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Sezione III: Attività per linea di ricerca corrente C
degenerazione dei neuroni dopaminergici. In particolare, andremo a valutare,
per mezzo di sostanze fluorescenti che si localizzano all’interno dei mitocondri,
la variazione di calcio mitocondriale, durante applicazione di 6-OHDA.
• Durante il terzo anno, sulla base dei risultati ottenuti, studieremo il
coinvolgimento dei mitocondri in altri modelli di deprivazione energetica
come l’ipossia, che, analogamente alle suddette tossine, va ad interferire con
la corretta funzionalità mitocondriale.
Tecniche utilizzate
1) Elettrofisiologia. Utilizzeremo le procedure standard già descritte
[Guatteo et al. 2000; Guatteo et al. 2005] per la preparazione delle fettine
acute del mesencefalo di ratto. Le registrazioni di patch-clamp sono effettuate
su neuroni visualizzati mediante un sistema di contrasto differenziale interferenziale
a infrarossi (IR-DIC), per mezzo di un obiettivo a immersione 40X e
una telecamera (Hamamatsu, Japan).
2) Microfluorimetria. Le misurazioni di [Ca2+] intracellulare verranno
ottenute da neuroni caricati rispettivamente con Fura-2 (0.25 mM, Molecular
Probes) aggiunti alla soluzione di riempimento dell’elettrodo di registrazione.
La sua eccitazione si realizzerà attraverso luce UV emessa da un monocromatore
(Till Photonics) a 340 e 380 nm. La luce emessa sarà monitorata con un
filtro a 500 nm e captata da una camera CCD. La misurazione del potenziale
mitocondriale sarà effettuata per mezzo della rodamina 123 e quella del calcio
mitocondriale per mezzo di Rhod-2.
3) Immunoistochimica per misurare la quantità di rilascio di citocromo c.
– Berretta N, Freestone PS, Guatteo E, de Castro D, Geracitano R, Bernardi G, Mercuri
NB, Lipski J (2005) Neurotoxicology 26(5): 869-881.
– Damier P, Hirsch EC, Agid Y, Graybiel AM (1999) Brain 122: 1421-1436.
– Dauer W, Przedborski S (2003) Neuron 39(6): 889-909. Review.
– Guatteo E, Chung KK, Bowala TK, Bernardi G, Mercuri NB, Lipski J (2005) J Neurophysiol
94(5): 3069-3080.
– Guatteo E, Fusco FR, Giacomini P, Bernardi G, Mercuri NB (2000) J Neurosci
20(16): 6013-6020.
– Liss B, Roeper J (2001) News Physiol Sci 16: 214-217. Review.
– Schapira AH (1999) Biochim Biophys Acta 1410(2): 159-170. Review.
C.2.5 – Modulazione sinaptica da parte di sostanze ad attività
transmettitoriale sui neuroni dopaminergici mesencefalici:
implicazioni nel controllo del movimento e nell’attenzione
(Nicola Biagio Mercuri)
Anno d’inizio: 2009
Durata: 36 mesi
Parole chiave: Dopamina, trace amine, endocannabinoidi, modafinil, gangli
della base.
382 2009