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Sezione III: Attività per progetti
a) Produzione di citochine: verrà misurata la produzione di IFNg, TNF-a,
IL2, IL4, IL17, in seguito a stimolazione con stimoli policlonali
(aCD3+aCD28, PMA+ionomicina, LPS) da parte delle popolazioni cellulari
che esprimono i recettori CB1 e/o CB2, in presenza di agonisti e antagonisti.
La produzione di citochine verrà misurata sia in citofluorimetria mediante
intracellular staining che in ELISA; in quest’ultimo caso verranno utilizzate
popolazioni cellulari omogenee ottenute mediante cell sorting.
b) Proliferazione cellulare: gli effetti degli agonisti e antagonisti dei recettori
CB1 e CB2 sulla proliferazione cellulare indotta mediante stimolazione
policlonale verrà misurata sia in citofluorimetria (utilizzando saggi di diluizione
del CFSE) che mediante incorporazione di timidina.
Studio fenotipico e funzionale dei recettori CB1 e CB2 nei pazienti affetti da Sclerosi
Multipla. Le informazioni ottenute nei primi due punti del progetto verranno
quindi trasferite ai pazienti affetti da SM.
Verranno selezionati 30 pazienti con la forma relapsing-remitting della
malattia, 20 con la forma secondary progressive, e 10 con la forma primary
progressive. In caso di ricadute cliniche, verrà effettuato un ulteriore prelievo
di sangue. Da ciascun paziente verranno prelevati 30 ml di sangue, e le cellule
mononucleate verranno isolate per effettuare gli studi sopradescritti. I dati
ottenuti sull’espressione dei recettori CB1 e CB2 da parte delle diverse popolazioni
cellulari e sull’effetto della stimolazione con agonisti e antagonisti sulla
produzione di citochine e sulla proliferazione cellulare verranno paragonati ai
dati ottenuti sui donatori sani, per valutare la possibilità che nel corso di una
malattia autoimmune, come la sclerosi multipla, vi sia una diversa distribuzione
o una diversa funzionalità di tali recettori a livello delle cellule del
sistema immunitario.
RICADUTE APPLICATIVE DEL PROGETTO
Alla fine del progetto, ci si attende di poter individuare uno o più marcatori
diagnostici della Sclerosi Multipla e/o uno o più bersagli per terapie innovative
di tale patologia. Entrambi i tipi di prodotto possono dar vita a brevetti
commercializzabili, sui quali costruire un’attività imprenditoriale di respiro
nazionale ed internazionale. Infatti, ci si può aspettare che tutte le Agenzie
preposte alla sorveglianza, custodia e miglioramento della salute pubblica trovino
tali prodotti di grande valore per la società.
A questo proposito, può essere utile ricordare che la terapia con interferoni,
oggi la più comunemente usata, costa al Sistema Sanitario circa 25.000
euro all’anno, per ciascun paziente. A questo valore va poi aggiunto il costo
delle ore lavorative perse da ciascun soggetto, ed il costo in termini di perdita
di autonomia e capacità relazionale dovuto alla malattia. Infine, dallo studio
della SM ci aspettiamo di ottenere informazioni utili per approfondire la
nostra comprensione di altre patologie neurodegenerative/neuroinfiammatorie
assai rilevanti per la popolazione umana, quali morbo di Alzheimer, còrea
di Huntington, morbo di Parkinson e Sclerosi Laterale Amiotrofica.
812 2009