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Meccanismi di danno neuronale alla base della neurodegenerazione nelle patologie…
– Paradigma di estinzione del condizionamento indotto da paura. L’estinzione
della risposta al condizionamento indotto da paura viene praticata in
una camera di condizionamento di plexiglas con un pavimento in rete metallica
collegato ad un generatore di scossa. L’atteggiamento di freezing viene
usato come misura di una risposta condizionata da una emozione. Il condizionamento
da contesto viene determinato misurando il comportamento di
freezing dopo 60 sec di intervallo immediatamente dopo il riposizionamento
nella camera del test.
– Cross maze. In questo test, un ratto privato del cibo viene lasciato alla
fine del braccio sud di un labirinto a forma di croce e addestrato a trovare
un pezzo di cibo localizzato alla fine del braccio ovest. L’addestramento
viene seguito da una prova di verifica durante la quale il ratto viene lasciato
in un opposto punto di inizio (braccio nord) Nella prova di verifica viene
considerata una scelta corretta se il ratto entra nel braccio ovest invertendo
la risposta motoria precedentemente appresa. Sarà inoltre valutata la tossicità
acuta e cronica della tetraidro-β-carbolina clorinata (TaClo) sulla
sostanza nera del ratto. Per lo studio della tossicità acuta, TaClo ed N-Me-
TaClo (10 µg) saranno somministrati per iniezione stereotassica monolateralmente
nella sostanza nera; gli animali saranno sacrificati dopo 2 giorni, 1
e 3 settimane. Per lo studio della tossicità cronica, gli animali saranno trattati
con TaClo (0.2 mg/kg/die) per via i.p. per sette settimane. Gli animali
saranno sacrificati una settimana, un mese e tre mesi dopo il periodo di
somministrazione. L’integrità della sostanza nera e della proiezione nigrostriatale
sarà valutata utilizzando anticorpi anti-tirosina-idrossilasi. L’eventuale
accumulo di aggregati fibrillari, evocativi dei corpi di Lewy, negli
animali trattati con TaClo ed N-Me-TaClo, sarà determinata utilizzando
anticorpi anti-α-synucleina. La efficienza dei processi catabolici proteici
ubiquitina-mediati sarà valutata utilizzando anticorpi anti-ubiquitina. La
distribuzione dei recettori D1 e D2 nel caudato putamen sarà valutata utilizzando
anticorpi specifici. Lo studio in microscopia elettronica sarà condotto
per dimostrare se il trattamento con TaClo ed N-Me-TaClo altera la integrità
strutturale dei vari organuli cellulari della sostanza nera e delle connessioni
sinaptiche nigrostriatali. La sostanza nera e lo striato saranno tagliati al
vibratomo in sezioni di 40 µ. Le sezioni saranno postfissate in tetrossido di
osmio, contrastate in acetato di uranile, disidratate in alcool ed incluse in
resina epossidica. Dai pezzi inclusi in resina saranno tagliate sezioni ultrasottili
che colorate con citrato di piombo saranno osservate e fotografate
con un microscopio elettronico Zeiss 901.
Per lo studio su soggetti affetti da MP saranno selezionati pazienti
con caratteristiche clinico-epidemiologiche omogenee (età, anni di malattia).
I soggetti saranno sottoposti a prelievo del liquor cefalo-rachidiano
tramite rachicentesi. Sui campioni di liquor verranno effettuate le misurazioni
tramite tecnica cromatografica (HPLC). Verranno dosati i livelli di
anandamide endogena e di 2-AG, altro metabolita endogeno del sistema dei
cannabinoidi.
2006 725