour une utilisation manuelle :
tapez la plaque, à la fin de la procédure de lavage, sur un papier absorbant.
français 11

Pos: 29 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_23.doc @ 21544 @ 2
7.5 Procédure de test manuelle
1. Placez le nombre de puits dont vous avez besoin dans le cadre et préparez une
feuille de protocole.
2. Déposez 100 µl d'échantillon dilué ou de contrôles prêts à l'emploi dans les
puits appropriés. Laissez un puits pour le blanc du substrat, par ex.,
IgG/IgM quantitatif
n o de puits
puits A1
puits B1
puits C1
puits D1
Blanc du substrat
Contrôle négatif
Sérum standard
Sérum standard
puits E1 Patient 1....
3. Incubation de l'échantillon pendant 60 minutes (+/- 5 min) à 37 °C (+/- 1°C) dans
une chambre humide
4. Après incubation lavez tous les puits avec une solution de lavage (avec un laveur
automatisé ou manuellement) :
- aspirez ou enlevez la solution d'incubation en retournant la plaque
- remplissez chaque puits avec 300 µl de solution de lavage
- aspirez ou enlevez le tampon de lavage en retournant la plaque
- répétez la procédure de lavage 3 fois (4 fois en tout!)
- séchez la plaque de microtitration en la tapant sur un papier absorbant
5. Ajout du conjugué
Ajoutez 100 µl de conjugué IgG/IgM prêt à l'emploi aux puits appropriés (sauf le
blanc du substrat)
6. Incubation du conjugué pendant 30 minutes (+/- 1 min)* à 37 °C (+/- 1 °C) dans
une chambre humide.
7. Après incubation, lavez tous les puits avec la solution de lavage (voir plus haut)
8. Ajout du substrat
Ajoutez 100 µl de solution de substrat prête à l'emploi à chaque puits (y compris le
puits pour le blanc de substrat!)
9. Incubation du substrat pendant 30 minutes (+/- 1 min)* à 37 °C (+/- 1 °C) dans
une chambre humide.
10. Arrêt de la réaction
Ajoutez 100 µl de solution d'arrêt à chaque puits, secouez doucement la plaque de
microtitration pour mélanger.
11. Lecture d'extinction
Lisez la densité optique (DO) dans les 60 minutes à 405 nm par rapport à un blanc
de substrat, longueur de référence entre 620 nm et 690 nm (ex. 650 nm).
_____________________
* Veuillez noter que dans des conditions de manipulation particulières, il peut s'avérer
nécessaire d'adapter les temps d'incubation selon le laboratoire.
français 12

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Positi vkontroll e / Richtigkeitskontroll e @ 8\mod_1260286311409_23.doc @ 27531 @ 2
Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: TESTAU SWER TUNG + Erreg er @ 1\mod_1197038305478_23.doc @ 11387 @ 1
7.6 Procédure de test automatisée
SERION ELISA est compatible avec un traitement sur automate et a été évalué quant à
son utilisation avec Immunomat TM mais également avec DYNEX DSX ® et DS2 ® . Le
traitement automatique est effectué de façon analogue à l'utilisation manuelle. Veuillez
noter que dans des conditions de manipulation particulières, il peut s'avérer nécessaire
d'adapter les temps d'incubation selon le laboratoire.
7.7 Contrôle positif / Contrôle de la précision
FR
Pour la vérification périodique du procédé de test, pour satisfaire aux exigences des
systèmes de gestion de la qualité internes des laboratoires, nous recommandons
l'utilisation des SERION ELISA controls afin de déterminer la précision et la fiabilité des
cycles de test du SERION ELISA classic. L'utilisation des SERION ELISA controls est
décrite dans les modes d'emploi spécifiques.
français 13

Pos: 33 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Testgültig kei tskriterien @ 4\mod_1255348317229_23.doc @ 21433 @ 2
8 ÉVALUATION DU TEST
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
Pos: 32 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Ei n-Punkt-Quantifizi erung @ 4\mod_1255348099107_23.doc @ 21401 @ 2
8.1 Quantification en un point selon la méthode 4PL
La transformation optimisée des signaux d'extinction en valeurs quantitatives est assurée
par les fonctions non linéaires, qui permettent d'ajuster une courbe sigmoïde sans autre
transformation des valeurs de DO. La détermination des concentrations d'anticorps avec le
SERION ELISA classic est effectuée par le modèle logistique logarithmique à 4
paramètres (4 PL) qui est idéal pour l'ajustement de courbe. Il est basé sur la formule :
DO = A +
1 + e
D - A
B(C - ln Conc.)
Les paramètres A, B, C et D sont représentatifs de la forme exacte de la courbe :
1. asymptote inférieure paramètre A
2. gradient de la courbe paramètre B
3. point d'inflexion paramètre C
4. asymptote supérieure paramètre D
Pour chaque lot, la courbe de référence est évaluée par l'Institut Virion\Serion GmbH
(Würzburg, Allemagne) dans des cycles d'analyses dans des conditions optimales. On
épargne ainsi à l'utilisateur le temps qu'il aurait consacré à tracer cette courbe ainsi que
les coûts qui y sont liées.
En ce qui concerne l'évaluation des concentrations d'anticorps, une courbe spécifique au
lot ainsi qu'un tableau d'évaluation spécifique au lot sont fournis avec la trousse de test
SERION ELISA classic. Le logiciel d'évaluation SERION evaluate et l'outil logiciel basé sur
Microsoft ® Excel SERION activity sont disponibles sur demande.
Afin de compenser les variations normales du test mais également pour le contrôle du
test, un sérum de référence est utilisé dans chaque cycle de test. Pour ce sérum de
contrôle, une valeur de référence avec une fourchette de validité est déterminée par le
contrôle de la qualité du fabricant. Dans ces limites, une bonne quantification de la
concentration des anticorps est assurée.
français 14

Pos: 34 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Auswertung: Ü berschrift @ 0\mod_1180968661538_23.doc @ 971 @ 2
Pos: 35 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Nichtautomatisierte Auswertung @ 4\mod_1255348011764_23.doc @ 21385 @ 3
8.2 Critères de validité
- Le blanc du substrat doit avoir une DO < 0,25.
- Le contrôle négatif doit donner un résultat de test négatif.
- Avec l'utilisation des tests SERION ELISA classic la valeur de DO moyenne (après
soustraction du blanc du substrat !) du sérum standard doit être dans les limites de
la fourchette de validité, qui est indiqué sur le certificat de contrôle de la qualité
spécifique au lot.
- La variation des valeurs de DO du sérum standard ne doit pas dépasser 20 %.
FR
En cas de non respect de ces critères, le test n'est pas valide et doit être refait.
8.3 Calcul SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
8.3.1 Évaluation non automatique
Pour l'évaluation du test SERION ELISA classic, un certificat de contrôle spécifique à un
lot donné, avec une courbe de référence et un tableau d'évaluation sont fournis avec la
trousse, de sorte que les valeurs de DO obtenues peuvent être attribuées aux activités
d'anticorps correspondantes. Le blanc du substrat doit être soustrait des valeurs de DO
avant l'évaluation.
Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Testauswertung: M ethode 1 (für all e T ests auß er T etanus & Di phtherie) @ 5\mod_1255349684243_23.doc @ 21528 @
s
Méthode 1 : Évaluation qualitative
Pour établir les fourchettes de seuil, multipliez la valeur moyenne des DO du standard
mesurées par les données numériques du certificat de contrôle de la qualité (voir les
formules des cas spéciaux), par ex. :
OD = 0,502 x PM(STD) avec limite supérieure
OD = 0,352 x PM(STD) avec limite inférieure
Si la valeur d'absorbance moyenne mesurée du sérum standard est DO 0,64, la fourchette
du seuil est de 0,225 à 0,321 DO.
français 15

Pos: 38 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_23.doc @ 21353 @ 3
Méthode 2 :
Pos: 37 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Methode 2 (für alle T ests) @ 4\mod_1255348201981_23.doc @ 21417 @
Détermination en continu des activités d'anticorps avec l'aide de la courbe de référence
Les variations entre les tests (déviations de jour en jour et déviations entre laboratoires)
sont compensées par multiplication de la valeur mesurée obtenue pour un échantillon de
patient par le facteur de correction F. Ce facteur est calculé comme suit :
F =
valeur de référence de DO (du sérum standard)
valeur réelle de DO (du sérum standard)
Cette procédure est nécessaire pour ajuster le niveau réel du test de l'utilisateur avec la
courbe de référence spécifique au lot. Premièrement, les déviations journalières doivent
être corrigées en calculant le facteur de correction F.
1. La moyenne des deux valeurs de DO du sérum standard doit être calculée et il faut
vérifier que cette valeur est dans les limites de la fourchette de validité.
2. Calcul du facteur F : la valeur de référence donnée est divisée par la moyenne de
l'extinction du sérum standard :
F = valeur de référence d'extinction du sérum STD / valeur moyenne d'extinction du
sérum STD.
3. Toutes les valeurs mesurées pour les échantillons du patient sont multipliées par F.
4. Les activités des anticorps en UI/ml ou U/ml peuvent être déterminées à partir de la
courbe de référence, avec des valeurs corrigées.
français 16

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Quantifi zierungsgrenzen @ 6\mod_1258098664276_23.doc @ 24401 @ 2
Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Grenzwertber eich ( für T este mehrerer Ig-Klassen) @ 9\mod_1276070736543_23.doc @ 32156 @ 2
Pos: 41 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Interpretation der Ergebnisse @ 0\mod_1190013774869_23.doc @ 9941 @ 2
8.3.2 Évaluation automatique du test avec le logiciel SERION evaluate
Après saisie des quatre paramètres et de la valeur de référence du sérum standard, les
activités des anticorps sont calculées en ligne à partir des séries de tests de SERION
ELISA classic, traités et mesurés, par le logiciel d'évaluation SERION evaluate.
Si la densité optique du standard est hors des limites de validité, le message suivant
apparaîtra.
„Valeurs de référence hors limite pour les groupes suivants : Groupe 1-24.” ou
„Valeur de référence diffère de plus de 20 % dans les groupes suivants : Groupe 1-24.”
FR
Dans ces cas, la série de tests n'est pas valide et doit être refait.
Les paramètres et la valeur de référence doivent être modifiés seulement s'il y a un
changement de lot (le tableau d'évaluation contient les paramètres et les valeurs de
référence). La vérification de la saisie correcte des données spécifiques au lot est basée
sur la vérification de l'activité du sérum standard (en UI/ml ou U/ml). La valeur moyenne
calculée des unités doit correspondre à la valeur unitaire indiquée sur le certificat
spécifique au lot. Une correction automatique des valeurs mesurées est effectuée. Dans la
version standard, les affichages à la sortie de l'imprimante sont les suivants :
Code d'échantillon
Valeur de DO
UI/ml ou U/ml
Évaluation
8.4 Limites de la quantification
Les limites de quantification sont mentionnées sur le certificat de contrôle de la qualité du
test SERION ELISA classic. La linéarité de la dilution dans les limites de cette fourchette a
été démontrée lors des études d'évaluation complètes. Dans le cas où l'échantillon du
patient donne un résultat au dessus de la limite supérieure de quantification, l'échantillon
peut être testé à une dilution plus élevée. L'activité de l'anticorps ainsi déterminée doit être
multipliée par un facteur de dilution additionnel.
8.5 Fourchettes limites
Les limites des fourchettes du test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM sont
mentionnées sur le certificat de contrôle de la qualité et indique la fourchette pour les
résultats limites des tests. Les valeurs obtenues, lors de l'analyse de l'échantillon du
patient, qui sont en dessous de cette fourchette indiquent un résultat de test négatif; les
valeurs qui sont au dessus sont interprétées comme des résultats positifs. Dans les cas où
les résultats sont des la fourchette limite, une interprétation définitive du résultat n'est pas
possible. Dans de tels cas, le test doit être refait en parallèle avec un échantillon prélevé
une ou deux semaines plus tard (paire de sérum).
français 17

Pos: 43 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Refer enzbereiche gesunder Pr obanden @ 8\mod_1258644290978_23.doc @ 26751 @ 2
8.6 Interprétation des résultats
Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/West Nile Virus/West Nile Virus Interpretation der Ergebnisse @ 12\mod_1366959586560_23.doc @ 56094 @
Les résultats des tests sérologiques ne doivent être interprétés qu’à la lumière des
antécédents du patient et des symptômes cliniques ou des autres résultats d'analyses
biologiques, le cas échéant.
Des résultats positifs obtenus avec les tests SERION ELISA classic West Nile Virus IgM et
IgG mettent en évidence la présence d’anticorps dirigés contre le virus du Nil occidental.
Un résultat positif avec SERION ELISA classic West Nile Virus IgM associé à un résultat
négatif avec SERION ELISA classic West Nile Virus IgG indique que la maladie est en
phase aiguë. Étant donné que les anticorps IgM peuvent persister pendant plusieurs
semaines à plusieurs mois, des résultats positifs obtenus avec les tests SERION ELISA
classic West Nile Virus IgM et IgG mettent en évidence une infection aiguë ou récente.
Des résultats positifs obtenus uniquement avec SERION ELISA classic West Nile Virus
IgG mettent en évidence une infection ancienne. La détection de séroconversions par
l’analyse d’échantillons de sérum appariés, prélevés dans un laps de temps de deux
semaines, est un indicateur indéniable d’infections aiguës.
L’absence d’anticorps entraînant des résultats négatifs avec les tests SERION ELISA
classic West Nile Virus ne permet pas d’exclure une infection aiguë. Si l’on suspecte une
infection par le virus du Nil occidental en raison des antécédents d’un patient, un second
échantillon de sérum, prélevé dans les deux semaines, doit être analysé. Il est également
possible d'analyser l'échantillon déjà testé par une autre méthode (PCR par ex.).
Les résultats douteux (valeurs limites) ne peuvent pas être interprétés. Pour interpréter ce
type de résultats, il est recommandé d’analyser des échantillons de suivi, prélevés dans
les deux semaines qui suivent la première analyse, ou d’utiliser une autre méthode
d’analyse (comme la PCR).
La valeur diagnostique des différents profils de résultats possibles est indiquée dans le
tableau suivant.
Schéma d’interprétation
IgM IgG Évaluation
- -
Pas de preuve d’infection ; en cas de suspicion d’une infection
aiguë : analyse d’un échantillon de suivi dans un délai de une à
deux semaines
+ -/+ Preuve d’une infection à un stade précoce
+ + Preuve d’une infection aiguë, récente ou ancienne
- + Preuve d'une infection ancienne
La présence d’anticorps dirigés contre les Flavivirus tels que le virus de l'encéphalite à
tiques, le virus de l’encéphalite japonaise, le virus de la dengue ou le virus de la fièvre
jaune peut entraîner des résultats positifs en raison de la grande homologie dans la famille
des Flaviviridae.
français 18

Pos: 45 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Leistungsmer kmale @ 0\mod_1184676089844_23.doc @ 2104 @ 1
Pos: 46 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift: Sensiti vität und Spezi fität @ 0\mod_1190013251494_23.doc @ 9926 @ 2
Pos: 47 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/West Nile Virus/West Nile Virus Sensiti vität und Spezifität @ 12\mod_1366960055337_23.doc @ 56129 @
8.7 Fourchette de références des personnes en bonne santé
Pos: 44 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/West Nile Virus/West Nile Virus Refenrenzber eiche g esunder Probanden @ 12\mod_1366959813962_23.doc @ 56111 @
L’analyse d’échantillons de sérum provenant de donneurs de sang, prélevés dans la
région du sud de l'Allemagne et sélectionnés aléatoirement, avec les tests SERION ELISA
classic West Nile Virus IgG and IgM nous donne la distribution suivante. Sur les
105 sérums analysés avec le test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG, 93 (88,6 %)
étaient négatifs, 3 sérums (2,9 %) étaient positifs et 9 sérums (8,6 %) ont été classés
comme limites. Avec le test SERION ELISA classic West Nile Virus IgM, 103 des
105 sérums (98,1 %) étaient négatifs, aucun échantillon n’était positif et 2 sérums (1,9 %)
ont été classés comme limites.
FR
9 CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE
9.1 Sensibilité et Spécificité
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
Pour déterminer la sensibilité du test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG,
30 échantillons prélevés chez des patients suspectés d’avoir contracté une infection par le
virus du Nil occidental, ayant donné des résultats positifs avec deux immunoessais
disponibles dans le commerce, ont été analysés. Vingt-cinq des 30 échantillons ont donné
un résultat positif lorsqu’ils ont été analysés par le test SERION ELISA classic West Nile
Virus IgG, 3 échantillons ont été classés comme limites et 2 échantillons se sont avérés
négatifs.
La spécificité du test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG a été évaluée en
analysant 69 sérums prélevés chez des donneurs de sang en bonne santé pour lesquels
deux immunoessais disponibles dans le commerce avaient préalablement donné des
résultats négatifs. Soixante-deux de ces 69 échantillons ont également donné des
résultats négatifs avec le test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG, 5 ont été
classés comme limites et 2 se sont avérés positifs.
Sensibilité
Spécificité
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG > 92,6 % > 96,9 %
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
Les paramètres de performance du test SERION ELISA classic West Nile Virus IgM ont
été déterminés par l’analyse de 103 sérums provenant de donneurs de sang en bonne
santé et de 30 sérums provenant de patients suspectés d’avoir contracté une infection par
le virus du Nil occidental. Les résultats obtenus au préalable avec deux immunoessais
disponibles dans le commerce ont été utilisés comme référence. Avec SERION ELISA
classic West Nile Virus IgM, 28 des 30 échantillons classés comme positifs ont donné des
résultats positifs et 2 échantillons ont été classés comme limites. De plus, avec le test
français 19

Pos: 48 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Präzisi on @ 0\mod_1184676568397_23.doc @ 2119 @ 2
Pos: 50 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_23.doc @ 21191 @ 122
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM, 101 des 103 sérums provenant de donneurs
de sang se sont avérés négatifs et 2 sérums ont été classés comme limites.
Caractéristiques de performance Sensibilité Spécificité
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM > 99 % > 99 %
Les sérums classés comme limites n'ont pas été inclus dans le calcul des sensibilités et
des spécificités.
9.2 Reproductibilité
Pos: 49 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/West Nile Virus/West Nile Virus Pr äzision @ 12\mod_1366960347929_23.doc @ 56146 @
La reproductibilité intra-essais a été déterminée en analysant des sérums ayant des
différentes réactivités, 20 fois dans un même test. La reproductibilité inter-essais a été
déterminée en analysant des sérums ayant des différentes réactivités, lors de 10 tests
indépendants.
Écart type
Coefficient de Variation (CV %) = x 100
Valeur moyenne
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG:
Échantillon
Valeur moyenne
(DO)
Intra-essai
(CV %)
Valeur moyenne
(DO)
Inter-essai
(CV %)
Sérum 1 0,396 3,0 0,413 8,0
Sérum 2 0,611 2,2 0,626 7,6
Sérum 3 1,259 6,2 1,355 3,6
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM:
Échantillon
Valeur moyenne Intra-essai Valeur moyenne Inter-essai
(DO) (CV %) (DO) (CV %)
Sérum 1 0,532 3,7 0,434 14,2
Sérum 2 1,035 5,0 0,888 6,0
Sérum 3 1,542 2,1 1,394 3,6
français 20

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Liter atur/Kapitelüberschrift: Liter atur @ 0\mod_1190013903728_23.doc @ 9957 @ 1
10 MESURES DE SÉCURITÉ
10.1 Mises en garde
Le test SERION ELISA classic est conçu pour être utilisé par un personnel compétent qui
est familier avec les bonnes pratiques de laboratoire.
Tous les réactifs de la trousse et les prélévements humains doivent être manipulés avec
précaution, en usant des bonnes pratiques de laboratoire.
FR
- Cette trousse contient des composants du sang humain. Même si tous les sérums
de contrôle et de seuil sont négatifs pour l'anticorps anti-VIH, HBs-Ag (Antigène de
surface du virus de l'hépatite B) et l'anticorps anti-VHC, ils doivent être considérés
comme potentiellement infectieux.
- Il ne faut pas pipeter à la bouche.
- Il ne faut pas fumer, consommer de la nourriture ou des boissons dans les endroits
où les réactifs de la trousse ou les échantillons sont manipulés.
- Utilisez des gants jetables et portez une blouse et des lunettes de protection lors de
la manipulation des réactifs de la trousse ou des échantillons. Lavez-vous bien les
mains après la manipulation.
- Les échantillons de patient et autres produits potentiellement infectieux doivent être
décontaminés après chaque série de tests.
- Les réactifs doivent être stockés dans un endroit sûr et doivent être inaccessibles
pour les personnes non autorisées, comme des enfants.
- Solution d'arrêt : corrosif (C); provoque des brûlures acides (R34)
Utilisez des lunettes de protection, des gants et une blouse lors de la manipulation!
10.2 Élimination
Veuillez respecter les dispositions légales pertinentes!
français 21

11 RÉFÉRENCES
Pos: 52 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Literatur /West Nile Virus Li ter atur @ 12\mod_1366961104707_0.doc @ 56180 @
[1] Beasley DWC., Holbrook MR., Travassos da Rosa A., Coffey L., Carrara AS.,
Philippi-Falkenstein K., Bohm Jr RP., Ratterree MS. Lillibridge KM., Ludwig GV.,
Estrada-Franco J., Weaver SC., Tesh RB., Shope RE., Barrett ADT. Use of a
Recombinant Envelope Protein Subunit Antigen for Specific Serological Diagnosis
of West Nile Virus Infection Journal of Clinical Microbiology; 42 2759-2765; 2004
[2] Campell GL., Marfin AA., Lanciotti RS., Gubler DJ. West Nile Virus Lancet Infect.
Dis.; 2 519-529; 2002
[3] Chávez JH., Silva JR., Amarilla AA., Figueiredo LTM. Domain III peptides from
flavivirus envelope protein are useful antigens for serologic diagnosis and targets
for immunization Biologicals; 38 613-618; 2010
[4] Dauphin G. & Zientara S. West Nile Virus: Recent trends in diagnosis and vaccine
development Vaccine; 25 5563-5576; 2007
[5] Diamond MS., Pierson TC., Fremont DH. The Structural Immunology of Antibody
Protection against West Nile Virus Immunol Rev.; 225 212-225; 2008
[6] Kemmerly SA. Diagnosis and Treatment of West Nile Infections The Ochsner
Journal; 5 16-17; 2003
[7] Marr J. & Calisher C. Alexander the Great and West Nile Virus Encephalitis Emer.
Infect. Diseases; 9 1599-1603; 2003
[8] Monini M., Falcone E., Busani L., Romi R., Ruggeri FM. West Nile Virus:
Characteristics of an African Virus Adapting to the Third Millennium World The
Open Virology Journal; 4 42-51; 2010
[9] Niedrig M., Sonnenberg K., Steinhagen K., Paweska JT. Comparison of ELISA and
immunoassays for measurement of IgG and IgM antibody to West Nile Virus in
human sera against virus neutralisation Journal of Virological Methods; 139 103-
105; 2007
[10] Oliphant T., Engle M., Nybakken GE., Doane C., Johnson S., Huang L., Gorlatov S.,
MehlhopE., Marri A., Chung KM., Ebel GD., Kramer LD., Fermont DH., Diamond
MS. Development of a Humanized monoclonal Antibody with Therapeutic Potential
against West Nile Virus Nat. Med.; 11 522-530; 2005
[11] Oliphant T., Nybakken GE., Engle M., Xu Q., Nelson CA., Sukupolvi-Petty S., Marri
A., Lachmi BE., Olshevsky U., Fremont DH., Pierson TC., Diamond MS. Antibody
Recognition and Neutralization Determinants on Domains I and II of West Nile Virus
Envelope Protein Journal of Virology; 80 12149-12159; 2006
[12] Rossi SL., Ross TM., Evans JD. West Nile Virus Clin Lab Med; 30 47-65; 2010
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Detection of West Nile Virus in Blood and Tissues Transfusion Medicine Reviews;
23 146-154; 2009
français 22

SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
INDICE
1 CAMPO DI APPLICAZIONE
2 RILEVANZA DIAGNOSTICA
3 PRINCIPIO DEL TEST SERION ELISA classic
4 COMPONENTI DEL KIT
5 MATERIALI NECESSARI, MA NON FORNITI
6 CONSERVAZIONE E STABILITÀ
7 PROCEDURA PER IL TEST SERION ELISA classic
7.1 Segni di deterioramento
7.2 Preparazione e conservazione dei campioni
7.3 Preparazione dei reagenti del kit
7.4 Schema riassuntivo della procedura
7.5 Procedura manuale
7.6 Procedura automatica
7.7 Controllo positivo / controllo di accuratezza
IT
8 VALUTAZIONE DEL TEST
8.1 Quantificazione a singolo punto con il metodo 4PL
8.2 Criteri di validità
8.3 Calcolo SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
8.4 Limiti di quantificazione
8.5 Zona grigia
8.6 Interpretazione dei risultati
8.7 Valori di riferimento negli individui sani
9 CARATTERISTICHE DI PRESTAZIONE
9.1 Sensibilità e specificità
9.2 Riproducibilità
10 MISURE DI SICUREZZA
10.1 Avvertenze
10.2 Smaltimento
11 BIBLIOGRAFIA
versione attuale nr.: V 1.13/04-1
versione precedente: --
italiano

Pos: 5 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_33.doc @ 224 @ 1
Pos: classic/Allgemeine @ 4\mod_1255336385816_33.doc 1 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ classic/Einleitung classic/Gültig 21168 @ für "Enzymimmunoassay"
alle Dokumente/ELISA
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
Dosaggio immunoenzimatico per la determinazione degli anticorpi umani
per uso diagnostico in vitro
Dokument/Bestellnummern/West 12\mod_1366958469615_33.doc Pos: 2 /Arbeitsanleitungen ELISA @ Nile classic/Gültig 56009 Virus @ Bestellnummern für nur ein @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
N. di ordinazione: ESR141G
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
N. di ordinazione: ESR141M
classic/Allgemeine 0\mod_1177351044007_33.doc Pos: 3 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ 173 classic/Kapitelüberschrift classic/Gültig @ 1 für alle Dokumente/ELISA
"Anwendungsbereich" @
1 CAMPO DI APPLICAZIONE
Pos: 4 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Anwendungsber eich/West Nile Vir us Anwendungsbereich @ 12\mod_1366957860138_33.doc @ 55975 @
I test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG e IgM sono immunodosaggi quantitativi e
qualitativi per la determinazione degli anticorpi umani diretti contro il virus del Nilo
occidentale nel siero o nel plasma. Il test SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
consente di diagnosticare le infezioni acute. Il test SERION ELISA classic West Nile Virus
IgG è consigliato per dimostrare il contatto con il patogeno, per determinare lo status
immunitario e per gli studi epidemiologici.
2 RILEVANZA DIAGNOSTICA
Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Di agnostische Bedeutung/West Nile Virus Diagnostische Bedeutung @ 12\mod_1366958140940_33.doc @ 55992 @
Come il virus Dengue, il virus della febbre gialla e il virus TBE, il virus del Nilo occidentale
appartiene alle specie patogene per l’uomo dei Flavivirus. Gli uccelli, come corvi e passeri,
costituiscono il serbatoio naturale dell’arbovirus (arthropode borne virus). Le zanzare dei
generi Culex, Aedes e Ochlerotatus sono i principali vettori di trasmissione del virus del
Nilo occidentale all'uomo.
Il genoma a RNA del virus del Nilo occidentale è circondato da un capside sferico a
simmetria icosaedrica. Il capside è rivestito da una membrana lipidica. In particolare la
proteina E del pericapside, alloggiata nella membrana esterna, è altamente
immunogenica.
Il virus del Nilo occidentale è stato scoperto nel 1937 nel distretto di West Nile in Uganda.
Le infezioni causate dal virus del Nilo occidentale sono documentate da tempo in estese
regioni dell’Africa, dell’Europa orientale e dell’Asia. Dagli anni ’90 è stato osservato un
aumento del numero di focolai epidemici in Europa, Australia e America settentrionale.
Il periodo d’incubazione è compreso tra 3 e 14 giorni. Le infezioni dovute al virus del Nilo
occidentale sono generalmente asintomatiche. Nelle forme lievi di malattia possono
manifestarsi sintomi simil-influenzali come febbre, cefalea, mialgia e artralgia, oltre che
sintomi gastrointestinali (febbre del Nilo occidentale). Il virus è in grado di attraversare la
barriera ematoencefalica e quindi, in casi rari, l’infezione da virus del Nilo occidentale può
essere accompagnata da encefalite, meningite o paralisi acuta. Con l’espansione del virus
in Europa, Australia e America si assiste sempre più frequentemente a forme gravi di
malattia. Tali forme neurologiche gravi si manifestano principalmente neí pazienti anziani o
immunocompromessi e possono portare al decesso o causare danni permanenti.
Per la conferma di laboratorio delle infezioni da virus del Nilo occidentale si consiglia la
determinazione sierologica degli anticorpi IgM. Gli anticorpi IgM appaiono al termine della
prima settimana dopo l’esordio della sintomatologia e sono prodotti da oltre il 90 % delle
persone infette. Gli anticorpi IgM sono rilevabili per diverse settimane o mesi. Gli anticorpi
italiano 2

IgG appaiono non prima di otto giorni dopo l’esordio della malattia e possono persistere
per mesi o per tutta la vita.
Pos: 7 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/T estprinzip/Testpri nzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_33.doc @ 21211 @ 1
3 PRINCIPIO DEL TEST SERION ELISA classic
Il test ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay, dosaggio immunoenzimatico) è un
immunodosaggio particolarmente indicato per la determinazione degli anticorpi nel campo
della sierologia infettiva. La reazione si basa sull’interazione specifica degli anticorpi con
gli antigeni corrispondenti. Le strisce reattive della piastra per microtitolazione del test
SERION ELISA classic sono rivestite con antigeni specifici dell’agente patogeno di
interesse. Se il siero del paziente contiene gli anticorpi specifici, questi si legano
all’antigene fissato sulle strisce. Un anticorpo secondario, coniugato con l’enzima fosfatasi
alcalina, rileva e lega il complesso immune. Il substrato incolore p-nitrofenilfosfato è quindi
convertito nel composto colorato p-nitrofenolo. L’intensità di segnale del prodotto della
reazione è proporzionale alla concentrazione dell’analita nel campione e viene misurata
con metodo fotometrico.
Pos: 8 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für mehrere Dokumente/Inhalt und
Zusammensetzung/Inhalt und Zusammensetzung (alle außer Bor,EBV,Hanta,Parvo,
Coxiella) @ 4\mod_1255342923549_33.doc @ 21227 @ 1
IT
italiano 3

4 COMPONENTI DEL KIT
Componenti del test Pezzi /
volume
Strisce reattive per microtitolazione separabili, ciascuna con otto pozzetti
singoli rivestiti da antigene
(96 in totale) MTP ,
1 telaio.
Il materiale di rivestimento è inattivato.
12 pezzi
Siero standard (pronto per l’uso) STD
Siero umano in tampone fosfato contenente proteine;
negativo per anti-HIV Ab, HBs-Ag (antigene di superficie del virus dell’epatite B) e
anti-HCV Ab;
conservante: sodio azide < 0,1 %;
colorante: amaranto O.
Siero di controllo negativo (pronto per l’uso) NEG
Siero umano in tampone fosfato contenente proteine;
negativo per anti-HIV Ab, HBs-Ag (antigene di superficie del virus dell’epatite B) e
anti-HCV Ab;
conservante: sodio azide < 0,1 %;
colorante: verde di lissamina V.
Coniugato anti- IgA, IgG o IgM umane (pronto per l’uso) APC
Anticorpo policlonale anti-IgA, IgG o IgM umane,
coniugato con fosfatasi alcalina, stabilizzato con soluzione stabilizzante contenente
proteine;
conservanti: metilisotiazolone 0,01 %, bromonitrodiossano 0,01 %.
Soluzione di lavaggio concentrata (sufficiente per 1000 ml) WASH
Soluzione di sodio cloruro con Tween 20 e Tris/HCl 30 mM, pH 7,4;
conservante: sodio azide < 0,1 %,
Tampone di diluizione DILB
Tampone fosfato contenente proteine, con Tween 20;
conservante: sodio azide < 0,1 %;
colorante: blu di bromofenolo 0,01 g/l.
Soluzione di arresto STOP
Sodio idrossido 1,2 N
Substrato (pronto per l’uso) pNPP
Para-nitrofenilfosfato in tampone privo di solvente;
conservante: sodio azide < 0,1 %
(Il substrato nel flacone chiuso può avere un colore leggermente giallo, che non
compromette la qualità del prodotto!)
Certificato di controllo qualità con curva standard e tabella di valutazione INFO
(Quantificazione degli anticorpi in UI/ml o U/ml).
2 x 2 ml
2 ml
13 ml
33,3 ml
2 x 50 ml
15 ml
13 ml
2 pagine
Pos: 9 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für mehrere Dokumente/Zusätzlich
benötigte Materialien/Z200 Zusätzlich benötigte Materialien (für Teste mit IgM-
Nachweis) @ 9\mod_1316422545600_33.doc @ 36493 @ 1
italiano 4

5 MATERIALI NECESSARI, MA NON FORNITI
- normale equipaggiamento di laboratorio
- per la determinazione delle IgM: adsorbente SERION Rf, n. di ordinazione Z200
(20 ml)
- fotometro per piastre da microtitolazione con filtro, lunghezza d’onda 405 nm,
lunghezza d’onda di riferimento consigliata 620 nm - 690 nm (ad es. 650 nm)
- incubatore a 37 °C
- camera umida
- acqua distillata
- Click-Clips (n. di ordinazione VT120)
Pos: 10 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA
classic/Lagerung und Haltbarkeit/Lagerung und Haltbarkeit @
4\mod_1255343176800_33.doc @ 21243 @ 1
IT
italiano 5

Pos: 11 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Überschrift: Durchführ ung @ 0\mod_1184679699953_33.doc @ 2476 @ 1
6 CONSERVAZIONE E STABILITÀ
Reagente Conservazione Stabilità
Strisce per
microtitolazione
(rivestite con
antigene)
non aperto
dopo l’apertura a 2 – 8 °C nella busta di alluminio
chiusa, con essiccante
vedere data di
scadenza;
validità minima: quattro
settimane;
Sieri di controllo / sieri
standard
Le strisce non utilizzate devono essere conservate
all’asciutto nella busta di alluminio chiusa.
dopo l’apertura a 2 – 8 °C
Coniugato soluzione pronta per l’uso a 2 – 8 °C
Tampone di diluizione non aperto
Evitare le contaminazioni, ad es. utilizzando puntali
sterili.
dopo l’apertura a 2 – 8 °C
Gettare via le soluzioni torbide.
validità in caso di uso
e conservazione
corretti fino alla data di
scadenza
vedere data di
scadenza;
24 mesi dopo la data
di produzione
vedere data di
scadenza;
28 mesi dopo la data
di produzione
vedere data di
scadenza;
36 mesi dopo la data
di produzione;
24 mesi
Soluzione di lavaggio concentrata dopo l’apertura a 2 – 8 °C
Substrato
alla diluizione di lavoro a 2 – 8 °C
alla diluizione di lavoro a temperatura ambiente
I flaconi usati per le diluizioni di lavoro devono essere
lavati regolarmente. Gettare via le soluzioni torbide.
soluzione pronta per l’uso a 2 – 8 °C, al riparo dalla
luce
Evitare le contaminazioni, ad es. utilizzando puntali
sterili.
Eliminare la soluzione se vira verso il giallo
(estinzione contro acqua distillata > 0,25 OD).)
vedere data di
scadenza;
2 settimane;
1 settimana
vedere data di
scadenza;
36 mesi dopo la data
di produzione
Soluzione di arresto dopo l’apertura a temperatura ambiente vedere data di
scadenza
italiano 6

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Allgemeine Hi nweise ELISA cl assic @ 4\mod_1255343318159_33.doc @ 21259 @ 2
7 PROCEDURA PER IL TEST SERION ELISA classic
7.1 Segni di deterioramento
Utilizzare solo i reagenti SERION ELISA classic con gli immunodosaggi SERION ELISA
classic. I componenti non devono essere sostituiti con reagenti di altri produttori. I sieri
standard e di controllo degli immunodosaggi SERION ELISA classic sono destinati
esclusivamente all’uso con il kit corrispondente e non devono essere utilizzati con altri lotti.
Il tampone di diluizione, la soluzione di lavaggio, il substrato e la soluzione di arresto
possono essere utilizzati con tutti gli immunodosaggi SERION ELISA classic,
indipendentemente dal numero di lotto e dal test.
Per ogni classe immunoglobulinica, il coniugato è disponibile in tre differenti
concentrazioni: BASSA, MEDIA, ALTA. La concentrazione è riportata sull’etichetta nel
modo seguente:
IT
ad es. IgG +
IgG ++
IgG +++
coniugato IgG a concentrazione bassa
coniugato IgG a concentrazione media
coniugato IgG a concentrazione alta
In casi rari è necessario utilizzare un coniugato speciale per garantire una qualità costante
dei nostri prodotti. I coniugati speciali vengono prodotti con un numero di lotto distinto, non
recano il segno “+” e non sono intercambiabili con altri coniugati.
Prestare la massima attenzione alle informazioni riportate sull’etichetta!
Finché sono chiusi e conservati correttamente, tutti i componenti dei test SERION ELISA
classic possono essere utilizzati fino alla data di scadenza riportata sulle etichette. I
reagenti non possono essere utilizzati dopo la data di scadenza.
La diluizione o qualsiasi modifica apportata ai reagenti può comportare una perdita di
sensibilità.
Non esporre i reagenti alla luce intensa durante la conservazione e l’incubazione. Dopo
l’uso, i reagenti devono essere chiusi saldamente per evitare l’evaporazione e la
contaminazione.
Per aprire la busta di alluminio della piastra per microtitolazione, tagliare solo l’estremità
del lato appositamente contrassegnato, per poter richiudere correttamente la busta. Non
utilizzare le strisce se la busta di alluminio risulta danneggiata o se la busta contenente le
strisce rimanenti e l’agente essiccante non è stata richiusa correttamente.
Per evitare contaminazioni, utilizzare tecniche asettiche per prelevare aliquote dalle
provette dei reagenti. Per evitare risultati falsamente positivi, prestare attenzione a non
toccare o bagnare con la pipetta la parte superiore delle pareti dei pozzetti quando si
dispensa il coniugato. Prestare attenzione a non scambiare i tappi dei flaconi e/o dei
flaconcini.
italiano 7

Pos: 14 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Kapi tel überschrift Probenverdünnung @ 0\mod_1184679414434_33.doc @ 2316 @ 3
Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Nile Virus Teil 2 Ü berschrift @ 12\mod_1366959209524_33.doc @ 56043 @
Per ottenere risultati riproducibili, mescolare con cura i reagenti. Prima dell’uso, agitare i
contenitori dei sieri di controllo e tutti i campioni dopo la diluizione (ad es. utilizzando un
vortex).
Pipettare con attenzione e attenersi ai tempi e alle temperature di incubazione indicati. Se,
quando si dispensano i campioni e i sieri di controllo, il coniugato o il substrato, trascorre
un arco di tempo significativo tra la pipettata nel primo pozzetto e la pipettata nell'ultimo
pozzetto della piastra da microtitolazione, possono derivarne tempi di pre-incubazione
differenti, con conseguenti effetti sulla precisione e la riproducibilità dei risultati.
Solo attenendosi scrupolosamente alle istruzioni è possibile ottenere risultati ottimali.
L’immunodosaggio SERION ELISA classic è valido solo se vengono rispettati i criteri di
validazione specifici per ogni lotto, riportati nel certificato di controllo qualità.
Un lavaggio corretto consente di evitare risultati non specifici. Pertanto, la procedura di
lavaggio deve essere effettuata con cura. Riempire tutti i pozzetti a fondo piatto con volumi
uguali di tampone di lavaggio. Al termine di questa procedura, assicurarsi che non
rimangano residui del tampone di lavaggio nei pozzetti, per evitare effetti di diluizione non
controllabili. Evitare la formazione di schiuma!
Per evitare confusioni, prestare attenzione a non danneggiare la scritta (agente patogeno /
classe anticorpale) sulle strisce reattive per microtitolazione durante le procedure di
lavaggio e aspirazione.
Pos: 13 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenvor ber. und Lager ung (für ALLE Err eger auß er Borreli a, CM V, FSM E, H SV,Masern,Mumps,R öteln,VZ V) @ 8\mod_1263998040982_33.doc @ 28433 @ 2
7.2 Preparazione e conservazione dei campioni
I campioni lipemici, emolitici o itterici (siero o plasma) devono essere analizzati solo con
cautela. Campioni contaminati non devono essere analizzati. Sono campioni idonei i
campioni di siero o plasma (EDTA, citrato, eparina) prelevati secondo le metodiche
standard di laboratorio. I campioni non devono essere sottoposti ad inattivazione termica.
7.2.1 Diluizione dei campioni
Prima dell’analisi, i campioni dei pazienti (V 1 ) devono essere diluiti nel tampone di
diluizione (V 2 ) nel modo seguente:
Pos: 15 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Ni kle Virus T eil 1 @ 12\mod_1366959098552_33.doc @ 56026 @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
V 1 + V 2 = 1+100 aggiungere 10 µl di campione del paziente
a ogni 1.000 µl di tampone di diluizione
Pos: 16 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_33.doc @ 21291 @
Dopo la diluizione e prima di dispensare i campioni nella piastra per microtitolazione, i
campioni devono essere miscelati con cura per ottenere una soluzione omogenea.
italiano 8

SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
Pos: Dokumente/Testdurchführung/Probenverdünnung: mit IgM-Nachweis) 18 /Arbeitsanleitungen @ 9\mod_1316422765852_33.doc ELISA classic/Gültig für @ Rheumafaktor-Interferenz mehrere 36510 @
(für Tests
Interferenza con i fattori reumatoidi
I fattori reumatoidi sono autoanticorpi appartenenti principalmente alla classe IgM, che si
legano preferenzialmente ai complessi immuni IgG. La presenza di anticorpi IgM non
specifici (fattori reumatoidi) può causare risultati falsamente positivi nel dosaggio delle
IgM. Inoltre, esiste la possibilità che gli anticorpi IgG con legame forte competano con gli
anticorpi IgM patogeno-specifici con legame debole per il legame all’antigene adeso sulla
micropiastra, di conseguenza gli anticorpi IgG si legano all’ antigene al posto degli
anticorpi IgM patogeno-specifici ottenendo un risultato falsamente negativo per le IgM.
Pertanto, è necessario pretrattare i campioni con un adsorbente del fattore reumatoide
prima di determinare le IgM (SERION Rf-Absorbent, n. di ordinazione: Z200 (20 ml/100
test)). Per l’adsorbimento del Rf, incubare il campione del paziente in tampone di
diluizione Rf per 15 minuti a temperatura ambiente oppure per una notte a 4 °C. La
procedura è descritta in un manuale di istruzioni distinto.
IT
Pos: 19 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Nile Virus Teil 3 @ 12\mod_1366959279193_33.doc @ 56060 @
Prima dell’analisi, l’adsorbente del fattore reumatoide (V 1 ) deve essere diluito 1+4 nel
tampone di diluizione (V 2 ).
V 1 + V 2 = V 3 (1 + 4) aggiungere 200 µl di adsorbente Rf
a ogni 800 µl di tampone di diluizione
I campioni dei pazienti (V 4 ) devono essere diluiti in questo tampone di diluizione Rf (V 3 ):
V 4 + V 3 = 1 +100 aggiungere 10 µl di campione del paziente
a ogni 1.000 µl di tampone di diluizione Rf
Pos: 20 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_33.doc @ 21291 @
Dopo la diluizione e prima di dispensare i campioni nella piastra per microtitolazione, i
campioni devono essere miscelati con cura per ottenere una soluzione omogenea.
Pos: 21 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenlager ung @ 4\mod_1255343526141_33.doc @ 21275 @ 3
7.2.2 Conservazione dei campioni
Non conservare i campioni dei pazienti per più di 7 giorni a 2 – 8 °C. Per una durata più
lunga dei campioni conservare a temperature ≤ - 20 °C. Evitare di congelare e scongelare
ripetutamente i campioni. I campioni diluiti possono essere conservati per una settimana a
2 – 8 °C.
classic/Testdurchführung/Reagenzienvorbereitung, 4\mod_1255343795606_33.doc Pos: 22 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 21307 classic/Gültig @ 233 für Teil alle 1 Dokumente/ELISA
@
italiano 9

Pos: 24 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 2 @ 4\mod_1255343884183_33.doc @ 21323 @ 33333
Pos: 25 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/Ü berschrift Testablauf @ 0\mod_1180955922843_33.doc @ 736 @ 2
7.3 Preparazione dei reagenti del kit
Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente prima dell’uso.
7.3.1 Strisce reattive per microtitolazione
Le strisce reattive per microtitolazione inserite in un telaio sono confezionate in una
busta di alluminio con un agente essiccante. Prelevare dal telaio i pozzetti non
necessari e riporli nella busta di alluminio. Chiudere la busta con cura per garantire
la chiusura ermetica.
7.3.2 Sieri di controllo / sieri standard
I sieri di controllo e i sieri standard sono pronti per l’uso e non devono essere
ulteriormente diluiti. I sieri di controllo e i sieri standard devono essere inclusi in ogni
analisi, indipendentemente dal numero di strisce reattive per microtitolazione
utilizzate. I sieri standard devono essere analizzati in duplicato.
Pos: 23 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/R eagenzienvorbereitung: Rf- Absorbens (für T este mit IgM-Nachweis) @ 0\mod_1184741119299_33.doc @ 2873 @
Non trattare i sieri di controllo con l’adsorbente Rf.
7.3.3 Coniugato AP anti- IgA, IgG o IgM umane (pronto per l’uso)
I coniugati con la medesima concentrazione e della stessa classe
immunoglobulinica sono intercambiabili. Evitare la contaminazione dei coniugati
pronti per l’uso, ad es. utilizzando puntali sterili.
7.3.4 Soluzione di lavaggio
Diluire la soluzione di lavaggio concentrata (V 1 ) 1:30 con acqua distillata, per un
volume finale di V 2 .
Esempio:
Tampone concentrato (V 1 )
Volume finale(V2)
33.3 ml 1.000 ml
1.0 ml 30 ml
7.3.5 Tampone di diluizione per campioni (pronto per l’uso)
7.3.6 Substrato (pronto per l’uso)
Evitare la contaminazione della soluzione substrato pronta per l’uso, ad es.
utilizzando puntali sterili.
7.3.7 Soluzione di arresto (pronta per l’uso)
italiano 10

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/T establauf/West Nile Virus: T establauf @ 12\mod_1366959390780_33.doc @ 56077 @
Pos: 27 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/T establ auf @ 12\mod_1365489408139_33.doc @ 55713 @
7.4 Schema riassuntivo della procedura
SERION ELISA classic
West Nile Virus IgG / IgM
analisi quantitativa
Per il rilevamento delle IgM eseguire l’adsorbimento del fattore reumatoide, vedere n.
7.2.1; Incubare 15 minuti a temperatura ambiente o tutta la notte a 4°C
diluizione del campione 1
(campioni dei pazienti)
1+100
Dispensare i campioni diluiti e i sieri di controllo /
standard pronti per l’uso nei pozzetti per microtitolazione (100 µl)
INCUBAZIONE 60 min/ 37 °C
camera umida
LAVARE (4 x 300 µl DIL WASH )²
Dispensare la soluzione di coniugato APC (100 µl)
INCUBAZIONE 30 min./ 37 °C
camera umida
LAVARE (4 x 300 µl DIL WASH )²
Dispensare la soluzione di substrato pNPP (100 µl)
INCUBAZIONE 30 min./ 37 °C
camera umida
Dispensare la soluzione di arresto STOP (100 µl)
LEGGERE L’ESTINZIONE a 405 nm
IT
1 Tamponi di diluizione speciali per i seguenti test SERION ELISA classic:
Borrelia burgdorferi IgG, IgM, EBV EA IgG e Hantavirus Puumala IgG, IgM
2 Per uso manuale:
al termine della procedura di lavaggio, picchiettare la piastra su carta bibula.
Pos: 28 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/M anuelle Testdurchführ ung (für ALLE Erreg er auß er C oxiella) @ 5\mod_1255349441824_33.doc @ 21514 @ 2
italiano 11

7.5 Procedura manuale
1. Collocare la quantità necessaria di pozzetti nel telaio e preparare un foglio
protocollo.
2. Aggiungere 100 µl di campione diluito o dei controlli pronti per l’uso nei
pozzetti corrispondenti delle strisce reattive per microtitolazione. Lasciare vuoto un
pozzetto per il bianco substrato, ad es.:
IgG/IgM analisi quantitativa
pozzetto n.
pozzetto A1 Bianco substrato
pozzetto B1 Controllo negativo
pozzetto C1 Siero standard
pozzetto D1 Siero standard
pozzetto E1 Paziente 1…
3. Incubare i campioni per 60 minuti (+/- 5 min) a 37 °C (+/- 1°C) in camera umida
4. Dopo l’incubazione, lavare tutti i pozzetti con la soluzione di lavaggio (con
dispositivo automatico o manualmente):
- aspirare o gettare via la soluzione di incubazione rovesciando la piastra per
microtitolazione
- riempire ogni pozzetto con 300 µl di soluzione di lavaggio
- aspirare o gettare via la soluzione di lavaggio rovesciando la piastra per
microtitolazione
- ripetere per 3 volte la procedura di lavaggio (per un totale di 4 lavaggi!)
- asciugare picchiettando la piastra per microtitolazione su carta bibula
5. Aggiunta del coniugato
Aggiungere 100 µl del coniugato IgG/IgM pronto per l’uso ai pozzetti corrispondenti
(ad eccezione del bianco substrato)
6. Incubare il coniugato per 30 minuti (+/- 1 min)* a 37 °C (+/- 1 °C) in camera
umida.
7. Dopo l’incubazione, lavare tutti i pozzetti con la soluzione di lavaggio (come sopra)
8. Aggiunta del substrato
Aggiungere a ogni pozzetto 100 µl della soluzione di substrato pronta per l’uso
(compreso il pozzetto per il bianco substrato!)
9. Incubare il substrato per 30 minuti (+/- 1 min)* a 37 °C (+/- 1 °C) in camera umida.
10. Arresto della reazione
Aggiungere a ogni pozzetto 100 µl di soluzione di arresto e miscelare scuotendo
leggermente la piastra per microtitolazione.
11. Determinare l’estinzione
Determinare la densità ottica (OD) entro 60 minuti a 405 nm contro il bianco
substrato; lunghezza d’onda di riferimento tra 620 nm e 690 nm (ad es. 650 nm).
_____________________
* Si prega di notare che, in particolari condizioni di lavoro, possono essere necessarie
modifiche interne al laboratorio dei tempi di incubazione.
Pos: 29 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_33.doc @ 21546 @ 2
italiano 12

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Positi vkontroll e / Richtigkeitskontroll e @ 8\mod_1260286311409_33.doc @ 27533 @ 2
Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: TESTAU SWER TUNG + Erreg er @ 1\mod_1197038305478_33.doc @ 11389 @ 1
7.6 Procedura automatica
I SERION ELISA possono essere analizzati con strumenti automatici e validati sia con
Immunomat TM , sia con DYNEX DSX ® e DS2 ® . L’analisi automatica viene effettuata
analogamente alla procedura manuale. Si prega di notare che, in particolari condizioni di
lavoro, possono essere necessarie modifiche interne di laboratorio ai tempi di incubazione.
7.7 Controllo positivo / controllo di accuratezza
Per la verifica periodica del metodo di analisi, in conformità ai requisiti dei sistemi di
gestione qualità interni al laboratorio, raccomandiamo l’uso dei controlli SERION ELISA
controls per determinare la precisione e l’affidabilità delle analisi effettuate con SERION
ELISA classic. L’uso dei SERION ELISA controls è descritto nei manuali di istruzioni
specifici.
IT
italiano 13

Pos: 33 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Testgültig kei tskriterien @ 4\mod_1255348317229_33.doc @ 21435 @ 2
8 VALUTAZIONE DEL TEST
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
Pos: 32 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Ei n-Punkt-Quantifizi erung @ 4\mod_1255348099107_33.doc @ 21403 @ 2
8.1 Quantificazione a singolo punto con il metodo 4PL
Una corrispondenza ottimale dei segnali di estinzione con i valori quantitativi è data dalle
funzioni non lineari, che consentono di correlare le curve sigmoidali direttamente, senza
ulteriore trasformazione, ai valori OD. La determinazione della concentrazione anticorpale
con il SERION ELISA classic viene effettuata con il modello logistic-log a 4 parametri (4
PL), ideale per una corrispondenza esatta della curva. Il modello si basa sulla formula
seguente:
OD = A +
1 + e
D - A
B(C - ln Conc.)
I parametri A, B, C e D rappresentano l'andamento esatto della curva:
1. asintoto inferiore parametro A
2. pendenza della curva parametro B
3. punto di flesso parametro C
4. asintoto superiore parametro D
L’Istituto Virion\Serion GmbH (Würzburg, Germania) determina le curve standard per
ciascun lotto in test ripetuti e in condizioni ottimali. Non è più quindi necessaria una lunga
e dispendiosa costruzione della curva standard da parte dell’utilizzatore.
Per la determinazione delle concentrazioni anticorpali, una curva standard e una tabella di
valutazione specifiche per il lotto sono allegate a ogni kit SERION ELISA classic. Il
software di valutazione SERION evaluate e il software basato su Microsoft ® Excel
SERION activity sono disponibili su richiesta.
Per compensare le normali oscillazioni e per valutare il test di controllo, in ogni test viene
utilizzato un siero standard. Il controllo qualità del produttore determina il valore di
riferimento e l’ambito di validità del siero di controllo. All’interno di tale ambito si
garantisce la quantificazione corretta della concentrazione anticorpale.
italiano 14

Pos: 34 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Auswertung: Ü berschrift @ 0\mod_1180968661538_33.doc @ 973 @ 2
Pos: 35 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Nichtautomatisierte Auswertung @ 4\mod_1255348011764_33.doc @ 21387 @ 3
8.2 Criteri di validità
- Il bianco substrato deve essere < 0,25 OD.
- Il controllo negativo deve fornire un risultato negativo.
- Con i test quantitativi SERION ELISA classic, il valore OD medio (dopo sottrazione
del bianco substrato!) del siero standard deve essere compreso nel range di
validità, riportato nel certificato di controllo qualità specifico per ogni lotto.
- Le oscillazioni dei valori OD del siero standard non devono superare il 20 %.
Se questi criteri non sono soddisfatti, il test non è valido e deve essere ripetuto.
IT
8.3 Calcolo SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
8.3.1 Valutazione non automatica
Per la valutazione dei test, al kit SERION ELISA classic sono allegati un certificato di
controllo qualità con curva standard e una tabella di valutazione specifici per ogni lotto, per
poter correlare i valori OD ottenuti alla corrispondente attività anticorpale. Il bianco
substrato deve essere sottratto da tutti i valori OD prima della valutazione.
Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Testauswertung: M ethode 1 (für all e T ests auß er T etanus & Di phtherie) @ 5\mod_1255349684243_33.doc @ 21530 @
s
Metodo 1: determinazione qualitativa
Per fissare gli ambiti di cut-off, moltiplicare il valore medio di OD dello standard con i
numeri riportati nel certificato di controllo qualità (vedere le formule per determinazioni
particolari),ad es.:
OD = 0,502 x MW(STD) con cut-off superiore
OD = 0,352 x MW(STD) con cut-off inferiore
Se il valore di assorbanza medio del siero standard è 0,64 OD, il range del cut-off è
compreso tra 0,225 e 0,321 OD.
italiano 15

Pos: 38 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_33.doc @ 21355 @ 3
Metodo 2:
Pos: 37 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Methode 2 (für alle T ests) @ 4\mod_1255348201981_33.doc @ 21419 @
Determinazione continua dell’attività anticorpale tramite la curva standard
Le cosiddette variazioni intersaggio (oscillazioni che possono verificarsi di giorno in giorno
e di laboratorio in laboratorio) vengono compensate moltiplicando il valore misurato nel
campione del paziente con il fattore di correzione F. Il fattore di correzione è calcolato nel
modo seguente:
F =
valore OD di riferimento (del siero standard)
valore OD attuale (del siero standard)
Questa procedura è necessaria per correlare il livello attuale del test effettuato
dall’utilizzatore alla curva standard specifica per il lotto. Innanzitutto, le deviazioni
giornaliere devono essere corrette con il calcolo del fattore di correzione F.
1. Calcolare la media dei due valori OD del siero standard e verificare che rientrino nel
range di validità prestabilito.
2. Calcolo del fattore F: il valore di riferimento viene diviso per la media di estinzione
del siero standard:
F = valore di riferimento estinzione siero STD / valore medio estinzione siero STD.
3. Tutti i valori determinati con i campioni dei pazienti vengono moltiplicati per F.
4. Le attività anticorpali espresse in UI/ml o U/ml possono essere determinate tramite
la curva standard con i valori corretti.
italiano 16

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Quantifi zierungsgrenzen @ 6\mod_1258098664276_33.doc @ 24403 @ 2
8.3.2 Valutazione automatica del test con il software SERION evaluate
Inserendo i quattro parametri e il valore di riferimento del siero standard, le attività
anticorpali vengono calcolate online dal software di valutazione SERION evaluate in base
alle analisi effettuate e misurate con SERION ELISA classic .
Se la densità ottica dello standard non è compresa nel range di validità, apparirà il
seguente messaggio (in lingua inglese).
“Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” oppure
“Standard value differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.”
In questi casi, l’analisi non è valida e deve essere ripetuta.
I parametri e il valore di riferimento devono essere modificati solo in occasione del cambio
di lotto (la tabella di valutazione riporta i parametri e i valori di riferimento). L’inserimento
corretto dei dati specifici per il lotto può essere controllato in base all’attività (in UI/ml o
U/ml) assegnata al siero standard. Il valore medio calcolato in unità deve corrispondere al
valore in unità riportato nel certificato specifico del lotto. Viene effettuata una correzione
automatica dei valori misurati. Nella versione standard, la stampa riporta quanto segue:
IT
Codice campione
Valore OD
UI/ml o U/ml
Valutazione
italiano 17

Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Grenzwertber eich ( für T este mehrerer Ig-Klassen) @ 9\mod_1276070736543_33.doc @ 32158 @ 2
Pos: 41 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Interpretation der Ergebnisse @ 0\mod_1190013774869_33.doc @ 9943 @ 2
8.4 Limiti di quantificazione
I limiti di quantificazione sono specificati nel certificato di controllo qualità del test SERION
ELISA classic. La linearità della diluizione in questo ambito è stata dimostrata in ampi studi
di validazione. Qualora un campione di un paziente fornisca un risultato superiore al limite
di quantificazione superiore, può essere analizzato a una diluizione maggiore. L’attività
anticorpale così determinata deve essere moltiplicata per il fattore di diluizione
addizionale.
8.5 Zona grigia
La zona grigia del test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM è specificata nel
certificato di controllo qualità e indica i valori del test della zona grigia. I valori dei campioni
dei pazienti inferiori a tale zona grigia indicano un risultato negativo, mentre i valori
superiori alla zona grigia sono considerati positivi. Se i risultati sono all’inerno della zona
grigia non è possibile un’interpretazione definitiva dei dati. In questi casi, ripetere il test in
parallelo con un nuovo campione prelevato dopo una o due settimane (coppia di sieri).
italiano 18

Pos: 43 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Refer enzbereiche gesunder Pr obanden @ 8\mod_1258644290978_33.doc @ 26753 @ 2
8.6 Interpretazione dei risultati
Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/West Nile Virus/West Nile Virus Interpretation der Ergebnisse @ 12\mod_1366959586560_33.doc @ 56095 @
I risultati delle analisi sierologiche devono essere interpretati facendo riferimento
all'anamnesi del paziente e nel contesto dei sintomi clinici o dei risultati delle altre analisi di
laboratorio, se disponibili.
I risultati positivi ottenuti con SERION ELISA classic West Nile Virus IgM e IgG indicano la
presenza di anticorpi diretti contro il virus del Nilo occidentale. Un risultato positivo al test
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM, accompagnato da un risultato negativo con il
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG, è indicativo di una malattia in fase acuta.
Poiché gli anticorpi IgM possono persistere per settimane o mesi, i risultati positivi ottenuti
con SERION ELISA classic West Nile Virus IgM e IgG depongono per un’infezione acuta o
recente. I risultati positivi al solo test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG sono
indicativi di un’infezione pregressa. La sieroconversione, determinata tramite l’analisi di
coppie di campioni di siero prelevati in un periodo di due settimane, è un chiaro indice di
infezione acuta.
IT
L’assenza di anticorpi, e quindi un risultato negativo al test SERION ELISA classic West
Nile Virus, non esclude un’infezione acuta. Qualora si sospetti un’infezione da virus del
Nilo occidentale sulla base dell’anamnesi, deve essere analizzato un secondo campione di
siero prelevato entro due settimane. In alternativa, si consiglia l’analisi del campione in
questione con un metodo alternativo (ad es. PCR).
I risultati compresi nella zona grigia non sono interpretabili. In questi casi si consiglia
l’analisi di campioni successivi prelevati entro due settimane o l’utilizzo di un metodo
alternativo (ad es. PCR).
Il valore diagnostico delle possibili costellazioni di anticorpi è riportato nella tabella
seguente.
Schema interpretativo di base
IgM IgG Valutazione
- -
Nessuna evidenza di infezione; in caso di sospetto di infezione
acuta: analisi di un campione successivo dopo una o due
settimane
+ -/+ Evidenza di infezione in fase precoce
+ + Evidenza di infezione acuta, recente o pregressa
- + Evidenza di infezione pregressa
Gli anticorpi diretti contro Flavivirus come il virus TBE, il virus dell’encefalite giapponese, il
virus Dengue o il virus della febbre gialla possono dare origine a risultati positivi per via
dell’ampia omologia nella famiglia Flaviviridae.
italiano 19

Pos: 45 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Leistungsmer kmale @ 0\mod_1184676089844_33.doc @ 2106 @ 1
Pos: 46 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift: Sensiti vität und Spezi fität @ 0\mod_1190013251494_33.doc @ 9928 @ 2
Pos: 47 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/West Nile Virus/West Nile Virus Sensiti vität und Spezifität @ 12\mod_1366960055337_33.doc @ 56130 @
Pos: 48 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Präzisi on @ 0\mod_1184676568397_33.doc @ 2121 @ 2
8.7 Valori di riferimento negli individui sani
Pos: 44 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/West Nile Virus/West Nile Virus Refenrenzber eiche g esunder Probanden @ 12\mod_1366959813962_33.doc @ 56112 @
L’analisi di sieri di donatori di sangue scelti a caso, provenienti dalla Germania
meridionale, con i test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG e IgM ha fornito i
seguenti risultati. Su 105 sieri analizzati con il test SERION ELISA classic West Nile Virus
IgG, 93 campioni (88,6 %) sono risultati negativi, tre sieri (2,9 %) sono risultati positivi e
nove sieri (8,6 %) sono stati compresi nella zona grigia. Con il test SERION ELISA classic
West Nile Virus IgM, 103 campioni di siero su 105 (98,1 %) sono risultati negativi, nessun
campione è risultato positivo e due sieri (1,9 %) sono stati compresi nella zona grigia.
9 CARATTERISTICHE DI PRESTAZIONE
9.1 Sensibilità e specificità
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
Per determinare la sensibilità del test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG sono
stati analizzati 30 campioni di pazienti con sospetta infezione da virus del Nilo occidentale,
con i quali sono stati ottenuti risultati positivi con due immunodosaggi disponibili in
commercio. Di questi 30 campioni, 25 sono risultati positivi al test SERION ELISA classic
West Nile Virus IgG, tre campioni sono stati compresi nella zona grigia e due sono risultati
negativi.
La specificità del test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG è stata determinata
analizzando 69 sieri di donatori di sangue sani, con i quali sono stati ottenuti risultati
negativi con due immunodosaggi disponibili in commercio. Di questi 69 campioni, 62 sono
risultati negativi anche con il test SERION ELISA classic West Nile Virus IgG, cinque sono
stati compresi nella zona grigia e due campioni sono risultati positivi.
Sensibilità
Specificità
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG >92.6 % >96.9 %
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
I parametri di prestazione del test SERION ELISA classic West Nile Virus IgM sono stati
determinati analizzando 103 campioni di siero di donatori di sangue sani e 30 sieri di
pazienti con sospetta infezione da virus del Nilo occidentale. I risultati concordanti ottenuti
con due immunodosaggi disponibili in commercio sono stati utilizzati come riferimento. Su
30 campioni positivi, 28 sono risultati positivi anche con il test SERION ELISA classic
West Nile Virus IgM e due campioni sono stati compresi nella zona grigia. Inoltre, con il
test SERION ELISA classic West Nile Virus IgM, 101 su 103 campioni di siero di donatori
di sangue sono risultati negativi e due sieri sono stati compresi nella zona grigia.
Caratteristiche di prestazione Sensibilità Specificità
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM >99 % >99 %
I sieri con risultati compresi nella zona grigia non sono stati inclusi nel calcolo della
sensibilità e della specificità.
italiano 20

Pos: 50 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_33.doc @ 21193 @ 122
9.2 Riproducibilità
Pos: 49 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/West Nile Virus/West Nile Virus Pr äzision @ 12\mod_1366960347929_33.doc @ 56147 @
La riproducibilità intrasaggio è stata determinata analizzando per 20 volte in una sessione
di analisi sieri con reattività differente. La riproducibilità intersaggio è stata determinata
analizzando sieri con reattività differente in 10 sessioni di analisi indipendenti.
Deviazione standard
Coefficiente di variazione (CV %) = x 100
Valore medio
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG:
IT
Campione
Valore medio
(OD)
Intrasaggio
(CV %)
Valore medio
(OD)
Intersaggio
(CV %)
Siero 1 0,396 3,0 0,413 8,0
Siero 2 0,611 2,2 0,626 7,6
Siero 3 1,259 6,2 1,355 3,6
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM:
Campione
Valore medio Intrasaggio Valore medio Intersaggio
(OD) (CV %) (OD) (CV %)
Siero 1 0,532 3,7 0,434 14,2
Siero 2 1,035 5,0 0,888 6,0
Siero 3 1,542 2,1 1,394 3,6
italiano 21

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Liter atur/Kapitelüberschrift: Liter atur @ 0\mod_1190013903728_33.doc @ 9959 @ 1
10 MISURE DI SICUREZZA
10.1 Avvertenze
Il SERION ELISA classic deve essere utilizzato da personale qualificato che abbia
familiarità con la buona pratica di laboratorio.
Maneggiare con attenzione tutti i reagenti del kit e i campioni di origine umana, secondo le
regole della buona pratica di laboratorio.
- Questo kit contiene emoderivati di origine umana. Benché tutti i sieri di controllo e
cut-off siano risultati negativi per gli anticorpi anti-HIV, per HbsAg (antigene di
superficie del virus dell’epatite B) e per gli anticorpi anti-HCV, devono essere
considerati potenzialmente infetti.
- Non pipettare con la bocca.
- Non fumare, mangiare o bere nelle aree dove vengono maneggiati i campioni o i
reagenti del kit.
- Indossare guanti monouso, camici da laboratorio e occhiali di protezione quando si
lavora con i reagenti del kit o con i campioni. Al termine, lavarsi accuratamente le
mani.
- Decontaminare i campioni dei pazienti e gli altri materiali potenzialmente infetti dopo
l’esecuzione del test.
- Conservare i reagenti in luogo sicuro e inaccessibile alle persone non autorizzate,
ad es. ai bambini.
- Soluzione di arresto: corrosivo (C); provoca ustioni (R34)
Utilizzare occhiali di protezione, guanti e camici da laboratorio per la manipolazione!
10.2 Smaltimento
Rispettare le disposizioni di legge vigenti!
italiano 22

11 BIBLIOGRAFIA
Pos: 52 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Literatur /West Nile Virus Li ter atur @ 12\mod_1366961104707_0.doc @ 56181 @
[1] Beasley DWC., Holbrook MR., Travassos da Rosa A., Coffey L., Carrara AS.,
Philippi-Falkenstein K., Bohm Jr RP., Ratterree MS. Lillibridge KM., Ludwig GV.,
Estrada-Franco J., Weaver SC., Tesh RB., Shope RE., Barrett ADT. Use of a
Recombinant Envelope Protein Subunit Antigen for Specific Serological Diagnosis
of West Nile Virus Infection Journal of Clinical Microbiology; 42 2759-2765; 2004
[2] Campell GL., Marfin AA., Lanciotti RS., Gubler DJ. West Nile Virus Lancet Infect.
Dis.; 2 519-529; 2002
[3] Chávez JH., Silva JR., Amarilla AA., Figueiredo LTM. Domain III peptides from
flavivirus envelope protein are useful antigens for serologic diagnosis and targets
for immunization Biologicals; 38 613-618; 2010
[4] Dauphin G. & Zientara S. West Nile Virus: Recent trends in diagnosis and vaccine
development Vaccine; 25 5563-5576; 2007
IT
[5] Diamond MS., Pierson TC., Fremont DH. The Structural Immunology of Antibody
Protection against West Nile Virus Immunol Rev.; 225 212-225; 2008
[6] Kemmerly SA. Diagnosis and Treatment of West Nile Infections The Ochsner
Journal; 5 16-17; 2003
[7] Marr J. & Calisher C. Alexander the Great and West Nile Virus Encephalitis Emer.
Infect. Diseases; 9 1599-1603; 2003
[8] Monini M., Falcone E., Busani L., Romi R., Ruggeri FM. West Nile Virus:
Characteristics of an African Virus Adapting to the Third Millennium World The
Open Virology Journal; 4 42-51; 2010
[9] Niedrig M., Sonnenberg K., Steinhagen K., Paweska JT. Comparison of ELISA and
immunoassays for measurement of IgG and IgM antibody to West Nile Virus in
human sera against virus neutralisation Journal of Virological Methods; 139 103-
105; 2007
[10] Oliphant T., Engle M., Nybakken GE., Doane C., Johnson S., Huang L., Gorlatov S.,
MehlhopE., Marri A., Chung KM., Ebel GD., Kramer LD., Fermont DH., Diamond
MS. Development of a Humanized monoclonal Antibody with Therapeutic Potential
against West Nile Virus Nat. Med.; 11 522-530; 2005
[11] Oliphant T., Nybakken GE., Engle M., Xu Q., Nelson CA., Sukupolvi-Petty S., Marri
A., Lachmi BE., Olshevsky U., Fremont DH., Pierson TC., Diamond MS. Antibody
Recognition and Neutralization Determinants on Domains I and II of West Nile Virus
Envelope Protein Journal of Virology; 80 12149-12159; 2006
[12] Rossi SL., Ross TM., Evans JD. West Nile Virus Clin Lab Med; 30 47-65; 2010
[13] Zhang W., Wu J., Li Y., Li F., Njoo H. Rapid and Accurate in Vitro Assays for
Detection of West Nile Virus in Blood and Tissues Transfusion Medicine Reviews;
23 146-154; 2009
italiano 23

SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
ОГЛАВЛЕНИЕ
1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
2 ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
3 ПРИНЦИП РАБОТЫ SERION ELISA classic
4 СОСТАВ НАБОРА
5 ДОПОЛНИТЕЛЬНО НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ
6 ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
7 ПРОВЕДЕНИЕ ТЕСТА SERION ELISA classic
7.1 Общие указания
7.2 Подготовка и хранение проб
7.3 Приготовление реагентов
7.4 Схема проведения анализа
7.5 Проведение анализа вручную
7.6 Проведение теста в автоматическом режиме
7.7 Положительный контроль / контроль достоверности
RU
8 ОБРАБОТКА ДАННЫХ ТЕСТА
8.1 Количественное определение одной точки по методу 4PL
8.2 Критерии валидности
8.3 Обработка данных SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
8.4 Диапазон количественных измерений
8.5 Области пограничных значений
8.6 Интерпретация результатов
8.7 Референсный диапазон значений, полученный для здоровой популяции людей
9 ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ЧЕРТЫ
9.1 Чувствительность и специфичность
9.2 Воспроизводимость
10 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ
10.1 Предостережения и меры предосторожности
10.2 Утилизация
11 ЛИТЕРАТУРА
Данная версия № V: V 1.13/04-1
предыдущая версия: --

Pos: 3 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift " Anwendungsber eich" @ 0\mod_1177351044007_78.doc @ 182 @ 1
Pos: 5 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 0\mod_1177351537598_78.doc @ 233 @ 1
Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/Allgemei ne T exte ELISA cl assic/Einl eitung " Enzymimmunoassay" @ 4\mod_1255336385816_78.doc @ 21177 @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
Иммуноферментный набор для определения человеческих
антител для диагностики in vitro
Dokument/Bestellnummern/West 12\mod_1366958469615_78.doc Pos: 2 /Arbeitsanleitungen ELISA @ Nile classic/Gültig 56010 Virus @ Bestellnummern für nur ein @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG № для заказа: ESR141G
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM № для заказа: ESR141M
1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Pos: 4 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Anwendungsber eich/West Nile Vir us Anwendungsbereich @ 12\mod_1366957860138_78.doc @ 55976 @
Иммуноферментные тест-наборы SERION ELISA classic West Nile Virus IgG и IgM
предназначены для качественного и количественного выявления антител человека в
сыворотке или плазме к вирусу Западно-нильской лихорадки. Тест-набор SERION
ELISA classic West Nile Virus IgM служит для определения свежей инфекции. Тестнабор
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG дает возможность подтверждения
контакта с возбудителем, определения иммунного статуса, а также поддержки
эпидемиологических исследований.
2 ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für nur ein Dokument/Di agnostische Bedeutung/West Nile Virus Diagnostische Bedeutung @ 12\mod_1366958140940_78.doc @ 55993 @
Западно-нильский вирус, наряду с вирусом денге, вирусом желтой лихорадки и
вирусом весенне-летнего энцефалита, относится к патогенным для человека
вирусам семейства флавивирусов. Резервуарами возбудителя арбовируса
(arthropode borne virus) являются птицы, такие как вороны и воробьи. Западнонильский
вирус может передаваться человеку через укусы комаров родов Culex,
Aedes и Ochlerotatus.
Геном РНК Западно-нильского вируса покрыт сферическим капсидом с
икосаэдрической симметрией. Капсид покрыт липидной мембраной. Особенно
энвелоп протеин Е на поверхности вируса вызывает сильное иммунногенное
действие.
Западно-нильский вирус был открыт в 1937 году в западно-нильском районе
Уганды. Инфекции, вызванные западно-нильским вирусом, известны уже давно на
большей территории Африки, в Восточной Европе, а также в Азии. С середины
1990-х годов эпидемии все чаще возникают в Европе, Австралии и в Северной
Америке.
Инкубационный период составляет от трёх до 14 суток. Инфекции Западнонильского
вируса протекают большей частью асимптомно, или с симптомами,
похожими на симптомы гриппа, такими как температура, головная боль, мышечная
боль, боль в суставах, а также желудочно-кишечные симптомы (западно-нильская
лихорадка). Вирус в сотоянии проходить гемато-энцефалический барьер, и может в
редких случаях вызывать энцефалит, менингит или вялый паралич (AFP, параличи).
С распространением вируса в Европе, Австралии и Северной Америке, нарастает
число эпидемий с тяжелым протеканием заболевания. Риск неврологического
протекания заболевания возрастает в зависимости от возраста пациента. Инфекция
russian 2

Pos: 7 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für alle D okumente/ELISA cl assic/T estprinzip/Testpri nzip ELISA classic @ 4\mod_1255342796551_78.doc @ 21220 @ 1
может приводить, особенно если затронута ЦНС, к тяжелой инвалидности, или, у
пожилых пациентов и людей со слабой иммунной системой, к смерти.
Для лабораторно-диагностического подтверждения инфекции Западно-нильского
вируса рекомендуется серологическое выявление антител IgM. Антитела IgM
возникают в конце первой недели после появления симптомов и образуются у 90%
всех инфицированных персон. Антитела IgM можно обнаружить в промежуток
времени от нескольких недель, до нескольких месяцев. Антитела IgG возникают
самое раннее через восемь дней после появления симптомов и персистируют спустя
месяцы или всю жизнь.
3 ПРИНЦИП РАБОТЫ SERION ELISA classic
ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) - это иммунологический метод, широко
используемый в инфекционной серологии для выявления антигенов и антител.
Реакция основывается на специфическом взаимодействии соотвествующих друг
другу антител и антигенов.
Стрипы микротитровального планшета SERION ELISA classic покрыты
специфическими антигенами диагностируемого возбудителя инфекции. Если в
сыворотке пациента присутствуют антитела к возбудителю, то они связываются с
антигенами стрипов. Для детекции образовавшихся таким образом иммунных
комплексов, используются вторичные антитела, меченные щелочной фосфатазой.
Фермент катализирует реакцию, в результате которой бесцветный субстрат
нитрофенилфосфат-р преобразуется в окрашенный продукт нитрофенол-р.
Интенсивность окраски продукта реакции пропорциональна концентрации антител в
пробе и измеряется фотометрическим методом.
RU
Pos: 8 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für mehrere Dokumente/Inhalt und
Zusammensetzung/Inhalt und Zusammensetzung (alle außer Bor,EBV,Hanta,Parvo,
Coxiella) @ 4\mod_1255342923549_78.doc @ 21236 @ 1
russian 3

Pos: 9 /Arbeitsanl eitung en ELISA classi c/Gültig für mehr ere D okumente/Z usätzlich benötigte Materiali en/Z200 Z usätzlich benötigte M aterialien ( für T este mi t IgM-Nachweis) @ 9\mod_1316422545600_78.doc @ 36502 @ 1
4 СОСТАВ НАБОРА
Компоненты набора
8-луночные стрипы; лунки с иммобилизованными антигенами (всего 12
стрипов по 8 лунок) MTP ,
1 рамка держатель
Напыленный материал деактивирован
Стандартная сыворотка (готовая к использованию) STD
Человеческая сыворотка в фосфатном буфере с протеином; отрицательная в
отношении антител к HIV, антигенов HBs -Ag (поверхностных антигенов вируса
гепатита B) и антител к HCV; консервант: < 0,1 % азид натрия
Краситель: Amaranth O
Отрицательная контрольная сыворотка (готовая к использованию) NEG
Человеческая сыворотка в фосфатном буфере с протеином; отрицательная в
отношении антител к HIV, антигенов HBs –Ag (поверхностных антигенов вируса
гепатита B) и антител к HCV; консервант: < 0,1 % азид натрия
Краситель: Lissamin-зеленый V
Конъюгаты к человеческим IgG, IgA, IgM (готовые к использованию) APC
Поликлональные антитела к человеческим IgG, IgA, IgM, конъюгированные со
щелочной фосфатазой, стабилизированные протеиновым стабилизирующим
раствором
Консервант: 0,01 % метилизотиазолон
0,01 % бромнитродиоксан
Концентрат раствора для промывания (доводится до 1000 мл) WASH
Раствор хлорида натрия с Tween 20, 30 mM Tris/HCl, pH 7,4
Консервант: < 0,1 % азид натрия
Буфер для разведения DILB
Фосфатный буфер с протеином и Tween 20;
Консервант: < 0,1 % азид натрия
Краситель: 0,01 г/л бромфеноловой голубой
Стоп-реагент STOP
1,2 Н гидроксид натрия
Субстрат (готовый к употреблению) pNPP
паранитрофенилфосфат
Консервант: < 0,1 % азид натрия
(Возможно лёгкое жёлтое окрашивание неоткрытого субстрата, не влияющее на
качество!)
Сертификат контроля качества со стандартной кривой и таблицей значений
INFO
(количественное выражение антител в мЕд/мл или Ед/мл)
Колич./
объём
12
2 х 2 мл
2 мл
13 мл
33,3 мл
2 х 50 мл
15 мл
13 мл
2 стр.
russian 4

Pos: 10 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Lag erung und Hal tbar kei t/Lager ung und Haltbar keit @ 4\mod_1255343176800_78.doc @ 21252 @ 1
5 ДОПОЛНИТЕЛЬНО НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ
- Обычное лабораторное оборудование
- Для определения IgM: SERION Rf-Absorbent (кат.номер Z200 (20 ml))
- Фотометр для микротитровальных планшетов со светофильтром на 405 нм и с
референтным сфетофильтром на 620 - 690 нм (например, 650 нм)
- Инкубатор 37°C
- Влажная камера
- Дистиллированная вода
- Зажимы ( № для заказа VT120)
RU
russian 5

6 ХРАНЕНИЕ И СРОК ГОДНОСТИ
Реактив Хранение Срок годности
8-луночные стрипы
микротитровального
планшета (покрытые
антигеном)
Контрольные/
стандартные
сыворотки
Конъюгат
в закрытом виде
после вскрытия хранить в закрытой алюминиевой
упаковке с влагопоглотителем при 2-8 °C
Неиспользованные стрипы хранить в сухих условиях
в специальном пакете из алюминиевой пленки,
герметично закрытыми.
после вскрытия упаковки при 2-8°C
готовый к использованию раствор при 2-8°C
Следует избегать контаминации, напр.,
использовать стерильные наконечники пипеток.
До истечения срока
годности
Минимальный срок
годности 4 недели
До истечения срока
годности;
24 месяца с даты
выпуска
До истечения срока
годности;
28 месяцев с даты
выпуска
Буфер для разведения В закрытом виде
после вскрытия упаковки при 2-8 °C
До истечения срока
годности;
36 месяцев с даты
выпуска
24 месяца
Помутневшие растворы не использовать.
Раствор для промывки Концентрат после вскрытия упаковки при 2 – 8 °C
Готовый раствор при 2 – 8 °C
Готовый раствор при комнатной температуре
До истечения срока
годности;
2 недели;
1 неделя
Субстрат
Регулярно чистить ёмкость для готового раствора!
Помутневшие растворы не использовать.
Готовый к использованию раствор при 2 – 8 °C, в
защищеном от света месте.
Следует избегать контаминации, напр.,
использовать стерильные наконечники пипеток.
При наличие интенсивной жёлтой окраски
(экстинкция против дистиллированной
воды > 0,25 ОE) не использовать
До истечения срока
годности;
36 месяцев с даты
выпуска
Стоп-раствор После вскрытия при комнатной температуре До истечения срока
годности
Pos: 11 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA
classic/Testdurchführung/Überschrift: Durchführung @ 0\mod_1184679699953_78.doc @
2485 @ 1
russian 6

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Allgemeine Hi nweise ELISA cl assic @ 4\mod_1255343318159_78.doc @ 21268 @ 2
7 ПРОВЕДЕНИЕ ТЕСТА SERION ELISA classic
7.1 Общие указания
При использовании набора SERION ELISA classic необходимо работать
исключительно с реагентами SERION ELISA classic, и не заменять их реагентами
других производителей. Стандартные и контрольные сыворотки, в зависимости от
лота адаптированы к конкретному набору и не могут использоваться в наборах
других лотов. Буфер для разведения, буфер для промывывания, субстрат и стопреагент
могут использоваться во всех тестах SERION ELISA classic независимо от
лота и наборов.
Для каждого класса иммунглобулина имеются три разных концентрации конъюгата:
НИЗКАЯ, СРЕДНЯЯ И ВЫСОКАЯ. Классификацию конъюгата можно распознать на
этикетках по следующим обозначениям:
Напр. IgG + IgG-конъюгат низкой концентрации
IgG ++ IgG-конъюгат средней концентрации
IgG +++ IgG-конъюгат высокой концентрации
RU
В некоторых тестах используют специальный конъюгат другого лота, не
промаркированный символом "+". Специальный конъюгат нельзя заменять другими
конъюгатами.
Пожалуйста, всегда обращайте внимание на надписи на этикетках!
При правильном хранении все компоненты теста SERION ELISA classic в закрытом
виде можно использовать до истечения срока годности (см. указания на этикетке).
Не следует использовать реагенты, срок годности которых истёк.
Неправильное разведение реагентов может привести к понижению
чувствительности.
Реагенты при хранении и использовании необходимо защищать от прямых лучей
солнца. После использования плотно закрыть упаковку, во избежание высыхания и
бактериального загрязнения.
Герметично закрытый пакет с микротитровальным планшетом разрезать только по
намеченному месту. При повреждении пакета из алюминиевой пленки использовать
планшет не рекомендуется.
При аликвотировании реактивов следует соблюдать правила стерильности для
предотвращения микробной контаминации. При раскапывании конъюгата не следует
касаться наконечником пипетки лунок во избежание ложноположительных
результатов. Необходимо следить за тем, чтобы флаконы закрывались своими
крышками.
russian 7

Pos: 13 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/Probenvor ber. und Lager ung (für ALLE Err eger auß er Borreli a, CM V, FSM E, H SV,Masern,Mumps,R öteln,VZ V) @ 8\mod_1263998040982_78.doc @ 28442 @ 2
Pos: 14 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Kapi tel überschrift Probenverdünnung @ 0\mod_1184679414434_78.doc @ 2345 @ 3
Воспроизводимость результатов зависит, кроме прочего, от тщательного
перемешивания реагентов. Контрольные сыворотки и разведенные сыворотки
пацентов необходимо тщательно перемешать перед использованием (например, с
помощью вортекса).
При постановке анализа необходимо следить за аккуратным раскапыванием лунок и
соблюдать указанные в инструкции время и температуру инкубации. Значительные
различия во времени между заполнением первой и последней лунок при внесении
проб пациентов, контрольных сывороток, конъюгата и субстрата приводят к
различиям инкубационного периода, которые могут значительно повлиять на
точность и воспроизводимость измеренных значений.
Лишь строгое соблюдение рабочей инструкции обеспечивает правильность
результатов.
Результаты теста SERION ELISA classic можно учитывать лишь в том случае, если
соблюдены все критерии валидности, приведенные в сертификате контроля
качества, прилагаемом к набору.
Правильная промывка предовтращает неспецифическое взаимодействие. Поэтому
необходимо следовать руководству по применению используемых приборов для
промывания. Важно равномерное заполнение промывающим буфером и
опорожнение лунок планшета во время промывки. Следует избегать образования
пены!
Избегать повреждения надписей микротитровальных стрипов, обозначающих
возбудителя и класс антител, чтобы не перепутать.
7.2 Подготовка и хранение проб
Липидные, гемолизированные, а также иктеричные пробы (сыворотка или плазма)
следует использовать с особым вниманием. Пробы, загрязненные бактериями,
использовать не следует. Пригодными для исследований материалами являются
пробы сыворотки или плазмы (EDTA, цитрат, гепарин), полученные стандартными
лабораторными методами. Пробы нельзя деактивировать термическим способом.
7.2.1 Разведение проб
Перед началом теста пробы (V 1 ) развести в буфере для разведения (V 2 )
Pos: 15 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Ni kle Virus T eil 1 @ 12\mod_1366959098552_78.doc @ 56027 @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
V 1 + V 2 = 1+100 по 10 мкл сыворотки пациента
на каждые 1000 мкл
разбавляющего буфера
Pos: 16 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_78.doc @ 21300 @
После каждого разведения и перед отбором пробы следует хорошо размешать
мономиксером (например, Vortex) для получения гомогенного раствора.
russian 8

Pos: 21 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenlager ung @ 4\mod_1255343526141_78.doc @ 21284 @ 3
Pos: 22 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 1 @ 4\mod_1255343795606_78.doc @ 21316 @ 233
Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Nile Virus Teil 2 Ü berschrift @ 12\mod_1366959209524_78.doc @ 56044 @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
Pos: Dokumente/Testdurchführung/Probenverdünnung: mit IgM-Nachweis) 18 /Arbeitsanleitungen @ 9\mod_1316422765852_78.doc ELISA classic/Gültig für @ Rheumafaktor-Interferenz mehrere 36519 @
(für Tests
Интерференция с ревматоидным фактором
Ревматоидные факторы – это аутоантитела, главным образом, относящиеся к
антителам класса M (IgM), связывающие иммунные комплексы IgG антител.
Присутствие неспецифических антител IgM (ревматоидных факторов) может
привести к ложноположительным результатам при определении специфических
антител IgM. Более того, существует вероятность вытеснения IgM-антител с более
слабыми связями IgG-антителами с более сильными связями. Результаты по IgM в
этом случае окажуться ложноотрицательными. По этой причине пробы для
определения IgM необходимо предварительно обработать абсорбентом
ревматоидного фактора SERION-Rheumafaktor-Absorbens (кат. номер Z200 (20
мл/100 определений)). Абсорбция ревматоидного фактора происходит путем
инкубирования пробы пациента в Rf-буфере в течение 15 минут при комнатной
температуре или в течение ночи при температуре 4° C. Данная процедура описана в
специальной инструкции по применению.
Pos: 19 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/Probenverdünnung/West Nile Virus Teil 3 @ 12\mod_1366959279193_78.doc @ 56061 @
Сначала производится разбавление абсорбента ревматоидного фактора (V 1 )
разбавляющим буфером (V 2 ) в соотношении 1+4.
RU
V 1 + V 2 = V 3 (1 + 4) по 200 мкл Rf-абсорбента
на каждые
800 мкл разбавляющего буфера
Затем пробы пациента (V 4 ) разбавляются в смеси Rf и разбавляющего буфера (V 3 ):
V 4 + V 3 = 1+100 по 10 мкл пробы пациента
на каждые
1000 мкл Rf-разбавляющего буфера
Pos: 20 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Pr obenver dünnung: Mischung der Proben @ 4\mod_1255343607624_78.doc @ 21300 @
После каждого разведения и перед отбором пробы следует хорошо размешать
мономиксером (например, Vortex) для получения гомогенного раствора.
7.2.2 Хранение проб
Пробы пациентов должны храниться не более 7 дней при температуре 2-8°C. Более
длительное хранение проб возможно при температуре ≤ -20°C. Следует избегать
повторных циклов замораживания и оттаивания. Разведенные пробы могут
храниться при 2-8°C в течение одной недели.
russian 9

Pos: 24 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Reagenzienvorberei tung, T eil 2 @ 4\mod_1255343884183_78.doc @ 21332 @ 33333
7.3 Приготовление реагентов
Перед использованием все реагенты должны быть прогреты до комнатной
температуры.
7.3.1 Стрипы планшета
Стрипы упакованы вместе с осушителем. Неиспользуемые стрипы следует
снова положить в пакет из алюминиевой фольги с осушителем, который
закрывается герметично.
7.3.2 Контрольные сыворотки / стандартные сыворотки
Контрольные и стандартные сыворотки готовы к использованию и не требуют
дальнейшего разведения. При каждой постановке анализа, независимо от
количества используемых стрипов, необходимо включать в анализ
контрольные и стандартные сыворотки. Тестирование проводить в дублях.
eis) @ 0\mod_1184741119299_78.doc @ 2882
Pos: 23 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/R eagenzienvorbereitung: Rf- Absorbens (für T este mit IgM-Nachweis) @ 0\mod_1184741119299_78.doc @ 2882 @
Контрольные сыворотки не обрабатывать Rf-абсорбентом (абсорбент
ревматоидных факторов)!
7.3.3 Конъюгат к человеческим IgA, IgG или IgM АР-конъюгат (готовый к
использованию)
Конъюгаты взаимозаменяемы в пределах одной концентрации и одного класса
иммунноглобулинов. Строго избегать бактериального заражения готового к
использованию конъюгата, используя для забора стерильные наконечники
пипетки.
7.3.4 Раствор для промывки
Концентрат раствора для промывки (V 1 ) разбавить дистиллированной водой в
соотношении 1:30 до конечного объема (V 2 ).
Пример:
Концентрат раствора для
промывки (V 1 )
Конечный объем (V 2 )
33,3 мл 1000 мл
1,0 мл 30 мл
7.3.5 Буфер для разведения проб (готовый к использованию)
7.3.6 Субстрат (готовый к использованию)
Во избежание загрязнения бактериями готового к использованию раствора
субстрата, используйте только стерильные наконечники пипеток.
7.3.7 Стоп-реагент (готовый к использованию)
Pos: 25 /Arbeitsanleitungen ELISA classic/Gültig für alle Dokumente/ELISA
classic/Testdurchführung/Testablauf/Überschrift Testablauf @
0\mod_1180955922843_78.doc @ 745 @ 2
russian 10

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testdurchführ ung/T establauf/West Nile Virus: T establauf @ 12\mod_1366959390780_78.doc @ 56078 @
Pos: 27 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Testabl auf/T establ auf @ 12\mod_1365489408139_78.doc @ 55722 @
7.4 Схема проведения анализа
SERION ELISA classic
West Nile Virus IgG / IgM
количественный
Для выявления IgM антител провести предварительную Rf-абсорбцию проб, см.
пункт 7.2.1; инкубировать 15 минут при комнатной температуре или ночь при 4°C.
Разбавление проб 1
(пробы пациентов)
1+100
Внесение разведенных проб пациентов и
готовых к использованию контрольных/стандартных сывороток в лунки планшета
(100 мкл)
ИНКУБАЦИЯ 60 мин./37°C
влажная камера
RU
ПРОМЫВКА (4 x 300 мкл DIL WASH ]) 2
Внесение раствора конъюгата APC (100 мкл)
ИНКУБАЦИЯ 30 мин./37°C
влажная камера
ПРОМЫВКА (4 x 300 мкл DIL WASH ]) 2
Внесение раствора субстрата pNPP (100 мкл)
ИНКУБАЦИЯ 30 мин./37°C
влажная камера
Внесение стоп-реагента STOP (100 мкл)
ИЗМЕРЕНИЕ ПОГЛОЩЕНИЯ при 405 нм
1 Специальный буфер для разведения для следующих наборов SERION
ELISA classic: Borrelia IgG, IgM, EBV EA IgG, Hantavirus Puumala IgG, IgM.
2 При проведении анализа вручную: после промывки хорошо вытряхнуть планшет на бумажные
салфетки.
Pos: 28 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estdurchführ ung/M anuelle Testdurchführ ung (für ALLE Erreg er auß er C oxiella) @ 5\mod_1255349441824_78.doc @ 21523 @ 2
russian 11

Pos: 29 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Automatische Testdurchführung @ 5\mod_1255350306938_78.doc @ 21555 @ 2
7.5 Проведение анализа вручную
1. Установить необходимое количество лунок в рамку держатель и составить протокол
маркировки лунок.
2. Внести по 100 мкл разведенных проб и готовых к использованию контрольных
образцов в соответствующие лунки планшета. Оставьте одну лунку пустой для
субстратного бланка, например:
IgG/IgM количественный
Лунка A1
Лунка B1
Лунка C1
Лунка D1
Субстратный бланк
Отрицательный контроль
Стандартная сыворотка
Стандартная сыворотка
Лунка E1 Пациент 1....
3. Инкубация проб 60 минут (+/- 5 мин.) при 37°C (+/-1°C) во влажной камере.
4. По истечении времени инкубации, промойте планшет (в промывателе или вручную):
- аспирируйте содержимое лунок или удалите ее из лунок вытряхиванием
- в каждую лунку внесите по 300 мкл промывочного раствора
- аспирируйте промывочный раствор или удалите его вытряхиванием
- повторите процедуру 3 раза (т.е. всего 4 раза)
- удалите остатки жидкости постукиванием планшета в перевернутом положении по
фильтровальной бумаге.
5. Добавление конъюгата
Внести по 100 мкл готового к использованию IgG/IgM конъюгата в соответствующие
лунки планшета (кроме лунок для определения субстратного бланка).
6. Инкубация конъюгата в течение 30 минут (+/-1 мин.) * при 37°C
(+/-1°C) во влажной камере.
7. По истечении времени инкубации промойте лунки (см. выше).
8. Добавление субстрата
Внести по 100 мкл готового к использованию раствора субстрата во все лунки (в т.ч. и в
лунку для субстратного бланка).
9. Инкубация субстрата в течение 30 минут (+/- 1 мин.) * при 37°C
(+/1°C) во влажной камере.
10. Остановка реакции
Внесите по100 мкл стоп-раствора во все лунки, слегка встряхните планшет.
11. Измерение поглощения
Измерить оптическую плотность в лунках при длине волны 405 нм в течении 60 минут
против бланка по субстрату. Референтная длина волны в пределах 620-690 нм
(например, 650 нм).
* Учтите, пожалуйста, что в особых условиях работы может возникнуть необходимость лабораторной
адаптации инкубационного периода.
russian 12

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estdurchführung/Positi vkontroll e / Richtigkeitskontroll e @ 8\mod_1260286311409_78.doc @ 27542 @ 2
Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: TESTAU SWER TUNG + Erreg er @ 1\mod_1197038305478_78.doc @ 11398 @ 1
7.6 Проведение теста в автоматическом режиме
Наборы SERION ELISA пригодны для применения с приборами Immunomat TM а также
DYNEX DSX ® и DS2 ® и с приборами, построенными по их типу. Автоматический
процесс аналогичен ручному анализу. Учтите, что при особых условиях работы
может возникнуть необходимость в лабораторной адаптации инкубационного
периода.
7.7 Положительный контроль / контроль достоверности
Для проведения внутрилабораторного контроля качества исследований,
проведенных с использованием наборов SERION ELISA classic, мы рекомендуем
использовать контрольные материалы SERION ELISA control. Процедура
применения контрольных материалов описана в отдельной инструкции по
использованию.
RU
russian 13

Pos: 33 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Testgültig kei tskriterien @ 4\mod_1255348317229_78.doc @ 21444 @ 2
8 ОБРАБОТКА ДАННЫХ ТЕСТА
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
Pos: 32 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Ei n-Punkt-Quantifizi erung @ 4\mod_1255348099107_78.doc @ 21412 @ 2
8.1 Количественное определение одной точки по методу 4PL
Определение концентрации антител с помощью наборов SERION ELISA classic
производится по “логистической логарифмической модели с 4 параметрами (4PL)”,
математическая функция которой описывается следующей формулой:
OD = A +
1 + e
D - A
B(C - ln Konz.)
Параметры A, B, C и D точно передают ход кривой и определяют
1. нижнюю асимптоту параметр A
2. подъем кривой параметр B
3. точку перегиба кривой параметр C
4. верхнюю асимптоту параметр D
Институт Вирион\Серион ГмбХ (Вюрцбург) (Virion\Serion GmbH (Würzburg)) для
каждого лота наборов, получает стандартную кривую в нескольких тестированиях
при соблюдении оптимальных условий. У пользователя нет необходимости в
дорогостоящем и занимающем много времени построении стандартной кривой.
Для расчета концентраций антител, к каждому набору прилагается стандартная
кривая в виде графика и таблица значений. Они привязаны к конкретному лоту
реагентов, и от лота к лоту меняются. Программное обеспечение для проведения
расчетов SERION activity, SERION evaluate, предоставляется в ответ на запрос.
Для выравнивания колебаний или смещений стандартной кривой, а также для
контроля качества, используют стандартную сыворотку. Для каждой партии
контрольной сыворотки производитель указывает референсное значение и диапазон
валидности.
russian 14

Pos: 35 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Nichtautomatisierte Auswertung @ 4\mod_1255348011764_78.doc @ 21396 @ 3
8.2 Критерии валидности
- Значение OD субстратного бланка < 0,25.
- Отрицательный контроль дает отрицательный результат
- При количественном методе SERION ELISA classic, полученное среднее
значение OD стандартной сыворотки, после вычета значения субстратного
бланка, должно быть в пределах диапазона валидности, указанного в
сертификате контроля качества данного лота.
- Отдельные значения OD стандартной сыворотки не должны расходиться более
чем на 20 % (CV

Pos: 38 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Automatische Auswer tung @ 4\mod_1255347464244_78.doc @ 21364 @ 3
Метод 2:
Pos: 37 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Testauswertung: Methode 2 (für alle T ests) @ 4\mod_1255348201981_78.doc @ 21428 @
Определение активности антител с помощью стандартной кривой
Для того чтобы компенсировать отклонения (девиацию) результатов, полученных в
разные дни, в различных лабораториях, используют корректирующий фактор F.
Полученные результаты пациентов умножают на F. Корректирующий фактор
рассчитывают по формуле:
Номинальное значение OD (стандартной сыворотки)
F =
Значение OD (стандартной сыворотки) в определенный день
Этот метод необходим для того, чтобы привести в соответствие текущее значение
теста и стандартную лотспецифическую кривую. Таким образом корректируются
суточные отклонения.
1. Из двух значений поглощения стандартной сыворотки рассчитать среднее
значение и проверить, находится ли полученное значение в допустимых
пределах.
2. Расчет коэффициента "F": Указанное номинальное значение стандарта делится
на среднее значение поглощения стандарта:
F= номинальное значение стандарта / среднее значение поглощения стандарта.
3. Все измеренные величины проб пациентов умножаются на "F".
4. При помощи стандартной кривой и откорректированных значений,
рассчитываются значения активности антител в мЕд/мл или Ед/мл.
russian 16

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Quantifi zierungsgrenzen @ 6\mod_1258098664276_78.doc @ 24412 @ 2
Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für mehrer e D okumente/T estauswertung/Grenzwertber eich ( für T este mehrerer Ig-Klassen) @ 9\mod_1276070736543_78.doc @ 32167 @ 2
Pos: 41 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Interpretation der Ergebnisse @ 0\mod_1190013774869_78.doc @ 9952 @ 2
8.3.2 Автоматическая обработка теста при помощи программы
SERION evaluate
В результате ввода четырех параметров и номинального значения стандартной
сыворотки, активность антител SERION ELISA classic рассчитывается специальной
программой для расчета SERION evaluate.
В случае, если значение выходит за рамки области действительности, программа
может выдать следующие сообщения об ошибках на английском языке:
”Standard values out of ranges in following groups: 1-24” («Стандартные значения
находятся вне диапазонов для следующих групп..») или
”Standard values differ more than 20 % in following groups: 1-24” («Стандартные
значения различаются более чем на 20 % в следующих группах..»).
В этих случаях результат теста является недействительным и его следует
повторить.
Параметры и номинальное значение необходимо менять только при изменении
партии (параметры и номинальное значение приведены в таблице значений).
Верность ввода этих специфических для каждой партии значений можно проверить
при помощи соответствующих стандартной сыворотке значений активности (в
мЕд/мл или Ед/мл). Полученное среднее значение активности антител должно
совпадать со значением, указанным в сертификате контроля качества партии.
Корректировка значений производится автоматически. На распечатке результатов
измерения появляется следующий текст:
Sample code
(Наименование пробы)
OD-value (Значение OD)
IU/ml или U/ml (мЕд/мл
или Ед/мл)
Evaluation (Подсчёт)
RU
8.4 Диапазон количественных измерений
Диапазон количественных измерений, указанный в сертификате по контролю
качества SERION ELISA classic, является диапазоном, в котором сохраняется
линейность разведений. Если значение поглощения образца выше верхней границы
диапазона измерений, сыворотку необходимо развести и измерить повторно.
Полученное значение нужно умножить на коэффициент разведения.
8.5 Области пограничных значений
Области пограничных значений SERION ELISA classic West Nile Virus IgG/IgM
указаны в сертификате контроля качества и обозначают области пограничных
результатов измерения. Полученное значение пробы пациента ниже пограничной
области характеризует отрицательный результат теста; полученное значение пробы
пациента выше пограничной области расценивается как положительный результат
теста. В случае, если результаты находятся в области пограничных значений,
нельзя с уверенностью оценить пробу пациента. В случае пограничного результата,
тест следует провести параллельно с новыми пробами (парных сывороток), взятыми
с интервалом в одну-две недели.
russian 17

8.6 Интерпретация результатов
Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/West Nile Virus/West Nile Virus Interpretation der Ergebnisse @ 12\mod_1366959586560_78.doc @ 56096 @
Серологические результаты теста следует интерпретировать с учетом анамнеза
пациента, клинической симптоматики, а также возможных дальнейших
лабораторных исследований.
Положительные результаты в тестах SERION ELISA classic West Nile Virus IgM и IgG
соотносятся с наличием антител к вирусу Западно-нильской лихорадки.
Положительный результат в тесте SERION ELISA classic West Nile Virus IgM при
отрицательном результате IgG указывает на недавнее инфицирование в стадии
острого заболевания. Поскольку антитела IgМ персистируют многие недели и
месяцы, тесты SERION ELISA classic West Nile Virus IgM и IgG при острой или уже
перенесенной инфекции могут дать положительные результаты. Изолированно
положительный результат в тесте SERION ELISA classic West Nile Virus IgG можно
интерпретировать, как перенесенную в далеком прошлом инфекцию. Сероконверсии
при параллельных исследованиях парных сывороток, забранных с интервалом в
одну-две недели, являются чётким указателем на свежую инфекцию.
Отрицательный результат в тестах SERION ELISA classic West Nile Virus IgM и IgG
Не исключает свеже приобретённую инфекцию. При обоснованном подозрении с
учетом соответствующей симптоматики и анамнеза, рекомендуется исследовать
ещё одну сыворотку, взятую с интервалом в 1-2 недели, или же исследовать
имеющуюся сыворотку другим методом (напр. PCR).
Пограничные результаты не интерпретируются. Их следует уточнить, проведя
исследование ещё одной сыворотки, взятой с интервалом в 1-2 недели, или же
исследовать имеющуюся сыворотку другим методом (напр. PCR).
В следующей таблице представлено обобщенно возникновение возможных
констелляций антител и их диагностическое значение
Основная схема интерпретаций
IgM IgG Оценка
- -
Нет указаний на инфекцию; при подозрении на свежую
инфекцию: повторный контроль через 1-2 недели.
+ -/+ Указание на раннюю стадию инфекции.
+ + Указание на свежую инфекцию.
- + Указание на перенесенную в прошлом инфекцию.
Антитела к другим флавивирусам, таким как вирус весенне-летнего энцефалита,
вирус японского энцефалита, вирус денге и вирус желтой лихорадки, из-за большой
гомологии между членами семейства флавивирусов и вызванной этим перекрестной
реактивностью, могут приводить к ложно-положительным результатам.
Pos: 43 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/T estauswertung/Kapi tel überschrift: Refer enzbereiche gesunder Pr obanden @ 8\mod_1258644290978_78.doc @ 26762 @ 2
russian 18

Pos: 45 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Leistungsmer kmale @ 0\mod_1184676089844_78.doc @ 2115 @ 1
8.7 Референсный диапазон значений, полученный для здоровой популяции
людей
Pos: 44 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Testauswertung/West Nile Virus/West Nile Virus Refenrenzber eiche g esunder Probanden @ 12\mod_1366959813962_78.doc @ 56113 @
Исследование сывороток случайных доноров из южной области Германии тестом
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG и IgM дало следующее распределение: из
105 исследованных сывороток 93 (88,6 %) были тестом SERION ELISA classic
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG определены как отрицательные, три
сыворотки (2,9 %) дали положительный результат и 9 сывороток (8,6 %) были
пограничными. В тесте SERION ELISA classic West Nile Virus IgM, 103 из 105
сывороток (98,1 %) дали отрицательный результат, две сыворотки (1,9 %) были
пограничными, ни одна сыворотка не была определена как положительная.
9 ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ЧЕРТЫ
classic/Leistungsmerkmale/Kapitelüberschrift: 0\mod_1190013251494_78.doc Pos: 46 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 9937 classic/Gültig @ 2 Sensitivität für alle Dokumente/ELISA
und Spezifität @
9.1 Чувствительность и специфичность
Pos: 47 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/West Nile Virus/West Nile Virus Sensiti vität und Spezifität @ 12\mod_1366960055337_78.doc @ 56131 @
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
Для определения чувствительности теста SERION ELISA classic West Nile Virus IgG
были протестированны 30 проб пациентов с подозрением на инфекцию Западнонильского
вируса, которые в двух иммунноферментных тестах конкурентов были
однозначно определены как положительные. 25 из 30 проб дали в тесте SERION
ELISA classic West Nile Virus IgG положительный результат, три реагировали
погранично. В двух пробах не была обнаружена активность антител.
RU
Специфичность теста SERION ELISA classic West Nile Virus IgG была определена на
69 пробах здоровых доноров из южной области Германии, которые в двух
иммунноферментных тестах конкурентов были однозначно определены как
отрицательные. Из 69 предварительно протестированных сывороток в тесте SERION
ELISA classic West Nile Virus IgG 62 сыворотки дали также отрицательный результат,
пять были пограничными и две сыворотки были положительными.
Чувствительность
Специфичность
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG 92,6 % 96,9 %
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
Определение функциональных параметров теста SERION ELISA classic West Nile
Virus IgM проводилось путем анализа 103 сывороток здоровых пациентов,
предварительно определенных как отрицательные, а также 30 проб пациентов с
подозрением на инфекцию Западно-нильского вируса, которые до этого были
проверенны в двух иммунноферментных тестах конкурентов и дали однозначно
положительные результаты. 28 из 30 сывороток, определенных предварительно как
положительные, дали в тесте SERION ELISA classic West Nile Virus IgM также
положительные результаты, две сыворотки были пограничными. 101 из 103
сывороток здоровых доноров были тестом SERION ELISA classic West Nile Virus IgM
russian 19

Pos: 50 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Allgemei ne Texte ELISA classic/Sicherheitsmaßnahmen @ 4\mod_1255337096255_78.doc @ 21202 @ 122
определены как отрицательные, в двух сыворотках была установлена пограничная
активность антител.
Чувствительность
Специфичность
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM >99 % >99 %
При расчетах чувствительности и специфичности пограничные результаты во
внимание не принимались.
Pos: 48 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Leistungsmer kmale/Kapi tel überschrift Präzisi on @ 0\mod_1184676568397_78.doc @ 2130 @ 2
9.2 Воспроизводимость
Pos: 49 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Leistungsmer kmal e/West Nile Virus/West Nile Virus Pr äzision @ 12\mod_1366960347929_78.doc @ 56148 @
Точность в пределах серии сывороток определялась многократно при
использовании сывороток с различной реактивностью (n = 20) в планшете с
антигенным покрытием. Для определения точности вне серии пробы сывороток с
различной реактивностью испытывались в 10 независимых друг от друга
приготовлениях.
Стандартное отклонение
Коэффициент изменения (VK %) = x 100
Среднее значение
SERION ELISA classic West Nile Virus IgG:
Проба
Среднее
значение
поглощения
(OD)
(VK %)
Среднее
значение
поглощения
(OD)
Внутрисериный
Межсерийный
(VK %)
Сыворотка 1 0,396 3,0 0,413 8,0
Сыворотка 2 0,611 2,2 0,626 7,6
Сыворотка 3 1,259 6,2 1,355 3,6
SERION ELISA classic West Nile Virus IgM:
Проба
Среднее
значение
поглощения
(OD)
(VK %)
Среднее
значение
поглощения
(OD)
Внутрисериный
Межсерийный
(VK %)
Сыворотка 1 0,532 3,7 0,434 14,2
Сыворотка 2 1,035 5,0 0,888 6,0
Сыворотка 3 1,542 2,1 1,394 3,6
russian 20

Pos: 51 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für all e D okumente/ELISA classic/Liter atur/Kapitelüberschrift: Liter atur @ 0\mod_1190013903728_78.doc @ 9968 @ 1
10 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ
10.1 Предостережения и меры предосторожности
Тест SERION ELISA classic предназначен только для использования специалистами,
безупречно владеющими необходимыми навыками.
При обращении с реагентами теста и пробами пациентов необходимо выполнение
общепринятых лабораторных правил:
- Упаковка теста содержит человеческие сыворотки. Хотя все контрольные
сыворотки отрицательны на anti-HIV-Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus-surface Antigen)
и anti-HCV-Ab их следует рассматривать, как потенциально инфекционно
опасные материалы.
- Не набирайте растворы в пипетку при помощи рта.
- В помещениях, где ведется работа с реагентами набора и пробами пациентов,
не разрешается принимать пищу, пить или курить.
RU
- При обращении с реагентами теста и пробами пациентов следует избегать
прямого контакта, поэтому следует использвать лабораторный халат,
одноразовые перчатки и защитные очки. Руки по окончании работы следует
тщательно вымыть.
- Пробы пациентов и все потенциально инфекционные материалы после
проведения теста следует подвергнуть обеззараживанию.
- Реагенты необходимо хранить в месте, недоступном для детей.
- Стоп-раствор:
Едкий (C); R34: вызывает химические ожоги,
необходимо использовать защитные очки, перчатки и лабораторный халат
10.2 Утилизация
Пожалуйста, выполняйте предписания, предусмотренные действующим
законодательством!
russian 21

11 ЛИТЕРАТУРА
Pos: 52 /Ar bei tsanl eitungen ELISA cl assic/Gültig für nur ein D okument/Literatur /West Nile Virus Li ter atur @ 12\mod_1366961104707_0.doc @ 56182 @
[1] Beasley DWC., Holbrook MR., Travassos da Rosa A., Coffey L., Carrara AS.,
Philippi-Falkenstein K., Bohm Jr RP., Ratterree MS. Lillibridge KM., Ludwig GV.,
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Recombinant Envelope Protein Subunit Antigen for Specific Serological Diagnosis
of West Nile Virus Infection Journal of Clinical Microbiology; 42 2759-2765; 2004
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flavivirus envelope protein are useful antigens for serologic diagnosis and targets
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Characteristics of an African Virus Adapting to the Third Millennium World The
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immunoassays for measurement of IgG and IgM antibody to West Nile Virus in
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against West Nile Virus Nat. Med.; 11 522-530; 2005
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Envelope Protein Journal of Virology; 80 12149-12159; 2006
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Detection of West Nile Virus in Blood and Tissues Transfusion Medicine Reviews;
23 146-154; 2009
russian 22

SERION ELISA classic (V 13/04-1)
Symbole auf den Etiketten/ symbols on labels/ symboles et étiquettes/ simboli sulle etichette/ символы на
этикетках/símbolos sobre las etiquetas/ σύµβολα στις ετικέτες/ símbolos nos rótulos / Symboly na štítcích /
symboler på etiketter/ symboler på etiketterna/ Symbole na etykietach/ symboly na označení/ Simboli na
oznakah/ symbol på etiketter
Hersteller/ Manufacturer/ Fabricant/ Produttore/Производитель/ Fabricante/ Κατασκευαστής/
Fabricante/ Výrobce/ Fremstiller/ Tillverkare/ Producent/ Výrobca/ Izdelovalec/ Produsent
2°C
96
LOT
REF
8°C
Ausreichend für 96 Tests/ sufficient for 96 tests/ suffisant pour 96 tests/ sufficiente per 96 test/
достаточно для 96 тестов / suficiente para 96 pruebas/ επαρεκεί για 96 δοκιµασίες/ suficiente para
96 ensaios/ stačí na 96 testů/ nok til 96 test/ tillräckligt för 96 tester/ Wystarcza na 96 testów/
postačuje na 96 testov/ Zadostuje za 96 testov/ Tilstrekkelig til 96 tester
Charge/ lot/ lot / lotto/ lote/ παρτίδα/ lote/ šarže/ lot/ lot/ seria/ šarža/ serija/ lot /lot
Referenz oder Bestellnummer/ reference or order number/ numéro de référence ou de commande/
numero di riferimento o ordinazione/ ссылка или номер для заказа / referencia o número de pedido/
Αριθµός αναφοράς ή παραγγελίας/ referência ou número para encomenda/ reference nebo číslo
objednávky/ reference eller bestillingsnummer/ referens eller beställningsnummer/ Numer
referencyjny lub numer zamówienia/ referenčné číslo alebo číslo objednávky/ referenčna ali kataloška
številka/ Referanse eller ordrenummer
Lagern zwischen 2 und 8 Grad Celsius/ store between 2 and 8 degree celsius/ entre 2 et 8 degré
celsius/ conservare a temperatura compresa tra 2 e 8 gradi centigradi/ хранить при температуре от
2 до 8 градусов цельсия / conservar entre 2 y 8 grados celsius/ Φύλαξη µεταξύ 2 και 8 βαθµούς
Κελσίου/ Armazenar entre 2º e 8º Celsius/ uchovávejte při teplotě 2 až 8 °C/ opbevares mellem 2 og 8
grader celsius/ förvara vid 2 till 8 grader Celsius/ Przechowywać w temp. pomiędzy 2 a 8 stopni
Celsjusza/ skladovať pri teplote 2 až 8 stupňov Celzia/ Shranjujte pri temperaturi od 2 do 8 C/
Oppbevares mellom 2 og 8 grader Celsiu
CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79 EG/ CE marking according to IVD guideline
98/79 EC/ Étiquetage CE selon les directives DIV/ marcatura CE in conformità alla direttiva IVD 98/79
EC/ маркировка СЕ согласно директивам IVD 98/79 /marca CE según la directiva IVD 98/79 CE/
Σήµανση CE σύµφωνα µε την οδηγία IVD 98/79 EΕ/ Marcação CE de acordo com a Directiva 98/79/
značení CE podle směrnice IVD 98/79/ES/ CE-mærkning iht. IVD-retningslinje 98/79/EF/ CEmärkning
enligt riktlinjerna för IVD i direktiv 98/79/EC/ Oznakowanie CE zgodne z wytycznymi dot.
diagnostyki in vitro 98/79 EC/ označenie CE podľa smernice IVD 98/79/ES/ oznaka CE, skladna s
smernico IVD 98/79/ES/ CE-merking i henhold til IVD-retningslinjer 98/79/EØF
0197 CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79 EG gemäß Anhang II, Liste B/ CE marking
according to IVD guideline 98/79 EC according to annex II, list B/ Étiquetage CE selon les directives
DIV 98/79 CE selon l'annexe II, liste B/ marcatura CE in conformità alla direttiva IVD 98/79 EC
secondo l’allegato II, elenco B/ маркировка СЕ согласно директивам IVD 98/79, приложение II,
список В / marca CE según la directiva IVD 98/79 CE de acuerdo con el anexo II, lista B/ Σήµανση
CE σύµφωνα µε την οδηγία IVD 98/79 EΕ, σύµφωνα µε το παράρτηµα ΙΙ, κατάλογο Β/ Marcação CE
de acordo com a Directiva 98/79/ CE relativo aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro,
segundo a lista B do anexo II/ značení CE podle směrnice IVD 98/79/ ES podle příloh II, seznamu B/
CE-mærkning iht. IVD-retningslinje 98/79 /EF iflg. anneks II, liste B/ CE-märkning enligt riktlinjerna för
IVD i direktiv 98/79/EC, bilaga II, lista B/ Oznakowanie CE zgodne z wytycznymi dot. diagnostyki in
vitro 98/79 EC, zgodnie z aneksem II, lista B/ označenie CE podľa smernice IVD 98/79 ES v znení
dodatku II, zoznam B/ oznaka CE, skladna s smernico IVD 98/79/ES in seznamom B v Dodatku II/
CE-merking i henhold til IVD-retningslinjer 98/79/EØF, tillegg II, liste B
Verfallsdatum/ expiry date/ date d'expiration/ data di scadenza/ срок годности до /fecha de
caducidad/ ηµεροµηνία λήξης/ data de validade/ datum exspirace/ udløbsdato/ förfallodatum/ data
upływu ważności/ dátum exspirácie/ datum izteka roka uporabnosti/ utløpsdatp

MTP
AG
AK
CAG
STD
POS
C/O
NEG
APC
Mikrotiterplatte (brechbare Streifen)/ microtiter plate (breakable strips)/ plaque de microtitration
(bandelettes détachables)/ piastra per microtitolazione (strisce separabili)/ микротитровальная
панель (отрывные стрипы) /placa de microtitulación (tiras rompibles)/ Πλάκα µικροτιτλοποίησης
(αποσπωµενες ταινίες)/ placa de microtitulação (tiras quebráveis)/ mikrotitrační deska (rozlomitelné
proužky)/ mikrotiterplade (afbrækkelige strimler)/ mikrotiterplatta (brytbara strips)/ Płytka
mikrotitracyjna (paski do odrywania)/ mikrotitračná platnička (rozlomiteľné prúžky)/ vsebnik za
mikrotitriranje (z razdelki, ki jih je mogoče odlomiti)/ Mikrotiterplate (avbrytbare strips)
Antigen/ antigen/ Antigène/ antigene/ антиген /antígeno/ αντιγόνο/ antigénio/ antigen/ antigen/
antigen/ Antygen/ antigén/ antigen/ Antigen
Antikörper/ antibodies/ Anticorps/ anticorpi/ антитела / anticuerpos/ αντίσωµα/ anticorpos/ protilátky/
antistoffer/ antikroppar/ Przeciwciała/ protilátky/ protitelesa/ Antistoffer
Kontrollantigen/ control antigen/ antigène de contrôle/ antigene di controllo/ контрольный антиген
/antígeno de control/ αντιγόνο ελέγχου/ antígeno de controre/ kontrolní antigen/ kontrolantigen/
kontrollantigen/ antygen kontrolny/ kontrolný antigén/ kontrolni antigen/ kontrollantigen
Standardserum/ standard serum/ Sérum standard/ siero standard/ стандартная сыворотка /suero
patrón/ πρότυπος ορός/ soro padrão/ standardní sérum/ standardserum/ standardserum/ Surowica
standardowa/ štandardné sérum/ standardni serum/ Standardserum
Positivkontrolle/ positive control/ Contrôle positif/ controllo positivo/ положительные контроли /control
positivo/ θετικός έλεγχος/ controlo positivo/ pozitivní kontrola/ positiv kontrol/ positiv kontroll/ Kontrola
pozytywna/ pozitívna kontrola/ pozitivna kontrola/ Positiv kontroll
Grenzwertiges Serum/ cut-off serum/ Sérum seuil/ siero cut-off/ сомнительные сыворотки
(пограничные)/suero de corte/ οριακός ορός (cut-off)/ soro cut-off/ cut-off sérum/ cutoff-serum/ cutoffserum/
Surowica „cut-off"/ sérum na určenie hraničnej hodnoty/ mejni serum/ Stoppserum
Negativkontrolle/ negative control/ Contrôle négatif/ controllo negativo/ отрицательные контроли
/control negativo/ αρνητικός έλεγχος/ controlo negativo/ negativní kontrola/ negativ kontrol/ negativ
kontroll/ Kontrola negatywna/ negatívna kontrola/ negativna kontrola/ Negativ kontroll
Alkalisches Phosphatase Konjugat antihuman/ alkaline phosphatase conjugate anti-human/ conjugué
phosphatase alcaline anti-humain/ coniugato con fosfatasi alcalina anti-umano/ античеловеческий
щелочной конъюгат фосфатазы / conjugado anti humano de fosfatasa alcalina/ Σύζευξη αλκαλικής
φωσφατάσης/ conjugado anti-humano com fosfatase alcalina/ konjugát alkalické fosfatázy antihumánní/
alkalisk phosphatase konjugat antihumant/ antihumant alkaliskt fosfatas-konjugat/ Antyludzki
koniugat fosfatazy alkalicznej/ konjugát antihumánnej alkalickej fosfatázy/ konjugat alkalne
fosfataze, antihumani/ Alkalisk fosfatase-konjugat, anti-humant
++++ niedrig-konzentriertes Konjugat/ conjugate with low concentration/ conjugué à faible concentration/
coniugato a concentrazione bassa/ конъюгат низкой концентрации /conjugado con concentración
baja/ Σύζευξη χαµηλής συγκέντωσης/ conjugado de baixa concentração/ konjugát s nízkou
koncentrací/ konjugat med lav koncentration/ konjugat med låg koncentration/ koniugat o niskim
stężeniu/ konjugát so strednou koncentráciou/ konjugat z majhno koncentracijo/ Konjugat med lav
konsentrasjon
++- mittel-konzentriertes Konjugat/ conjugate with medium concentration/ conjugué à concentration
moyenne/ coniugato a concentrazione media/ конъюгат средней концентрации /conjugado con
concentración media/ Σύζευξη µέτριας συγκέντρωσης/ conjugado de concentração intermédia/
konjugát se střední koncentrací/ konjugat med medium koncentration/ konjugat med medelhög
koncentration/ koniugat o średnim stężeniu/ konjugát so strednou koncentráciou/ konjugat s srednjo
koncent/ Konjugat med middels konsentrasjon
++++ hoch-konzentriertes Konjugat/ conjugate with high concentration/ conjugué à concentration élevée/
coniugato a concentrazione alta/ высококонцентрированный конъюгат/ conjugado con
concentración alta/ σύζευξη υψηλής συγκέντρωσης/ conjugado de elevada concentração/ konjugát
s vysokou koncentrací/ konjugat med høj koncentration/ konjugat med hög koncentration/ koniugat o
wysokim stężeniu/ konjugát s vysokou koncentráciou/ konjugat z veliko koncentracijo/ Konjugat med
høy konsentrasjon

RF
DILB
DILBS1
DILBS2
Rheumafaktor-Absorbens (Rf-Absorbens)/ rheumatoid factor absorbent (rf-absorbent)/ absorbant de
facteur rhumatoïde (rf-absorbant)/ adsorbente del fattore reumatoide (adsorbente Rf)/ абсорбент
ревматоидного фактора (Rf-абсорбент) /absorbente de factor reumatoide (material absorbente de
Rf)/ Απορροφητής ρευµατοειδούς παράγοντα (απορροφητής Rf)/ absorvente de factor reumatóide
(absorvente de Fr)/ absorbent revmatoidního faktoru (rf-absorbent)/ reumafaktor- absorptionsmiddel
(rf-absorptionsmiddel)/ reumafaktor-absorptionsmedel (rf-absorptionsmedel)/ Absorbent czynnika
reumatoidalnego (absorbent RF)/ absorbent reumatoidného faktora (absorbent rf)/ absorbent
revmatoidnega faktorja (absorbent RF)/ Revmatoid faktor-absorbent (rf-absorbent)
Verdünnungspuffer für Serum/ dilution buffer for sera/ sérum pour le tampon de dilution/ tampone di
diluizione per sieri / разбавляющий буфер для сыворотки / solución amortiguadora para los sueros/
ρυθµιστικό διάλυµα αραίωσης για ορούς/ tampão de diluição para soro/ ředicí pufr pro séra/
fortyndingsbuffer til sera/ spädningsbuffert för serum/ bufor rozcieńczający do surowic / pufor na
riedenie sér/ pufer za redčenje seruma/ Fortynningsbuffer til serum
WASH Waschlösungskonzentrat/ washing solution concentrate/ concentré de solution de lavage / soluzione
di lavaggio concentrata / промывочный концентрат /concentrado de solución de lavado/
συµπύκνωµα έκπλυσης/ concentrado de solução de lavagem/ koncentrát promývacího roztoku/
vaskeopløsningskoncentrat/ tvättlösningskoncentrat/ Stężony roztwór do płukania/ koncentrát
premývacieho roztoku/ koncentrat za raztopino za izpiranje/ Vaskeløsningskonsentrat
pNPP
STOP
pNPP Substrat/ pNPP substrate/ substrat Pnpp/ substrato pNPP/ pNPP субстрат / sustrato pNPP/
Υπόστρωµα pNPP/ substrato pNPP/ pNPP substrát/ pNPP-substrat/ pNPP-substrat/ Substrat pNPP/
substrát pNPP/ substrat pNPP/ pNPP-substrat
Stopplösung/ stopping solution/ solution d'arrêt/ soluzione di arresto/стоп-раствор/ solución de
parada/ διάλυµα διακοπής/ solução de paragem/ zastavovací roztok/ stopopløsning/ stopplösning/
roztwór zatrzymujący reakcję/ ukončovací roztok/ raztopina za ustavitev reakcije/ stoppeløsning
ätzend/ corrosive/ corrosif/ corrosivo/ едкий /corrosivo/ διαβρωτικό/ corrosivo/ žíravý/ ætsende/
frätande/ czynnik korozyjny/ korozívne/ jedko/ etsende
ätzend/ corrosive/ corrosif/ corrosivo/ едкий /corrosivo/ διαβρωτικό/ corrosivo/ žíravý/ ætsende/
frätande/ czynnik korozyjny/ korozívne/ jedko/ etsende
INFO
RTU
Gebrauchsanweisung, Zertifikat (Standardkurve und Auswertetabelle), CD/ instructions, certificate
(standard curve and evaluation table), CD/ instructions, certificat (courbe de référence et tableau
d'évaluation), CD/ istruzioni per l’uso, certificato (curva standard e tabella interpretativa), CD/
Инструкция по применению, сертификат (стандартная кривая и таблица для оценки),
компактный диск /instrucciones, certificado (curva patrón y tabla de evaluación), CD/ Οδηγίες
χρήσης, Πιστοποιητικό (πρότυπη καµπύλη και πίνακας υπολογισµού), CD/ instruções, certificado
(curva padrão e tabela de avaliação), CD/ (standardní křivka a vyhodnocovací tabulka), CD/
brugsanvisning, certifikat (standardkurve og evalueringstabel), CD/ instruktioner, certifikat
(standardkurva och utvärderingstabell), CD/ Instrukcje, certyfikat (krzywa standardowa i tabela do
określania wyników/ CD/ pokyny, certifikát (štandardná krivka a hodnotiaca tabuľka), disk CD/
navodila, certifikat (standardna krivulja in ocenjevalna tabela), CD/ Instruksjoner, sertifikat
(standardkurve og evalueringstabell), CD
gebrauchsfertig/ ready-to-use/ prêt à l'emploi/ pronto per l'uso/ готовый к использованию /listo para
usar/ έτοιµο προς χρήση/ pronto a utilizar/ připravený k použití/ klar til brug/ bruksfärdig/ gotowy do
użycia/ pripravené na použitie/ pripravljen za uporabo/ klar til bruk
CONC Konzentrat/ concentrate/ concentré/ concentrato/ концентрат / concentrado/ Συµπύκνωµα/
concentrado/ koncentrát/ koncentrat/ koncentrat/ Koncentrat/ koncentrát/ koncentrat/ Konsentrat
DIL
verdünnen oder lösen in/ dilute or disolve in/ diluez ou dissoudre dans/ diluire o sciogliere in/
разбавить или растворить в /diluir o disolver en/ αραίωση ή διάλυση σε/ diluir ou dissolver em/
nařeďte nebo rozpusťte v/ fortynd eller opløs i/ späd eller lös i/ Rozcieńczyć lub rozpuścić w/ rozriediť
alebo rozpustiť v/ razredčite ali raztopite v/ Fortynnes eller løses opp i

AQUA
IVD
destilliertes Wasser/ aqua detillata/ eau distillée/ acqua distillata/ дистиллированная вода /agua
destilada/ αποσταγµένο νερό/ água destilada/ destilovaná voda/ destilleret vand/ destillerat vatten/
woda destylowana/ destilovaná voda/ destilirana voda/ Destillert vann
In-vitro Diagnostik Anwendung/ in-vitro diagnostic use/ utilisation en diagnostic in-vitro/ uso
diagnostico in vitro/ использование в диагностике ин-витро /uso diagnóstico in-vitro/ ∆ιάγνωση,
χρήση in-vitro/ para diagnóstico in vitro/ diagnostické použití in-vitro/ til in-vitro diagnostik/ in vitrodiagnostisk
användning/ do diagnostyki in vitro/ diagnostické použitie in-vitro/ uporaba pri diagnostiki
in vitro/ In vitro-diagnostisk bruk
SERION ELISA classic
102 Masern Virus / Measles Virus / Rougeole 1261 Parainfluenza Virus 1
103 Mumps Virus / Parotitis virus / Oreillons 1262 Parainfluenza Virus 2
104 Varicella-Zoster Virus (VZV) 1263 Parainfluenza Virus 3
105 Herpes simplex Virus 1/2 127 Mycoplasma pneumoniae
1051 Herpes simplex Virus 1 128 Adenovirus
1052 Herpes simplex Virus 2 129 Röteln Virus / Rubella virus / virus de rubéole
106 Legionella pneumophila 1-7 130 Diphtherie / Diphtheria
107 Echinococcus 1311 Coxiella burnetii (Q-Fieber) Phase 1 / Coxiella
burnetii (Q-fever) phase 1
108 Tetanus 1312 Coxiella burnetii (Q-Fieber) Phase 2 / Coxiella
burnetii (Q-fever) phase 2
109 Cytomegalovirus / Citomegalovirus 132 Aspergillus fumigatus
110 Toxoplasma gondii 133 Enterovirus
112 FSME Virus / TBE Virus 134 Coxsackievirus
113 Resp. Syncytial Virus (RSV) 135 Echovirus
114 Dengue Virus/ Dengue 1361 Epstein-Barr Virus VCA
116 Brucella 1362 Epstein-Barr Virus EBNA 1
117 Candida albicans 1363 Epstein-Barr Virus Early Antigen
118 Helicobacter pylori 137 Chlamydia
120 Bordetella pertussis 1371 Chlamydia pneumoniae
1201 Bordetella pertussis Toxin 1372 Chlamydia trachomatis
121 Borrelia burgdorferi 138 Yersinia
122 Parvovirus B19 139 Campylobacter jejuni
1231 Influenza A Virus 140 Bacillus anthracis
1232 Influenza B Virus 141 West Nile Virus
125 Leptospira 142 Francisella tularensis
126 Parainfluenza Virus 1, 2, 3 145 Hantavirus Puumala