0-TESTO COMPLETO.pdf - Fondazione Santa Lucia

Sezione III: Attività per progetti
con anticorpi specifici [Maccarrone et al. (2005) J Cell Sci 118:4393-4404]. La
posizione intracellulare dei vari elementi del sistema endocannabinoide verrà
visualizzata al microscopio confocale Leica TCS SP (Leica Microsystems,
Wetzlar, Germania), usando il programma LAS AF (Leica Microsystems) per
l’acquisizione delle immagini [Maccarrone et al. (2005) J Cell Sci 118:4393-
4404].
Analisi statistica
I dati delle analisi biochimiche, ripetute almeno tre volte in doppio, verranno
analizzati mediante test non-parametrici come il test U di Mann-Whitney,
usando il programma InStat 3 (GraphPAD Software for Science, San
Diego, CA).
U.O.2 – All’interno dell’U.O.2, lo studio sul sistema endocannabinoide da
parte del Centro SM si svilupperà in diverse direzioni e con tecniche sperimentali
complementari:
– Indagine del coinvolgimento del sistema endocannabinoide nelle
diverse fasi e nelle diverse varianti cliniche della SM. Abbiamo recentemente
dimostrato [Centonze et al. 2007] che durante la fase di attività clinica della
SM, il sistema endocannabinoide si attiva all’interno del cervello e nelle cellule
immunitarie, così da portare ad un notevole aumento della produzione di
anandamide. Intendiamo proseguire tale studio validando sul liquor e sangue
periferico di pazienti con SM l’utilità del dosaggio di tale endocannabinoide
come indicatore delle diverse fasi e dei diversi sottogruppi di malattia (RR, SP
e PP).
– Strettamente legato al punto precedente, intendiamo indagare il ruolo
funzionale della anandamide prodotta in corso di SM. A tale scopo, indurremo
la SM sperimentale in topi geneticamente modificati, in modo da esprimere
livelli di anandamide fino a 15 superiori alla norma. In tali topi valuteremo
se l’induzione della SM sperimentale causerà deficit neurologici ed alterazioni
neurofisiologiche più gravi o meno gravi che nei topi di controllo. In
tal modo, verificheremo se l’anandamide esercita un ruolo protettivo oppure
tossico in corso di SM. Esperimenti simili verranno condotti in topi che presentano
aumentati livelli di anandamide solo nel sistema immunitario ma
non nel cervello, allo scopo di verificare se l’eventuale effetto protettivo di tale
endocannabinoide sullo sviluppo della SM è dipendente o meno dalla sua
azione immunomodulante oppure da quella puramente neuroprotettiva. Il
ruolo dei recettori nello sviluppo della SM verrà inoltre valutato attraverso
l’induzione di SM sperimentale in topi transgenici che mancano di specifici
recettori per gli endocannabinoidi (CB1, CB2), o che mancano dei recettori
CB1 solo su specifiche popolazioni neuronali (neuroni glutammatergici o
GABAergici).
– Valuteremo inoltre il ruolo della possibile interazione tra endocannabinoidi
e neurotrofine in pazienti con SM. Esiste una notevole mole di dati scientifici
a favore del coinvolgimento delle neurotrofine, e soprattutto del BDNF
(brain-derived neurotrophic factor) nel danno neurodegenerativo [Hennigan et
al. 2007]. Dati più recenti provenienti anche dal nostro gruppo, inoltre, hanno
808 2009