0-TESTO COMPLETO.pdf - Fondazione Santa Lucia

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Borse di studio brana, le cellule corticali sono state stimolate con una corrente di +60 pA ed è stato analizzato il primo potenziale d’azione e la frequenza di insorgenza dei potenziali d’azione. Nei neuroni trattati con i BCAA per 6 giorni, il tempo di soglia (26.31 ± 17.91 ms) e il potenziale di soglia (-26.31 ± 4.15 mV, n=14) del primo potenziale d’azione differivano significativamente rispetto ai Controlli (43.67 + 22.43 ms, -29.24 + 4.38 mV, n= 39; Student t-test, P
Sezione II Questi dati suggeriscono che l’assunzione di integratori alimentari a base di BCAA può essere dannosa, essendo in grado di alterare le proprietà elettrofisiologiche dei neuroni corticali. ANALISI DELLA FOSFORILAZIONE DI CASPASI-8 NELLA TUMORIGENESI E NELLA METASTATIZZAZIONE (Caterina Cenci) Il progetto di lavoro svolto si è basato sull’analisi dei meccanismi che regolano il ruolo non apoptotico di Caspasi-8, una proteina principalmente nota per svolgere un ruolo essenziale nell’attivazione dei processi che inducono alla morte cellulare. Cellule in cui Caspasi-8 è assente o inattiva sono resistenti all’apoptosi indotta dai ligandi per i recettori di morte (Fas e TRAIL). Sorprendentemente però, diversi studi hanno rilevato un ruolo non apoptotico per questa proteina [per delle reviews Maelfait, Beyaert (2008) Biochem Pharmacol 76: 1365-1373; Frisch SM (2008) Cancer Res 68: 4491-4493] evidenziando una nuova funzione della Procaspasi-8 nel promuovere l’adesione e la motilità cellulare, processi che contribuiscono in modo significativo alla metastatizzazione dei tumori. Uno studio precedente ha indicato Caspasi- 8 come un nuovo substrato delle chinasi appartenenti alla famiglia Src [Cursi et al. (2006) EMBO J 19: 931-941]. Src, che risulta aberrantemente attiva in diversi tipi di tumori, fosforila Caspasi-8 alla Tirosina 380 (Y380), un residuo aminoacidico situato nella regione di legame fra la subunità maggiore e quella minore di Procaspasi-8. La fosforilazione di Y380 ad opera di Src (Caspasi-8 P-Y380) interferisce col processamento della Procaspasi-8 e ne impedisce l’attività proapoptotica. Src non è invece in grado di bloccare l’induzione dei processi apoptotici in cellule in cui è espressa una variante di Caspasi-8 che non può essere fosforilata (Caspasi-8Y380F). Ruolo della fosforilazione di Caspasi-8 nei processi di ancoraggio e migrazione cellulare – Diversi studi hanno evidenziato un ruolo della Procaspasi-8 nei processi di migrazione cellulare. Sulla base di queste osservazioni è stato scelto di analizzare il possibile ruolo della forma fosforilata di Caspasi-8 nella promozione della crescita tumorale e della metastatizzazione. Per questo progetto sono stati prodotti cloni di cellule in cui l’espressione della forma wild-type o di quella non fosforilabile di Caspasi-8 è regolata tramite induzione con doxiciclina. È stato scelto di utilizzare la linea DLD1R, cellule derivate da un tumore del colon. Queste sono caratterizzate da livelli estremamente bassi di Caspasi-8 e dalla presenza di Src attivo, da cui ne segue una resistenza all’apoptosi indotta da Fas e TRAIL. I vettori inducibili pSMVcaspasi-8WT e pSMVcaspasi-8Y380F sono stati clonati in laboratorio e trasfettati nelle cellule che quindi sono state selezionate stabilmente e caratterizzate per la capacità di esprimere Caspasi-8 in seguito a trattamento con doxiciclina. Esperimenti di immunoprecipitazione anti-Caspasi-8 e conseguente immuno-detezione con anticorpo anti fosfo-tirosina hanno permesso di confermare che Src endogeno fosforila la forma wild type ma non quella mutata in Y380 della proteina. Inoltre è stata calcolata l’efficienza di induzione della morte cellulare in seguito a trattamento di queste cellule con TRAIL. Ciò è stato effettuato tramite analisi al FACS dell’incorporazione cellulare di Propidio Ioduro ed ha 128 2009
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FONDAZIONE SANTA LUCIA ISTITUTO DI
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TEL.14 - MANIPULATION OF SEROTONIN
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UMD.1 - Anti-staphylococcal activit
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UMD.1 - Anti-staphylococcal activit
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Finito di stampare nel mese di sett
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