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Analisi elettrofisiologica, biologica e comportamentale in modelli animali di distonia
suscettibili di apprezzare stimoli gratificanti e di attribuire salienza incentivante
a stimoli condizionati, se la risposta catecolaminergica nelle aree cerebrali
implicate nella gratificazione e nello stress sia ridotta.
Criteri e indicatori per la verifica dei risultati intermedi
L’acquisizione di dati sperimentali che indichino in modo chiaro la valutazione
del fenotipo comportamentale in almeno un modello sperimentale e
la risposta dopaminergica cerebrale a stimolazioni positive o avversive.
METODOLOGIA
La liberazione di dopamina ed eventualmente di noradrenalina sarà misurata
mediante la tecnica della microdialisi intracerebrale in topi liberi di muoversi.
La microdialisi sarà effettuata in topi nei quali sarà impiantata unilateralmente
nel caudatus putamen (CP), nella corteccia prefrontale mediale
mpFC o nel nucleus accumbens NAc una cannula guida 24 ore prima dell’inserimento
del “ probe ” per la dialisi. Il probe [membrana da dialisi di 2 mm
(CP e mpFC) o 1 mm (NAc) e diametro esterno di 0.24 mm (del tipo MAB 4
cuprophane prodotto dalla Metalant AB)] sarà testato per la capacità di recupero
in vitro. I campioni di dialisato saranno analizzati per mezzo di HPLC
(sistema Alliance, Waters Corporation, Milford, MA) con detezione coulometrica
(ESA Model 5200A Coulochem II) dotato di una cella di condizionamento
(M 5021) e di una cella analitica (M 5011). La cella di condizionamento sarà
regolata a 400 mV, l’elettrodo 1 a 250 mV, e l’elettrodo 2 a – 250 mV. La
colonna, una Nova-Pack C18 (3.9 × 150 mm, Waters) verrà mantenuta a 33°C e
il flusso della fase mobile a 1.1 ml/min (Ventura et al., 2003; 2004; 2005). Sarà,
in particolare, misurata la liberazione di neuromediatore in topi wild-type ed
in topi DYT1 esposti a cibo o ad alimenti appetibili (es. cioccolata) o a stimoli
avversivi (stimoli anche adoperati nel test di condizionamento spaziale).
Saranno eventualmente testati gli effetti di farmaci antidepressivi e/o di inibitori
della ricaptazione della dopamina.
Il condizionamento spaziale verrà effettuato in gabbie test costituite
da due compartimenti (15 × 15 × 20 cm) collegate da un corridoio centrale
(15 × 5 × 20) come descritto in precedenza (Cabib et al., 2000; Ventura et al.,
2003). In breve, la procedura sperimentale seguirà 3 fasi: Il giorno 1(pretest),
i topi saranno liberi di esplorare l’intero apparato per 20 min. Durante
i successivi 8 giorni (fase di condizionamento), i topi saranno confinati giornalmente
per 40 min. alternativamente in una delle 2 camere. Per ciascun
animale, durante la fase di condizionamento, uno dei 2 pattern sarà sempre
appaiato con salina o con uno stimolo poco saliente e l’altro con lo stimolo
saliente (appetitivi o avversivo o farmacologico). L’appaiamento sarà bilanciato
così che per metà di ciascun gruppo sperimentale lo stimolo saliente
sarà appaiato con un pattern e per l’altra metà con l’altro pattern. Per il
gruppo di controllo, entrambe le camere saranno appaiate con salina o con
uno stimolo non saliente (Ventura et al. 2007). Il test verrà eseguito il giorno
10, allo steso modo del prestest.
2006 615