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Sezione II
Distribuzione cellulare e subcellulare
dei recettori purinergici P2 nel sistema nervoso centrale
Susanna Amadio
Introduzione e scopo della ricerca
Le molecole puriniche presenti nel mezzo extracellulare costituiscono
importanti molecole segnale che mediano i più diversi effetti biologici, attraverso
specifici recettori di membrana denominati recettori purinergici: ionotropici,
o P2X, e metabotropici, o P2Y. La discriminazione tra le due classi è
di tipo sia farmacologico, sia funzionale che molecolare (Burnstock G., 2006,
Trends Pharmacol Sci 27(3): 166-176; Volonté C., Amadio S. et al., 2006, Pharmacol
Ther 112(1): 264-280). Nel sistema nervoso centrale e periferico, è stato
dimostrato che l’ATP può agire sia come neurotrasmettitore, sia come cotrasmettitore
o, in generale, come neuromodulatore, modulando il rilascio di
altri neurotrasmettitori. I recettori P2 sono implicati soprattutto nelle comunicazioni
neurone-neurone, glia-glia e neurone-glia (Amadio S., D’Ambrosi N.
et al., 2002, Neuropharmacology 42(4): 489-501; Fields R.D., Burnstock G.,
2006, Nat Rev Neurosci 7(6): 423-436).
Scopo del presente progetto è stato lo studio della distribuzione delle sottoclassi
dei recettori P2 nel sistema nervoso centrale di ratto, per mezzo di
reazioni immunoenzimatiche (Western blot) e tecniche immunoistologiche.
Risultati
Tra i vari recettori purinergici di cui si è studiata la distribuzione, di notevole
interesse è stata la localizzazione del recettore metabotropico P2Y 12
. Si è
osservato nella corteccia cerebrale e nei nuclei subcorticali (striato e substantia
nigra) che il recettore P2Y 12
è localizzato negli oligodendrociti. Mediante
microscopia confocale, si è quindi riscontrato che l’immunoreattività per
P2Y 12
è visibile nella corteccia come lunghe fibre parallele che formano un
“ network ” tra i corpi neuronali positivi al NeuN. Tale immunoreattività,
invece, conferisce un aspetto spugnoso allo striato, essendo localizzata esclusivamente
nella sostanza bianca ed escludendo i neuroni GABAergici calbindina-positivi,
di cui la sostanza grigia è notevolmente arricchita. Nel mesencefalo,
si osserva un forte segnale di P2Y 12
distribuito attraverso i peduncoli
cerebrali, ed in particolare nella substantia nigra. Il recettore P2Y 12
non colocalizza,
quindi, né con il generico marker neuronale NeuN nella corteccia
cerebrale, né con lo specifico marker neuronale calbindina nello striato, né
tantomeno con la TH nella substantia nigra. Successivamente, è stata valutata
la natura dell’immunoreattività per P2Y 12
in sezioni contenenti corteccia e
striato utilizzando, rispettivamente, il marcatore microgliale IB4 e quello
astrocitario GFAP. In entrambi i casi, non si è riscontrata nessuna colocalizzazione
con il recettore P2Y 12
. È stata poi condotta una doppia immunofluorescenza
tra P2Y 12
e NFL, specifico per i processi neuronali. L’immunofluore-
210 2006