0-TESTO COMPLETO.pdf - Fondazione Santa Lucia

Neuroscienze sperimentali
lulari di neuroblastoma umano SH-SY5Y. In seguito ad espressione eterologa
del recettore, ne verificheremo:
• la presenza, attraverso PCR ed immunofluorescenza;
• la funzionalità attraverso misurazioni fluorimetriche di Ca2+ intracellulare.
Analizzeremo quindi gli effetti della stimolazione del recettore P2Y6 con
il ligando specifico UDP:
• sul ciclo cellulare, tramite incorporazione di propidio di ioduro ed analisi
citofluorimetrica;
• sull’induzione di apoptosi/necrosi, tramite marcatura con annessina/
propidio di ioduro;
• sulla frammentazione nucleare, tramite marcatura con Hoechst;
• sulla modulazione di parametri intracellulari quali attivazione di
caspasi 3 e 7, rilascio di citocromo c dai mitocondri, attivazione dell’enzima
MnSOD.
I risultati che conseguiremo durante il primo anno ci permetteranno
quindi di comprendere come le dinamiche recettoriali di tipo purinergico P2,
ed in particolare il coinvolgimento della subunità recettoriale P2Y6, possano
modulare alcuni eventi di tipo fisiopatologico in cellule tumorali di neuroblastoma
umano.
2009 397