Solo testo.pdf - Fondazione Santa Lucia

Analisi elettrofisiologica, biologica e comportamentale in modelli animali di distonia
comparabili ai controlli. Al contrario, rispetto ai controlli, questi interneuroni
mostrano una anormale sensibilità a dosi basse di quinpirolo, agonista dei
recettori dopaminergici di tipo D2. Ciò potrebbe suggerire un incremento compensatorio
di questi recettori. Un’accurata analisi del meccanismo sottostante
(assemblaggio dei recettori, funzione della proteina G, attività dei canali del calcio
accoppiati a recettori) merita ulteriori ricerche sperimentali. Questa osservazione
appare di particolare interesse alla luce del ben noto coinvolgimento
della trasmissione colinergica nella distonia (Augood et al., 2002; Albin et al.,
2003) e, di conseguenza, delle potenziali strategie terapeutiche. Tale accurata
analisi elettrofisiologica e farmacologica sarà anche focalizzata ai neuroni
nigrali ed ippocampali.
Nella prima fase di questa ricerca, nei laboratori del prof. Pisani analizzeremo
le proprietà intrinseche e sinaptiche dei neuroni principali dello
striato, i neuroni medium spiny (MS). Risultati sperimentali preliminari
ottenuti da un piccolo numero di topi che esprimono la Torsina umana
mutata suggeriscono che le proprietà intrinseche di membrana dei neuroni
MS registrati da fettine acute non mostrano grossolane alterazioni. La curva
corrente-voltaggio ottenuta con registrazioni elettrofisiologiche nella modalità
del patch-clamp non ha infatti mostrato differenze significative rispetto
a topi WT e di controllo. La frequenza di scarica dei potenziali d’azione, il
potenziale di riposo delle cellule e la resistenza in ingresso erano non significativamente
diverse nei topi mutati rispetto ai controlli. La stimolazione
corticale evoca un potenziale postsinaptico eccitatorio nei neuroni MS, che
presenta una prevalente componente mediata dai recettori ionotropici del
glutammato di tipo AMPA, ed una di minore entità mediata da recettori
NMDA. Valuteremo le singole componenti del potenziale sinaptico tramite
esperimenti farmacologici in cui le singole componenti verranno isolate ed
analizzate.
Nella seconda fase, condurremo una serie di esperimenti in “ whole-cell
patch-clamp ” e valuteremo le correnti sinaptiche in neuroni MS. Lo stimolo
sinaptico determina, nelle cellule registrate, la comparsa di correnti sinaptiche
sia con prevalente componente eccitatoria, glutammatergica (EPSC) che
correnti inibitorie, mediate dal GABA (IPSC). In questa fase dello studio verranno
esaminate le possibili differenze esistenti nei neuroni ottenuti da topi di
diversi genotipi. Verrà inoltre valutata l’attività spontanea sia glutammatergica
che GABAergica in condizioni di isolamento farmacologico. Le singole
componenti sinaptiche verranno inoltre sottoposte a test farmacologici con
agonisti dopaminergici in neuroni registrati da topi mutanti e i dati ottenuti
saranno confrontati con quelli di controllo.
In una terza fase della ricerca, l’U.O. 2 valuterà le possibili alterazioni
della plasticità sinaptica cortico-striatale nei topi hMT, rispetto a topi WT e
topi di controllo. Sono stati condotti esperimenti preliminari sulla induzione
di Long-term depression (LTD) in neuroni MS. I primi risultati sembrano suggerire
l’assenza di LTD corticostriatale, che supportano l’ipotesi che alla base
del disturbo distonico esista un’alterazione nell’apprendimento motorio e
nella memorizzazione di programmi motori. In questa fase cercheremo di
confermare le osservazioni preliminari su di un vasto numero di animali.
2006 607