Prolil endopeptidasa eta piroglutamil peptidasa I ... - Euskara
Prolil endopeptidasa eta piroglutamil peptidasa I ... - Euskara
Prolil endopeptidasa eta piroglutamil peptidasa I ... - Euskara
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Metodoak<br />
3.AKTIBITATE ENTZIMATIKOAREN NEURKETA<br />
Entzima baten kontzentrazioa ehun edo likido bat<strong>eta</strong>n, entzima berak<br />
katalizatzen duen erreakzioaren abiadura neurtuz jakin daiteke. Hon<strong>eta</strong>rako,<br />
substratuaren kontzentrazioaren gutxitzea, edo produktuen agerpena denboran zehar<br />
neur daiteke.<br />
Peptidasen ikerk<strong>eta</strong>rako substratu artifizialen artean erabilienak β-<br />
naftilaminaren eratorri aminoazidikoak dira, non aminoazidoa amida lotura batez<br />
lotzen zaion substratu artifizialari. Aminoazil-β-naftilamida molekularen gain<br />
amino<strong>peptidasa</strong> jakin batek eragitean, askatutako β-naftilamina ziklatu egiten da<br />
ahalmen fluoreszentea bereganatuz. Substratu hauek Gomorik erabili zituen<br />
lehenengoz (Gomori, 1954). Hortik aurrera, aminoazido <strong>eta</strong> dipeptido askoren<br />
eratorriak lortu dira.<br />
Hastapenean, entzimatikoki askatutako β-naftilamina diazosal batekin<br />
akoplatzen zen, kolore gorria edo urdina lortzeko (kontsideratutako akoplamendu<br />
gatzaren arabera) <strong>eta</strong> espektrofotometrikoki neurtzen zen 520 nm-tara. Metodo hau,<br />
peptidasen determinazio histokimikoari ere aplikatu zaio (Gomori, 1954). Baina,<br />
askatutako β-naftilamina, fluorometrikoki ere neurtu ahal da, ondorengoko<br />
akoplamendurik erabili gabe. Metodo hau Greenbergek 1962.ean garatu zuen<br />
(Greenberg, 1962) <strong>eta</strong> 1989.ean Alba <strong>eta</strong> lankideek moldak<strong>eta</strong> batzuk gehitu zizkioten<br />
(Alba <strong>eta</strong> lank., 1989).<br />
Oinarria<br />
Substratu artifitziala laginarekin inkubatzen da. <strong>Prolil</strong> <strong>endo<strong>peptidasa</strong></strong> <strong>eta</strong><br />
<strong>piroglutamil</strong> <strong>peptidasa</strong> I entzimak, laginean badaude, Z-Gly-Pro-β-naftilamida <strong>eta</strong> Lazido<br />
piroglutamiko-β-naftilamida, hurrenez hurren, apurtuko dute. Lehenengoak Gly-<br />
Pro dipeptidoa <strong>eta</strong> β-naftilamina molekula bat askatuko ditu, <strong>eta</strong> azkenekoak azido<br />
piroglutamikoa <strong>eta</strong> β-naftilaminako beste molekula bat.<br />
β-naftilaminak, bere deribatu amidikoak ez bezala, fluoreszentea da.<br />
Fluoreszentzia, molekula askok duten ezaugarri fisikoa da. Zenbait molekulak behar<br />
baino energia gehiago jasotzean (egitura elektronikoa kitzikatzean) ohiko egoera<br />
energetikora berriz bilakatzeko argia igortzen dute. Ahalmen honi fluoreszentzia<br />
Materialak <strong>eta</strong> Metodoak 91
Change language