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Borse di studio
vità di questo recettore in particolare modo nei neuroni spinosi dello striato,
popolazione neuronale più vulnerabile alla corea di Huntington.
In studi precedenti abbiamo descritto la distribuzione dei canali TRPC
in condizioni fisiologiche [Fusco et al. (2004) Neurosci lett 365(2): 137-142;
De March et al. (2006) Neurosci Lett 402(1-2): 35-39; Martorana et al.
(2006) Eur J Neurosci 24(3): 732-738; Giampà et al. (2007) Neurosci Lett
424(3): 170-174]. Nel tentativo di capire una relazione tra l’aumento della
tripletta CAG dell’huntingtina mutata (mhtt) e i livelli di espressione dei
canali TRPC, l’obiettivo di questo studio è stato quello di determinare l’espressione
genica di questi canali nei modelli murini per la corea di Huntington
(topi transgenici R6/1 e R6/2). È stata valutata la quantità dell’RNA
messaggero nelle fasi presintomatiche e sintomatiche della malattia
mediante quantitative reverse-PCR.
Materiali e metodi – Per questo studio sono stati utilizzati topi transgenici
R6/1 e R6/2. Gli animali sono stati sacrificati, previa anestesia con 3,3% di
clorario idrato, nelle fasi presintomatiche e sintomatiche della malattia. I
cervelli sono stati rimossi e da questi isolati lo striato e la corteccia. L’RNA
totale è stato estratto dalle aree di interesse, mediante il solvente organico
TRIZOL. 1mg di mRNA totale è stato trascritto in una molecola di DNA
(cDNA) mediante il kit “Superscript III reverse trascriptase ” (Invitrogen). La
quantificazione dell’mRNA maturo per i diversi TRPC ed isolato dallo
striato o corteccia è stata effettuata mediante una PCR quantitativa in
tempo reale (qRT-PCR) utilizzando il software LightCycler thermal cycler
system (Roche Applied Science).
Risultati – Da questo studio è emerso che i livelli di mRNA per i TRPC presi
in esame (TRPC1-7) sono molto più alti nella corteccia che non nello striato,
sia nei topi WT che nei modelli transgenici per corea di Huntington. È stato
osservato anche un effetto del tempo sull’espressione genica di questi canali; i
livelli di mRNA per i TRPC aumentavano con il progredire della patologia. Un
effetto del genotipo invece è stato osservato solo per l’isoforma TRPC3. I livelli
di mRNA per il TRPC3 diminuivano in maniera drastica nei topi transgenici
R6/1 rispetto ai topi WT e al modello transgenico R6/2.
Conclusioni – I TRPC sono canali permeabili al calcio e permettono l’influsso
di questo ione attraverso la membrana plasmatica mediante l’attivazione della
PLC [Putney (2001) J Cell Sci 114: 2223-2229]. L’attivazione dei canali TRPC è
coinvolta nell’espressione del fattore neurotrofico BDNF. In relazione al
BDNF, l’huntingtina mutata porta ad una riduzione dell’espressione genica
per il BDNF e la stessa proteina può influenzare l’attività dei recettori per la
PLC. Questo studio mostra per la prima volta che l’espressione dell’mRNA per
i TRPC3 è diminuita nel modello murino R6/1 e che questo potrebbe essere
legato alla presenza della proteina mutata nel modello transgenico. L’mhtt
potrebbe portare ad una disfunzione nell’omeostasi del calcio intracellulare
influenzando l’espressione dei canali per il calcio TRPC3 e portare di conseguenza
a morte cellulare.
Questo studio dimostra che questi canali potrebbero rappresentare una
potenziale strategia terapeutica in molte patolgie del sistema nervoso centrale.
2009 143