Rapporto annuale 2007 - Istituto di Ricerche Farmacologiche Mario ...

IRFMN
In questo studio abbiamo valutato se l’attivazione locale delle cellule endoteliali dovuta alla Stx
promuove la deposizione del complemento attraverso la P-selettina.
I nostri risultati mostrano un marcato aumento dei depositi di C3 sulle cellule endoteliali umane
della microcircolazione (HMEC-1) in coltura incubate con Stx1 e poi perfuse ad alto sforzo di
taglio con siero umano come fonte di complemento. Sia la Stx1 che la Stx2 alla concentrazione di
50 pM inducono un marcato deposito granulare di C3 che è uniformemente distribuito sulla
superficie endoteliale. Per escludere ogni possibile effetto dovuto alla contaminazione di
lipopolisaccaride della preparazione di Stx abbiamo valutato l’effetto della Stx1 purificata (Stx1p)
sulla deposizione di C3. I risultati mostrano che sia la Stx1p che la Stx1 non purificata inducono
aumenti simili nel deposito di C3.
Poiché la Stx aumenta l’espressione sulla superficie endoteliale di P-selettina, una molecola
adesiva che può interagire direttamente con il C3, abbiamo studiato il ruolo di questa proteina nel
mediare la deposizione di C3 sull’endotelio in risposta alla Stx. Il blocco funzionale della P-
selettina con un anticorpo specifico riduce in modo marcato il deposito di C3 indotto da Stx.
Questi dati suggeriscono che la Stx induce depositi di C3 sull’endotelio via P-selettina. I depositi
di C3 indotti da Stx sono completamente aboliti quando il siero umano viene trattato con il
recettore 1 del complemento solubile (sCR-1) che inibisce sia la via classica che la via alternativa
del complemento. Il trattamento con l’inibitore della via classica EGTA non modifica il deposito
di C3 indicando che la Stx induce l’attivazione della via alternativa del C. Studi ulteriori
serviranno per stabilire se esiste un rapporto di causa-effetto tra l’attivazione della via alternativa
del complemento e la trombosi della microcircolazione nella D+ HUS.
Laboratorio di Modelli Sperimentali di Malattie Renali
Ruolo del recettore Toll-like 9 nello sviluppo del danno tubulo-interstiziale
nella nefrite lupica
In collaborazione con l’Unità di Terapia Genica
Il recettore Toll-like 9 (TLR-9), capace di legare brevi sequenze di DNA (CpG DNA), è
coinvolto nell’attivazione delle cellule del sistema immune nel lupus eritematoso sistemico. Il
nostro studio ha voluto investigare se, nella nefrite lupica, l’espressione del TLR-9 in cellule
residenti renali fosse correlata allo sviluppo del danno tubulo-interstiziale. Attraverso
microdissezione laser combinata a Real Time PCR effettuata sul tessuto renale di topi lupus
NZBxNZW analizzati a differenti stadi della malattia, abbiamo osservato una marcata
espressione di TLR9 localizzata soprattutto nelle cellule del tubulo prossimale. I livelli di TLR-
9 correlavano con la proteinuria e il danno tubulo-interstiziale. Il trattamento dei topi lupus con
seliciclib, un inibitore delle cicline che riduceva la proteinuria e il danno strutturale del rene
determinava anche una marcata riduzione di TLR-9 nei tubuli. In accordo con questi risultati,
esperimenti di immunoistochimica effettuati su biopsie renali di pazienti affetti da nefrite lupica
hanno evidenziato un forte segnale di TLR-9 nei tubuli che correlava con il danno tubulointerstiziale.
Per identificare il fattore responsabile dell’attivazione di TLR9, abbiamo esposto cellule del
tubulo prossimale in coltura al siero di pazienti con lupus ed abbiamo osservato che il DNA
contenuto negli immunocomplessi purificati dal siero era in grado di indurre l’espressione di
TLR-9. Questo effetto era inibito in maniera significativa dalla pre-esposizione delle cellule a
brevi sequenze oligonucleotidiche ricche di CCGG capaci di antagonizzare in modo specifico il
legame di CpG DNA al recettore, indicando che il DNA contenuto negli immunocomplessi era
indispensabile per la stimolazione di TLR-9.
Questi dati indicano che l’attivazione tubulare di TLR-9 ha un ruolo importante nella
patogenesi dell’infiammazione e del danno tubulo-interstiziale nella nefrite lupica e
suggeriscono TLR-9 come nuovo target per future terapie.
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RAPPORTO ATTIVITA’ 2007