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Sezione II
tenuto di ax-2. Conseguentemente si può dedurre che le cellule del circuito
cerebellare degenerano indipendentemente dall’espressione della proteina ax-2
e che possibili interazioni tra la proteina ax-2 con altri fattori del metabolismo
cellulare possa essere la causa della degenerazione neuronale.
Obiettivi e metodi
Nel nostro studio abbiamo cercato di verificare se le popolazioni neuronali
delle principali stazioni precerebellari (oliva inferiore e nuclei pontini)
ax-2 positive, sottoposte a deafferentazione, avessero una sensibilità al danno
diversa rispetto a quelle prive di tale proteina. Per testare questa ipotesi
abbiamo utilizzato il modello sperimentale dell’emicerebellectomia, modello
di lesione dei circuiti cerebellari ben caratterizzato nel nostro laboratorio.
Dopo aver sottoposto gli animali a lesione cerebellare gli stessi sono stati
lasciati sopravvivere per un lasso di tempo variabile che andava dai 7 giorni
fino a 2 mesi post-lesione. Dopo aver sacrificato gli animali mediante perfusione
transcardiaca e aver processato il cervello prelevato, le sezioni delle aree
anatomiche di nostro interesse sono state alcune sottoposte a colorazione di
Nissl e altre processate mediante tecniche di immunoistochimica e/o di
immunofluorescenza (doppia e/o tripla colorazione). Mediante la colorazione
di Nissl abbiamo cercato di quantificare il danno neuronale provocato dalla
lesione cerebellare, dopodichè abbiamo caratterizzato neurochimicamente le
popolazioni delle due stazioni precerebellari, verificando il grado di espressione
della proteina ax-2 e di altri markers cellulari quali P2X 1
e P2X 2
e la
NOS neuronale.
Il nostro studio ha portato all’evidenza che nei nuclei precerebellari la
popolazione neuronale direttamente connessa all’emicervelletto lesionato,
capace di esprimere la proteina ax-2 normale, ha un time course di sopravvivenza
dopo danno assonale significativamente migliore dei neuroni che non
esprimono tale proteina. Queste evidenze sperimentali, in associazione con i
dati della letteratura depongono per un possibile ruolo della proteina ax-2 nei
meccanismi di controllo del fenomeno di morte cellulare programmata. Questa
ipotesi è attualmente materia di indagine del nostro laboratorio e necessita
di ulteriori verifiche sia in altri modelli sperimentali di danno cellulare
che in altri circuiti neuronali.
Si sono svolti anche altri progetti mirati alla caratterizzazione neurochimica
di alcune popolazioni cellulari in condizioni fisiologiche. In un lavoro
svolto dal nostro gruppo è stato dimostrato, mediante l’utilizzo di metodiche
di immunoistochimica e di ibridizzazione in situ, la presenza di una subunità
dei recettori ionotropici dell’ATP (P2X 2
) su tutti i neuroni orexinergici dell’area
perifornicale e dorso-mediale dell’ipotalamo laterale. Questo gruppo di
neuroni sembra essere uno dei principali centri regolatori del metabolismo
corporeo e rappresenta un’interfaccia tra il sistema nervoso autonomo e neuroendocrino
ed i centri superiori. La dimostrazione della presenza della subunità
P2X 2
su questi neuroni ipotalamici è di particolare interesse, in quanto è
stata ampiamente dimostrata la possibilità di modulare questa subunità recettoriale
in diversi paradigmi di lesione (Florenzano F., Viscomi M.T. et al.,
268 2006