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Sezione II
tore neurotrofico particolarmente coinvolto nella degenerazione delle cellule
nervose striatali nell’HD) (Zuccato et al., 2001, Science, 293(5529): 493-498.
Epub 2001 Jun 14; Fusco et al., 2003, Eur J Neurosci 18(5): 1093-1102) in ratti
trattati con acido quinolinico (QA) (modelli animali dell’HD) simulando i
danni prodotti dall’eccitotossicità cellulare.
Materiali e metodi
Per lo studio sono stati utilizzati ratti normali Wistar adulti di 2 mesi (Stefano
Morini, S. Polo D’Enza RE, Italia) ai quali sotto anestesia (cloralio idrato
33%) è stato somministrato 1 ml di acido quinolinico (QA) intrastriatale.
Venti animali sono stati successivamente perfusi con paraformaldeide al 4%
a differenti tempi: 12 ore, 24 ore, 1 settimana, 2 settimane, 6 settimane. I cervelli
sono stati rimossi e quindi congelati e sezionati al microtomo congelatore. Le
sezioni sono state incubate con anticorpi primari diretti verso i differenti marcatori
(CB1, FAAH) e successivamente incubate nuovamente con anticorpi secondari
fluorescenti specificatamente diretti verso il rispettivo marcatore primario e
quindi visualizzati per uno studio di tipo morfologico con l’utilizzo del microscopio
confocale. Si è andati quindi ad analizzare la distribuzione cellulare del
recettore CB1 e del FAAH in striato e in corteccia negli strati 3, 5, 6 in cervelli
affetti da HD. È stato anche possibile studiare la tripla colocalizzazione dei due
marcatori neuronali (CB1, FAAH) con il BDNF. È stato inoltre utilizzato il Quantimet
TM (Laica Q Win Softwar) per avere una misura indiretta dell’intensità di
fluorescenza nei neuroni contenenti entrambi i marcatori.
Altri 20 animali sono stati invece decapitati ai diversi tempi. Su di essi è
stato poi condotto uno studio Elisa per calcolare l’espressione del BDNF e di
Binding recettoriale per misurare l’attività del recettore CB1.
Risultati e conclusioni
Gli studi hanno confermato una stretta relazione tra espressione del CB1
e del FAAH negli animali con attività Ca 2+ dipendente alterata. Il BDNF sembra
invece assumere un andamento non strettamente correlato agli altri due
fattori. In particolare si è visto che il CB1 può sostenere un’iniziale sovraregolazione
del BDNF dopo insulto da eccitotossicità. Un picco nell’attività del
CB1 risulta infatti in un aumento nell’espressione del BDNF che però a 2 settimane
non riesce a mantenersi costante. Si assiste quindi ad una drastica
diminuzione del fattore neurotrofico a 6 settimane.
Questi studi preliminari ci confermano una stretta relazione tra l’enzima
FAAH e il recettore CB1 anche in stato patologico differentemente da ciò che
si osserva invece con il fattore neurotrofico BDNF.
Un ulteriore studio di tali molecole può essere utile come base per lo sviluppo
di nuovi agenti terapeutici da utilizzare per il trattamento di quelle
patologie causate o peggiorate da una eccessiva espressione dei meccanismi
di inattivazione o di un difettoso funzionamento dei meccanismi biosintetici
degli endocannabinoidi.
236 2006