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Valutazione neurofisiologica e immuno-molecolare in topi EAE e in pazienti con SM…
Verranno prelevati inoltre monociti e macrofagi isolati dalla milza e/o da
lavaggi peritoneali dagli animali sacrificati per lo studio dell’espressione della
citochina IL-18 e delle molecole ad essa correlate. In seguito a stimolazione in
vitro con molecole infiammatorie (es. LPS) i sovranatanti e le cellule stesse
verranno analizzati per valutare l’espressione di IL-18, IL-18 Binding Protein
e delle due catene recettoriali di IL-18, mediante PCR quantitativa (Real Time
PCR), saggi immunoenzimatici e citofluorimetrici. Allo scopo di verificare l’efficacia
del sistema IL-18 quale possibile marcatore di patologia nell’EAE i
risultati ottenuti da questa attività verranno comparati con i risultati derivati
dagli altri studi di questo stesso WP.
Studio biomolecolare – Verrà valutata l’insorgenza di tratti patologici
molecolari ed istologici in tessuti ex-vivo di origine corticale e sottocorticale e
cellule primarie corticali e sottocorticali derivate da topi con EAE nelle varie
fasi di malattia con deficit cognitivi e non. Ad una prima analisi si verificherà
la presenza di alterazioni morfologiche a livello dei processi neuritici. Dal
punto di vista molecolare verranno quindi verificati i seguenti parametri di
stress e morte cellulare:
– attivazione di calpaine dopo 20 giorni di incubazione;
– analisi dei tratti tipici dell’apoptosi (attivazione delle caspasi, livelli dell’apoptosoma
e frammentazione del DNA);
– incremento delle proteine di risposta allo shock termico hsp70 e hsp27
e decremento della proteina di risposta allo stress ossidativo MnSOD;
– iperfosforilazione di tau;
– localizzazione sub-cellulare della catalasi;
– formazione di autofagolisosomi in risposta a deprivazione di nutrienti
(mediante immunoistochimica per le proteine traslocanti Beclin1 e LC3 e
analisi morfologica ultrastrutturale per EM).
WP 2 – Selezione, reclutamento pazienti e test cognitivi – Per il secondo
obiettivo dello studio, arruoleremo 60 pazienti con SM afferenti al Centro per
la Diagnosi e Cura della SM dell’Università di Tor Vergata diretto dal Dr. Centonze.
In tali pazienti intendiamo effettuare un’analisi dettagliata della eventuale
relazione esistente tra attività clinico-radiologica di malattia, presenza o
assenza di deficit cognitivi e marcatori immunologici correlati. Tali pazienti
saranno valutati clinicamente (Expanded Disability Status Scale (EDSS) ogni
3 mesi), radiologicamente (Risonanza Magnetica Cerebrale con e senza gadolinio
ogni 12 mesi). Saranno effettuati prelievi ematici per le valutazioni
immunofenotipiche delle cellule linfocitarie in pazienti nelle varie fasi di
malattia con e senza deficit cognitivi. La durata complessiva dello studio sarà
di 24 mesi.
Criteri d’inclusione:
– Pazienti con SM definita secondo i criteri di Mc Donalds.
– Età: 18-50 anni.
– Durata di malattia: 2-20 anni.
2006 787