MKONA 1 (Z) Onconeural Antigens IgG - Milenia Biotec GmbH

Onconeural Antigens IgG 

Dot Blot for the qualitative detection of onconeural HuD, Ri, 

Yo and Amphiphysin I/II specific IgG autoantibodies 

English: Page 1-8 

Dot-Blot zum qualitativen Nachweis von onkoneuralen HuD-, Ri-, 

Yo- und Amphiphysin I/II-spezifischen IgG Autoantikörpern 

Deutsch: Seite 9-14 

Dot Blot per the la determinazione qualitativa di autoanticorpi 

IgG onconeurali specifici per HuD, Ri, Yo e Amfifisina I/II 

Italiano: Pagine 15-20 

Dot Blot pour la détection qualitative des auto-anticorps (IgG) 

anti-onconeuronaux HuD, Ri, Yo et Amphiphysine I/II 

Français : Page 21-28 

REF: 

MKONA 1 (Z) 

24 (8) 

Privates Institut für Immunologie 

und Molekulargenetik GmbH 

Kriegsstraße 99 

D-76133 Karlsruhe, Germany 

Distribution/Service: 

Vertrieb/Service: 

Distribuzione/Assistenza: 


Milenia Biotec GmbH 

Hohe Straße 4-8 

D-61231 Bad Nauheim, Germany 

Tel.: +49-(0)6032-8040-0 

Fax: +49-(0)6032-8040-80 

E-Mail: info@milenia-biotec.de 


http://www.milenia-biotec.de 

MKONA / P / 2007-03-30

- 2 - 

Explanation of Sym bols 

Symbols (GB) / Symbole (D) / Symboli (I) / 

Símbolos (E) / Symboles (F) / Jelölés (H) 

REF 

Explanation / Erklärung / Significato / Significado / 

Signification / Magyarázat 

Expiry date 

Haltbarkeitsdatum 

Data di scadenza 

Fecha de caducidad 

Date d’expiration 

Lejárati idõ 

In Vitro Diagnostic Medical Device 

In Vitro Diagnostikum 

Dispositivo medico-diagnostico in vitro 

Para uso en el Diagnóstico in vitro 

Diagnostic in vitro 

In vitro diagnosztikum 

Batch code 

Los-Bezeichnung 

Codice del lotto 

Lote 

Numéro de lot 

Sarzsszám 

Catalogue number 

Artikel-Nummer 

Numero di catalogo 

Referencia 

Référence 

Katalógusszám 

Storage conditions 

Lagerungsbedingungen 

Temperatura di conservazione 

Temperatura de conservación 

Température de conservation 

Tárolási körülmények 

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Consultare le istruzioni per l‘uso 

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A használati utasítás tanulmányozandó 

Consult attended documents 

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A csatolt dokumentumok tanulmányozandók 

Package size 

Packungsgröße 

Numero di test 

Número de determinaciones 

Nombre de tests par trousse 

Kiszerelés nagysága 

Manufacturer 

Hersteller 

Produttore 

Fabricante 

Fabriqué par 

Gyártó 

Only for evaluation purposes 

Nur zur Leistungsbewertung 

Solo per uso sperimentale 

Con fines exclusivos de evaluación 

Pour évaluation uniquement 

Kizárólag vizsgálati célokra 

Onconeural Antigens IgG (MKONA)

- 3 - 

M aterials Supplied, Storage and Stability 

Components Cat.-No. Content Preparation Store at Shelf life 

ONA Dotblot Strips, 

nitrocellulose strips coated with 

recombinant onconeural antigens 

HuD, Ri, Yo and Amphiphysin I/II 

ONA Control Sera, 

negative control 

positive control 

cut-off control 

ONA Enzyme Conjugate, 

polyclonal (goat) anti-hu-IgG 

antibodies, labeled with alkaline 

phosphatase 

ONA Buffered Wash Solution, 

Concentrate (5x) 

Substrate Solution, 

contains 5-Brom-4-chloro-3- 

indolyl phosphate and 4-Nitrobluetetrazoliumchloride 

MONADS 24 (8) ready to use 2 - 8 °C 

Protect from 

moisture! Store 

together with 

desiccant in the 

tube! 

Do not touch 

with fingers! 

MONAC1/2/3 1 set 

3 vials à 

50 µL 

MEONA 

MWBONA 

MSONA 

2 (1) vial(s) 

à 15 mL 

1 vial 

50 mL 

Disposable incubation trays MONAP 3 (1) 

Evaluation Sheet ONAA 1 (1) 

2 (1) vial(s) 

à 15 mL 

Predilution! 

Dilute 1 : 20 with 

1 x wash buffer 

see expiry date 

2 – 8 °C 30 days after 

dilution, resp. 

until the expiry 

date 

ready to use 2 - 8 °C 30 days after 

dilution, resp. 


date 

Dilute before use: 

e.g. add to 10 mL 

5 x wash buffer 

to 40 mL dest. 

water 

ready to use 2 - 8 °C 

Protect from 

light! 

Material Safety Data Sheets are available on request (see also www.milenia-biotec.de). 

2 - 8 °C 30 days after 

opening, 5 days 

after dilution 

30 days after 

opening, resp. 


date 

M aterials Required 

horizontal Shaker 

Vortex mixer 

destilled water 

graduated cylinder for 250 mL; storage flasks for the wash buffer 

pipettes for 10, 50 and 1000 µL 

reaction tubes for predilution of the samples 

optional: Westernblot Processor 


- 4 - 

Specim en Collection and Preparation 

Serum, plasma (EDTA, citrated, heparinized) and cerebrospinal fluid (CSF) can be used as sample 

materials. All serum/plasma samples and controls provided with the kit should be prediluted 1:20 with 

wash buffer; e.g. 10 µL sample is mixed with 190 µL wash buffer. CSF can be used undiluted. At the 

end of the procedure the final dilution of the sample is 1:2000. 

During transportation, patient samples may be stored at room temperature for up to 24 hours. For 

short term storage the samples can be stored at 2-8 °C for up to 5 days. For long term storage the 

samples should be dispensed and stored frozen at < -18°C. Avoid repeated freeze-thaw cycles. 

W arnings and Precautions 

All reagents of this test kit are strictly intended for in vitro diagnostic use only. This test should be 

carried out only by persons who are familiar in performing in vitro diagnostic procedures. Please follow 

strictly the sequence of pipetting steps provided in this protocol. 

Sample material of patients are always potentially infectious. Handling of samples suspected to be 

infectious should be done in a laminar flow clean bench. 

M ethod and Test Principle 

The Onconeural Antigens IgG assay is an immunoassay in a dot blot format for the qualitative 

detection of human IgG autoantibodies against the neuronal antigens HuD, Ri, Yo and Amphiphysin. 

Human recombinant proteins HuD, Ri, Yo, Amphiphysin I and Aphiphysin II are immobilized on fixed 

locations of a nitrocellulose membrane; in addition anti-human IgG antibodies are immobilized as 

functional control. 

The prediluted sample is pipetted to the antigen coated carrier membrane. During the first incubation 

period the autoantibodies present in the patient’s samples will bind according to their antigen 

specificity. In the following step unbound serum components are washed away. Bound immune 

complexes are labelled with alkaline phosphatase conjugated anti-human IgG during the next 

incubation period. Surplus of conjugate is removed by washing the strips. Finally, immunocomplexes 

are visualized by the addition of the colorless enzym substrate BCIP which forms a blue precipitate 

line. Type of antibodies in the sample are then identified by comparing their position with the reference 

bands on the evaluation sheet. 


- 5 - 

Test Perform ance 

Important notes: 

Do not interchange components of different lots and assays. 

Do not use kit components beyond their expiration dates. 

All components should be prewarmed at room temperature (18 – 28 °C) before use. 

Dilute concentrates at least 30 minutes prior to use. Mix well, but prevent foam formation. 

To avoid carryover contamination carefully aspirate fluids; take particularly care on patient sample 

containing fluids! 

1. Dilute patient samples and controls 1 : 20 

with wash buffer (e.g. pipet 10 µL of sample + 

190 µL of wash buffer); mix well. 

2. Using tweezers, place the required number of 

strips in the incubation tray (labeling must 

face up). 

3. Overlay the strips with 1,000 µL wash buffer 

and incubate for 5 minutes at room 

temperature (18-28 °C) on a shaker. Do not 

aspirate; wash buffer remains in the 

reservoirs ! 

4. Add 10 µL prediluted patient serum/plasma 

and prediluted controls (resp. 50 µL undiluted cerebrospinal fluid) and incubate for 90 minutes 

on a shaker. 

5. Aspirate and wash the strips with 1,000 µL wash buffer. Do it by carefully mixing and aspiration. 

6. Add 1,000 µL of wash buffer and shake for 5 minutes. Aspirate the wash buffer. Repeat this 

step once. 

7. Pipet 1,000 µL Enzyme Conjugate solution and incubate for 60 minutes on a shaker. 

8. Aspirate and wash the strips with 1,000 µL wash buffer. Do it by carefully mixing and aspiration. 

9. Add 1,000 µL of wash buffer and shake for 5 minutes. Aspirate fluid. Repeat this step once. 

10. Pipet 1,000 µL of Substrate Solution and incubate 5-15 minutes on a shaker. Control the color 

development after 5 minutes. The functional control should be a clearly visible band on all 

strips. Especially the positive control should show five clearly visible bands. 

11. Aspirate Substrate Solution and wash twice with 1,000 µL of distilled water. 

12. Remove the strips from their reservoir using tweezers. Airdry on adsorbent paper for about 

30 minutes. 

13. Interpret the band pattern according the evaluation sheet provided with the kit. 


- 6 - 

Interpretation of Results 

After complete drying the strips will be placed according their functional control on the evaluation 

sheet (see interpretation sample) with the numbers on top and the ends of the strips fixed with 

adhesive film. The position of the antigen bands may slightly vary from lot to lot, but they always lay 

within the indicated marks of the evaluation sheet. The blue color of the antigen bands will fade, if the 

dry strips are exposed to air and light for a longer time. 

M: marker for position of antigens. 

Antigen M 1 2 3 4 5 6 7 8 

1. negative control. 

2. positive control. 

3. cut-off control 

4-8. example of patient sera. 

Amphiphysin I 

Amphiphysin II 

Yo 

Ri 

HuD 

Functional Control 

Test results are interpreted by comparing locations and color intensities of the bands with those of the 

cut-off control supplied with the kit. 

Positive Result 

Negative Result 

Only samples with a stronger color intensity than No bands or very weak color intensities (weaker 

the signal obtained with the cut-off control are than those of the cut-off control) are interpreted 

clearly antibody positive 

as antibody negative 

In principle, the results of this immuno dot blot should only be interpreted for diagnosis only in context 

with the patient´s clinical state of health and other diagnostic and epidemiologic data. 


- 7 - 

Q uality Control 

The functional control on each strip (internal reaction control) has to display an intensive color. The 

negative control must show only the functional control band; in very rare cases very faint bands can be 

seen, which have no importance. 

The positive control must always show an intensive staining of the five antigens (Yo, Ri, Hu-D and 

Amphiphysin I/II) and the functional control; if not, the test has to be repeated. 

Assay Characteristics 

Sample material: 

Time for test procedure: 

Specificity: 

serum, plasma, cerebrospinal fluid 

3.5 hours 

by probing 100 healthy blood donors none tested serum was found to be 

positive. 


- 8 - 

Short Instruction: O nconeural Antigens IgG 

(all sample volumes are given in µL) 

Steps Solution Sample Controls 

negative/positive/cut-off 

Pipet to the strips Wash Buffer 1000 1000 

Incubate for 5 min at room temperature 

(18-28 °C) on a shaker; do not aspirate 

the solution! 

Add 

Add 

Incubate for 90 min at room temperature 

(RT) on a shaker 

Aspirate; wash the strips with 1,000 µL 

wash buffer by mixing gently and aspirate 

again 

Add 1,000 µL of wash buffer to each strip 

and incubate for 5 min at RT on a shaker; 

aspirate 

Repeat this step once 

Add 

pre-diluted 

Control 

pre-diluted 

Sample 

(CSF undiluted) 

Enzyme 

Conjugate 

- 10 

10 

(50) 

1000 1000 

- 

Incubate for 60 min at RT on a shaker 

Aspirate; wash the strips with 1,000 µL 

wash buffer by mixing gently and aspirate 

again 

Add 1,000 µL of wash buffer to each strip 

and incubate for 5 min at RT on a shaker; 

aspirate 

Repeat this step once 

Add 

Incubate for 5 – 15 min at RT on a shaker 

Decant and wash the strips twice with 

1,000 µL destilled water 

Remove the strips with tweezers and airdry 

on adsorbent paper for about 30 min 

Analyze the band pattern using the 

evaluation sheet 

Substrate 

Solution 

1000 1000 

For a detailed description of the procedure see also page 5. 


- 9 - 


Dot Blot for the qualitative detection of onconeural HuD, Ri, Yo 

and Amphiphysin I/II specific IgG autoantibodies 


Dot-Blot zum qualitativen Nachweis von onkoneuralen HuD-, 

Ri-, Yo- und Amphiphysin I/II -spezifischen IgG 

Autoantikörpern 








REF: 


24 (8) 












Tel.: +49-(0)6032-8040-0 

Fax: +49-(0)6032-8040-80 





- 10 - 

Kitbestandteile, Lagerung und Stabilität 

Komponente Art.-Nr. Inhalt Vorbereitung Lagerung bei Haltbarkeit 

ONA Dot-Blot Streifen 

(ONA Dotblot strips), 

Nitrozellulose-Streifen 

beschichtet mit rekombinanten 

onkoneuralen 

Antigenen HuD, Ri, Yo und 

Amphiphysin 

MONADS 24 (8) gebrauchsfertig 2 - 8 °C 

Vor Feuchtigkeit 

schützen! 

Zusammen mit 

Trocknungsmittel 

in dem Röhrchen 

aufbewahren 

Nicht mit den 

Fingern anfassen! 

Bis zum 

Verfallsdatum 

ONA Kontroll-Sera 

(ONA Control Serum), 

Negativkontrolle 

Positivkontrolle 

Cut-off-Kontrolle 

MONAC1/2/3 1 Set 

3 Fl. à 50 µl 

Vorverdünnung! 

1:20 mit 1 x 

Waschpuffer 

verdünnen 

2 – 8 °C 30 Tage nach 

dem 

Verdünnen 

bzw. bis zum 

Verfallsdatum 

ONA Enzym-Konjugat 

(ONA Enzyme Conjugate), 

polyklonaler (Ziegen) antihu-IgG 

Antikörper, markiert 

mit alkalischer Phosphatase 

ONA Waschpuffer 

(ONA Buffered Wash 

Solution), 

Konzentrat (5x) 

Substrat-Lösung 

(Substrate Solution), 

enthält 5-Brom-4-Chlor-3- 

Indolyl-Phosphat und 4- 

Nitro-Blautetrazoliumchlorid 

MEONA 

MWBONA 

MSONA 

2 (1) Fl. 

à 15 ml 

1 Fl. 

50 ml 

2 (1) Fl. 

à 15 ml 

Einweg-Inkubationswannen MONAP 3 (1) 

Auswertebogen ONAA 1 (1) 

gebrauchsfertig 2 - 8 °C 30 Tage nach 

dem 

Verdünnen 

bzw. bis zum 

Verfallsdatum 

Vor Gebrauch 

verdünnen: z.B. 

zu 10 ml 

Waschpuffer- 

Konzentrat 

40 ml dest. 

Wasser 

zugeben 

gebrauchsfertig 2 - 8 °C 

Vor Licht 

schützen! 

2 - 8 °C 30 Tage nach 

dem Öffnen, 5 

Tage nach dem 

Verdünnen, 

bzw. bis zum 

Verfallsdatum 

30 Tage nach 

dem Öffnen 

bzw. bis zum 

Verfallsdatum 

Sicherheitsdatenblätter sind auf Anfrage erhältlich (siehe auch unter www.milenia-biotec.de). 

Erforderliche Hilfsm ittel 

Horizontal-Schüttler 

Wirbelmischer (Vortex) 

destilliertes Wasser 

Messzylinder für 250 ml; Plastikgefäße zur Aufbewahrung des Waschpuffers 

Mikropipetten für 10, 50 und 1000 µl 

Reaktionsgefäße zur Probenverdünnung 

Optional: Westernblot Prozessor 


- 11 - 

Probenentnahm e und -vorbereitung 

Als Probenmaterial können Serum, Plasma (EDTA, Citrat, Heparin) und Liquor cerebrospinalis 

verwendet werden. Alle Serum-/Plasmaproben und die im Kit befindlichen Kontrollen werden 1:20 mit 

Waschpuffer vorverdünnt; dazu wird beispielsweise 10 µl Probe zu 190 µl Wasch-Puffer gegeben. 

Liquor kann unverdünnt eingesetzt werden. Am Ende der Testdurchführung ist die Endverdünnung 

der Probe 1:2000. 

Für den Transport kann das Untersuchungsmaterial bis zu 24 Stunden bei Raumtemperatur gelagert 

werden. Die Proben können gekühlt bei 2-8 °C bis zu 5 Tage aufbewahrt werden. Ist eine längere 

Lagerung beabsichtigt, sollten die Proben aliquotiert und bei < -18 °C tiefgefroren werden. Wiederholte 

Einfrier- und Auftauzyklen sind zu vermeiden. 

Hinw eise und Vorsichtsm assnahm en 

Alle Reagenzien dieser Testpackung dürfen ausschließlich zur in vitro-Diagnostik verwendet werden. 

Die Anwendung sollte durch Personal erfolgen, das speziell in Verfahren von in vitro-Diagnostika 

unterrichtet und ausgebildet wurde. Die Einhaltung des vorgeschriebenen Protokolls zur Durchführung 

des Tests ist unbedingt erforderlich. 

Untersuchungsmaterial von Patienten ist stets als potentiell infektiös einzustufen und sollte stets in 

einer Sicherheitswerkbank weiterbearbeitet werden. 

M ethodik und Testprinzip 

Der Onconeural Antigens IgG Test ist ein Immunoassay im Dot-Blot-Verfahren zur qualitativen 

Bestimmung von humanen IgG-Autoantikörpern gegen die neuronalen Antigene HuD, Ri, Yo und 

Amphiphysin. Die rekombinanten humanen Proteine HuD, Ri, Yo, Amphiphysin I und Amphiphysin II 

sind auf einer Nitrozellulose-Membran an fixen Stellen aufgetragen; zusätzlich sind anti-human-IgG- 

Antikörper als Funktionskontrolle aufgetragen. 

Die vorverdünnte Patientenprobe wird zu der Antigen-beladenen Trägermembran pipettiert. Während 

der ersten Inkubation (90 Minuten) binden die in der Patientenprobe vorhandenen Autoantikörper 

entsprechend ihrer Antigen-Spezifität. Im nächsten Schritt werden ungebundene Serumbestandteile 

weggewaschen. Während der nächsten Inkubation (60 Minuten) werden die gebundenen 

Immunkomplexe mit anti-human-IgG, das mit alkalischer Phosphatase konjugiert ist, markiert. 

Überschüssiges Konjugat wird durch Waschen der Streifen entfernt. Schließlich werden die 

Immunkomplexe sichtbar gemacht, indem sich durch Zugabe von farblosem Enzymsubstrat (BCIP) 

eine blaue Präzipitat-Linie bildet. Die Antikörper-Typen der Probe werden durch den Vergleich der 

Positionen mit denen der Referenzbanden auf der Auswerteschablone identifiziert. 


- 12 - 

Testdurchführung 

Wichtige Hinweise 

Einzelne Komponenten verschiedener Chargen und Testbestecke dürfen nicht ausgetauscht 

werden. 

Kitbestandteile dürfen nach Ablauf des Haltbarkeitsdatums nicht benutzt werden. 

Alle Komponenten müssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur (18-28 °C) erwärmt werden. 

Die Konzentrate müssen mindestens 30 Minuten vor Gebrauch verdünnt werden. Gut mischen, 

Schaumbildung vermeiden. 

Um Kreuzkontaminationen zu vermeiden Flüssigkeiten vorsichtig absaugen; das gilt vor allem für 

die Patientenproben-haltigen Flüssigkeiten! 

1. Patientenproben und Kontrollen 1:20 mit 

Waschpuffer verdünnen (z.B. 10 µl Probe + 190 

µl Waschpuffer); gut mischen. 

2. Mit einer Pinzette die benötigte Anzahl an 

Streifen in die Inkubationswannen legen 

(Beschriftung nach oben). 

3. Streifen mit 1000 µl Waschpuffer überschichten 

und 5 Minuten bei Raumtemperatur (18-28 °C) 

auf einem Schüttler inkubieren. Nicht 

Absaugen, Waschpuffer verbleibt in den 

Reservoirs! 

4. 10 µl vorverdünntes Serum/Plasma und vorverdünnte Kontrollen (bzw. 50 µl unverdünnten 

Liquor) zugeben und 90 Minuten auf einem Schüttler inkubieren. 

5. Absaugen und die Streifen mit 1000 µl Waschpuffer waschen. Dabei vorsichtig schwenken und 

dann wieder absaugen. 

6. 1000 µl Waschpuffer hinzugeben, 5 Minuten schütteln. Waschpuffer absaugen. Diesen Schritt 

einmal wiederholen. 

7. 1000 µl Enzymkonjugat-Lösung zupipettieren und 60 Minuten auf einem Schüttler inkubieren. 

8. Absaugen und die Streifen mit 1000 µl Waschpuffer waschen. Dabei vorsichtig schwenken und 

dann wieder absaugen. 

9. 1000 µl Waschpuffer hinzugeben, 5 Minuten schütteln. Waschpuffer absaugen. Diesen Schritt 

einmal wiederholen. 

10. 1000 µl Substrat-Lösung zupipettieren und 5 - 15 Minuten unter Schütteln inkubieren. Nach 

5 Minuten die Farbentwicklung kontrollieren. Die Funktionskontrolle sollte auf allen Streifen als 

intensive Bande sichtbar sein. Insbesondere soll Positivkontrolle fünf deutlich sichtbare Banden 

aufweisen. 

11. Substratlösung absaugen und Streifen zweimal mit 1000 µl dest. Wasser waschen. 

12. Streifen mit einer Pinzette der Wanne entnehmen und für ca. 30 Minuten auf Filterpapier 

lufttrocknen. 

13. Das Bandenmuster mit dem im Kit vorhandenen Auswertebogen interpretieren. 


- 13 - 

Ausw ertung der Ergebnissse 

Die komplett getrockneten Streifen werden anhand der Funktionskontrolle auf dem Auswertebogen 

(siehe Auswertebeispiel) mit der Nummerierung nach oben ausgerichtet und mit Tesafilm an ihren 

Enden befestigt. Die Position der Antigene auf den Streifen kann chargenabhängig geringgradig 

variieren, sie liegen aber stets in dem Bereich der auf dem Auswertebogen befindlichen 

Markierungen. Die blaue Färbung der Antigen-Banden verblaßt, wenn die trockenen Streifen Luft und 

Licht für längere Zeit ausgesetzt sind. 

M: Positionsmarker der Antigene 

Antigen M 1 2 3 4 5 6 7 8 

1. Negativ-Kontrollserum 

2. Positiv-Kontrollserum 

3. Cut-off-Kontrollserum 

4-8. Beispiele für Patientenseren 

Amphiphysin I 

Amphiphysin II 

Yo 

Ri 

HuD 

Funktionskontrolle 

Die Testergebnisse werden anhand von Lokalisation und Farbintensität der Banden mit der Cut-off- 

Kontrolle aus dem Kit verglichen und entsprechend ausgewertet. 

Positives Ergebnis 

Negatives Ergebnis 

Nur Proben mit einer stärkeren Bandenintensität Keine oder ganz schwache Bandenintensitäten 

als die der Cut-off-Kontrolle sind eindeutig (schwächer als die der Cut-off-Kontrolle), sind als 

Antikörper-positiv. 

Antikörper-negativ zu interpretieren. 

Prinzipiell sollten die Ergebnisse des Immunoblots zur Diagnosestellung nur im Zusammenhang mit 

dem klinischen Bild und anderen diagnostischen und epidemiologischen Daten interpretiert werden. 

Q ualitätskontrolle 

Die auf jedem Streifen vorhandene Funktionskontrolle (interne Reaktionskontrolle) muß kräftig gefärbt 

sein. Die Negativ-Kontrolle darf nur die Färbung der Funktionskontrolle aufweisen; in wenigen 

seltenen Fällen treten sehr schwache Banden auf, denen keine Bedeutung zukommt. 

Die Positiv-Kontrolle muß immer eine kräftige Färbung der fünf Antigene (Yo, Ri, HuD und 

Amphiphysin I/II) und der Funktionskontrolle zeigen; falls nicht, muß der Test wiederholt werden. 

Testcharakteristika 

Probenmaterial: 

Zeit zur Testdurchführung: 

Spezifität: 

Serum, Plasma, Liquor 

3,5 Stunden 

Bei der Testung von 100 gesunden Blutspendern wurde für keines der 

untersuchten Seren ein positives Ergebnis gefunden 


- 14 - 

Kurzanleitung: O nconeural Antigens IgG 

(alle Volumenangaben in µl) 

Schritte Lösung Probe Kontrolle 

negativ/positiv/cut-off 

Zu den Streifen pipettieren Waschpuffer 1000 1000 

5 min bei Raumtemperatur (18-28 °C) auf einem 

Schüttler inkubieren; 

die Lösungen nicht absaugen! 

Zugeben 

Zugeben 

90 min bei Raumtemperatur (RT) auf einem 

Schüttler inkubieren 

Absaugen; die Streifen mit 1000 µl Waschpuffer 

durch vorsichtiges Mischen waschen und wieder 

absaugen 

1000 µl Waschpuffer zu jedem Streifen zugeben 

und für 5 min bei RT auf einem Schüttler 

inkubieren; absaugen 

Diesen Schritt einmal wiederholen 

Zugeben 

60 min bei RT auf einem Schüttler inkubieren 

Absaugen; die Streifen mit 1000 µl Waschpuffer 

durch vorsichtiges Mischen waschen und wieder 

absaugen 

1000 µl Waschpuffer zu jedem Streifen zugeben 

und für 5 min bei RT auf einem Schüttler 

inkubieren; absaugen 

Diesen Schritt einmal wiederholen 

Zugeben 

5 – 15 min bei RT auf einem Schüttler inkubieren 

Absaugen und zweimal mit 1000 µl dest. Wasser 

waschen 

Die Streifen mit einer Pinzette entfernen und auf 

einem Papier ca. 30 min lufttrocknen lassen 

Die Bandenmuster anhand des Auswertebogens 

analysieren 

vorverdünnte 

Kontrolle 

vorverdünnte 

Probe 

(Liquor 

unverdünnt) 

Enzym- 

Konjugat 

Substrat- 

Lösung 

Vgl. auch Seite 12 für eine detaillierte Beschreibung der Testdurchführung. 

- 10 

10 

(50) 

1000 1000 

1000 1000 

- 


- 15 - 






Yo- und Amphiphysin I/II -spezifischen IgG Autoantikörpern 


Dot Blot per the la determinazione qualitativa di 

autoanticorpi IgG onconeurali specifici per HuD, Ri, Yo e 

Amfifisina I/II 





REF: 


24 (8) 












Tel.: +49-(0)6032-8040-0 

Fax: +49-(0)6032-8040-80 





- 16 - 

M ateriale Fornito, Conservazione e Stabilità 

Componenti Cat.-No. Contenuto Preparazione Conservare a Stabilità 

ONA Dotblot Strisce 

(ONA Dotblot strips), 

strisce di nitrocellulosa rivestite 

con antigeni ricombinanti 

onconeurali HuD, Ri, Yo e 

Amfifisina 

ONA Sieri di Controllo 


controllo negativo 

controllo positivo 

controllo cut-off 

MONADS 24 (8) Pronte all’uso 2 - 8 °C 

Proteggere 

dall’umidità! 

Conservare nel 

tubo con 

l’essiccante! 

Non toccare 

con le dita! 

MONAC1/2/3 

1 set 

3 flaconi da 

50 µL 

Prediluizione! 

Diluire 1:20 con 

tampone di 

lavaggio 

Fino alla data di 

scadenza 

2 - 8 °C 30 giorni dopo 

la diluizione o 

fino alla data di 

scadenza 

ONA Coniugato con Enzima 


anticorpi policlonali (pecora) antih-IgG, 

marcati con fosfatasi 

alcalina 

ONA Soluzione di lavaggio 

tamponata (ONA Buffered Wash 

Solution) 

Concentrata (5x) 

Soluzione Substrato 


contiene 5'Bromo-4'Cloro- 

3'Indolil-Fosfato e Cloruro di 

4'Nitro-Tetrazolio 

Contenitori disposable per 

l’incubazione 

MEONA 

MWBONA 

MSONA 

2 (1) flacone 

(i) 

da 15 mL 

1 flacone 

50 mL 

MONAP 3 (1) 

Schema di valutazione ONAA 1 (1) 

2 (1) flacone 

(i) 

da 15 mL 

Pronto all’uso 2 - 8 °C 30 giorni dopo 

la diluizione o 

fino alla data di 

scadenza 

Diluire prima 

dell’uso, ad es. 

aggiungendo 40 

mL acqua dist. a 

10 mL tampone 

lavaggio 

Pronta all’uso 2 - 8 °C 

Proteggere dalla 

luce! 

2 - 8 °C 30 giorni dopo 

l’apertura, 5 

giorni dopo 

diluizione 

30 giorni dopo 

l’apertura o fino 

alla data di 

scadenza 

Le schede di sicurezza sono disponibili a richiesta (consultare www.milenia-biotec.de). 

M ateriale richiesto 

Agitatore orizzontale 

Vortex mixer 

acqua distillata 

cilindro graduato per 250 mL; contenitori per il tampone di lavaggio 

pipette da 10, 50 e 1000 µL 

provette per la prediluizione dei campioni 

opzionale: Processore automatico per Western-blot 


- 17 - 

Raccolta e preparazione dei cam pioni 

Siero, plasma (EDTA, citrato, eparinato) e liquido cerebrospinale (CSF) possono essere utilizzati 

come materiale campione. Tutti i campioni di siero/plasma forniti col kit devono essere prediluiti 1: 20 

con tampone lavaggio; ad es. 10 µL di campione è diluito con 190 µL di tampone lavaggio. Il liquido 

cerebrospinale (CSF) può essere utilizzato non diluito. Alla fine di esecuzione del test la diluizione 

finale del campione è 1:2000. 

Durante il trasporto i campioni possono essere conservati a temperatura ambiente fino a 24 ore. I 

campioni refrigerati at 2-8 °C si conservano fino a 5 giorni. Per periodi più lunghi i campioni vanno 

aliquotati e congelati a < -18°C. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti del campione. 

Avvertim enti e precauzioni 

Tutti I reattivi di questo kit sono tassativamente da intendersi solo per uso diagnostico in vitro. Il kit va 

utilizzato esclusivamente da personale addestrato all’uso di metodologie diagnostiche in vitro. 

Preghiamo di seguire alla lettera lo schema di pipettaggio indicato in questa procedura. 

I campioni dei pazienti sono sempre da considerarsi come potenzialmente infetti. I campioni di 

pazienti potenzialmente infetti vanno maneggiati in banchi di lavoro con cappe a flusso laminare. 

M etodo e principio del test 

Il test per gli Onconeural Antigens IgG è un immunoassay in formato “dot blot” per la determinazione 

qualitativa di autoanticorpi IgG umani anti antigeni neuronali HuD, Ri, Yo e Amfifisina. Proteine umane 

ricombinanti di HuD, Ri, Yo, Amfifisina I e Amfifisina II sono fissate su posizioni prestabilite su una 

membrana di nitrocellulosa; inoltre anticorpi antii-IgG umane sono fissati sulla membrana come 

controllo funzionale. 

Il campione prediluito è pipettato sulla membrana di supporto su cui sono fissati gli antigeni. Nel corso 

della prima incubazione gli autoanticorpi presenti nel campione del paziente si legano secondo la loro 

specificità agli antigeni.Nel passaggio successivo i componenti del campione non legati sono eliminati 

col lavaggio. Durante il periodo di incubazione seguente gli immunocomplessi legati vengono marcati 

con anticorpi anti-IgG umane, coniugati con fosfatasi alcalina. L’eccesso di coniugato è rimosso con il 

lavaggio delle strisce. Infine aggiungendo una soluzione di substrato incolore (BCIP), gli 

immunocomplessi vengono visualizzati, con la formazione di una banda di precipitato blu. 

Confrontando con le bande di riferimento sul foglio di valutazione gli autoanticorpi presenti nei 

campioni vengono identificati. 


- 18 - 

Esecuzione del test 

Important notes: 

Non mescolare componenti di lotti e dosaggi differenti. 

Non utilizzare i componenti del kit dopo la data di scadenza. 

Tutti i componenti devono essere portati a temperatura ambiente (18 – 28°C) prima dell’ uso. 

Diluire I concentrati almeno 30 minuti prima dell’ uso Mescolare bene, evitando la formazione di 

schiuma. 

Per evitare contaminazione da trascinamento aspirare i liquidi con cura, particolarmente i liquidi 

contenenti il campione! 

1. Diluire I campioni e i controlli 1:20 con 

tampone lavaggio (ad es. pipettare 10 µL 

di campione + 190 µL di tampone); 

mescolare bene. 

2. Usando le pinzette, collocare il numero di 

strisce richiesto nel contenitore per 

reazione (l’etichettatura deve apparire 

verso l’alto). 

3. Ricoprire le strisce con 1.000 µL tampone 

lavaggio e incubare per 5 minuti a 

temperatura ambiente (18-28 °C) su un 

agitatore. Non aspirare; il tampone 

rimane nelle cellette! 

Zona di 

Aspirazione 

Camera di reazione 

Aggiunta reattivi 

4. Aggiungere 10 µL di siero/plasma del paziente prediluito e i controlli prediluito (oppure 50 µL di 

liquido cerebrospinale non diluito) ed incubare per 90 minuti su agitatore. 

5. Aspirare e lavare le strisce con 1.000 µL tampone lavaggio. Mescolare e aspirare con molta 

cura. 

6. Aggiungere 1.000 µL di tampone lavaggio e agitare per 5 minuti. Aspirare il tampone lavaggio. 

Ripetere questo lavaggio per una volta. 

7. Pipettare 1.000 µL di soluzione Coniugato e incubare per 60 minuti su agitatore. 

8. Aspirare e lavare le strisce con 1.000 µL tampone lavaggio. Mescolare e aspirare con molta 

cura. 

9. Aggiungere 1.000 µL tampone lavaggio e agitare per 5 minuti. Aspirare il liquido. Ripetere 

questo lavaggio per una volta. 

10. Pipettare 1.000 µL soluzione Substrato e incubare 5-15 minuti su agitatore. Controllaree dopo 

circa 5 minuti lo sviluppo del colore. La linea del controllo funzionale deve essere chiaramente 

visibile in tutte le strisce. In particolare il controllo positivo deve presentare cinque bande ben 

visibili. 

11. Aspirare la Soluzione Substrato e lavare due volte con 1.000 µL di acqua distillata. 

12. Rimuovere le strisce dal contenitore usando le pinzette. Asciugare con aria calda su carta 

assorbente per circa 30 minuti. 

13. Interpretare le bande presenti confrontandole con il foglio di valutazione fornito col kit. 


- 19 - 

Interpretazione dei Risultati 

Dopo che le strisce sono completamente asciugate, le stesse vengono posizionate sul foglio di 

valutazione a partire dalla posizione del controllo di funzionamento (v. esempio di interpretazione) con 

i numeri in cima alla parte terminale della striscia fissata con pellicola adesiva. La posizione delle 

bande degli antigeni può variare leggermente da lotto a lotto, ma le stesse si trovano sempre in 

corrispondenza della posizione indicata sul foglio di valutazione. La colorazione blu delle bande tende 

a sbiadire se le strisce asciutte sono esposte all’aria e alla luce per un periodo prolungato. 

M: posizione delle bande di antigeni. 

1. controllo negativo. 

2. controllo positivo. 

3. controllo cut-off 

4-8. sieri dei pazienti. 

Antigeni M 1 2 3 4 5 6 7 8 

Amfifisina I 

Amfifisina II 

Yo 

Ri 

HuD 

Controllo funzionale 

I risultati si ottengono confrontando la posizione e l'intensità del colore delle bande del campione con 

quelle del controllo "cut-off" fornito con la confezione. 

Risultati positivi 

Risultati negativi 

Solo campioni con una intensità di colore più 

elevata del controllo cut-off sono chiaramente 

positivi all'anticorpo. 

In caso di assenza di bande o intensità di colore 

molto debole (più debole del controllo cut-off) il 

risultato è da considerarsi negativo. 

In linea di principio, i risultati di questo immuno dot blot dovrebbero essere tenuti in considerazione 

per una diagnosi solo insieme ad un quadro clinico ed altri dati diagnostici ed epidemiologici. 

Controllo di qualità 

Il controllo di funzionalità su ciascuna striscia (controllo di reazione interno) deve mostrare un colore 

intenso. Il controllo negativo deve mostrare solamente la banda di controllo interno; in casi molto rari 

possono essere osservate bande molto deboli, senza nessun valore. 

Il controllo positivo deve presentare sempre una colorazione intensa per i cinque antigeni (Yo, Ri, Hu- 

D e Amfifisina I/II); altrimenti il test deve essere ripetuto. 

Caratteristiche del test 

Campione: 

Tempo di esecuzione: 

Specificità: 

siero, plasma, liquido cerebrospinale 

3,5 ore 

il test eseguito su 100 donatori sani non ha dato alcun risultato positivo 


- 20 - 

M etodica breve: O nconeural Antigens IgG 

(quantità espresse in µL) 

Operazioni Soluzioni Campione Controllo 

negativo/positivo/cut-off 

Pipettare sulle strisce Tampone lavaggio 1000 1000 

Incubare per 5 min. a temperatura 

ambiente (TA) su un agitatore, non 

aspirare le soluzioni! 

Aggiungere Controllo prediluito - 10 

Aggiungere 

Incubare per 90 min. a TA su un 

agitatore 

Aspirare il liquido. Lavare le strisce con 

1000 µl di tampone lavaggio , mescolare 

delicatamente e aspirare di nuovo 

Aggiungere 1000 µl tampone lavaggio ad 

ogni striscia e incubare per 5 min. su un 

agitatore. 

Ripetere una seconda volta 

Campione 

prediluito 

(CSF non diluito ) 

Aggiungere Coniugato 1000 1000 

Incubare per 60 min. a TA su un 

agitatore 

Aspirare. Lavare con 1000 µl di tampone 

lavaggio. Mescolare delicatamente. 

Aspirare ancora 

Aggiungere 1000 µl di tampone lavaggio 

incubare per 5 min. a TA su un agitatore. 

Ripetere una seconda volta 

Aggiungere 

Incubare per 5-15 min. a TA e su un 

agitatore 

Vuotare e lavare due volte con 1000 µl di 

acqua distillata 

Rimuovere le strisce con una pinzetta e 

lasciarle asciugare su carta da filtro per 

almeno 30 min. 

Confrontare le bande ottenute con il 

foglio di valutazione 

Soluzione 

Substrato 

10 

(50) 

1000 1000 

- 

Per una descrizione dettagliata della procedura vedi anche alle pagine 18. 


- 21 - 






Yo- und Amphiphysin I/II-spezifischen IgG Autoantikörpern 





Dot Blot pour la détection qualitative des auto-anticorps 

(IgG) anti-onconeuronaux HuD, Ri, Yo et Amphiphysine I/II 


REF: 


24 (8) 












Tel.: +49-(0)6032-8040-0 

Fax: +49-(0)6032-8040-80 





- 22 - 


- 23 - 

Contenu du kit, stockage et stabilité 

Composants Cat.-No. Quantité Préparation Conservation Durée de vie 

Bandelettes Dotblot ONA 

(ONA Dotblot Strips), 

Bandelettes de nitrocellulose 

coatées avec des antigènes 

onconeuraux recombinants HuD, 

Ri, Yo et Amphiphysine 

Sérum de contrôle ONA 


contrôle négatif 

contrôle positif 

contrôle valeur seuil 

Conjugué enzymatique ONA 


Anticorps polyclonal (de chèvre) 

anti-IgG humaines, marqué à la 

phosphatase alcaline 

Solution de lavage ONA 

(ONA Buffered Wash Solution), 

Concentrée (5x) 

Solution de substrat 


Substrat : 5-Bromo-4-chloro-3- 

indolyl phosphate and 4-Nitrobluetetrazoliumchloride 

MONADS 24 (8) Prêt à l’emploi 2 - 8 °C 

Protéger des 

moisissures ! 

Stocker avec du 

dessicant ! 

Ne pas toucher 

avec les doigts! 

MONAC1/2/3 

3 flacons de 

50 µl 

MEONA 2 (1) 

flacon(s) 

à 15 ml 

MWBONA 

1 flacon 

50 ml 

MSONA 2 (1) 

flacon(s) 

à 15 ml 

Plateau d’incubation MONAP 3 (1) 

Fiche d’évaluation ONAA 1 (1) 

Prédilution ! 

dilution 1:20 avec 

la solution de 

lavage 1x 

Voire date de 

péremption 

2 – 8 °C 30 jours après 

ouverture ou 

jusqu'à la date 

de péremption 

Prêt à l’emploi 2 - 8 °C 30 jours après 

ouverture ou 



Diluer avant 

usage : 10 ml de 

solution de lavage 

concentrée dans 

40 ml d’eau 

distillée 

Prêt à l’emploi 2 - 8 °C 

Protéger de la 

lumière ! 

2 - 8 °C 30 jours après 

ouverture, 5 

jours après 

dilution 

30 jours après 

ouverture ou 



Les fiches de sécurité sont disponibles sur demande (voir également sur www.milenia-biotec.de). 

M atériel requis 

Agitateur horizontal 

Vortex 

Eau distillée 

Eprouvette graduée de 250 ml; flacon pour stocker la solution de lavage 

Pipettes de 10, 50 et 1000 µl 

Tubes à essais pour la prédilution des échantillons 

optionnel: automate de western-blot 


- 24 - 

Echantillon et Préparation 

Le sérum, le plasma (sous EDTA, citrate, héparine) et le liquide cérébrospinal (CSF) peuvent être 

employés pour ce test. Tous les échantillons de sérum et de plasma doivent être prédilués au 1:20 

avec la solution de lavage; ex: 10 µl d’échantillon mélangé à 190 µl de solution de lavage. Le CSF 

peut être utilisé sans dilution. À la fin de la réalisation du test la dilution finale de l´échantillon est 

1:2000. 

Pendant le transport, les échantillons peuvent être stockés à température ambiante pendant 24 

heures. Pour le stockage à court terme (5 jours maximum), les échantillons peuvent être conservés à 

2-8°C. Pour une conservation à plus long terme, aliquotez les échantillons et congelez les à < -18°C. 

Evitez des cycles de congélation / décongélation répétitifs. 

Avertissem ent et précautions d’em ploi 

Tous les réactifs de ce kit sont strictement réservés à un usage de diagnostic in vitro. Le personnel 

doit être formé et exercer les bonnes pratiques de laboratoire nécessaires au diagnostic in vitro. 

Respecter rigoureusement l'ordre des étapes de pipetage du protocole. 

Les réactifs du kit doivent être considérés comme potentiellement infectieux. Les échantillons issus de 

groupes de patients à risque doivent être identifiés et manipulés sous hotte à flux laminaire. 

M éthode et Principe du test 

Le test Onconeural Antigens IgG est un immuno-test dot blot pour la détection qualitative des 

auto-anticorps humains IgG anti antigènes neuronaux, HuD, Ri, Yo et Amphiphysine. Des protéines 

humaines recombinantes HuD, Ri, Yo, et Amphiphysine I e Amphyphisine II sont fixées sur une 

membrane de nitrocellulose. Des anticorps anti IgG humaines sont également fixés sur la membrane 

et servent de contrôle interne. 

L'échantillon prédilué est déposé à la pipette sur la membrane porteuse des antigènes. Pendant la 

première période d'incubation (90 minutes) les auto-anticorps présents dans l’échantillon du patient se 

fixent à leur antigène spécifique. Le lavage permet d’éliminer les éléments non liés. Un conjugué anti- 

IgG humaines couplé à de la phosphatase alcaline est ajouté et se fixe sur les immunocomplexes liés 

à la membrane. L'excédent de conjugué est éliminé par le lavage. En phase finale, les 

immunocomplexes sont visualisés par l'addition d’un substrat incolore (BCIP) qui forme un précipité 

bleu en leur présence. Les types d'anticorps présents dans l'échantillon sont alors identifiés en 

comparant leur position aux bandes de référence sur la fiche d'évaluation. 


- 25 - 

Réalisation du test 

Important : 

Ne pas échanger les composants de différents lots. 

Ne pas utiliser après la date de péremption. 

Tous les composants doivent être à température ambiante (18 – 28 °C) avant usage. 

Diluer les concentrés moins de 30 minutes avant usage. Bien mélanger, mais éviter la formation de 

mousse. 

Pipeter soigneusement pour éviter les contaminations par transfert ! 

1. Diluer les échantillons et les contrôles au 

1:20 avec la solution de lavage (ex: ajouter 

10 µl d’échantillon à 190 µl de solution de 

lavage); mélanger. 

2. En utilisant des pincettes, placer le nombre 

requis de bandelettes sur le plateau d’incubation 

(marquage vers le haut). 

3. Recouvrir les bandelettes de 1000 µl de solution 

de lavage et incuber 5 minutes à température 

ambiante (18-28°C) sous agitation. Ne pas 

aspirer, la solution de lavage reste dans les 

barquettes ! 

Réservoir 

Aspirer 

Chambre d´incubation 

Adjonction de réactifs 

4. Ajouter 10 µl d’échantillon prédilué (sérum/plasma) ainsi que les contrôles positif et négatif 

prédilués (remarque: ou 50 µl de liquide cérébrospinal non dilué) et incuber 90 minutes sous 

agitation. 

5. Aspirer le liquide et laver les bandelettes avec 1000 µl de solution de lavage. Mélanger et 

aspirer soigneusement. 

6. Ajouter 1000 µl de solution de lavage et agiter 5 minutes. Aspirer la solution de lavage. 

Répéter l’opération de lavage encore une fois. 

7. Ajouter 1000 µl de conjugué et incuber 60 minutes sous agitation. 

8. Aspirer le liquide et laver les bandelettes avec 1000 µl de solution de lavage. Mélanger et 

aspirer soigneusement. 

9. Ajouter 1000 µl de solution de lavage et agiter 5 minutes. Aspirer la solution de lavage. 

Répéter l’opération de lavage encore une fois. 

10. Ajouter 1000 µl de substrat et incuber 5-15 minutes sous agitation. Vérifier le développement 

de la couleur après 5 minutes. Le contrôle interne doit être clairement visible sur chaque 

bandelette. La bandelette contrôle positif doit présenter 5 lignes colorées nettement visibles. 

11. Aspirer le substrat et laver deux fois avec 1000 µl d’eau distillée. 

12. Retirer les bandelettes du portoir en utilisant des pincettes. Laisser sécher à l’air sur du papier 

absorbant pendant 30 minutes. 

13. Interpréter le profil des bandelettes en vous référant à la fiche d’évaluation fournie avec le kit. 


- 26 - 

Interprétation des Résultats 

Après séchage complet, placer les bandelettes sur une feuille, numérotation vers le haut, en alignant 

le contrôle interne. Fixer les extrémités des bandelettes avec du ruban adhésif (voir l'exemple 

d'interprétation). La position des bandes d'antigène peut légèrement varier d’un lot à l’autre, mais elles 

sont toujours comprises entre les marques indiquées par la fiche d'évaluation. La couleur bleue des 

bandes d'antigènes peut pâlir si les bandelettes sont exposées trop longtemps à l'air et à la lumière. 

M: Marqueur de position pour les antigènes. 

1. contrôle négatif. 

2. contrôle positif. 

3. contrôle valeur seuil 

4-8. exemples de sérums de patient. 

Antigen M 1 2 3 4 5 6 7 8 

Amphiphysine I 

Amphiphysine II 

Yo 

Ri 

HuD 

Contrôle interne 

Les résultats du test sont interprétés en comparant les localisations et les intensités de couleur des 

bandes à celles du contrôle valeur seuil fourni avec le kit. 

Résultat positif 

Seuls les échantillons ayant une intensité plus 

forte que celle du signal obtenu avec le contrôle 

valeur seuil du kit sont clairement positifs. 

Résultat négatif 

Pas de coloration ou une coloration plus faible 

que le contrôle valeur seuil est interprétée 

comme un résultat négatif. 

Par principe, les résultats de cet immuno-dot blot doivent être interprétés uniquement en fonction de 

l’état clinique du patient et des autres données diagnostiques et épidémiologiques. 


- 27 - 

Contrôle Q ualité 

Le contrôle interne de chaque bande doit être de couleur intense. Le contrôle négatif doit seulement 

présenter une coloration au niveau du contrôle interne; dans de très rares cas des lignes d’intensité 

très faible peuvent être visibles, sans aucune incidence sur le résultat. 

Le contrôle positif doit toujours présenter des colorations intenses pour les cinq antigènes (Yo, Ri, Hu- 

D et Amphiphysine I/II) et pour le contrôle interne, sinon le test ne peut être interprété. 

Caractéristiques du test 

Echantillons : 

Temps de manipulation : 

Spécificité : 

sérum, plasma, liquide cérébrospinal (CSF) 

3h 30 min. 

Sur 100 donneurs sains testés aucun n’est apparu positif. 


- 28 - 

Protocole court: O nconeural Antigens IgG 

(Tous les volumes sont donnés en µl) 

Etapes Solution Echantillon Contrôles 

négatif/positif/ valeur seuil 

Ajouter sur les bandelettes solution de lavage 1000 1000 

Incuber 5 min à température ambiante 

(18-28 °C) sous agitation; 

ne pas aspirer la solution! 

Ajouter 

Ajouter 

Incuber 90 min à température ambiante 

(RT) sous agitation 

Aspirer, laver les bandelettes avec 1000 

µl de solution de lavage, mélanger 

doucement et aspirer de nouveau. 

Ajouter 1000 µl de solution de lavage sur 

chaque bandelette et incuber 5 min à 

RT sous agitation; aspirer 

Répéter l’opération une fois 

Contrôles 

prédilués 

échantillons 

prédilués 

(CSF pur) 

- 10 

Ajouter Conjugué 1000 1000 

Incuber 60 min à RT sous agitation 

Aspirer; laver les bandelettes avec 1000 

µl de solution de lavage mélanger 

doucement et aspirer 

Ajouter 1000 µl de solution de lavage 

sur chaque bandelette et incuber 5 min à 

RT sous agitation; aspirer 

Répéter l’opération une fois 

Ajouter Substrat 1000 1000 

Incuber 5 – 15 min à RT sous agitation 

Aspirer et laver les bandelettes 2 fois 

avec 1000 µl d’eau distillée. 

Enlever les bandelettes avec des 

pincettes et sécher à l’air et sur papier 

absorbant 30 min 

Analyser le profil des bandelettes en 

utilisant la fiche d’évaluation 

Pour plus de détails voir page 25. 

10 

(50) 

-

MKONA 1 (Z) Onconeural Antigens IgG - Milenia Biotec GmbH

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