Solo testo.pdf - Fondazione Santa Lucia

Sezione II
Materiali e metodi
Topi C57BL/6J (N=24) e DBA/2J (N=23) maschi adulti (3 mesi).
L’Olfactory Tubing Maze (OTM) (Roman F.S. et al., 2002, J Neurosci
Methods 117: 173-181) è costituito da 4 camere di test (cubiche, lato 10 cm)
connesse da tubi di plastica (diametro: 5 cm).
Due stimoli olfattivi sono rilasciati simultaneamente da due bocchette
situate all’estremità di due tubi (diametro 5 cm; lunghezza 20 cm) posti perpendicolarmente
rispetto ai lati delle camere di test. A ciascuna estremità di
questi tubi sono posti una coppetta per l’acqua ed un altoparlante. L’uscita e
l’ingresso alle camere sono regolati da porte automatizzate. Attraversata la
prima fotocellula, la porta di ingresso alla prima camera di test viene aperta e
due differenti odori vengono emessi dalle estremità dei due tubi. Un odore
(Allyl heptanoate; odore positivo) è associato al rilascio di una ricompensa
(0,03 ml di acqua) mentre il secondo odore (Citral dimethyl acetal; odore
negativo) è associato ad un suono avversivo (Buzzer, 3s). Il topo fornisce la
risposta ad uno dei due stimoli olfattivi raggiungendo l’estremità di uno dei
due tubi ed attraversando una seconda fotocellula che chiude la porta di
ingresso ed apre la porta di uscita della camera di test.
I topi sono stati sottoposti ad una sessione al giorno di 20 prove ciascuna.
Sono state registrate la percentuale di risposte corrette (scelta dell’odore positivo)
e l’intervallo-inter-prove (ITI). L’agonista SL65.0155 (0.01 mg/Kg; i.p.) è
stato iniettato 30 minuti prima dell’inizio delle ultime 4 sessioni di apprendimento.
I topi sono stati iniettati con salina o agonista ed assegnati ai gruppi
addestramento o pseudo-addestramento. Nella condizione addestramento l’odore
positivo era associato al rinforzo nel 100% delle prove, mentre nella condizione
pseudo-addestramento l’odore positivo era associato al rinforzo nel
50% delle prove. In un esperimento successivo due gruppi di topi C57 sono
stati addestrati e trattati con salina + salina o con agonista + antagonista
(RS39604 - 0.5 mg/Kg) al fine di verificare che gli effetti riscontrati in questo
ceppo fossero dovuti all’attivazione dei 5-HT4R. Per gli studi morfologici è
stato aggiunto un gruppo di controllo che non è stato sottoposto ad addestramento
nell’OTM. Ventiquattro ore dopo il termine dell’addestramento, gli animali
sono stati sacrificati ed il loro cervello è stato sottoposto ad impregnazione
di Golgi-Cox (Restivo L. et al., 2005, Proc Natl Acad Sci USA 102(32):
11557-11562). I cervelli sono stati tagliati coronalmente ed il campo CA1 dell’ippocampo
è stato ispezionato al microscopio. Le spine dendritiche sono
state contate lungo i dendriti apicali, obliqui e basali dei neuroni piramidali
ed espressa come numero di spine per 10 micrometri.
Risultati e discussione
L’ANOVA condotta sulla percentuale di risposte corrette ha mostrato
che i topi C57 mostravano una prestazione superiore rispetto ai topi DBA
(Ceppo X Sessione: F 5,115
= 16.34, P < 0.0001). In particolare, la prestazione
dei topi DBA non si è discostata da quella degli animali pseudo-addestrati di
entrambi i ceppi i quali hanno mostrato una prestazione casuale (~50%). La
258 2006