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Sezione III: Attività per progetti
U.O. 3 – Laboratorio di Neurobiologia del Comportamento
Stefano Puglisi-Allegra
OBIETTIVO FINALE DEL CONTRIBUTO
L’identificazione delle disfunzioni, a livello neuronale e sinaptico, ed ad
un livello più integrato “ comportamentale ”, che occorrono nella distonia è un
requisito assoluto per sviluppare una terapia che possa bloccare o ritardare la
progressione della malattia distonica. L’attività di ricerca sarà rivolta alla verifica
dell’ipotesi che la depressione associata ai disturbi motori possa essere
collegata ad un deficit della trasmissione dopaminergica nel sistema nigrostriatale
e meso-cortico-limbico nei topi DYT1 analizzando i fenotipi comportamentali
e neurochimici in modelli di depressione. In particolare topi transgenici,
i controlli ‘wild-type’ e gli eterozigoti saranno sottoposti: (a) al test di
Porsolt come modello di depressione, (b) al test di preferenza spaziale condizionata
mantenuta da un cibo appetibile come misura di anedonia, (c) al test
del Plus-Maze e dell’esplorazione sociale come misure di ansia.
Sulla base dei dati ottenuti dallo screening comportamentale si procederà
ad analizzare la risposta di attivazione dei geni precoci (c-FOS, FOSB, ∆FOSB,
p-CREB) promossa dalle condizioni di test che avranno prodotto i dati di maggior
interesse, utilizzando procedure immunoistochimiche e di Western blot. In
altri gruppi di animali verrà analizzata la risposta da stress dei sistemi dopaminergico
nigro-striatale e meso-corticale. Il rilascio di dopamina (DA) nello
striato dorsale, nello striato ventrale e nella corteccia pre-frontale sarà misurato
mediante la tecnica della microdialisi intracerebrale in topi liberi di muoversi.
L’obiettivo sarà la verifica di un fenotipo “ depressive-like ” nei topi DYT1
che sia in relazione con la trasmissione catecolaminergica e la sua attivazione
nei modelli sperimentali volti a valutare la risposta dell’organismo sia a stimoli
positivi (gratificazione/anedonia) o avversivi (stress/coping).
Criteri e indicatori per la verifica dei risultati finali
I risultati finali dovranno essere in grado di dimostrare che quanto formulato
nelle ipotesi alla base del progetto sia verificato o meno sulla base di
evidenze sperimentali pubblicabili. In particolare dovrà essere verificato un
fenotipo comportamentale che modelli la depressione e l’eventuale relazione
con la trasmissione dopaminergica e i sistemi neurali che la regolano.
OBIETTIVI INTERMEDI PREVISTI
Si prevede che nel medio termine il programma di ricerca abbia acquisito
dati sperimentali nei test comportamentali, test di Porsolt (o “ forced swimming
test ”), nella preferenza spaziale condizionata e nel test del “ plus maze ”.
In particolare, dovrà essere verificato se i topi distonici presentano una maggiore
propensione al “ behavioral despair ” rispetto ai wild-type, se sono meno
614 2006