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Valutazione neurofisiologica e immuno-molecolare in topi EAE e in pazienti con SM…
• Validare markers fenotipici o funzionali utili a identificare nuove sottopopolazioni
di linfociti T regolatori nei topi EAE.
• Studiare l’attività funzionale dei recettori NMDA del glutammato e la
frequenza e/o ampiezza delle correnti postsinaptiche eccitatorie spontanee
(sEPSCs) registrate nello striato dei topi con EAE.
• Identificare nell’ambito delle molecole correlate al sistema dell’interleuchina-18,
potenziali marcatori biologici e funzionali associati a deficit cognitivi
nel modello animale di Sclerosi Multipla, rappresentato dai topi EAE.
Criteri e indicatori per la verifica dei risultati intermedi
Per ciascuna Unità Operativa, gli indicatori più affidabili per la verifica dei
risultati intermedi consisteranno nella riproducibilità degli stessi e nell’eventuale
consistenza di tali dati con quelli esistenti nella letteratura e ottenuti in
altri laboratori. Di cruciale importanza sarà perciò la discussione, tramite
seminari, visite, e partecipazioni a convegni, con colleghi impegnati in attività
di ricerca simili, allo scopo di individuare precocemente eventuali discrepanze
nei risultati. Un ‘work in progress’ durante un incontro tra i responsabili di
tutte le U.O. alla fine dei primi 12 mesi sarà organizzato dal coordinatore per
verificare gli obiettivi proposti e ottimizzare le tecniche impiegate.
METODOLOGIA
Experimental Allergic Encephalomyelitis (EAE) in mice – Useremo due tipi
differenti di EAE. Indurremo EAE cronico progressiva in topi C57/BL6
mediante immunizzazione con 200µg/topo di MOG35-55 (Espikem, Firenze,
Italia). Gli antigeni saranno emulsionati 1:1 in adiuvante completo di Freund
(contenente IFA più 4 mg/ml Mycobacterium Tuberculosis; ceppo H37, Difco)
e 300 µl di temulsione finale saranno iniettati nei fianchi e alla base della
coda. Inietteremo tossina pertussica (500 ng per topo) il giorno dell’immunizzazione
e 48 ore dopo. EAE ricorrente remittente in topi SJL mediante due
immunizzazioni, a distanza di 7 giorni, con 300µg/topo di PLP139-151 (Espikem,
Firenze, Italia). Gli antigeni saranno emulsionati 1:1 in adiuvante completo
di Freund (contenente IFA più 4 mg/ml Mycobacterium Tuberculosis;
ceppo H37, Difco) e 100 µl di temulsione finale saranno iniettati nei fianchi.
Inietteremo tossina pertussica (500 ng per topo) il giorno della prima immunizzazione
e 24 ore dopo. Peso e punteggio clinico saranno valutati quotidianamente
(0 = sano, 1 = paresi coda, 2 = paresi arti posteriori, 3 = plegia arti
posteriori, 4 = tetraparalisi, 5 = moribondo).
Test comportamentali – (a) Radial maze: l’apparato consiste di otto braccia
che partono da una piattaforma ottagonale. I topi saranno posti al centro
e potranno raggiungere cibo messo al termine degli otto corridoi. Per
ogni trial, verranno registrati automaticamente il numero delle scelte, il
numero delle scelte corrette prima del primo errore, il numero degli errori,
gli errori di omissione, il tempo decisionale tra le scelte, la distanza percorsa.
La durata ideale dei trial deve essere stabilita. (b) Fear-conditioning:
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