Solo testo.pdf - Fondazione Santa Lucia

Sezione III: Attività per progetti
d’onda è filtrata alternativamente a 340 e 380 nm. La luce di emissione viene
filtrata a 500 nm ed è rilevata da una camera CCD (Photonic Science, UK). Le
immagini sono analizzate a registrazione ultimata con il software Ionvision
(ImproVision, UK), che gira su un PowerMac 8100. Le immagini ratiometriche
sono il risultato del rapporto tra coppie di immagini acquisite a 340 e 380
nm, sottratte del background (fluorescenza di fondo misurata in aree prive
della fluorescenza specifica dell’indicatore). L’andamento nel tempo dei valori
ratiometrici è valutato sulle “ regioni d’interesse ” (pixel che mostrano almeno
il 20-30% della fluorescenza specifica massima) che includono il soma ed i
dendriti. I valori ratiometrici sono trasformati in valori di concentrazione
ionica usando il metodo di Grynkiewicz et al. La Kd apparente per l’indicatore
è calcolata ponendo tra due vetrini copri-oggetto distanziati da pezzetti di
vetrino soluzioni contenenti l’indicatore e concentrazioni note di ione libero e
misurandone i valori ratiometrici (Fura-2 Calcium Imaging Calibration Kit,
Molecular Probes, The Netherlands).
Analisi statistica – I dati vengono analizzati con il test del t di Student (per
osservazioni appaiate o non appaiate) o con analoghi non parametrici, come
il test di Wilcoxon. Le caratteristiche dei potenziali d’azione e delle curve corrente-voltaggio
in differenti condizioni sperimentali sono studiate mediante
un fast chart recorder ed un sistema digitale (Nicolet System 400: Benchtop
Waveform Acquisition System).
736 2006