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Sezione III: Attività per progetti
Come già descritto per la prima fase, anche nella seconda fase tali risultati
comportamentali saranno di complemento ed integrati con il lavoro che
svolgerà la U.O. 4. Difatti, la U.O. 4 utilizzerà gli animali del ceppo R6/1 già
sottoposti ai test descritti sopra. Saranno effettuate registrazioni elettrofisiologiche
da neuroni spinosi e da interneuroni colinergici. Si analizzeranno le
proprietà intrinseche di base di queste cellule ed ogni variazione sarà segnalata.
Inoltre nelle varie fasi di progressione di malattia saremo in grado di
analizzare le possibili alterazioni di plasticità sinaptica striatale, inducendo
sia LTD che LTP.
La seconda fase vedrà impegnata l’U.O. 5 nel trattamento cronico degli
animali con tricloroetilene e dalla tetraidro-β-carbolina clorinata (TaClo). Per
lo studio della tossicità cronica, gli animali saranno trattati con TaClo (0.2
mg/kg/die) per via i.p. per sette settimane. Sarà valutata l’attività motoria
spontanea tramite i test di “ open field ” a vari tempi dopo la intossicazione
cronica. La risposta locomotoria dopo somministrazione di apomorfina sarà
valutata soltanto negli animali trattati cronicamente, due-tre settimane prima
del sacrificio. Gli animali saranno sacrificati una settimana, un mese e tre
mesi dopo il periodo di somministrazione. Come già descritto per la prima
fase, nello studio degli effetti acuti di tali tossine, anche dopo intossicazione
cronica, i cervelli degli animali trattati verranno sottoposti sia ad analisi
immunoistochimica che a valutazione tramite microscopia elettronica. Ciò
consentirà di confermare l’ipotesi della presenza di inclusioni simili ai corpi
di Lewy nella sostanza nera, e di analizzare a livello subcellulare quali organuli
vengono compromessi ed in quale misura.
U.O. 6. Nella seconda fase del progetto, sarà completato il reclutamento
dei pazienti, e suddivisi in rapporto alle caratteristiche cliniche ed epidemiologiche
(età, sesso, anni di malattia, tipo di trattamento farmacologico). Quindi
gli stessi pazienti verranno sottoposti a breve periodo di ricovero presso la Clinica
Neurologica del Policlinico Tor Vergata. Durante il ricovero, oltre gli
accertamenti di routine, verrà eseguita la rachicentesi per il prelievo di campioni
di liquor cefalorachidiano. Verrà raccolto circa 1 ml di liquor che sarà
immediatamente riposto in congelatore a – 80°C. Successivamente, i campioni
di liquor saranno trasferiti in ghiaccio secco presso i laboratori di Biochimica
dove verranno processati. I singoli campioni saranno analizzati in cieco, senza
cioè che l’operatore conosca la tipologia del paziente il cui liquor viene analizzato.
Tramite tecniche di High-performance-liquid- cromatography (HPLC), si
doseranno i livelli di anandamide e di 2-AG, metaboliti endogeni del sistema
dei cannabinoidi. I dati ottenuti saranno raggruppati in rapporto alle caratteristiche
cliniche del paziente e sarà effettuata l’analisi statistica.
OUTPUT DEL PROGRAMMA
– Pubblicazioni scientifiche “ peer-review ” su riviste ad alto fattore di
impatto, ed indicizzate (ISI).
– Partecipazione a congressi nazionali ed internazionali e presentazione
dei dati ottenuti.
730 2006