Solo testo.pdf - Fondazione Santa Lucia

Borse di studio
Interazioni molecolari tra recettori metabotropici
in modelli neuronali
Nadia D’Ambrosi
Introduzione
È stato ampiamente dimostrato che molti recettori di membrana interagiscono
tra loro per costituire strutture dimeriche ed oligomeriche e che ciò
può rendersi necessario per la loro stessa attivazione (Terrillon S., Bouvier M.,
2004, EMBO Rep 5(1): 30-34). Sebbene i modelli classici indichino che i recettori
accoppiati a proteine G (GPCR) siano espressi solo come monomeri,
studi recenti hanno invece messo in evidenza che i GPCR esistono sotto
forma di complessi dimerici e multimerici (Devi L.A., 2001, Trends Pharmacol
Sci 22: 532-537).
I recettori purinergici P2Y, dei quali sono state clonate otto subunità fra
loro distinte (P2Y 1-2,4,6,11-14
), sono recettori di tipo metabotropico ed appartengono
quindi alla super-famiglia dei GPCR (Abbracchio M.P., Burnstock G. et
al., 2006, Pharmacol Rev 58(3): 281-341). Mentre da un punto di vista farmacologico
i recettori P2Y sono stati ampiamente caratterizzati (von Kugelgen
I., 2006, Pharmacol Ther 110(3): 415-432), gli studi riguardanti la loro struttura
quaternaria sono tuttora piuttosto limitati (Yoshioka K., Hosoda R. et al.,
2002, FEBS Lett 531(2): 299-303; Kotevic I., Kirschner K.M. et al., 2005, Cell
Signal 17: 869-880; Savi P., Zachayus J.L. et al., 2006, Proc Natl Acad Sci USA
103(29): 11069-11074,).
L’obiettivo del presente programma di ricerca è stato pertanto quello di
investigare la capacità in particolare della subunità P2Y 4
, di formare complessi
recettoriali di ordine superiore. Esperimenti condotti in precedenza nel
nostro laboratorio avevano evidenziato che il recettore P2Y 4
era espresso sotto
forma di dimero (D’Ambrosi N., Murra B. et al., 2004, Prog Brain Res 146: 93-
100) ed inoltre risultava associato al recettore NMDAR1 (Cavaliere F., Amadio
S. et al., 2004, Exp Cell Res 300: 149-158).
Risultati e conclusioni
Scopo del presente programma di ricerca è stato pertanto quello di verificare:
1. Se il putativo segnale dimerico del recettore endogeno P2Y 4
fosse
specifico.
Esperimenti di immunoblotting in presenza dell’antigene competitore
specifico per la subunità P2Y 4
hanno dimostrato che il putativo dimero presente
in diversi sistemi neuronali corrisponde effettivamente al recettore P2Y 4
e non è dovuto ad un segnale aspecifico dell’anticorpo.
2. Se il recettore ricombinante Myc-P2Y 4
fosse espresso sotto forma
monomerica, dimerica ed oligomerica.
2006 233