Solo testo.pdf - Fondazione Santa Lucia

Borse di studio
acquisiscono alcune caratteristiche morfologiche tipiche dei neuroni primari.
Esperimenti di immunofluorescenza e di immunoblotting con anticorpi specifici
hanno consentito di verificare l’espressione di alcuni marcatori del differenziamento,
tra cui NF200, MAP2, GAP43,TAU, Tuj1, TrkA, e la Calcitonina.
L’espressione e l’attività di ATM sono state rilevate mediante immunoblotting
con anticorpi che riconoscono specificamente ATM oppure fosfo-
Ser1981-ATM (la forma attivata della chinasi). Tale approccio ha consentito
di rivelare che i livelli di ATM non aumentano, bensì decrescono durante il
differenziamento. Consistentemente non si osserva alcuna attivazione della
chinasi durante il differenziamento. Inoltre il differenziamento per sé non
determina l’induzione della fosforilazione di alcune proteine identificate
come substrati di ATM in seguito a danno al DNA.
Per definire la presenza di una correlazione tra differenziamento ed attività
di ATM, gli stessi esperimenti sono stati eseguiti in assenza della funzione
di ATM. L’approccio scelto per eliminare l’attività di ATM, è stata la generazione
di linee cellulari stabilmente transfettate con costrutti per l’espressione
di specifici shRNA per ATM. La riduzione dei livelli di ATM è stata verificata
mediante immunoblotting con specifici anticorpi. Tale approccio ha consentito
di dimostrare che la forte riduzione dell’espressione di ATM non compromette
il differenziamento neuronale in vitro. Al contrario la presenza di ATM
è assolutamente necessaria anche nel sistema modello per mediare la risposta
apoptotica al danno al DNA indotto da radiazioni ionizzanti o da sostanze
radiomimetiche.
Discussione
Questo studio supporta l’ipotesi in base alla quale ATM non partecipa
direttamente al differenziamento neuronale, che coerentemente con i nostri
risultati non risulta alterato in individui affetti da AT. Al contrario ATM svolge
un ruolo decisivo in presenza di stress che determinano danno al DNA e la
sua assenza impedisce l’eliminazione per apoptosi dei progenitori neuronali
danneggiati, favorendo quindi l’accumulo di cellule che preferenzialmente
andranno incontro a neurodegenerazione.
Esperimenti in altri sistemi modello di differenziamento consentiranno di
consolidare il significato dei dati ottenuti.
2006 247