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Meccanismi di danno neuronale alla base della neurodegenerazione nelle patologie…
ristiche clinico-epidemiologiche (età, anni di malattia, risposta alla terapia,
presenza di fluttuazioni motorie) il più possibile omogenee (Stefani et al.,
2005, Ann Neurol). Una sottopopolazione sarà quindi sottoposta a wash-out
farmacologico di almeno 15 giorni mentre l’altra proseguirà la terapia con dosi
stabili di l-dopa. Per quanto concerne il reclutamento dei pazienti con forme
atipiche di MP, i pazienti saranno inseriti in base alle loro caratteristiche cliniche
in tre sottogruppi, in relazione alla patologia: Atrofia Multisistemica, Paralisi
Sopranucleare Progressiva, o Degenerazione Cortico-basale. Obiettivo della
ricerca è di includere nello studio il maggior numero di pazienti possibile, allo
scopo di raggiungere un elevato numero di campioni da sottoporre a dosaggio
biochimico e raggiungere una significatività statistica.
Nella seconda fase della ricerca, la U.O. 1 effettuerà registrazioni elettrofisiologiche
da preparati di tessuto striatale ottenuti da animali sottoposti a trattamento
cronico con un’altra tossina mitocondriale, metamfetamina, principio
attivo di droghe d’abuso (Lotharius et al., 2005, J Neurosci). Il trattamento cronico
con metamfetamina determina la insorgenza di lesioni degenerative a
carico della sostanza nera, portando anche alla formazione di inclusi cellulari
simili a quelli da inibizione proteosomica (Fornai et al., 2005, Brain Res Bull).
Verranno registrati i diversi sottotipi neuronali striatali, neuroni spinosi ed
interneuroni colinergici. Valuteremo le proprietà intrinseche di membrana,
come la resistenza, la scarica di potenziali d’azione. Si analizzeranno inoltre le
diverse componenti sinaptiche e sarà registrata ogni possibile alterazione. Inoltre
verranno effettuate registrazioni combinate, di elettrofisiologia ed imaging
degli ioni calcio. Un eccessivo aumento di ioni calcio intracellulari è stato indicato
tra i meccanismi più accreditati alla base del danno neuronale (Pisani et
al., 2004, Cell Calcium). Differenze nella capacità di gestire aumenti di calcio
intracellulari possono rendere conto della peculiare resistenza interindividuale
tra sottotipi neuronali distinti. Pertanto, durante la perfusione con tossine mitocondriali
o negli animali trattati acutamente e cronicamente con metamfetamina,
verranno monitorizzati i livelli intracellulari di calcio e registrate le
eventuali differenze tra neuroni spinosi ed interneuroni.
Analogo iter sperimentale verrà seguito dall’U.O. 2 su neuroni dopaminergici
di sostanza nera. Saranno esaminate infatti le risposte delle cellule dopaminergiche
a dosi neurotossiche di amfetamina e metamfetamina. Attraverso
un’analisi in vitro della funzione cellulare otterremo delle informazioni sulle
variazioni delle proprietà di membrana e del contenuto ionico citoplasmatico
(sodio e calcio). Compareremo inoltre le eventuali variazioni indotte da amfetamina
e metamfetamina con quelle prodotte dalla 6-idrossidopamina e rotenone.
Nella seconda fase del progetto di ricerca, la U.O. 3 valuterà gli aspetti
comportamentali nel ceppo di topi R6/1. Come già segnalato, questi topi
presentano alterazioni motorie e comportamentali più lievi e una progressione
significativamente più lenta. Verranno pertanto eseguiti tutti i test
comportamentali e valutati deficit motori (Open field), alterazioni nella flessibilità
comportamentale (“ Cross maze ”) e capacità di cancellare tracce
mnesiche già consolidate (“ Conditioned fear extinction ”). I dati ottenuti
nella prima fase con i topi del ceppo R6/2 verranno comparati ai risultati
osservati nei topi R6/1.
2006 729