(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

(51) Int. Cl. 

(19) 대한민국특허청(KR) 

(12) 공개특허공보(A) 

C07K 14/11 (2006.01) A61K 39/42 (2006.01) 

C12N 7/01 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) 

(21) 출원번호 10-2009-7003756 

(22) 출원일자 2009년02월24일 

심사청구일자 없음 

번역문제출일자 2009년02월24일 

(86) 국제출원번호 PCT/US2007/075585 

국제출원일자 2007년08월09일 

(87) 국제공개번호 WO 2008/021959 

국제공개일자 2008년02월21일 

(30) 우선권주장 

60/821,832 2006년08월09일 미국(US) 

60/942,804 2007년06월08일 미국(US) 

전체 청구항 수 : 총 71 항 

(54) 인플루엔자 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제 변이체 

(57) 요 약 

(11) 공개번호 10-2009-0053794 

(43) 공개일자 2009년05월27일 

(71) 출원인 

메디뮨 엘엘씨 

미국 20878 메릴랜드주 게이테르스부르크 원 메디 

뮨 웨이 

더 가번먼트 오브 더 유나이티드 스테이츠 오브 

아메리카, 내셔널 인스티튜츠 오브 헬스 

미국 메릴랜드주 20852 록크빌 6011 이그제큐티브 

불바드 스위트 325 

(72) 발명자 

양 친-펭 

미국 캘리포니아주 95129 산 호세 카탈리나 드라 

이브 4581 

켐블 조지 

미국 캘리포니아주 95070 사라토가 바이어 그랜드 

드라이브 19585 

(뒷면에 계속) 

(74) 대리인 

김성기, 김진회 

(조류 범유행성) 인플루엔자 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제 변이체를 포함하는 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 

방법, 조성물을 제공한다. 

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공개특허 10-2009-0053794

(72) 발명자 

서바라오 칸타 

미국 워싱톤 디씨 20009 노스웨스트 윌러드 스트리 

트 1720 

- 2 - 

머피 브라이언 

공개특허 10-2009-0053794 

미국 매릴랜드주 베데스다 투스카라워스 로드 5410

특허청구의 범위 

청구항 1 

a) 서열 번호 21-26 또는 33-38 또는 45 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오티드에 의해 코딩된 아미노산 서열을 

포함하는 폴리펩티드; 

b) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드; 

c) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드의 성숙 형태; 

d) 고도로 엄격한 조건하에서 (a), (b) 또는 (c)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 

하이브리드화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드; 및 

e) (b)의 폴리펩티드와 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드로 구성된 군으로 

부터 선택되는 단리된 폴리펩티드. 

청구항 2 

제1항의 하나 이상의 폴리펩티드의 면역학적 유효량을 포함하는 면역원성 조성물. 

청구항 3 

제1항의 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 단리된 항체. 

청구항 4 

생리학적으로 허용되는 담체 중의 제1항의 폴리펩티드의 면역학적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 

포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 형성하기 위해 개체의 면역계를 자극하는 방법. 

청구항 5 

제1항의 폴리펩티드를 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스. 

청구항 6 

제5항의 재조합 인플루엔자 바이러스의 면역학적 유효량을 포함하는 면역원성 조성물. 

청구항 7 

생리학적으로 허용되는 담체 중의 제5항의 재조합 인플루엔자 바이러스의 면역학적 유효량을 개체에게 투여하는 

단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 형성하기 위해 개체의 면역계를 자극하는 

방법. 

청구항 8 

a) 서열 번호 21-26 또는 33-38 또는 45 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오티드 서열, 또는 그의 상보적 서열을 

포함하는 폴리뉴클레오티드; 

b) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클 

레오티드 서열, 또는 그의 상보적 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 

c) 고도로 엄격한 조건하에서 실질적으로 전길이의 (a)의 폴리뉴클레오티드에 걸쳐 하이브리드화하는 폴리뉴클 

레오티드; 및 

d) (a)의 폴리뉴클레오티드와 98% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 

로 구성된 군으로부터 선택되는 단리된 폴리뉴클레오티드. 

청구항 9 

제8항의 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물. 

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공개특허 10-2009-0053794

청구항 10 

제8항의 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포. 

청구항 11 

제8항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터. 

청구항 12 

제11항에 있어서, 플라스미드, 코스미드, 파지, 바이러스, 또는 바이러스의 단편인 벡터. 

청구항 13 

제12항에 있어서, 발현 벡터인 벡터. 

청구항 14 

제13항의 벡터를 포함하는 세포. 

청구항 15 

제8항의 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 인플루엔자 바이러스. 

청구항 16 

제15항에 있어서, 재배열(reassortant) 바이러스인 바이러스. 

청구항 17 

A/앤 아버/6/60으로부터의 6개의 내부 게놈 분절과, 서열 번호 27-32, 및 39-44의 폴리펩티드로 구성된 군으로 

부터 선택되는 HA 및/또는 NA 폴리펩티드를 코딩하는 2개의 게놈 분절을 포함하는 6:2 재배열 인플루엔자 바이 

러스. 

청구항 18 

폴리뉴클레오티드가 발현될 수 있도록 하는 조건하에 적합한 배양 배지에서 제14항의 세포를 배양하는 단계; 및 

상기 세포를 포함하는 세포 군집 또는 배지로부터 재배열 인플루엔자 바이러스를 단리하는 단계를 포함하는, 재 

배열 인플루엔자 바이러스를 생성하는 방법. 

청구항 19 

제17항의 재배열 인플루엔자 바이러스의 면역학적 유효량을 포함하는 면역원성 조성물. 

청구항 20 

생리학적으로 유효한 담체 중의 제17항의 재배열 인플루엔자 바이러스의 면역학적 유효량을 개체에게 투여하는 


방법. 

청구항 21 

폴리뉴클레오티드가 발현될 수 있도록 하는 조건하에 적합한 배양 배지에서 제10항의 세포를 배양하는 단계; 및 

세포 또는 배지로부터 폴리펩티드를 단리하는 단계를 포함하는, 단리된 또는 재조합 폴리펩티드를 생성하는 방 

법. 

청구항 22 

바이러스 감염에 대한 면역원성 반응을 형성하는데 유효한 양으로 제17항의 바이러스를 피험체에게 투여하는 단 

계를 포함하는, 피험체에서 바이러스 감염을 예방학적으로 또는 치료학적으로 치료하는 방법. 

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공개특허 10-2009-0053794

청구항 23 

제22항에 있어서, 피험체가 인간인 방법. 

청구항 24 

제19항에 있어서, 헤마글루티닌이 변형된 다염기 절단 부위를 포함하는 면역원성 조성물. 

청구항 25 

제19항의 조성물을 포함하는 약독화 인플루엔자 생백신. 

청구항 26 

제19항의 조성물을 포함하는 분할(split) 바이러스 또는 사멸 바이러스 백신. 

청구항 27 

제24항의 조성물을 포함하는 약독화 인플루엔자 생백신. 

청구항 28 

제24항의 조성물을 포함하는 분할 바이러스 또는 사멸 바이러스 백신. 

청구항 29 

i) 인플루엔자 바이러스의 복제를 지지할 수 있는 숙주 세포 군집으로, A/앤 아버/6/60의 6개 이상의 내부 게놈 

분절; 및 서열 번호 27-32, 및 39-44의 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택되는 HA 및/또는 NA 폴리펩티드를 

코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 게놈 분절에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복수 

의 벡터를 도입하는 단계; 

ii) 35℃이하의 온도에서 숙주 세포 군집을 배양하는 단계; 및 

iii) 인플루엔자 바이러스를 회수하는 단계를 포함하는, 세포 배양물에서 인플루엔자 바이러스를 생성하는 

방법. 

청구항 30 

제29항에 있어서, HA 및/또는 NA 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 

a) 서열 번호 21, 23-26 또는 33-38, 또는 45 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열, 또는 그의 상보적 뉴클레오티 

드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 

b) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클 

레오티드 서열, 또는 그의 상보적 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 

c) 고도로 엄격한 조건하에서 실질적으로 전길이의 (a)의 폴리뉴클레오티드에 걸쳐 하이브리드화하는 폴리뉴클 

레오티드; 및 

d) (a)의 폴리뉴클레오티드와 98% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 

로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법. 

청구항 31 

제29항의 방법에 의해 생성된 인플루엔자 바이러스의 면역학적 유효량을 포함하는 면역원성 조성물. 

청구항 32 


청구항 33 

생리학적으로 유효한 담체 중의 제29항의 방법에 의해 생성된 인플루엔자 바이러스의 면역학적 유효량을 개체에 

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공개특허 10-2009-0053794

게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 형성하기 위해 개체의 면역계를 

자극하는 방법. 

청구항 34 




청구항 35 

제31항의 면역원성 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응 

을 형성하기 위해 개체의 면역계를 자극하는 방법. 

청구항 36 



청구항 37 

제31항의 면역원성 조성물을 포함하는 약독화 인플루엔자 생백신. 

청구항 38 

제32항의 면역원성 조성물을 포함하는 분할 바이러스 또는 사멸 바이러스 백신. 

청구항 39 

A/앤 아버/6/60 이외의 하나 이상의 공여 바이러스로부터의 6개의 내부 게놈 분절과, 서열 번호 27-32, 및 39- 

44의 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택되는 HA 및/또는 NA 폴리펩티드를 코딩하는 2개의 게놈 분절을 포함 

하는 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스. 

청구항 40 

제39항에 있어서, 상기 공여 바이러스가 온도 감수성, 저온 적응성, 또는 약독화 표현형 중 하나 이상을 포함 

하는 것인 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스. 

청구항 41 

제39항에 있어서, 상기 공여 바이러스가 PR8인 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스. 

청구항 42 

제39항에 있어서, 상기 공여 바이러스가 A/레닌그라드/17인 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스. 

청구항 43 


청구항 44 


청구항 45 


청구항 46 


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공개특허 10-2009-0053794

청구항 47 



방법. 

청구항 48 



방법. 

청구항 49 



방법. 

청구항 50 



방법. 

청구항 51 



청구항 52 



청구항 53 



청구항 54 

제51항에 있어서, 상기 바이러스가 사멸 또는 불활성화된 것인 방법. 

청구항 55 


청구항 56 


청구항 57 

제43항에 있어서, 헤마글루티닌이 변형된 다염기 절단 부위를 포함하는 면역원성 조성물. 

청구항 58 


청구항 59 

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공개특허 10-2009-0053794


청구항 60 


청구항 61 


청구항 62 


청구항 63 


청구항 64 


청구항 65 


청구항 66 

i) 인플루엔자 바이러스의 복제를 지지할 수 있는 숙주 세포 군집으로, 

(a) A/앤 아버/6/60이 아닌 제1 인플루엔자 균주의 6개 이상의 내부 게놈 분절; 및 서열 번호 27-32, 및 39- 

44의 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택되는 HA 또는 NA 폴리펩티드를 코딩하는 하나 이상의 게놈 분절; 또 

는 

(b) A/앤 아버/6/60이 아니며, 약독화, 저온 적응성 및 온도 감수성으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상 

의 표현형 특질을 포함하는 제1 인플루엔자 균주의 6개 이상의 내부 게놈 분절; 및 서열 번호 27-32, 및 39- 

44의 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택되는 HA 또는 NA 폴리펩티드를 코딩하는 하나 이상의 게놈 분절 

에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복수의 벡터를 도입하는 단계; 


iii) 인플루엔자 바이러스를 회수하는 단계를 포함하는, 세포 배양물에서 인플루엔자 바이러스를 생성하는 

방법. 

청구항 67 


청구항 68 




청구항 69 



청구항 70 

제67항의 면역원성 조성물을 포함하는 약독화 인플루엔자 생백신. 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

청구항 71 

제67항의 면역원성 조성물을 포함하는 분할 바이러스 또는 사멸 바이러스 백신. 

명 세 서 

배 경 기 술 

매년 많은 개체들이 상이한 인플루엔자 바이러스 균주와 상이한 유형의 인플루엔자 바이러스로 감염되고 있기 

때문에 지역 사회 보건 관점에서 뿐만 아니라, 상업적인 측면에 있어서 다양하며 진화하고 있는 인플루엔자 균 

주에 대한 백신이 중요하다. 유아, 노인, 적절한 건강 관리를 받지 못하는 개체 및 면역이 약화된 사람은 특히 

상기와 같은 감염으로부터 사망할 위험에 있다. 인플루엔자 감염의 문제를 악화시키는 것은 신규한 인플루엔자 

균주가 쉽게 진화하며, 다양한 종 사이에서 퍼질 수 있다는 것이며, 이로 인해 새로운 백신이 연속적으로 생산 

되어야 한다. 

상기와 같이 상이한 인플루엔자 바이러스/바이러스 균주에 대해 특이적인 방어 면역 반응을 일으킬 수 있는 다 

수의 백신이 50여년간 제조되었으며, 이는 전 바이러스 백신, 분할(split) 바이러스 백신, 표면 항원 백신 및 

생 약독화 바이러스 백신을 포함한다. 그러나, 이들 백신 유형들 중 어느 것의 적절한 제제가 전신 면역 반응을 

일으킬 수 있는 반면, 생 약독화 바이러스 백신은 기도내 국소적인 점막 면역을 자극시킬 수 있는 장점도 갖고 

있다. 백신 제조를 위해 인플루엔자 바이러스, 및 그의 단편을 제조하는 상당수의 연구들이 본 발명자와 동료들 

에 의해 이루어졌다; 예를 들면, 미국 출원 번호 제60/420,708호(2002년 10월 23일 출원); 제60/574,117호 

(2004년 5월 24일 출원); 제10/423,828호(2003년 4월 25일 출원); 제60/578,962호(2004년 6월 12일 출원); 및 

제10/870,690호(2004년 6월 16일 출원)(상기의 개시 내용이 본원에서 참고로 인용된다)를 참조한다. 

상이한 인플루엔자 균주의 연속적인 출현(또는 재출현)으로 인하여 새로운 인플루엔자 백신이 계속적으로 요구 

되고 있다. 그러한 백신은 전형적으로 새롭게 출현한 바이러스 균주의 항원 부분을 사용하여 재조되는 바, 신규 

한, 새롭게 출현한, 또는 새롭게 재출현한 바이러스 균주의 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드(특히 항원 유전자 

서열)가 매우 바람직할 수 있다. 

본 발명은 여러 유형의 백신 제조에서 뿐만 아니라, 연구, 진단 등에서 사용될 수 있는, 신규의 및/또는 새롭게 

단리된 인플루엔자 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제 변이체를 제공한다. 많은 다른 잇점들은 하기 리뷰를 통해 명 

백해질 것이다. 

발명의 상세한 설명 

발명의 요약 

본원의 몇몇 측면에서, 본 발명은 서열 번호 1부터 서열 번호 10, 또는 서열 번호 21부터 서열 번호 26, 또는 

서열 번호 33부터 서열 번호 38에 의해 코딩되는 폴리펩티드 중 어느 하나; 서열 번호 11부터 서열 번호 20, 또 

는 서열 번호 27부터 서열 번호 32, 또는 서열 번호 39부터 서열 번호 44의 폴리펩티드 중 어느 하나; 오직, 서 

열 번호 11부터 서열 번호 20, 또는 서열 번호 27부터 서열 번호 32, 또는 서열 번호 39부터 서열 번호 44의 폴 

리펩티드를 코딩하는 오픈 리딩 프레임만; 서열 번호 11-20, 또는 서열 번호 27-32, 또는 서열 번호 39-44의 폴 

리펩티드의 임의의 대체 형태(예로서, 신호 펩티드가 없는 성숙한 형태, 또는 오픈 리딩 프레임 바깥쪽 5' 및 

3' 서열이 없는 성숙한 형태, 또는 바이러스(예로서, 인플루엔자) 표면상에서 발현되는 서열이 없는 성숙한 형 

태); 고도로 엄격한 조건하에서 실질적으로 전길이의, 서열 번호 1부터 서열 번호 10, 또는 서열 번호 21부터 

서열 번호 26, 서열 번호 33-38, 또는 서열 번호 45의 폴리뉴클레오티드 서열에 걸쳐 하이브리드화하는 폴리뉴 

클레오티드 서열에 의해 코딩되는 임의의 폴리펩티드; 고도로 엄격한 조건하에서 서열 번호 1부터 서열 번호 

10, 또는 서열 번호 21부터 서열 번호 26, 서열 번호 33-38, 또는 서열 번호 45의 폴리뉴클레오티드 서열에 걸 

쳐 하이브리드화하는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 임의의 폴리펩티드; 및 서열이 헤마글루티닌 또는 

뉴라미니다제 폴리펩티드를 포함하는 것인 상기중 어느 것의 단편, 또는 헤마글루티닌 또는 뉴라미니다제 폴리 

펩티드의 단편, 바람직하게는, 전길이의 본 발명의 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하는 단편으 

로부터 선택되는 단리된 또는 재조합 폴리펩티드를 포함한다. 다양한 실시태양에서, 본 발명의 단리된 또는 재 

조합 폴리펩티드는 상기 폴리펩티드 중 어느 것의 약 300개의 인접한 아미노산 잔기와 실질적으로 동일한다. 추 

가의 다른 실시태양에서, 본 발명은 상기 폴리펩티드 중 어느 것의 적어도 약 350개 이상의 인접한 아미노산; 

적어도 약 400개 이상의 인접한 아미노산; 적어도 약 450개 이상의 인접한 아미노산; 적어도 약 500개 이상의 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

인접한 아미노산; 적어도 약 520개 이상의 인접한 아미노산; 적어도 약 550개 이상의 인접한 아미노산; 적어도 

약 559개 이상의 인접한 아미노산; 적어도 약 565개 이상의 인접한 아미노산; 또는 적어도 약 566개 이상의 인 

접한 아미노산과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 단리된 또는 재조합 폴리펩티드를 포함한다. 몇 

몇 실시태양에서, 폴리펩티드 서열(예로서, 본원 "서열"에 열거되어 있는 것)은 565개 미만, 559개 미만 등의 

아미노산을 포함한다. 그러한 실시태양에서, 열거되어 있는 것 중 더욱 짧은 폴리펩티드는 임의로 565개 미만, 

559개 미만 등의 아미노산을 포함한다. 추가의 다른 실시태양에서, 본 발명의 폴리펩티드는 임의로 융합 

단백질, 리더 서열을 포함하는 단백질, 전구체 폴리펩티드, 분비 신호 또는 위치 신호를 포함하는 단백질, 또는 

에피토프 태그, E-태그, 또는 His 에피토프 태그를 포함하는 단백질을 포함한다. 추가의 다른 실시태양에서, 본 

발명은 상기 열거된 것 중 적어도 하나의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 93%, 적어도 95%, 적어 

도 98%, 적어도 98.5%, 적어도 99%, 적어도 99.2%, 적어도 99.4%, 적어도 99.6%, 적어도 99.8%, 또는 적어도 

99.9%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 본 발명의 헤마글루티닌 서열은 변형되지 

않은 다염기 절단 부위를 포함하는 서열 및 변형된 다염기 절단 부위를 포함하는 서열, 둘 모두를 포함할 수 있 

다(이로써, 바이러스는 난(egg)에서 성장할 수 있다). 서열 번호 11, 13, 15, 17, 19, 27, 29, 31, 39, 41, 또 

는 43의 헤마글루티닌 폴리펩티드 서열은 내인성 아미노 말단 신호 펩티드 서열을 포함하지만, 본 발명의 헤마 

글루티닌 폴리펩티드 서열은 또한 성숙한 형태의 (아미노 말단 신호 펩티드가 절단된 형태의) 헤마글루티닌 폴 

리펩티드를 포함한다. 임의의 인플루엔자 균주의 임의의 헤마글루티닌 폴리펩티드 서열의 절단 부위는 당업계의 

임의의 많은 방법을 사용함으로써 통상적으로 결정되거나 예측될 수 있다. 

다른 측면에서, 본 발명은 상기 열거된 하나 이상의 폴리펩티드, 또는 그의 단편을 포함하는 조성물을 

포함한다. 본 발명은 또한 상기 기술된 적어도 하나의 아미노산 서열, 또는 그의 단편을 포함하는 적어도 1개의 

항원에 대해 발생된 폴리클로날 항혈청에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드를 포함한다. 상기 기술된 폴리펩티드 

에 대하여 특이적인 상기와 같은 항체 또한 본 발명의 특징이 된다. 본 발명의 폴리펩티드는 임의로 면역원성이 

다. 

본 발명은 또한 상기 기술된 임의의 폴리펩티드들 중 하나 이상을 면역학적 유효량으로 포함하는 면역원성 조성 

물 뿐만 아니라, 생리학적으로 허용가능한 담체 중의 상기 임의의 폴리펩티드들을 면역학적 유효량으로 개체에 

게 투여하는 단계를 포함하는 개체의 면역계를 자극시켜 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키 

는 방법을 포함한다. 

추가로, 본 발명은 면역학적 유효량의 상기와 같은 재조합 인플루엔자 바이러스를 포함하는 면역원성 조성물 이 

외에, 상기의 하나 이상의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스를 포함한 

다. 생리학적으로 허용가능한 담체 중의 면역학적 유효량의 상기와 같은 재조합 인플루엔자 바이러스를 투여함 

으로써 개체의 면역계를 자극시켜 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키는 방법 또한 본 발명의 

일부이다. 

다른 측면에서, 본 발명은 서열 번호 1부터 서열 번호 10, 또는 서열 번호 21부터 서열 번호 26, 또는 서열 번 

호 33부터 서열 번호 38, 또는 서열 번호 45(또는 그의 상보성 서열)의 폴리뉴클레오티드 서열 중 어느 하나, 

서열 번호 11부터 서열 번호 20, 또는 서열 번호 27부터 서열 번호 32, 또는 서열 번호 39부터 서열 번호 44(또 

는 그의 상보성 폴리뉴클레오티드 서열)의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열 중 어느 하나, 고도로 

엄격한 조건하에서 실질적으로 전길이의 상기 폴리뉴클레오티드 서열 중 어느 것에 걸쳐 하이브리드화하는 폴리 

뉴클레오티드 서열, 및 바람직하게 서열이 헤마글루티닌 또는 뉴라미니다제 폴리펩티드 또는 헤마글루티닌 또는 

뉴라미니다제 폴리펩티드의 단편을 코딩하는 것인 상기와 같은 폴리뉴클레오티드 서열 중 어느 것의 모두 또는 

단편을 포함하는 폴리뉴클레오티드 서열로부터 선택된 단리된 핵산 또는 재조합 핵산을 포함한다. 본 발명은 또 

한 상기 핵산에 의해 코딩되는 임의의 폴리펩티드의 적어도 약 300개 이상의 인접한 아미노산개 이상의 아미노 

산; 적어도 약 350개 이상의 아미노산; 적어도 약 400개 이상의 아미노산; 적어도 약 450개 이상의 아미노산; 

적어도 약 500개 이상의 아미노산; 적어도 약 502개 이상의 아미노산; 적어도 약 550개 이상의 아미노산; 적어 

도 약 559개 이상의 아미노산; 적어도 약 565개 이상의 아미노산; 또는 적어도 약 566개 이상의 아미노산과 실 

질적으로 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 단리된 핵산 또는 재조합 핵산을 포함한다. 또한, 아미노산 길이가 

예를 들어, 566개 미만, 565개 미만, 559개 미만 등인 경우(예로서, "서열" 참조)에는 상기 길이가 임의로 566 

개 미만, 565개 미만, 559개 미만 등임을 이해하여야 한다. 본 발명은 또한 헤마글루티닌 또는 뉴라미니다제 폴 

리펩티드, 또는 하나 이상의 헤마글루티닌 또는 뉴라미니다제 폴리펩티드의 하나 이상의 단편을 코딩하는 폴리 

뉴클레오티드를 포함하는 상기 핵산 중 임의의 것을 포함한다. 본 발명의 다른 측면은 서열이 상기 기술된 폴리 

뉴클레오티드들 중 적어도 하나와 적어도 98%의 동일성, 적어도 98.5%의 동일성, 적어도 99%의 동일성, 적어도 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

99.2%의 동일성, 적어도 99.4%의 동일성, 적어도 99.6%의 동일성, 적어도 99.8%의 동일성, 또는 적어도 99.9%의 

동일성을 갖는 폴리펩티드(임의로 헤마글루티닌 또는 뉴라미니다제 폴리펩티드)를 코딩하는 단리된 핵산 또는 

재조합 핵산을 포함한다. 본 발명은 또한 상기 기술된 폴리뉴클레오티드 서열들 중 하나 이상을 돌연변이화하거 

나 재조합하여 제조된 헤마글루티닌 또는 뉴라미니다제의 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 또는 재조합 핵산 

을 포함한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열은 임의로는 예로서, 리더 서열, 전구체 서열, 또는 에피토프 태 

그 서열 등의 것 중 하나 이상을 포함하고, 임의로 융합 단백질(예로서, 추가의 핵산 서열을 하나 이상 포함하 

는 융합 단백질)을 코딩할 수 있다. 

추가의 다른 실시태양에서, 본 발명은 2개 이상의 상기 기술된 핵산을 갖는 조성물(예로서, 적어도 약 2개, 

5개, 10개, 50개 이상의 핵산을 포함하는 라이브러리)을 포함한다. 그러한 조성물은 임의로 하나 이상의 상기 

기술된 핵산을(예로서, 기계적으로, 화학적으로, 제한 엔도뉴클레아제/RN아제/DN아제를 사용한 효소적인 것으로 

등) 절단함으로써 제조할 수 있다. 본 발명의 다른 조성물은 예로서, 데옥시리보뉴클레오티드 트리포스페이트 

및 열안정성 핵산 폴리머라제의 존재하에서 하나 이상의 상기 기술된 핵산을 인큐베이션시킴으로써 제조된 조성 

물을 포함한다. 

본 발명은 또한 상기 기술된 핵산, 또는 그의 절단된 또는 증폭된 단편 또는 생성물을 포함하는 세포를 포함한 

다. 그러한 세포는 임의로 상기 핵산에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 발현할 수 있다. 본 발명의 다른 실시태양 

은 상기 기술된 핵산 중 어느 것을 포함하는 벡터(예로서, 플라스미드, 코스미드, 파지, 바이러스, 바이러스 단 

편 등)를 포함한다. 그러한 벡터는 임의로 발현 벡터를 포함할 수 있다. 본 발명의 바람직한 발현 벡터로는 pol 

I 프로모터 및 종결자 서열을 포함하는 벡터, 또는 pol I 및 pol II 프로모터, 둘 모두를 사용하는 벡터인 "pol 

I/pol II 프로모터 시스템"(예로서, ([[Zobel et al., Nucl. Acids Res. 1993, 21:3607]; US20020164770; 

[Neumann et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96:9345]; [Fodor et al., J. Virol. 1999, 73:9679]; 

및 US20030035814)))을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 벡터에 의해 형질도입된 세포 또한 본 발명에 포 

함된다. 

몇몇 실시태양에서, 본 발명은 하나 이상의 상기 기술된 핵산(예로서, 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니다제를 코 

딩하는 핵산), 또는 그의 단편을 하나 이상 포함하는 바이러스(예로서, 인플루엔자 바이러스)를 포함한다. 상기 

바이러스를 포함하는 면역원성 조성물 또한 본 발명의 일부이다. 그러한 바이러스는 예를 들어, 6:2 재배열 바 

이러스(예로서, 하나 이상의 공여 바이러스로부터의 영역을 코딩하는 6개의 유전자와, 임의로 헤마글루티닌 및/ 

또는 뉴라미니다제를 포함할 수 있는, 하나 이상의 상기 기술된 뉴클레오티드 서열(또는 하나 이상의 그의 

단편)로부터의 영역을 코딩하는 2개의 유전자를 포함하는 6:2 재배열 바이러스)와 같은 재배열 바이러스를 포함 

할 수 있다. 본 발명의 재배열 바이러스(임의로 생 바이러스)는 예로서, 저온 감수성, 저온 적응, 약독화 공여 

바이러스 중 하나 이상의 것인 공여 바이러스를 포함할 수 있다. 예를 들어, 재배열 바이러스는 예로서, A/앤 

아버/6/60, PR8 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 재배열 바이러스는 별법으로 A/앤 아버/6/60을 제외할 수 

있다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시태양은 바이러스가 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스이며, A/앤 아버/6/60 

으로부터의 영역을 코딩하는 6개의 유전자와, 서열 번호 11-20, 서열 번호 27-32, 및 서열 번호 39-44의 폴리펩 

티드로 구성된 군으로부터 선택되는 폴리펩티드를 코딩하는 영역을 코딩하는 2개의 유전자를 포함하는 것인 재 

배열 인플루엔자 바이러스이다. 대체 실시태양에서, 본 발명의 재배열 인플루엔자 바이러스는 바이러스가 A/앤 

아버/6/60 이외의 하나 이상의 공여 바이러스로부터의 영역을 코딩하는 6개의 유전자와, 서열 번호 11-20, 서열 

번호 27-32, 및 서열 번호 39-44의 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택되는 폴리펩티드를 코딩하는 영역을 코 

딩하는 2개의 유전자를 포함하는 것인, 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스를 포함한다. 또다른 대체 

실시태양에서, 본 발명의 재배열 인플루엔자 바이러스는 바이러스가 A/앤 아버/6/60 이외의 하나 이상의 공여 

바이러스로부터의 영역을 코딩하는 6개의 유전자와, 임의의 범유행성 인플루엔자 균주로부터의 HA 또는 NA 폴리 

펩티드인 영역을 코딩하는 2개의 유전자를 포함하는 것인, 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스를 포함한다. 핵산이 

발현될 수 있도록 하는 조건하에 적합한 배양 배지에서 인플루엔자 바이러스를 수반하는 숙주 세포를 배양하고, 

하나 이상의 상기 숙주 세포 또는 상기 배지로부터 재조합 인플루엔자 바이러스를 단리시키는 단계를 통해 재조 

합 인플루엔자 바이러스를 제조하는 방법 또한 본 발명의 일부이다. 

본원의 다른 실시태양에서, 본 발명은 상기 기술된 재조합 인플루엔자 바이러스 중 어느 것을 면역학적 유효량 

으로 갖는 면역원성 조성물을 포함한다. 다른 실시태양은 (임의로 생리학적으로 허용가능한 담체 중의) 상기 기 

술된 재조합 인플루엔자 바이러스 중 어느 것을 면역학적 유효량으로 개체에게 투여하여 개체의 면역계를 자극 

시켜 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키는 방법을 포함한다. 

본 발명의 다른 측면은 핵산이 발현될 수 있도록 하는 조건하에 적합한 배양 배지에서 상기 임의의 숙주 세포를 

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배양하고, 하나 이상의 상기 숙주 세포, 또는 상기 세포가 배양된 배지로부터 폴리펩티드를 단리시켜 단리된 폴 

리펩티드 또는 재조합 폴리펩티드를 제조하는 방법을 포함한다. 

면역원성 조성물 또한 본 발명의 특징이 된다. 예를 들어, 상기 기술된 임의의 폴리펩티드들 및/ 또는 핵산들 

중 하나 이상, 및 임의로 부형제, 예를 들어, 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 하나 이상의 약제학적으로 

허용가능한 투여 성분을 포함하는 면역원성 조성물이다. 본 발명의 면역원성 조성물은 또한(예로서, 하나 이상 

의 약제학적으로 허용가능한 투여 성분과 함께) 임의의 하나 이상의 상기 기술된 바이러스도 포함할 수 있다. 

피험체에게 상기 바이러스(또는 면역원성 조성물)들 중 임의의 것을 유효량 투여함으로써 피험체에서 면역원성 

반응을 일으키는 방법 또한 본 발명에 포함된다. 추가로, 바이러스 감염에 대한 면역원성 반응을 일으키는데 유 

효한 양으로 임의의 하나 이상의 상기 기술된 바이러스(또는 면역원성 조성물)를 투여함으로써 피험체에서 바이 

러스 감염(예로서, 바이러스성 인플루엔자)을 예방학적으로 또는 치료학적으로 치료하는 방법 또한 본 발명의 

일부이다. 상기와 같은 치료법을 위한 피험체는 포유동물(예로서, 인간)을 포함할 수 있다. 그러한 방법 또한 

피험체에게 생체내 투여하는 것 뿐만 아니라, 피험체의 하나 이상의 세포에 시험관내에서 또는 생체외에서 투여 

하는 것을 포함할 수 있다. 추가로, 상기 방법은 또한 예방학적으로 또는 치료학적으로 바이러스 감염을 치료하 

는데 유효한 양으로 피험체에게 투여되는, 바이러스와 약제학적으로 허용가능한 부형제의 조성물을 투여하는 것 

을 포함할 수 있다. 

다른 측면에서 본 발명은 하나 이상의 범유행성 인플루엔자 균주의 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니다제 폴리펩 

티드를 코딩하는 핵산 서열, 및 A/앤 아버/6/60의 하나 이상의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 조 

성물을 포함한다. 추가로, 본 발명은 하나 이상의 범유행성 인플루엔자 균주의 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니 

다제 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 및 PR8 또는 A/앤 아버/6/60의 하나 이상의 폴리펩티드를 코딩하는 핵 

산 서열을 포함하는 조성물을 포함한다. 그러한 서열은 본원 "서열"에 열거된 것을 포함할 수 있다. 추가로, 본 

발명의 바람직한 실시태양은 하나 이상의 범유행성 인플루엔자 균주의 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니다제를 코 

딩하는 서열, 및 6:2 재배열체 중 선택된 골격 균주를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 조성물을 포함한다. 그러 

한 조성물은 바람직하게 본원 "서열"로부터 선택된 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제를 코딩하는 서열을 포함하며, 

여기서, 골격 균주는 PR8 또는 A/앤 아버/6/60이다. 본 발명은 또한 헤마글루티닌이 변형된 다염기 절단 부위를 

포함하는 것인, 상기 기술된 것과 같은 조성물을 포함한다. 본 발명은 또한 상기 조성물을 포함하는 생 약독화 

인플루엔자 백신을 포함한다. 

본 발명의 이러한 특징과 목적 및 기타의 특징과 목적은 첨부된 도면 및 보충물과 함께 하기의 상세한 설명을 

참고함으로써 더 잘 이해할 수 있을 것이다. 

실 시 예 

실시예 1: H5N1 ca 바이러스 및 백신 작제 및 분석 

H5N1 HA/NA 서열을 포함하는 본원의 다양한 서열을 사용하여 인플루엔자 바이러스 및 백신을 제조하였다. 그러 

한 백신 중의 HA 서열은 HA내 다염기 절단 부위를 제거함으로써 야생형으로부터 변경시켰다. ca A/AA/6/60과 함 

께 HA/NA 서열을 재배열하였다(6:2의 재배열체). 

3개의 H5N1 인플루엔자 균주를 본 실시예에서 사용하였다: AVN/1203/2004, A/HK/491/1997, 및 A/HK/213/2003. 

상기 균주는 또한 본 실시예에서는 이들이 지정된 년도에 기초하여 '97, '03, 및 '04 균주로도 지칭된다. 이들 

3개의 균주의 HA 서열 상동성은 95-96%이다. 도 1은 바이러스/백신을 작제하기 위해 사용된, 대표적인 HA 서열, 

'04 HA 서열의 다염기 절단 부위의 변형을 도시한다. 앞서 언급한 바와 같이. 본 발명의 다양한 실시태양은 제 

거되는 다염기 절단 부위 영역이 다른 서열을 포함한다. 상기 참조. 

언급한 바와 같이, 변형된 H5N1 서열 (즉, 변형된 '97, '03, 및 '04 유전자)를 사용하여 ca A/AA/6/60을 갖는 

6:2 재배열 바이러스를 작제하였다. 기타의 바람직한 골격(예로서, PR8 등) 또한 사용된다는 것을 이해할 것이 

며, 그리고 이는 본원 도처에서 명시되고 있다. 

본 발명의 6:2 재배열체에 있어서, HA 및 NA 유전자 서열은 하나 이상의 야생형 모체 바이러스로부터 유래하였 

는데, 즉, '03 바이러스의 HA 및 NA 유전자 서열은 A/HK/213/2003으로부터 유래하였고, '04 바이러스의 HA 및 

NA 유전자 서열은 A/VN/1203/2004로부터 유래하였으며, '97 바이러스의 HA 및 NA 유전자 서열은 A/HK/491/1997 

로부터 유래한 반면, 유전자 서열은 A/HK/486/1997로부터 유래하였다. 6:2 재배열체 중 나머지 유전자는 

A/AA/6/60 ca 모체 바이러스로부터 유도된 것과 같은 서열 분석법에 의해 특징화하였다. 재배열된 바이러스는 

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난에서 8.0-8.5 log10 TCID50으로까지 복제하였다. 그러나, log10 TCID50이 약 7.0 내지 약 9.0, 약 7.5-8.5, 또 

는 약 8.0-8.5인 다른 실시태양 또한 본 발명의 범주내 포함된다는 것을 이해할 것이다. 작제된 바이러스에서 

내인성 프로테아제에 의한 변형된 HA의 절단가능성은 시험관내에서는 제안되었고, 바이러스는 성장에 대해 트립 

신(예로서, 약 0.1 ug/ml 내지 약 1.0 ug/ml)에 의존하였다. 작제된 바이러스는 시험관내 분석법에 의해 분석한 

바, 온도 감수성이었다. 

H5N1 ca 재배열 바이러스(변형된 '97, '03, 또는 '04 HA 유전자를 갖는 것)는 닭에 대해 치사성을 띠지는 않았 

다. 예를 들어, 4주된 SPF 백색 플리머스 록(Plymouth Rock) 닭에 1:10의 스톡 바이러스 희석액(10 8-8.75 

TCID50/ml)을 정맥내로 접종하고, 10일간 관찰하였을 때, 야생형 '97, '03, 및 '04 H5N1이 사용된 경우에는 8마 

리의 닭 중 8마리가 1-2일내 사망한 반면, H5N1 ca 재배열 바이러스가 사용된 경우에는 8마리의 닭 중 한마리도 

죽지 않은 것이 관찰되었다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 비내로 투여된 H5N1 ca 재배열 바이러스는 닭에서 복제 

되지 않았다. 

H5N1 ca 재배열체 또한 마우스에 대해 치사성을 띠지는 않았다. H5N1 야생형 균주에 대한 TCID50도 나타내는 도 

3을 참조한다. 도 4는 마우스에서 1997 및 2004 H5N1 ca 재배열 바이러스 복제가 제한된다는 것을 나타낸다. 도 

5는 H5N1 ca 재배열된 바이러스 복제가 마우스의 폐에서는 제한된다는 것을 나타낸다. 

단일의, 백신 비내 투여 후 마우스에서 유도된 혈청 HAI 항체 역가의 비교(2003 야생형과 2003 ca 비교)를 도 6 

에 나타낸다. 도 7 및 15는 유사한 측정치를 나타내는데, 단, 혈청 중화 항체 역가를 사용한다. 

도 8은 H5N1 ca 재배열 바이러스가 마우스를 50, 500, 또는 5,000 LD50의 야생형 H5N1 바이러스를 사용한 치사 

항원자극으로부터 방어한다는 것을 나타낸다. 도 9는 마우스 폐에서 동종성 및 이종성 H5N1 항원자극 바이러스 

복제로부터의 방어 효능을 보여준다. 알 수 있는 바와 같이, ca 재배열 바이러스는 야생형 바이러스보다 덜 복 

제되었다. 도 10은 마우스의 상기도를 사용하여 얻은 관련 데이타를 나타낸다. 당업자는 동종성 및 이종성 항원 

자극(예로서, 2003 백신이 2003 야생형 항원자극(동종성)에 대해 방어하는지 여부를 시험하는 것 또는 2003 백 

신 1997 야생형 항원자극(이종성)에 대해 방어하는지 여부를 시험하는 것 등)에 대해 정통할 것이다. 

도 11은 마우스에서 동종성 또는 이종성 H5N1 야생형 바이러스를 고용량(1O 5 

TCID50)으로 사용한 항원자극에 대 

해 2004 H5N1 ca 백신에 의해 부여된 방어 효능을 나타낸다. 도 12는 마우스에서 동종성 또는 이종성 H5N1 야생 

형 바이러스를 고용량(1O 5 

TCID50)으로 사용한 항원자극에 대해 1997 및 2003 H5N1 ca 백신에 의해 부여된 방어 

효능을 나타낸다. 도 13은 마우스에서 저용량 또는 고용량의 동종성 H5N1 야생형 바이러스를 사용한 항원자극에 

대해 2004 H5N1 ca 백신에 의해 부여된 방어 효능을 나타낸다. 도 11-13은 시험된 백신이 기타 관련 바이러스에 

대해 방어할 수 있다는 것을 입증한다. 

건강한 성인 인간에서 비내로 분무하여 투여한 경우, '04 백신의 내성은 우수하였고, 그의 복제는 고도로 제한 

되었다. 건강한 성인에서 백신의 복제 제한에 관해 도 27을 참조한다. 건강한 성인 중 일부에서는 10 6.7 

'04 백신에 대한 HI 항체 반응도 관찰되었다. 도 28을 참조한다. 

TCID50의 

본 실시예는 본 발명의 예시적인 H5N1 ca 재배열 바이러스/백신에 관한 몇몇 주안점을 입증한다. 변형된 ca 재 

배열 '97, '03, 및 '04 바이러스는 시험관내 ts 표현형, 닭에서의 발병성 상실 및 마우스에서의 약독화를 갖는 

것으로 나타났다. 약독화는 또한 페럿에 존재하는 것으로 예측된다. 마우스에서 야생형 바이러스를 사용한 치사 

성 항원자극 및 전신 전파에 대한 방어 효능 및 교차 방어 효능 또한 나타낸다. 마우스의 기도에서 야생형 항원 

자극 바이러스의 복제에 대한 방어 효능 및 교차 방어 효능 또한 기대된다. 

2회의 백신 투약 이후 면역원성 및 효능이 개선되었는지 여부를 측정하기 위해; 인간이 아닌 영장류에서의 면역 

원성을 평가하기 위해; 페럿에서의 약독화 및 백신 효능을 평가하기 위해; 마우스에서 생산된 백신의 관찰된 효 

능에 대한 체액성 및 세포성 면역의 기여를 측정하기 위해; 2003 HA의 어떤 잔기가 면역원성을 증진시키는데 도 

움이 되며, 그를 1997 및 2004 HAs로 도입시키는데 도움이 되는지를 측정하기 위해; 및 다염기 아미노산 절단 

부위의 결실 및 유전자 배열이 미치는 효과를 측정하기 위해 이들(및 유사한) 바이러스/백신을 사용하는 것에 

주시한다. 

실시예 2: H6 ca 바이러스 및 백신의 작제 및 분석 

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3개의 재조합 인플루엔자 바이러스 한 세트와 H6 HA 서열을 포함하는 백신을 제조하였다: (a) A/오리(이는 A/오 

리77의 H6 HA 및 N9 NA를 포함하였다); (b) A/검둥오리(이는 A/검둥오리97의 H6 HA 및 N1 NA를 포함하였다); 

및 (c) A/청둥오리(이는 A/청둥오리85의 H6 HA 및 N2 NA를 포함하였다). 각 재조합 바이러스의 6개의 내부 게놈 

분절은 ca A/AA/6/60의 것이었다. 

각각의 A/오리, A/검둥오리, 및 A/청둥오리 재조합 바이러스를 페럿의 비갑개 및 폐에서 약독성이었다. 페럿에 

10 7 

TCID50 재조합(ca; 바로 앞 문단 참조) 또는 야생형(wt) H6 인플루엔자 바이러스를 비내로 접종하였다. 검사 

하기 위해 감염후 3일째 페럿으로부터 비갑개 및 폐 조직을 수거하였다. 도 16은 재조합 바이러스(ca)를 접종받 

은 페럿의 비갑개 및 폐 조직이 각각의 대응 wt 바이러스를 접종받은 페럿의 비갑개 및 폐 조직에서보다 더 낮 

은 바이러스 역가를 나타내었다는 것을 보여준다. 

A/오리, A/검둥오리, 및 A/청둥오리 재조합(ca) 바이러스 각각은 또한 페럿에서 면역원성이었다. 도 17을 참조 

한다. 

도 18은 A/오리, A/검둥오리, 및 A/청둥오리 백신에 의해 부여받은 방어 효능을 보여준다. 페럿을 7 log10 PFU 

재조합 A/오리, A/검둥오리, 또는 A/청둥오리 백신을 단일 투약하여 백신화하였다. 이어서, 페럿을 7 log10 PFU 

wt A/오리, A/검둥오리, 또는 A/청둥오리 바이러스로 항원자극시켰다. 항원자극후 3일째 페럿의 폐 및 비갑개를 

수거하고, 조직 중의 바이러스 역가를 측정하였다. 도 18은 페럿에서 동종성 및 이종성 야생형 H6 바이러스에 

대한, 재조합(ca) H6 백신에 의해 부여받은 방어 효능을 보여준다. 

실시예 3: H7N3, BC 04 ca. 바이러스 및 백신의 작제 및 분석 

추가의 재조합 인플루엔자 바이러스 및 백신은 A/ck/BC/CN-6/04(BC 04 ca)의 HA H7 및 NA N3 서열을 사용하여 

제조하였다. 이러한 HA 및 NA 서열을 ca A/AA/6/60의 6개의 내부 게놈 분절과 조합하였다. 

BC 04 ca 백신은 페럿에서 약독성이었다. 페럿에 10 7 

TCID50 백신을 0.5 mL로 하여 비내로 접종하였다. 접종후 3 

일째, 페럿 비갑개, 폐, 뇌, 및 후구를 수거하였다. 이들 각각의 조직 중의 바이러스 역가는 wt 바이러스 

A/BC/CN-6/04 또는 A/BC/CN-7/04를 접종받은 페럿과 비교하였을 때 백신 바이러스를 접종받은 페럿에서 감소하 

였다. 도 19를 참조한다. 

BC 04 ca 백신은 마우스에서 면역원성이었다. BC 04 ca 백신을 받은 마우스에서 4주째 중화 항체가 검출되었고, 

역가는 8주에 걸쳐 상승하였다. 백신의 2차 투약으로 항체 역가가 증폭되었지만, 획득한 최종 역가는 단일 투약 

후의 것과 유사하였다. 도 20을 참조한다. 

도 21 및 22는 동종성 및 이종성 H7 wt 바이러스, 둘 모두에 대한, BC 04 ca 백신에 의해 부여받은 방어 효능을 

보여준다. 도 21의 경우, 항원자극 4주전 1회의 백신 투약, 항원자극 8주전 1회의 백신 투약, 또는 50 LD50 동종 

성(A/ck/BC/CN-7/04) 및 이종성(A/NL/219/03 또는 A/tk/Eng/63) H7 wt 바이러스를 사용하여 치사 항원자극 이 

전에 2회에 걸친 백신 투약(4주간의 간격을 두고 투여됨)으로 마우스에 비내로 접종하였다. 치사 항원자극 이후 

마우스의 체중 변화를 14일 동안 매일 모니터하여 wt 인플루엔자 바이러스 항원자극과 관련된 사망율을 모니터 

하였다. 

동종성 A/ck/BC/CN-7/04 바이러스로 치사 감염된 각각의 마우스의 경우, 항원자극 4주전 1회의 백신 투약으로 

투여되었는지(a), 항원자극 8주전 1회의 백신 투약으로 투여되었는지(b) 또는 항원자극 이전에 2회에 걸친 백신 

투약으로 투여되었는지(c)와는 상관없이 체중 변화는 거의 관찰되지 않거나, 전혀 관찰되지 않았다. 유사하게, 

이종성 인플루엔자 바이러스, A/NL/2109/03(d, e, f) 또는 A/tk/Eng/63(g, h, i)으로 마우봄보 항원자극한 후 

에는 체중 손실이 거의 관찰되지 않거나, 전혀 관찰되지 않았다. 또한, 항원자극 4주전 1회의 백신 투약으로 투 

여되었는지(d 또는 g), 항원자극 8주전 1회의 백신 투약으로 투여되었는지(e, 또는 h), 또는 항원자극 이전에 2 

회에 걸친 백신 투약으로 투여되었는지(i의 경우)와는 상관없이 체중 손실은 없은 것으로 관찰되었다. 

도 22는 H7N3 BC 04 ca 백신의 효능을 보여주는 추가의 증거를 제공한다. H7N3 BC 04 ca 백신을 받은 마우스의 

비갑개(a) 및 폐(b), 둘 모두에서 ck/BC/CN-6/04(H7N3), ck/BC/CN-7/04(H7N3), NL/219/03(H7N7), 

tk/Eng/63(H7N3), tk/UT/95(H7N3), 및 tk/VA/02(H7N2) 바이러스를 사용한 항원자극에 대한 방어가 관찰되었다. 

실시예 4: H9N2 G9/AA ca. 바이러스 및 백신의 작제 및 분석 

A/ck/홍콩/G9/97의 HA H9 및 NA N2 서열(G9/AA ca)을 사용하여 추가의 재조합 인플루엔자 바이러스 및 백신을 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

제조하였다. 이들 HA 및 NA 서열을 ca A/AA/6/60의 6개의 내부 게놈 분절과 함께 조합하였다. 

H9N2 G9/AA ca 백신은 페럿에서 약독성이었다. H9N2 G9 wt 바이러스와 비교하였을 때, H9N2 G9/AA ca 바이러스 

를 투여한 후의 페럿의 비갑개(a) 및 폐(b)에서의 바이러스 역가는 감소한 것으로 나타났으며, 이에 대해서는 

도 23을 참조한다. 

도 24는 마우스에서 H9N2 G9 ca 백신의 효능을 보여주는 증거를 제공한다. H9N2 G9 ca 백신을 받은 마우스에서 

는 H9N2 G9 wt 및 A/HK/1073/99 바이러스를 사용한 항원자극에 대한 방어가 관찰되었다. 

H9N2 G9/AA ca 백신은 또한 임상 시험 세팅의 건강한 성인에서 내성은 우수하였다. 점비제에 의해 H9N2 G9/AA 

ca 백신을 건강한 성인에게 투여하였다. 건강한 성인에서 H9N2 G9/AA ca 백신은 복제에 있어 매우 

제한적이었다. 도 25를 참고한다. 추가로, 10 7.0 

HI 역가가 4배 초과로 증가하는 것이 유도되었다. 도 26을 참조한다. 

TCID50의 H9N2 G9/AA ca 백신 투여로 건강한 지원자 중 92%에서 

명확하게 하고 이해를 돕기 위한 목적으로 상기의 발명은 보다 상세히 기술되었지만, 본 발명의 진실된 범주로 

부터 벗어남 없이 형식대로 및 상세히 다양하게 변형될 수 있다는 것을 본 개시를 해독함으로써 당업자는 명백 

하게 이해할 것이다. 예를 들어, 상기 기술된 모든 기법과 장치는 다양하게 조합하여 사용될 수 있다. 본 출원 

에서 인용된 모든 간행물, 특허, 특허 출원, 또는 기타 문서들은 각각의 개별 간행물, 특허, 특허 출원, 또는 

기타 문서가 모든 목적을 위해 참고로 인용된다는 것을 개별적으로 나타내는 바와 같이 모든 목적을 위해서 상 

기의 전문이 참고로 포함된다. 특히, 2006년 8월 9일 출원된 미국 가출원 번호 제60/821,832호 및 2007년 6월 8 

일 출원된 미국 가출원 번호 제60/942,804호의 전문이 모든 목적을 위해 본원에서 인용된다. 

본 발명의 추가의 실시태양은 표 3 및 4에서 제시한다. 

표 3 

구체적인 실시태양 


1 a) 서열 번호 21-26 또는 33-38 또는 45 중 어느 하나에 제시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩 

된 폴리펩티드; 

b) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된 폴리펩티드; 

c) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된, 성숙한 형태의 폴리펩티드; 

d) 고도로 엄격한 조건하에서 (a), (b) 또는 (c)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 하이브리 

드화하는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드; 및 

e) (b)의 폴리펩티드와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택 

되는 단리된 폴리펩티드. 

2 면역학적 유효량의, 실시태양 1의 적어도 하나의 폴리펩티드를 포함하는 면역원성 조성물. 

3 실시태양 1의 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 단리된 항체. 

4 생리학적으로 허용가능한 담체 중 면역학적 유효량의, 실시태양 1의 폴리펩티드를 개체에게 투 

여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키기 위해 개체의 

면역계를 자극시키는 방법. 

5 실시태양 1의 폴리펩티드를 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스. 

6 면역학적 유효량의, 실시태양 5의 재조합 인플루엔자 바이러스를 포함하는 면역원성 조성물. 

7 생리학적으로 허용가능한 담체 중 면역학적 유효량의, 실시태양 5의 재조합 인플루엔자 바이러 

스를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으 

키기 위해 개체의 면역계를 자극시키는 방법. 

8 a) 서열 번호 21-26 또는 33-38 또는 45 중 어느 하나에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 

그의 상보적 서열; 

b) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티 

드 서열, 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오티드 서열; 

c) 고도로 엄격한 조건하에서 실질적으로 전길이의 (a)의 폴리뉴클레오티드 서열에 걸쳐 하이브 

리드화하는 폴리뉴클레오티드 서열; 및 

d) (a)의 폴리뉴클레오티드 서열과 적어도 98%의 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드 서열로 

구성된 군으로부터 선택되는 단리된 핵산. 

9 실시태양 8의 적어도 하나의 핵산을 포함하는 면역원성 조성물. 

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10 실시태양 8의 적어도 하나의 핵산을 포함하는 세포. 

11 실시태양 8의 핵산을 포함하는 벡터. 

12 실시태양 12에 있어서, 플라스미드, 코스미드, 파지, 바이러스, 또는 바이러스의 단편인 벡터. 

13 실시태양 12에 있어서, 발현 벡터인 벡터. 

14 실시태양 13의 벡터를 포함하는 세포. 

15 실시태양 8의 하나 이상의 핵산을 포함하는 인플루엔자 바이러스. 

16 실시태양 15에 있어서, 재배열 바이러스인 바이러스. 

17 A/앤 아버/6/60으로부터의 영역을 코딩하는 6개의 유전자와, 서열 번호 27-32, 및 39-44의 폴리 

펩티드로 구성된 군으로부터 선택되는 폴리펩티드를 코딩하는 영역을 코딩하는 2개의 유전자를 

포함하는 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스. 

18 핵산이 발현될 수 있도록 하는 조건하에 적합한 배양 배지 중 실시태양 14의 세포를 배양하는 

단계; 및 상기 세포를 포함하는 세포 군집 또는 배지로부터 재조합 인플루엔자 바이러스를 단리 

시키는 단계를 포함하는, 재조합 인플루엔자 바이러스를 제조하는 방법. 

19 면역학적 유효량의, 실시태양 17의 재조합 인플루엔자 바이러스를 포함하는 면역원성 조성물. 

20 생리학적으로 유효한 담체 중 면역학적 유효량의, 실시태양 17의 재조합 인플루엔자 바이러스를 

개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키기 

위해 개체의 면역계를 자극시키는 방법. 

21 상기 핵산이 발현될 수 있도록 하는 조건하에 적합한 배양 배지 중 실시태양 10의 숙주 세포를 

배양하는 단계; 및 하나 이상의 숙주 세포 또는 배지로부터 폴리펩티드를 단리시키는 단계를 포 

함하는, 단리된 또는 재조합 폴리펩티드를 제조하는 방법. 

22 바이러스 감염에 대한 면역원성 반응을 일으키는데 유효한 양으로 실시태양 17의바이러스를 피 

험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 피험체에서 바이러스 감염을 예방학적으로 또는 치료학적 

으로 치료하는 방법. 

23 실시태양 22에 있어서, 피험체가 인간인 방법. 

24 실시태양 19에 있어서, 헤마글루티닌이 변형된 다염기 절단 부위를 포함하는 면역원성 조성물. 

25 실시태양 19의 조성물을 포함하는 생 약독화 인플루엔자 백신. 

26 실시태양 19의 조성물을 포함하는 분할 바이러스 또는 사멸된 바이러스 백신. 

27 실시태양 24의 조성물을 포함하는 생 약독화 인플루엔자 백신. 

28 실시태양 24의 조성물을 포함하는 분할 바이러스 또는 사멸된 바이러스 백신. 

29 i) 인플루엔자 바이러스의 복제를 지지할 수 있는 숙주 세포 군집으로 A/앤 아버/6/60인 제1 인 

플루엔자 균주의 적어도 6개의 내부 게놈 분절; 및 범유행성 인플루엔자 균주인 제2 인플루엔자 

균주의 면역원성 인플루엔자 표면 항원을 코딩하는 적어도 하나의 게놈 분절을 코딩하는 핵산을 

포함하는 복수개의 벡터를 도입하는 단계; 


iii) 복수개의 인플루엔자 바이러스를 회수하는 단계를 포함하는, 세포 배양물에서 인플루엔자 

바이러스를 제조하는 방법. 

30 실시태양 29에 있어서, 복수개의 벡터가 

a) 서열 번호 21-26 또는 33-38, 또는 45 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그의 상 

보적 서열; 

b) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열, 

또는 그의 상보적 폴리뉴클레오티드 서열; 

c) 고도로 엄격한 조건하에서 실질적으로 전길이의 (a)의 폴리뉴클레오티드 서열에 걸쳐 하이브 

리드화하는 폴리뉴클레오티드 서열; 및 

d) (a)의 폴리뉴클레오티드 서열과 적어도 98%의 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드 서열로 

구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 단리된 핵산을 포함하는 것인 방법. 

31 실시태양 29의 인플루엔자 바이러스를 면역학적 유효량으로 포함하는 면역원성 조성물. 

32 실시태양 30의 인플루엔자 바이러스를 면역학적 유효량으로 포함하는 면역원성 조성물. 

33 생리학적으로 유효한 담체 중 실시태양 29의 인플루엔자 바이러스를 면역학적 유효량으로 개체 

에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키기 위해 

개체의 면역계를 자극시키는 방법. 

34 생리학적으로 유효한 담체 중 실시태양 30의 인플루엔자 바이러스를 면역학적 유효량으로 개체 

에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키기 위해 

개체의 면역계를 자극시키는 방법. 

35 실시태양 31의 면역원성 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 

대한 방어 면역 반응을 일으키기 위해 개체의 면역계를 자극시키는 방법. 



37 실시태양 31의 면역원성 조성물을 포함하는 생 약독화 인플루엔자 백신. 

38 실시태양 32의 면역원성 조성물을 포함하는 분할 바이러스 또는 사멸된 바이러스 백신. 

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표 4 


1 a) 서열 번호 21-26 또는 33-38 또는 45 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오티드에 의해 코딩된 아 

미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드; 

b) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드; 

c) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 성숙한 형태 

의 폴리펩티드; 

d) 고도로 엄격한 조건하에서 (a), (b) 또는 (c)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴 

리뉴클레오티드에 하이브리드화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 

폴리펩티드; 및 

e) (b)의 폴리펩티드와 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 

로 구성된 군으로부터 선택되는 단리된 폴리펩티드. 

2 면역학적 유효량의, 실시태양 1의 적어도 하나의 폴리펩티드를 포함하는 면역원성 조성물. 

3 실시태양 1의 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 단리된 항체. 

4 생리학적으로 허용가능한 담체 중 면역학적 유효량의, 실시태양 1의 폴리펩티드를 개체에게 투 

여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키기 위해 개체의 

면역계를 자극시키는 방법. 

5 실시태양 1의 폴리펩티드를 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스. 

6 면역학적 유효량의, 실시태양 5의 재조합 인플루엔자 바이러스를 포함하는 면역원성 조성물. 

7 생리학적으로 허용가능한 담체 중 면역학적 유효량의, 실시태양 5의 재조합 인플루엔자 바이러 

스를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으 

키기 위해 개체의 면역계를 자극시키는 방법. 

8 a) 서열 번호 21-26 또는 33-38 또는 45 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오티드 서열, 또는 그의 

상보적 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 

b) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 

코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 그의 상보적 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티 

드; 

c) 고도로 엄격한 조건하에서 실질적으로 전길이의 (a)의 폴리뉴클레오티드에 걸쳐 하이브리드 

화하는 폴리뉴클레오티드; 및 

d) (a)의 폴리뉴클레오티드와 적어도 98%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 

폴리뉴클레오티드로 구성된 군으로부터 선택되는 단리된 폴리뉴클레오티드. 

9 실시태양 8의 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물. 

10 실시태양 8의 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포. 

11 실시태양 8의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터. 

12 실시태양 11에 있어서, 플라스미드, 코스미드, 파지, 바이러스, 또는 바이러스의 단편인 벡터. 

13 실시태양 12에 있어서, 발현 벡터인 벡터. 

14 실시태양 13의 벡터를 포함하는 세포. 

15 실시태양 8의 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 인플루엔자 바이러스. 

16 실시태양 15에 있어서, 재배열 바이러스인 바이러스. 

17 A/앤 아버/6/60으로부터의 6개의 내부 게놈 분절과, 서열 번호 27-32, 및 39-44의 폴리펩티드로 

구성된 군으로부터 선택되는 HA 및/또는 NA 폴리펩티드를 코딩하는 2개의 게놈 분절을 포함하는 

6:2 재배열 인플루엔자 바이러스. 

18 상기 폴리뉴클레오티드가 발현될 수 있도록 하는 조건하에 적합한 배양 배지 중 실시태양 14의 

세포를 배양하는 단계; 및 상기 세포를 포함하는 세포 군집 또는 배지로부터 재배열 인플루엔자 

바이러스를 단리시키는 단계를 포함하는, 재배열 인플루엔자 바이러스를 제조하는 방법. 

19 면역학적 유효량의, 실시태양 17의 재배열 인플루엔자 바이러스를 포함하는 면역원성 조성물. 

20 생리학적으로 유효한 담체 중 면역학적 유효량의, 실시태양 17의 재배열 인플루엔자 바이러스를 

개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키기 

위해 개체의 면역계를 자극시키는 방법. 

21 상기 폴리뉴클레오티드가 발현될 수 있도록 하는 조건하에 적합한 배양 배지 중 실시태양 10의 

세포를 배양하는 단계; 및 세포 또는 배지로부터 폴리펩티드를 단리시키는 단계를 포함하는, 단 

리된 또는 재조합 폴리펩티드를 제조하는 방법. 

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공개특허 10-2009-0053794

22 바이러스 감염에 대한 면역원성 반응을 일으키는데 유효한 양으로 실시태양 17의바이러스를 피 




24 실시태양 19에 있어서, 헤마글루티닌이 변형된 다염기 절단 부위를 포함하는 면역원성 조성물. 

25 실시태양 19의 조성물을 포함하는 생 약독화 인플루엔자 백신. 

26 실시태양 19의 조성물을 포함하는 분할 바이러스 또는 사멸된 바이러스 백신. 


28 실시태양 24의 조성물을 포함하는 분할 바이러스 또는 사멸된 바이러스 백신. 

29 i) 인플루엔자 바이러스의 복제를 지지할 수 있는 숙주 세포 군집으로 A/앤 아버/6/60의 적어도 

6개의 내부 게놈 분절; 및 서열 번호 27-32, 및 39-44의 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택 

되는 HA 및/또는 NA 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적어도 하나의 게놈 

분절에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복수개의 벡터를 도입하는 단계; 


iii) 인플루엔자 바이러스를 회수하는 단계를 포함하는, 세포 배양물에서 인플루엔자 바이러스 

를 제조하는 방법. 

30 실시태양 29에 있어서, HA 및/또는 NA 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 

a) 서열 번호 21, 23-26 또는 33-38, 또는 45 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열, 또는 그의 

상보적 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 

b) 서열 번호 27-32 또는 39-44 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 

를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 그의 상보적 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오 

티드; 

c) 고도로 엄격한 조건하에서 실질적으로 전길이의 (a)의 폴리뉴클레오티드에 걸쳐 하이브리드 

화하는 폴리뉴클레오티드; 및 

d) (a)의 폴리뉴클레오티드와 적어도 98%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 

폴리뉴클레오티드로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법. 

31 실시태양 29의 방법에 의해 제조된 인플루엔자 바이러스를 면역학적 유효량으로 포함하는 면역 

원성 조성물. 



33 생리학적으로 유효한 담체 중 실시태양 29의 방법에 의해 제조된 인플루엔자 바이러스를 면역학 

적 유효량으로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반 

응을 일으키기 위해 개체의 면역계를 자극시키는 방법. 

34 생리학적으로 유효한 담체 중 실시태양 30의 방법에 의해 제조된 인플루엔자 바이러스를 면역학 

적 유효량으로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반 

응을 일으키기 위해 개체의 면역계를 자극시키는 방법. 







39 A/앤 아버/6/60 이외의 하나 이상의 공여 바이러스로부터의 6개의 내부 게놈 분절과, 서열 번호 

27-32, 및 39-44의 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택되는 HA 및/또는 NA 폴리펩티드를 코 

딩하는 2개의 게놈 분절을 포함하는 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스. 

40 실시태양 39에 있어서, 공여 바이러스가 하기 표현형: 온도 감수성, 저온 적응성, 또는 약독화 

된 것 중 하나 이상을 포함하는 것인 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스. 

41 실시태양 39에 있어서, 공여 바이러스가 PR8인 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스. 

42 실시태양 39에 있어서, 공여 바이러스가 A/레닌그라드/17인 6:2 재배열 인플루엔자 바이러스. 

43 면역학적 유효량의, 실시태양 39의 재배열 인플루엔자 바이러스를 포함하는 면역원성 조성물. 




47 생리학적으로 유효한 담체 중 실시태양 39의 재배열 인플루엔자 바이러스를 면역학적 유효량으 

로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키 

기 위해 개체의 면역계를 자극시키는 방법. 

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공개특허 10-2009-0053794










51 바이러스 감염에 대한 면역원성 반응을 일으키는데 유효한 양으로 실시태양 39의 바이러스를 피 









54 실시태양 51에 있어서, 바이러스가 사멸된 또는 불활성화된 것인 방법. 



57 실시태양 43에 있어서, 헤마글루티닌이 변형된 다염기 절단 부위를 포함하는 면역원성 조성물. 









66 i) 인플루엔자 바이러스의 복제를 지지할 수 있는 숙주 세포 군집으로 

 

 

 

서열 

(a) A/앤 아버/6/60이 아닌 제1 인플루엔자 균주의 적어도 6개의 내부 게놈 분절; 및 서열 번 

호 27-32, 및 39-44의 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택되는 HA 또는 NA 폴리펩티드를 코 

딩하는 적어도 하나의 게놈 분절; 또는 

(b) A/앤 아버/6/60이 아니며, 약독화된 것, 저온 적응성 및 온도 감수성인 것으로 구성된 군 

으로부터 선택되는 하나 이상의 표현형 특질을 포함하는 것인 제1 인플루엔자 균주의 적어도 6 

개의 내부 게놈 분절; 및 서열 번호 27-32, 및 39-44의 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택 

되는 HA 또는 NA 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 게놈 분절에 상응하는 뉴클레오티드 서 

열을 포함하는 복수개의 벡터를 도입하는 단계; 


iii) 인플루엔자 바이러스를 회수하는 단계를 포함하는, 세포 배양물에서 인플루엔자 바이러스 

를 제조하는 방법. 



68 생리학적으로 유효한 담체 중 실시태양 66의 방법에 의해 제조된 인플루엔자 바이러스를 면역 

학적 유효량으로 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 

반응을 일으키기 위해 개체의 면역계를 자극시키는 방법. 





ca A/베트남/1203/04 

ca A/베트남/1203/04 H5의 뉴클레오티드 서열(서열 번호1) 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

전체 분자 길이: 1767 nt 

ca A/베트남/1203/04 H5의 아미노산 서열(서열 번호 11) 

전체 분자 길이: 564 aa 

ca A/베트남/1203/04 N1의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 2) 

- 20 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 


ca A/베트남/1203/04 N1의 아미노산 서열(서열 번호 12) 


ca A/홍콩/213/03 

ca A/홍콩/213/03 H5의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 3) 

- 21 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 


ca A/홍콩/213/03 H5의 아미노산 서열(서열 번호 13) 


ca A/홍콩/213/03 N1 (서열 번호 4)의 뉴클레오티드 서열 

- 22 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 


ca A/홍콩/213/03 N1의 아미노산 서열 (서열 번호 14) 


ca A/홍콩/491/97(HA) + A/홍콩/486/97(NA) 

ca A/홍콩/491/97 H5의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 5) 

- 23 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 


ca A/홍콩/491/97 H5의 아미노산 서열(서열 번호 15) 


ca A/홍콩/486/97 N1의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 6) 

- 24 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 


ca A/홍콩/486/97 N1의 아미노산 서열(서열 번호 16) 

전체 분자 길이: 450 

ca A/홍콩/491/97(Ser211)(HA) + ca A/홍콩/486/97(NA) 

ca A/홍콩/491/97(Ser211) H5의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 7) 

- 25 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 


ca A/홍콩/491/97(Ser211) H5의 아미노산 서열(서열 번호 17) 


ca A/홍콩/486/97 N1의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 8) 

- 26 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 


ca A/홍콩/486/97 N1의 아미노산 서열(서열 번호 18) 


ca A/ck/홍콩/G9/97 

ca A/ck/홍콩/G9/97의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 9) 

- 27 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

전체 분자 길이: 1690 bp 

ca A/ck/홍콩/G9/97의 아미노산 서열(서열 번호 19) 


ca A/ck/홍콩/G9/97 N2의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 10) 

- 28 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 


ca A/ck/홍콩/G9/97 N2의 아미노산 서열(서열 번호 20) 


A/네덜란드/219/03 

A/네덜란드/219/03 H7의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 21) 

- 29 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 


A/네덜란드/219/03 H7의 아미노산 서열(서열 번호 27) 


A/네덜란드/219/03 N7의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 22) 

- 30 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

 


A/네덜란드/219/03 N7의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 45) 


A/네덜란드/219/03 N7의 아미노산 서열(서열 번호 28) 


- 31 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

 

A/ck/BC/CN-7/04 

A/ck/BC/CN-7/04 H7의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 23) 


A/ck/BC/CN-7/04 H7의 아미노산 서열(서열 번호 29) 


A/ck/BC/CN-7/04 N3의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 24) 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 


A/ck/BC/CN-7/04 N3의 아미노산 서열(서열 번호 30) 


ca A/ck/BC/CN-6/04 

ca A/ck/BC/CN-6/04 H7의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 25) 

- 33 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 


ca A/ck/BC/CN-6/04 H7의 아미노산 서열(서열 번호 31) 


ca A/ck/BC/CN-6/04 N3의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 26) 

- 34 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 


ca A/ck/BC/CN-6/04 N3의 아미노산 서열(서열 번호 32) 


ca A/오리 

ca A/오리 H6의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 33) 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

 

 


ca A/오리 H6의 아미노산 서열(서열 번호 39) 


ca A/오리 N9의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 34) 


ca A/오리 N9의 아미노산 서열(서열 번호 40) 

- 36 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

 

 

 


ca A/검둥오리 

ca A/검둥오리 H6의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 35) 


ca A/검둥오리 H6의 아미노산 서열(서열 번호 41) 


ca A/검둥오리 N1의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 36) 

- 37 - 

공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

 

 

 


ca A/검둥오리 N1의 아미노산 서열(서열 번호 42) 


ca A/청둥오리 

ca A/청둥오리 H6의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 37) 


ca A/청둥오리 H6의 아미노산 서열(서열 번호 43) 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

 


ca A/청둥오리 N2의 뉴클레오티드 서열(서열 번호 38) 


ca A/청둥오리 N2의 아미노산 서열(서열 번호 44) 


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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

 

서열번호 의미 요약 

도면의 간단한 설명 

도 1은 다염기 절단 부위를 제거하기 위해 VN/1203/2004의 HA 유전자 내로 공학처리된 변형을 나타낸다. 

도 2는 비내로 투여된 H5N1 ca 재배열 바이러스는 닭에서는 복제되지 못한다는 것을 나타내는 결과를 보여준다. 

도 3은 H5N1/AA ca 백신 후보물질이 마우스에 대해 치사적인 것은 아니라는 것을 도시한다. 

도 4는 1997 및 2004 H5N1 ca 재배열 바이러스의 복제는 마우스에서 제한되는 것을 도시한다. 

도 5는 재배열 H5N1/AA ca 인플루엔자 바이러스의 복제는 마우스의 폐에서 제한되는 것을 도시한다. 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

도 6은 i.n.으로 백신을 단일 투약한 후 마우스에서 유도된 혈청 HAI Ab 역가를 나타낸다. 

도 7은 i.n.으로 백신을 단일 투약한 후 마우스에서 유도된 혈청 중화 Ab 역가를 나타낸다. 

도 8은 H5N1 ca 재배열 바이러스가 50, 500 또는 5000 LD50의 야생형 H5N1 바이러스를 사용한 치사 항원자극으 

로부터 마우스를 보호한다는 것을 도시한다. 

도 9는 마우스 폐에서 동종성 및 이종성 H5N1 항원자극 바이러스 복제로부터의 방어 효능을 도시한다. 

도 10은 마우스의 상기도에서 동종성 및 이종성 H5N1 항원자극 바이러스 복제로부터의 방어 효능을 도시한다. 

도 11은 마우스에서 동종성 또는 이종성 H5N1 wt 바이러스를 사용한 고용량(105 TCID5O) 항원자극에 대해 2004 

H5N1 ca 백신에 의해 부여되는 방어 효능을 도시한다. 

도 12는 마우스에서 동종성 또는 이종성 H5N1 야생형 바이러스를 사용한 고용량(105 TCID5O) 항원자극에 대해 

1997 및 2003 H5N1 ca 백신에 의해 부여되는 방어 효능을 도시한다. 

도 13은 마우스에서 저용량 또는 고용량의 동종성 H5N1 야생형 바이러스 항원자극에 대해 2004 H5N1 ca 백신에 

의해 부여되는 방어 효능을 도시한다. 

도 14는 다염기 절단 부위를 제거하기 위해 A/네덜란드/219/03 HA의 HA 유전자내로 공학처리될 수 있는 변형을 

나타낸다. 

도 15: H5N1 ca 백신은 마우스에서 혈청 중화 항체 역가를 유도한다. 백신 투여 이전(출혈전) 및 각각의 백신 

투약후 28일째 혈청을 수집하였다; 검출불가능한 역가에 대해서는 값을 10으로 지정한다. 

도 16: H6 ca 바이러스는 페럿에서 약독성이었다. *폐의 경우, EID50/g; 비갑개의 경우, PFU/g. 10 7 

비내로 접종학, 조직을 감염후 3일째에 수거하였다. 

도 17: 페럿에서 H6 ca 백신의 면역원성. 

TCID50으로 

도 18(a) 및 18(b): 페럿에서 H6 ca 백신의 효능. (a) 폐 및 (b) 비갑개에서 바이러스 역가를 측정하였다. 

백신: 7 1og10 PFU 1회 투약. 항원자극: 7 1og10 PFU; 항원자극 후 3일째. 

도 19: H7N3 BC 04 ca는 페럿에서 약독성이었다. 접종: 0.5 mL 중 10 7 

일째에 수거하였다. 

TCID50으로 비내로 접종. 조직을 감염후 3 

도 20: H7N3 BC 2004 ca는 마우스에서 면역원성이다. a: ck/BC/CN-6/04 wt에 대한 혈청 중화 항체 역가의 기하 

평균의 역수. b: 감염후 28일째의 중화 역가와의 비교에 대한 p

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

도 26: HI 항체는 건강한 성인에서 10 7.0 

TCID50의 H9N2 G9/AA ca에 대해 반응한다. 

도 27: H5N1 VN2004 A/AA ca의 복제는 건강한 성인에서 고도로 제한된다. 

도 28: HI 항체는 건강한 성인에서 10 6.7 

TCID50의 VN2004 A/AA ca에 대해 반응한다. 

상세한 설명 

본 발명은 인플루엔자 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제의 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드 서열 뿐만 아니라, 상 

기 서열을 포함하는 벡터, 조성물 등 및 그의 사용 방법을 포함한다. 본 발명의 추가의 특징은 본원에서 더욱 

상세히 설명된다. 

정의 

달리 정의되지 않는다면, 본원에서 사용되는 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속한 분야의 당업자에게 통상 

적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 하기 정의는 당업계의 정의를 보충하는 것으로, 본 출원에 관한 

것이며, 예로서, 임의의 공동 소유의 특허 또는 출원과 같은, 임의의 관련 또는 비관련 출원건에까지 귀속될 필 

요는 없다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 재료가 본 발명을 시험 실시하는데 사용될 

수 있지만, 바람직한 재료 및 방법은 본원에 기술되어 있는 것이다. 따라서, 본원에서 사용되는 용어는 단지 특 

정 실시태양을 기술하기 위한 목적으로 사용된 것이며, 제한하고자 하는 것은 아니다. 

본 명세서 및 첨부된 청구의 범위에서 사용되는 바, 단수 형태("하나"("a"), "하나"("an") 및 "그"("the"))는 

내용을 달리 정확하게 명시하지 않는 한 복수의 것도 포함한다. 따라서, 예를 들면, "하나의 바이러스"에 대해 

언급하는 것은 복수개의 바이러스를 포함하는 것이며; "숙주 세포"에 대해 언급하는 것은 숙주 세포의 혼합물 

등을 포함하는 것이다. 

"아미노산 서열"은 아미노산 잔기 중합체(단백질, 폴리펩티드 등) 또는 아미노산 중합체를 나타내는 문자 열이 

다. 

용어 "핵산," "폴리뉴클레오티드," "폴리뉴클레오티드 서열" 및 "핵산 서열" 은 싱글 스트랜드 또는 더블 스트 

랜드 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 중합체, 그의 키메라 또는 유사체, 또는 문맥에 따라 그를 

나타내는 문자열을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바, 상기 용어는 임의로 천연적으로 발생된 뉴클레오티드(예로 

서, 펩티드 핵산)와 유사한 방식으로 싱글 스트랜드 핵산에 하이브리드화된다는 점에서 천연 뉴클레오티드의 본 

질적 성질을 갖는, 천연적으로 발생된 뉴클레오티드의 유사체의 중합체를 포함한다. 달리 명시하지 않는 한, 본 

발명의 특정 핵산 서열은 임의로 명확하게 명시된 서열 이외에 상보적 서열을 포함한다. 임의의 구체화된 폴리 

뉴클레오티드 서열로부터 주어진 핵산 또는 상보적 폴리뉴클레오티드 서열(예로서, 상보적 핵산)이 결정될 수 

있다. 

용어 "핵산" 또는 "폴리뉴클레오티드"는 또한 뉴클레오티드 열에 상응될 수 있는 임의의 물리적인 단량체 열을 

포함하며, 이는 뉴클레오티드의 중합체(예로서, 전형적인 DNA 또는 RNA 중합체), PNAs, 변형된 올리고뉴클레오 

티드(예로서, 2'-O-메틸화된 올리고뉴클레오티드와 같이, 용액 중 생물학적 RNA 또는 DNA에 전형적인 것은 아닌 

염기를 포함하는 올리고뉴클레오티드) 등을 포함한다. 핵산은 예로서, 싱글 스트랜드 또는 더블 스트랜드일 수 

있다. 

"하위서열"은 완전한 서열까지의 것을 포함하는, 전체 서열의 임의의 일부분이다. 전형적으로 하위서열은 전장 

서열보다 작은 것을 포함한다. "독특한 하위서열"은 임의의 앞서 결정된 인플루엔자 폴리뉴클레오티드 또는 폴 

리펩티드 서열에서는 발견되지 않은 하위서열이다. 

폴리펩티드와 관련하여 용어 "변이체"는 참고 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산이 변경되어 있는 아미노산 

서열을 지칭한다. 변이체는 "보존적" 변화를 가질 수 있는데, 여기서, 치환된 아미노산은 류신에서 이소류신으 

로의 대체와 같이, 유사한 구조적 성질, 또는 화학적 성질을 갖는다. 별법으로, 변이체는 글리신에서 트리토판 

으로의 대체와 같이 "비보존적" 변화를 가질 수 있다. 유사한 최소한의 변형으로는 또한 아미노산 결실 또는 삽 

입, 또는 둘 모두를 포함할 수 있다. 아미노산 잔기가 생물학적 또는 면역학적 활성이 제거되지 않고 치환, 삽 

입, 또는 결실되었는지를 결정하는 것에 관한 지침은 예를 들어, DNASTAR 소프트웨어와 같이, 당업계에 잘 알려 

져 있는 컴퓨터 프로그램을 사용함으로써 찾아볼 수 있다. 보존적 치환의 예 또한 본원에 기술되어 있다. 

용어 "유전자"는 생물학적 기능과 관련하여 임의의 핵산을 지칭하는 것으로 광범위하게 사용된다. 따라서, 유전 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

 

 

 

자는 코딩 서열 및/또는 그의 발현을 위해 필요한 조절 서열을 포함한다. 용어 "유전자"는 특이적인 게놈 서열 

뿐만 아니라, cDNA 또는 상기 게놈 서열에 의해 코딩된 mRNA에 적용된다. 

유전자는 또한 예를 들어, 다른 단백질에 대한 인식 서열을 형성하는 비발현 핵산 분절을 포함한다. 비발현 조 

절 서열로는 "프로모터" 및 "인핸서"를 포함하는데, 전사 인자와 같은 조절 단백질이 상기 "프로모터" 및 "인핸 

서"에 결합함으로써 인접한 또는 근접한 서열의 전사가 이루어진다. "조직 특이성" 프로모터 또는 인핸서는 특 

이적인 조직 유형 또는 세포 유형, 또는 유형들에서 전사를 조절하는 것이다. 

"유전자의 발현" 또는 "핵산의 발현"은 문맥에 따라 명시되는 바, DNA가 RNA로 전사되는 것(임의로는 예로서, 

스플라이싱과 같은 RNA의 변형 포함), RNA가 폴리펩티드로 번역되는 것(가능하게는, 예로서, 번역후 변형과 같 

은, 폴리펩티드의 추후 변형 포함), 또는 전사 및 번역, 둘 모두를 의미한다. 

"오픈 리딩 프레임(open reading frame)" 또는 "ORF"는 폴리펩티드로 번역될 수 있는, 번역이 가능한 DNA 또는 

RNA의 리딩 프레임(예로서, 유전자의 것)이다. 즉, 리딩 프레임은 정지 코돈에 의해 중단되지 않는다. 그러나, 

ORF라는 용어가 반드시 폴리뉴클레오티드는 실제 폴리펩티드로 번역된다는 것을 명시하는 것은 아니라는 것에 

주시하여야 한다. 

용어 "벡터"는 핵산이 유기체들, 세포들 또는 세포 성분들 간에 전파되고/거나 전달될 수 있도록 하는 수단을 

지칭한다. 벡터는 자발적으로 복제하거나, 숙주 세포의 염색체내로 통합될 수 있는, 플라스미드, 바이러스, 박 

테리오파지, 프로바이러스, 파지미드, 트랜스포존, 인공 염색체 등을 포함한다. 벡터는 또한 자발적으로 복제하 

지는 못하는 나형 RNA 폴리뉴클레오티드, 나형 DNA 폴리뉴클레오티드, 동일 스트랜드내에 DNA 및 RNA, 둘 모두 

로 이루어진 폴리뉴클레오티드, 폴리-리신-접합된 DNA 또는 RNA, 펩티드-접합된 DNA 또는 RNA, 리포좀-접합된 

DNA 등일 수 있다. 모두가 그러하지는 않지만, 다수의 보편적인 실시태양에서, 본 발명의 벡터는 플라스미드이 

다. 

"발현 벡터"는 벡터에 혼입되어 있는 핵산의 발현 뿐만 아니라 복제도 촉진시킬 수 있는 플라스미드와 같은 벡 

터이다. 전형적으로, 발현시키고자는 핵산은 프로모터 및/또는 인핸서에 "작동가능하게 연결되고," 이는 프로모 

터 및/또는 인핸서에 의한 전사 조절 제어에 대한 대상이 된다. 

"양방향 발현 벡터"는 2개의 프로모터 사이에 위치해 있는 핵산에 대하여 반대 방향으로 배향되어 있는 2개의 

대체 프로모터를 특징으로 하는데, 이는 발현이 양쪽 배향으로 개시될 수 있도록 함으로써 예를 들면, 플러스 

(+) 또는 센스 스트랜드, 및 네거티브(-) 또는 안티센스 스트랜드 RNAs, 둘 모두의 전사가 이루어질 수 있다. 

"폴리펩티드"는 2개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 중합체(예로서, 펩티드 또는 단백질)이다. 중합체는 임의 

로 예를 들면, 당화 등의 변형을 포함할 수 있다. 폴리펩티드의 아미노산 잔기는 천연이거나 비천연일 수 있고, 

치환되지 않거나, 변형되지 않거나, 치환되거나, 변형될 수 있다. 

본 발명과 관련하여, "단리된"이라는 용어는 일반적으로 생물학적 물질의 천연적으로 발생된 환경하에서 생물학 

적 물질을 수반하거나, 그와 상호작용하는 성분이 실질적으로는 없는 생물학적 물질, 예를 들면, 바이러스, 핵 

산 또는 단백질을 지칭한다. 단리된 생물학적 물질은 임의로 예로서, 세포 또는 야생형 바이러스와 같이 그의 

천연 환경에서 생물학적 물질과 함께 발견되지 않는 추가의 물질은 포함한다. 예를 들어, 세포와 같은 상기 물 

질이 그의 천연 환경에 존재하는 경우, 물질은 상기 환경에서 발현되는 그러한 물질에 대해 본래의 것이 아닌 

세포내 위치(예로서, 게놈 또는 유전 요소)에 배치될 수 있다. 예를 들어, 천연적으로 발생된 핵산(예로서, 코 

딩 서열, 프로모터, 및 인핸서 등)이 비천연적으로 발생된 수단에 의해 상기 핵산에 대해 본래의 것이 아닌 게 

놈의 유전자좌(예로서, 벡터, 예를 들면, 플라스미드 또는 바이러스 벡터 또는 앰플리콘)에 도입된다면, 이는 

단리된 것이다. 상기 핵산은 또한 "이종성" 핵산으로서 지칭된다. 단리된 바이러스는 예를 들면, 야생형 바이러 

스의 본래의 환경(예로서, 감염된 개체의 코인두) 이외의 환경(예로서, 세포 배양 시스템, 또는 세포 배양물로 

부터 정제)에 존재한다. 

바이러스와 관련하여 언급될 때, "키메라(chimeric 또는 chimera)"라는 용어는 바이러스가 1 초과의 모체 바이 

러스 균주 또는 공급원으로부터 유래된 유전 성분 및/또는 폴리펩티드 성분을 포함한다는 것을 의미한다. 유사 

하게, 바이러스 단백질과 관련하여 언급될 때, "키메라(chimeric 또는 chimera)"라는 용어는 단백질이 1 초과의 

모체 바이러스 균주 또는 공급원으로부터 유래된 폴리펩티드 성분(즉, 아미노산 하위서열)을 포함한다는 것을 

의미한다. 

용어 "재조합"은 물질(예로서, 핵산 또는 단백질)이 인간의 개입으로 인해 인공적으로 또는 합성적으로(비천연 

적으로) 변경되었음을 의미한다. 변형은 그의 천연 환경 또는 상태 내에서 실시될 수 있거나, 그로부터 제거될 

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수 있다. 구체적으로, 예로서, 인플루엔자 바이러스는 재조합 핵산의 발현에 의해 생산된 재조합체이다. 예를 

들어, "재조합 핵산"은 예로서, 클로닝, DNA 셔플링 또는 다른 절차시에 핵산을 재조합함으로써, 또는 화학적 

또는 다른 돌연변이유발에 의해 제조된 것이며; "재조합 폴리펩티드" 또는 "재조합 단백질"은 재조합 핵산의 발 

현에 의해 생산된 폴리펩티드 또는 단백질이고; "재조합 바이러스," 예로서, 재조합 인플루엔자 바이러스는 재 

조합 핵산의 발현에 의해 생산된다. 

바이러스와 관련하여 언급될 때, "재배열"라는 용어는 바이러스가 1 초과의 모체 바이러스 균주 또는 공급원으 

로부터 유래된 유전 성분 및/또는 폴리펩티드 성분을 포함한다는 것을 의미한다. 예를 들어, 7:1 재배열체는 제 

1 모체 바이러스로부터 유래된 7개의 바이러스 게놈 분절(또는 유전자 분절)과, 예로서, 본 발명의 헤마글루티 

닌 또는 뉴라미니다제를 코딩하는, 단일의 상보적인 바이러스 게놈 분절을 포함한다. 6:2 재배열체는 제1 모체 

바이러스로부터 6개의 게놈 분절, 가장 보편적으로는 6개의 내부 유전자와, 다른 모체 바이러스로부터의 2개의 

상보적인 분절, 예로서, 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제를 포함한다. 

이종성 또는 단리된 핵산과 관련하여 언급될 때, "도입된"이라는 용어는 핵산이 세포의 게놈(예로서, 염색체, 

플라스미드, 색소체 또는 미토콘드리아 DNA)내로 혼입되어, 자율 레플리콘으로 전환되거나, 일시적으로 발현(예 

로서, 형질감염된 mRNA)될 수 있는, 진핵생물 또는 원핵생물 세포내로의 핵산의 혼입을 지칭한다. 상기 용어는 

"감염," "형질감염," "형질전환" 및 "형질도입"과 같은 방법을 포함한다. 본 발명과 관련하여 핵산을 세포내로 

도입하는데 전기천공법, 인산칼슘 침전법, 지질 매개 형질감염(리포펙션) 등을 비롯한 다양한 방법이 사용될 수 

있다. 

용어 "숙주 세포"는 예로서, 벡터와 같이 이종성 핵산을 함유하며, 핵산의 복제 및/또는 발현을 지지하는 세포 

를 의미한다. 숙주 세포는 예로서, E. 콜라이(E. coli)와 같은 원핵생물 세포, 또는 예로서, 효모, 곤충, 양서 

류, 조류 또는 인간 세포를 비롯한 포유동물 세포와 같은 진핵생물 세포일 수 있다. 예시적인 숙주 세포로는 예 

로서, 베로(Vero)(아프리카 녹색원숭이 신장) 세포, BHK(아기 햄스터 신장: baby hamster kidney) 세포, 1차 

병아리 신장(PCK: primary chick kidney) 세포, 마딘-다비 개 신장(MDCK: Madin-Darby Canine Kidney) 세포, 

마딘-다비 소 신장 (MDBK: Madin-Darby Bovine Kidney) 세포, 293 세포(예로서, 293T 세포), 및 COS 세포(예로 

서, COS1, COS7 세포) 등을 포함한다. 

인플루엔자 바이러스의 "면역학적 유효량"은 추후의 인플루엔자 바이러스 노출에 대한 개체(예로서, 인간) 자기 

자신의 면역 반응을 증진시키기에 충분한 양이다. 유도된 면역 수준은 플라크 중화, 보체 고정, 

효소면역분석법, 또는 미세중화 분석법에 의해 중화 분비성 및/또는 혈청 항체의 양을 측정함으로써 모니터할 

수 있다. 

인플루엔자 바이러스에 대한 "방어 면역 반응"은 개체가 추후에 상기 인플루엔자 바이러스에 노출되고/거나 그 

로 감염되었을 때에 질환에 대해 보호적인, 개체(예로서, 인간)가 나타내는 면역 반응을 지칭한다. 몇몇의 경우 

에서, 인플루엔자 바이러스(예로서, 천연적으로 순환형 인플루엔자 바이러스)는 여전히 감염을 유발할 수는 있 

지만, 중증의 감염을 유발시킬 수는 없다. 전형적으로, 방어 면역 반응을 통해 시험관내 및 생체내에서 동일한 

바이러스 균주 및/또는 하위군의 바이러스(및 가능하게는 또한 상이한 비백신형 균주 및/또는 하위군의 바이러 

스)를 중화시킬 수 있는 숙주에 의해 발생된 혈청 및 분비성 항체를 검출가능한 수준으로 일으킨다. 

본원에서 사용되는 바, "항체"는 실질적으로 또는 부분적으로 면역글로불린 유전자 또는 면역글로불린 유전자의 

단편에 의해 코딩된 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는 단백질이다. 인지된 면역글로불린 유전자로는 카파, 람 

다, 알파, 감마, 델타, 입실론 및 뮤 불변 영역 유전자 뿐만 아니라, 무수히 많은 면역글로불린 가변 영역 유전 

자를 포함한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 입실론으로 분류되며, 

결국 이는 각각 면역글로불린 부류인, IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 정의한다. 전형적인 면역글로불린(항체) 구 

조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 폴리펩티드 쇄 쌍으로 구성되는데, 각각은 하나의 

"경쇄"(약 25 kD)와 하나의 "중쇄"(약 50-70 kD)를 갖는다. 각 쇄의 N-말단은 주로 항원 인식을 담당하는 약 

100 내지 110개 이상의 아미노산으로 이루어진 가변 영역을 정의한다. 가변 경쇄(VL) 및 가변 중쇄(VH)라는 용 

어는 각각 이러한 경쇄 및 중쇄를 지칭한다. 항체는 온전한 면역글로불린으로서, 또는 다양한 펩티다제로 분해 

되어 생성된 것인 다수의 잘 특징화된 단편으로서 존재한다. 따라서, 예를 들어, 펩신은 힌지 영역내 이황화 결 

합 아래의 항체를 분해하여 F(ab)'2를 생성하는데, 이는 그 자체가 이황화 결합에 의해 VH-CH1에 연결되어진 경 

쇄인 Fab 이량체이다. F(ab)'2는 힌지 영역내 이황화 결합을 파괴시키는 경미한 조건하에서 환원됨으로써 

(Fab')2 이량체는 Fab' 단량체로 전환될 수 있다. Fab' 단량체는 본질적으로 힌지 영역의 일부를 갖는 Fab이다 

(기타 항체 단편에 관한 보다 상세한 설명에 대해서는 [Fundamental Immunology, W.E. Paul, ed., Raven 

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Press, N.Y. (1999)]를 참조한다). 온전한 항체의 분해에 의해 다양한 항체 단편이 정의되지만, 기술자는 상기 

와 같은 Fab' 단편은 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법을 사용함으로써 새롭게 합성될 수 있다는 것을 이해할 

것이다. 따라서, 본원에서 사용되는 바, 항체라는 용어는 항체 또는 전체 항체의 변형에 의해 제조되거나, 재조 

합 DNA 방법을 사용함으로써 새롭게 합성된 단편을 포함한다. 항체는 예로서, 폴리클로날 항체, 모노클로날 항 

체, 다중 또는 단일 쇄 항체(가변 중쇄 및 가변 경쇄가 함께 (직접적으로 또는 펩티드 링커를 통해) 연결되어 

연속 폴리펩티드를 형성하는 것인 단일 쇄 Fv (sFv 또는 scFv) 항체 포함), 및 인간화된 항체 또는 키메라 항체 

를 포함한다. 

인플루엔자 바이러스 

본 발명의 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드, 예로서, 서열 번호 1-45는 인플루엔자 HA 및 NA 서열의 

변이체이다. 일반적으로 인플루엔자 바이러스는 분절된 싱글 스트랜드 RNA 게놈을 함유하는 내부 리보뉴클레오 

단백질 중심부와 기질 단백질이 늘어서 있는 외부의 지단백 외피로 구성되어 있다. 인플루엔자 바이러스의 게놈 

은 면역원성 헤마글루티닌(HA) 및 뉴라미니다제(NA) 단백질을 코딩하는 선형(-) 스트랜드 리보핵산(RNA), 및 6 

개의 내부 중심부 폴리펩티드: 뉴클레오캡시드 뉴클레오단백질(NP); 기질 단백질(M); 비구조 단백질(NS); 및 3 

개의 RNA 폴리머라제(PA, PB1, PB2) 단백질로 이루어진 8개의 분절로 구성된다. 복제시 게놈 바이러스 RNA는 숙 

주 세포의 핵에서 (+) 스트랜드 메신저 RNA 및 (-) 스트랜드 게놈 cRNA로 전사된다. 8개의 게놈 분절 각각은 

RNA 이외에, NP 및 폴리머라제 복합체(PB1, PB2, 및 PA)를 함유하는 리보뉴클레오단백질 복합체로 패킹된다. 

인플루엔자는 통상 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B 카테고리로 분류된다. 인플루엔자 A 및 인플루엔자 B 카테고 

리 바이러스 각각은 음극성을 갖는, 8개의 분절로 이루어진 싱글 스트랜드 RNA를 함유한다. 분절 1-3은 RNA-의 

존성 RNA 폴리머라제를 구성하는 3개의 폴리펩티드를 코딩한다. 분절 1은 폴리머라제 복합체 단백질 PB2를 코딩 

한다. 나머지 폴리머라제 단백질 PB1 및 PA는 각각 분절 2와 분절 3으로 코딩된다. 또한, 몇몇 인플루엔자 균주 

의 분절 1은 PB1 코딩 영역내의 대체 리딩 프레임으로부터 생산된 작은 단백질인 PB1-F2를 코딩한다. 분절 4는 

감염시 세포 부착 및 진입에 관여하는 헤마글루티닌(HA) 표면 당단백질을 코딩한다. 분절 5는 바이러스 RNA와 

관련하여 주된 구조 성분인 뉴클레오캡시드 뉴클레오단백질(NP) 폴리펩티드를 코딩한다. 분절 6은 뉴라미니다제 

(NA) 외피 당단백질을 코딩한다. 분절 7은 M1 및 M2로 명시되는 2개의 기질 단백질을 코딩하는데, 이는 차별적 

으로 스플라이싱된 mRNAs로부터 번역된 것이다. 분절 8은 2개의 비구조 단백질, NS1 및 NS2를 코딩하는데, 이는 

교대로 스플라이싱된 mRNAs로부터 번역된 것이다. 인플루엔자 B의 8개의 게놈 분절이 11개의 단백질을 

코딩한다. 가장 큰 3개의 유전자가 RNA 폴리머라제의 성분인, PB1, PB2 및 PA를 코딩한다. 분절 4는 HA 단백질 

을 코딩한다. 분절 5는 NP를 코딩한다. 분절 6은 NA 단백질 및 NB 단백질를 코딩한다. NB 및 NA, 이 두 단백질 

모두는 바이시스트론 mRNA의 중복 리딩 프레임으로 번역된다. 인플루엔자 B의 분절 7은 또한 2개의 단백질: M1 

및 BM2를 코딩한다. 가장 작은 분절은 2개의 생성물을 코딩하는데; NS1은 전길이의 RNA로부터 번역되는 반면, 

NS2는 스플라이싱된 mRNA 변이체로부터 번역된다. 

인플루엔자 바이러스 백신 

본원의 서열, 조성물 및 방법은 오로지 단독으로 그러한 것은 아니지만, 주로 백신용의 인플루엔자 바이러스 제 

조에 관한 것이다. 역사상, 인플루엔자 바이러스 백신은 주로 관련 균주의 실험적 예측에 의해 선택되었거나, 

그에 기초한 바이러스 균주를 사용하여 암닭 부화란에서 제조되었다. 보다 최근에는 허가받은 약독화된 온도 민 

감성 마스터 균주와 관련하여 선택된 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니다제 항원을 혼입시키는 재배열 바이러스가 

제조되었다. 암탉에서 다회에 걸쳐 계대접종하여 바이러스를 배양한 후, 인플루엔자 바이러스를 회수하고, 임의 

로는 예로서, 포름알데히드 및/또는 β-프로피오락톤(또는 별법으로 생 약독화 백신에서 사용)을 사용하여 불활 

성화시킨다. 따라서, HA 및 NA 서열(예로서, 서열 번호 1-45)이 인플루엔자 백신을 작제하는데 매우 유용하다는 

것을 이해할 것이다. 본 발명은 범유행성 인플루엔자 균주의 HA 및/또는 NA 서열(여기서, HA 서열은 변형된 다 

염기 절단 부위, 예를 들면, 본원에 기술된 변형물을 포함하는 것을 포함)을 포함하는 바이러스/백신을 포함하 

는데; 여기서, 바이러스/백신은 ca 골격, 예를 들면, A/AA/6/60 또는 PR8의 골격을 포함하는 것을 포함한다. 

백신 제조용으로 허가받은 균주 중 몇몇은 표준 세포 배양 조건하에서 효율적으로 성장할 수 없기 때문에 세포 

배양물에서 재조합 및 재배열 백신을 제조하려는 시도는 곤란을 겪었다. 그러나, 본 발명자들과 그의 동료들에 

의한 종래 연구는 벡터 시스템, 및 배양물에서 재조합 및 재배열 바이러스를 제조하는 방법을 제공하였고, 이로 

써, 하나 또는 다수의 선택된 바이러스 항원 균주, 예로서, 또는 B 균주, 다양한 하위유형 또는 하위균주 등에 

상응하며, 예로서, 본원의 HA 및/또는 NA 서열을 포함하는 백신을 신속하게 제조할 수 있게 되었다. 2002년 10 

월 23일 출원된 미국 출원 번호 제60/420,708호(Multi-Plasmid System for the production of Influenza 

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virus), 2003년 4월 25일 출원된 미국 출원 번호 제10/423,828호 및 2004년 5월 24일 출워된 미국 출원 번호 

제60/574,117호를 참조한다. 전형적으로, 배양물은 시스템, 예를 들면, 세포 배양물 인큐베이터에서 습도 및 

CO2의 조절하에 예를 들면, 온도가 35℃를 초과하지 않도록 하는 자동 온도 조절 장치와 온도 조절기의 사용으로 

일정하게 유지되는 온도하에서 유지된다. 관심의 대상이 되는 균주로부터 유래된 상보적 분절(예로서, 본원의 

HA 및/또는 NA 항원성 변이체)과 함께, 마스터 인플루엔자 바이러스의 게놈 분절에 상응하는 벡터 하위세트를 

도입함으로써 재배열 인플루엔자 바이러스를 용이하게 수득할 수 있다. 전형적으로, 마스터 균주는 백신 투여와 

관련하여 바람직한 성질에 기초하여 선택된다. 예를 들어, 백신 제조를 위해, 예로서, 생 약독화 백신 제조를 

위해서는 저온 약독화 표현형, 저온 적응성 및/또는 온도 감수성에 대해 마스터 공여 바이러스 균주가 

선택된다. 본원 다른 곳, 및 예로서, 미국 특허 출원 번호 제10/423,828호 등에서 설명되는 바와 같이, 본 발명 

의 다양한 실시태양은 원하는 재배열 바이러스를 생성하기 위해 그 위에 HA 및/또는 NA 유전자(예로서, 본원에 

열거되어 있는 서열 등)가 첨가되는 "골격"으로서 A/앤 아버(AA)/6/60 인플루엔자 균주를 사용한다. 따라서, 예 

를 들어, 6:2 재배열체에서 2개의 유전자(즉, NA 및 HA)는 인플루엔자 균주(들)에 대한 면역원성 반응이 바람직 

할 경우의 인플루엔자 균주(들)로부터 유래될 것이며, 이에 반해, 다른 6개의 유전자는 앤 아버 균주, 또는 다 

른 골격 균주 등으로부터 유래될 것이다. 앤 아버 바이러스는 그의 저온 적응성, 약독화, 온도 감수성 특질에 

대해 유용하다. 물론, 본원의 HA 및 NA 서열이 다수의 기타 바이러스 유전자 또는 재배열체에 존재하는 다른 인 

플루엔자 유전자, 즉, 비-HA 및 비-NA 유전자를 함유하는 바이러스 유형(예로서, 다수의 상이한 "골격," 예를 

들면, PR8 등)과 재배열될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 

본원의 다양한 실시태양은 범유행성 인플루엔자용의, 본원의 HA 및/또는 NA 서열을 갖는 생 약독화 백신을 포함 

한다. 그러한 백신은 전형적으로 예로서, 서열 번호 11-20, 27-32, 또는 39-44의 HA 및/또는 NA 서열, 또는 서 

열 번호 1-10, 21-26, 33-38, 또는 45의 상기에 상응하는 코딩 뉴클레오티드를 포함한다. 난에서 백신 바이러스 

균주(예로서, 재배열체)가 성장함으로써 발생하게 되는 한가지 문제는 백신이 난안에서 생산되는데 그 난을 조 

류 균주(범유행병에 관여할 수 있다)가 난을 죽일 수 있다는 점이며, 따라서, 종래(비-플라스미드 구제) 재배열 

생산법을 사용함으로써 조작, 제조 등을 하기는 어렵다. 그러한 조류 균주는 인간에서는 인플루엔자를, 그리고 

가능하게는 범유행병을 유발할 수 있다고 증거를 통해 제시되고 있는 바, 상기의 조류 균주는 관심의 대상이 된 

다. 따라서, 범유행성 균주, 예를 들면, 다양한 조류 서열(예로서, 본원의 HA 및 NA 서열)를 포함하는 인플루엔 

자 재배열체를 생성/조작하기 위해 플라스미드-구제 시스템을 사용하는 것이 매우 바람직할 수 있으며, 이는 본 

발명의 특징이 된다. 그러나, 본 서열은 또한 비-플라스미드 또는 종래 시스템과 함께 사용할 수 있다는 것을 

이해할 것이다. 

수생 조류(다른 것들 중)는 5개의 헤마글루티닌(HA) 및 9개의 뉴라미니다제(NA) 하위유형으로 이루어진 인플루 

엔자 A 바이러스로 감염될 수 있다. 상기 조류는 신규한 인플루엔자 하위유형이 인간 군집으로 도입될 수 있는 

저장소로서의 역할을 할 수 있으며, 범유행병을 유발할 수 있다. 2003년 네덜란드에서 조류 H7N7 인플루엔자 A 

바이러스가 인간을 감염시켰고, 그보다 좀더 일찍 홍콩에서는 조류 H5N1 및 H9N2 바이러스가 인간을 감염시켰다 

는 관찰 결과는 이들(및 다른) 하위유형이 범유행병을 유발할 수 있는 잠재능을 갖고 있다라는 우려를 

자아냈다. 따라서, 조류 인플루엔자 A 바이러스로 인간 감염을 예방하는 백신이 요구되고 있다. 인간 인플루엔 

자 바이러스에 대한 생, 약독화 인플루엔자 A 바이러스 백신이 최근 미국에서 허가를 받았다. 그러한 백신은 A/ 

앤 아버(AA)/6/60(H2N2) 저온 적응성(ca) 바이러스의 내부 단백질 유전자가 재배열 바이러스(즉, 비-앤 아버 균 

주로부터의 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제 유전자를 갖는 것)에 AA ca 바이러스의 저온 적응성, 약독화 및 온도 

감수성 표현형을 부여하는 것인 재배열 H1N1 및 H3N2 바이러스이다. 조류 인플루엔자 A 바이러스로부터의 헤마 

글루티닌 및 뉴라미니다제 유전자(H4-H14 하위유형) 및 AA ca 바이러스로부터의 6개의 내부 유전자 분절을 함유 

하는 재배열 바이러스를 생성하기 위해 종래의 유전자 재배열 및 플라스미드-기초 역 유전자 기법이 적용되어 

왔다. 그러한 재배열 바이러스가 본 발명의 특징이 된다. 하기 HA 및 NA 유전자 서열을 참조한다. AA ca 바이러 

스와 관련된 표현형이 재배열 바이러스에 존재하기 때문에 이들 바이러스는 후보 물질 백신에서 바람직할 수 있 

는 생물학적 성질을 갖고 있다. 백신용 근원 바이러스로서 이들 재배열 바이러스를 생성하고 평가하는 것이 범 

유행병 대비에 있어 중요한 단계이다. 임상 시험이 상기와 같은 생 약독화 범유행성 백신의 안전성, 감염성 및 

면역원성을 확립할 수 있다고 주시된다. 본 발명의 다른 실시태양은 플라스미드-구제 재배열(예로서, A/앤 아버 

6/60(즉, A/AA/6/60), PR8 등과의 재배열)을 통해 생성되는 범유행성 백신을 제조하기 위해서 상기 열거된 것 

이외에, 예로서, 조류, 돼지 등, 범유행성 바이러스 균주로부터의 범유행성 항원성 유전자 HA 및/또는 NA를 포 

함하는 재배열 바이러스(예로서, 백신에서 사용되는 것)를 포함한다. 상기 바이러스 및 백신의 작제 방법 및 사 

용 방법 또한 포함된다. 본원에서 사용되는 "범유행성 바이러스 균주"는 인간 군집에서는 유행하지 않으며, 질 

병 대책 센터(Centers for Disease Control) 또는 세계 보건 기구(World Health Organization)로부터 범유행성 

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균주로서 공표된 것이거나, 일반적으로 과학 공동체내에서는 그 자체로서 인정되는 것인 인플루엔자 균주 A 바 

이러스 하위유형으로서 정의된다. 

본원의 다양한 실시태양에서, 항원성 서열(예로서, HA 서열) 뿐만 아니라, 바이러스 및 상기 바이러스로부터의 

백신은 변형된 다염기 절단 부위를 포함한다. 몇몇 고도로 병원성인 조류 범유행성 인플루엔자 균주는 헤마글루 

티닌 서열내 다염기 아미노산 절단 부위를 포함한다. 예로서, [Li et al., J. of Infectious Diseases, 

179:1132-8, 1999]를 참조한다. 본원의 전형적인 실시태양에서, 상기와 같은 절단 부위는 본 서열이 유래된 야 

생형 서열과 비교하여 예를 들면, 그의 서열내에서 변형되거나 변경된다(예로서, 이를 통해 상기 절단은 무력화 

되거나, 그 안에서의 절단은 감소하게 된다). 상기 변형/변경은 야생형 서열내 절단 부위의 다양한 서열에 기인 

하여 상이한 균주에서는 상이할 수 있다. 예를 들어, 성숙한 H5의 326-329 위치의 4개의 다염기 잔기(RRKK)는 

전형적으로 (wt와 비교하여) 본원 서열내에 제거되어 있다. "서열"을 참조한다. 다양한 실시태양에서, 다염기 

절단 부위는 여러 방법으로 변형될 수 있다(상기 방법 모두가 본 발명에 포함되어 있다). 예를 들어, 다염기 절 

단 부위는 한번에 1개의 아미노산이 제거될 수 있다(예로서, 1개의 R이 제거되거나, 2개의 Rs이 제거되거나, 3 

개의 RRK가 제거되거나, RRKK가 제거될 수 있다). 추가로, 절단 부위의 직상류부에 있는 아미노산 잔기는 또한 

제거되거나 변경될 수 있고(예로서, R로부터 T 등으로 변경될 수 있고); 절단 부위 바로 뒤의 아미노산 잔기를 

코딩하는 뉴클레오티드 또한 변형될 수 있다. 절단 부위 변형에 대한 설명에 대해서 예로서, 도 1을 참조한다. 

또한, 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌 폴리펩티드 서열은 아미노 말단 신호 펩티드 서열을 포함하는 바, 

따라서, 본 발명의 헤마글루티닌 폴리펩티드 서열은 성숙한(아미노 말단 신호 펩티드가 절단된) 형태의 헤마글 

루티닌 폴리펩티드 및 절단되기 이전 형태인 헤마글루티닌, 둘 모두를 포함한다. 임의의 인플루엔자 균주의 임 

의의 헤마글루티닌 폴리펩티드 서열의 절단 부위는 당업계의 다수 방법들 중 임의의 것을 사용함으로써 통상적 

으로 측정되거나 예측될 수 있다. 

임의로 본 서열을 포함하는 바이러스(전형적으로 백신으로서 사용되거나, 백신 제조를 위해 사용되는 바이러 

스)에 적용되는 바, "온도 감수성," "저온 적응성" 및 "약독화"라는 용어 또한 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 

들어, "온도 감수성"(ts: temperature sensitive)이라는 용어는 예로서, 바이러스가 인플루엔자 A 균주에 대해 

33℃에 비해 39℃에서 100배 이상 감소된 역가를 나타내거나, 바이러스가 인플루엔자 B 균주에 대해 33℃에 비 

해 37℃에서 100배 이상 감소된 역가를 나타내는 것을 의미한다. "저온 적응성"(ca: cold adapted)이라는 용어 

는 바이러스가 25℃에서, 33℃에서의 성장의 100배 이내의 성장을 보이는 것을 의미하는 반면, "약독화"(att)라 

는 용어는 바이러스가 페럿의 상기도에서 복제하지만, 페럿의 폐 조직에서는 검출되지 않으며, 상기 동물에서 

인플루엔자-유사 질환을 유발하지는 것을 의미한다. 중간 표현형을 갖는 바이러스, 즉, 39℃(A 균주 바이러스의 

경우) 또는 37℃(B 균주 바이러스의 경우)에서 역가가 100배 미만으로 감소된 바이러스, 또는 33℃에서의 성장 

을 100배를 초과하는(예로서, 200배, 500배, 1000배, 10,000배 미만 이내) 성장을 25℃에서 나타내는 바이러스, 

및/또는 페럿의 상기도에서의 성장과 비교하여 폐에서의 성장이 감소된 것을 나타내는 바이러스(즉, 부분적으로 

약독화 바이러스) 및/또는 동물에서 인플루엔자 유사 질환이 감소된 것을 나타내는 바이러스는 또한 유용한 바 

이러스이며, 이는 본원의 HA 및 NA 서열과 함께 사용될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 

이에 다시, 본 발명의 HA 및 NA 서열은 임의로 재배열 백신(및/또는 기타 ts, cs, ca, 및/또는 att 바이러스 및 

백신)의 제조 또는 상기 재배열 백신에 사용된다. 그러나, 본 발명의 HA 및 NA 서열 등은 특정의 백신 조성물 

또는 제조 방법으로 제한되는 것이 아니며, 따라서, 균주 특이적인 HA 및 NA 항원(예로서, 서열 번호 11-20, 

27-32, 또는 39-44 또는 특이적인 HA 및 NA 항원을 코딩하는, 상기에 상응하는 뉴클레오티드, 예로서, 서열 번 

호 1-10, 21-26, 33-38, 또는 45 중 임의 것)을 사용하는, 실질적으로 임의의 백신 유형 또는 백신 제조 방법에 

사용될 수 있다는 것에 주목하여야 한다. 

플루미스트(FLUMIST) 

상기 언급한 바와 같이, 다수의 인플루엔자 백신 예와 유형이 존재한다. 대표적인 인플루엔자 백신은 어린이와 

성인을 인플루엔자 질환으로부터 보호하는 생, 약독화 백신인 플루미스트이다([Belshe et al. (1998) The 

efficacy of live attenuated, cold-adapted, trivalent, intranasal influenza virus vaccine in children N 

Engl J Med 338:1405-12]; [Nichol et al. (1999) Effectiveness of live,ttenuated intranasal influenza 

virus vaccine in healthy, working adults: a randomized controlled trial JAMA 282: 137-44]). 

전형적이고, 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 플루미스트 백신 제조에 적합화되고/거나 

그와 함께 사용되는 것이 바람직하다. 그러나, 본원의 서열, 방법, 조성물 등은 또한 유사하거나, 심지어 상이 

한 바이러스 백신의 제조에도 적합화될 수 있다는 것을 당업자는 이해할 것이다. 

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플루미스트 백신 균주는 예로서, 보통 마스터 공여 바이러스(MDV: master donor virus)로부터의 6개의 

분절인, PB1, PB2, PA, NP, M 및 NS와 함께, 상기 백신이 처리하는 균주(예로서, 야생형 균주)로부터 유래된 HA 

및 NA 유전자 분절을 함유한다. 따라서, 본원의 HA 서열은 각종 플루미스트 제제의 일부가 된다. 플루미스트 

의 인플루엔자 A 균주에 대한 MDV는 순차적으로 더 낮은 온도하에 1차 닭 신장 조직 배양물 중 야생형 A/앤 

아버/6/60 (A/AA/6/60) 균주를 연속하여 계대접종함으로써 생성하였다[Maassab (1967) Adaptation and growth 

characteristics of influenza virus at 25 degrees C Nature 213:612-4]. MDV-A는 25℃에서 효율적으로 복제 

하지만(ca, 저온 적응성), 그의 성장은 38 및 39℃에서 제한되어 있다(ts, 온도 감수성). 추가로, 이러한 바이 

러스는 감염된 페럿의 폐에서는 복제하지 못한다(att, 약독화). ts 표현형은 기도 중 가장 저온인 부위를 제외 

한 모든 부위에서 그의 복제를 제한함으로써 백신의 약독화에 기여하는 것으로 여겨지고 있다. 이러한 성질의 

안정성은 동물 모델 및 임상 시험에서 입증되었다. 화학적 돌연변이에 의해 생성된 인플루엔자 균주의 ts 표현 

형과는 대조적으로, MDV-A의 ts 성질은 감염된 햄스터를 거친 계대접종 후 또는 어린이로부터 얻은 방출된 단리 

물에서 복귀하지 않는다(최근 리뷰를 위해, [Murphy & Coelingh (2002) Principles underlying the 

development and use of live attenuated cold-adapted influenza A 및 B virus vaccines Viral Immunol 

15:295-323]를 참조한다). 

20,000여명의 성인 및 어린이에서 실시된 12개의 별개의 6:2 재배열 균주를 포함하는 임상 연구는 이들 백신이 

약독화된 것이며, 안전하고 효능이 있다는 것으로 제시하였다([Belshe et al. (1998) The efficacy of live 

attenuated, cold-adapted, trivalent, intranasal influenza virus vaccine in children N Engl J Med 

338:1405-12]; [Boyce et al. (2000) Safety and immunogenicity of adjuvanted and unadjuvanted subunit 

influenza vaccines administered intranasally to healthy adults Vaccine 19:217-26]; [Edwards et al. 

(1994) A randomized controlled trial of cold adapted and inactivated vaccines for the prevention of 

influenza A disease J Infect Pis 169:68-76]; [Nichol et al. (1999) Effectiveness of live,ttenuated 

intranasal influenza virus vaccine in healthy, working adults: a randomized controlled trial JAMA 282: 

137-44]). 

MDV-A의 6개의 내부 유전자와 야생형 바이러스의 2개의 HA 및 NA 유전자 분절을 수반하는 재배열체(즉, 6:2 재 

배열체)는 ca, ts 및 att 표현형을 일관되게 유지한다[Maassab et al. (1982) Evaluation of a cold- 

recombinant influenza virus vaccine in ferrets J. Infect. Pis. 146:780-900]. 인플루엔자 B 균주를 사용하 

여 상기와 같은 재배열된 바이러스를 제조하는 것은 더욱 어렵지만, 최근 연구(예로서, 2002년 10월 23일 출원 

된 미국 출원 번호 제60/420,708호(Multi-Plasmid System for the Production of Influenza Virus), 2003년 4 

월 25일 출원된 미국 출원 번호 제10/423,828호, 및 2004년 5월 24일 출원된 미국 출원 번호 제60/574,117호 

참고)는 전적으로 클로닝된 cDNA로부터 인플루엔자 B 바이러스를 생성하기 위한 8개의 플라스미드 시스템을 제 

시하였다. 백신 제제, 예를 들면, 비내 투여에 유용한 생 바이러스 백신 제제에 대해 적합한 약독화 생 인플루 

엔자 A 및 B 바이러스 제조 방법 또한 제시하였다. 

상기 기술된 시스템 및 방법은 예를 들면, 비내 투여에 적합한 백신과 같은 생 약독화 백신을 비롯한 백신으로 

사용하기 적합한 바이러스를 포함하는 재조합 및 재배열 인플루엔자 A 및 B 바이러스를 세포 배양물에서 신속하 

게 제조하는데 유용하다. 본 발명의 서열(예로서, 뉴클레오티드 서열인 서열 번호 1-10, 21-26, 33-38, 또는 45 

및 서열 번호 11-20, 27-32, 또는 39-44의, 상기 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 상응하는 아미노산), 방법 

은 임의로 백신용 바이러스를 제조하기 위해 예로서, 백신 제조용의 재배열된 인플루엔자 바이러스를 포함하는 

상기와 같은 종래 연구와 함께, 또는 그와 조합되어 사용된다. 

백신의 예방학적 투여 방법 및 조성물 

상기 언급한 바와 같이, 별법으로, 또는 플루미스트 백신 제조에서의 용도이외에 본 발명은 다른 백신 제제에 

사용될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 재조합 및 재배열 바이러스(예로서, 서열 번호 1-10, 21, 23-26, 33- 

38, 또는 45의 폴리뉴클레오티드, 또는 서열 번호 11-20, 27-32, 또는 39-44의 폴리펩티드, 또는 그의 단편을 

포함하는 것)은 HA 및/또는 NA 서열에 의해 결정되는 바, 하나 이상의 인플루엔자 바이러스 균주에 대하여 특이 

적인 면역 반응을 자극시키기 위하여 면역학적 유효량으로 및 적절한 담체 또는 부형제 중 예방학적으로 투여될 

수 있다. 전형적으로, 담체 또는 부형제는 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제, 예를 들면, 멸균수, 염 

수 수용액, 완충처리된 염수 수용액, 덱스트로스 수용액, 글리세롤 수용액, 에탄올 또는 그의 조합물이다. 멸균 

성, pH, 등장성, 및 안정성을 보장하며 그러한 용액을 제조하는 것은 당업계에 확립된 프로토콜에 따라 수행된 

다. 일반적으로, 담체 또는 부형제는 알레르기 및 기타 바람직하지 못한 작용을 최소화하며, 예로서, 피하, 근 

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육내, 비내 등과 같은 특정의 투여 경로에 적합하도록 선택된다. 

본 발명의 관련된 측면은 개체의 면역계를 자극시켜 인플루엔자 바이러스에 대한 방어 면역 반응을 일으키는 방 

법을 제공한다. 본 방법에서 면역학적 유효량 의 재조합 인플루엔자 바이러스(예로서, 본 발명의 HA 및/또는 NA 

분자를 포함하는 것), 면역학적 유효량의 본 발명의 폴리펩티드, 및/또는 면역학적 유효량의 본 발명의 핵산은 

생리학적으로 허용가능한 담체 중에서 개체에게 투여된다. 

일반적으로 본 발명의 인플루엔자 바이러스는 하나 이상의 인플루엔자 바이러스 균주(즉, 본 발명의 HA 및/또는 

NA 균주)에 대해 특이적인 면역 반응을 자극시키는데 충분한 양으로 투여된다. 바람직하게, 인플루엔자 바이러 

스를 투여하는 것이 상기 균주에 대한 방어 면역 반응을 유도한다. 하나 이상의 인플루엔자 균주에 대한 방어 

면역 반응을 유도하는 용량 및 방법은 당업자에게 알려져 있다. 예로서, USPN 5,922,326; ([Wright et al, 

Infect. Immun. 37:397-400 (1982)]; [Kim et al, Pediatrics 52:56-63 (1973)]; 및 [Wright et al., J. 

Pediatr. 88:931-936 (1976)])을 참조한다. 예를 들어, 인플루엔자 바이러스는 약 1-1000 HID50(인간 감염 

용량: human infectious dose)의 범위로, 즉, 투여량당 약 10 5 

- 10 8 

pfu (플라크 형성 단위: plaque forming 

unit)로 투여된다. 전형적으로, 용량은 예를 들면, 연령, 신체 상태, 체중, 성별, 섭식, 투여 시간, 및 기타 임 

상적 인자에 기초하여 상기 범위내에서 조정될 것이다. 예방학적 백신 제제는 예를 들면, 바늘 및 시린지, 또는 

바늘없는 주사 장치를 사용하여 피하 또는 근육내 주사에 의해 전신 투여된다. 별법으로, 백신 제제는 드롭스, 

큰 입자 에어로졸(약 10 미크론 초과), 또는 상기도로의 분무에 의해 비내로 투여된다. 상기 전달 경로들 중 어 

느 것이나 방어적인 전신 면역 반응을 일으키지만, 비내 투여가 인플루엔자 바이러스 진입 부위에서 점막 면역 

을 유도한다는 추가적인 잇점을 부여한다. 비내 투여의 경우에는 주로 약독화 생 바이러스 백신, 예로서, 약독 

화, 저온 적응성 및/또는 온도 감수성의 재조합 또는 재배열 인플루엔자 바이러스가 바람직하다. 상기를 참조한 

다. 단일 투약으로 방어 면역 반응을 자극시키는 것이 바람직하지만, 원하는 예방학적 효과를 달성하기 위해서 

는 동일하거나 상이한 경로에 의해 추가의 용량을 투여할 수 있다. 

전형적으로, 백신에 사용되는 것으로서 본 발명의 약독화 재조합 인플루엔자는 약독화 인플루엔자 바이러스로 

면역화된(또는 다르게는 그로 감염된) 대부분의 개체에서 감염 증상, 또는 적어도의 중증의 감염 증상이 발생하 

지 않도록 충분히 약독화된다. 몇몇의 경우, 약독화 인플루엔자 바이러스는 여전히 경미한 병(예로서, 경미한 

상기도 병) 증상을 일으킬 수 있고/거나 백신화되지 않은 개체로의 전염을 일으킬 수 있을 것이다. 그러나, 그 

의 병독성은 백신화된 숙주 또는 우발적인 숙주에서 중증의 하기도 감염이 발생하지 않도록 충분히 폐기된다. 

별법으로, 생체외 또는 생체내에서 본원의 서열을 포함하는 인플루엔자 바이러스로 가지 세포를 표적화함으로써 

면역 반응을 자극시킬 수 있다. 예를 들어, 인플루엔자 항원이 가지 세포에 의해 포획될 수 있도록 하는데 충분 

한 기간 동안 충분한 양으로 바이러스에 증식성 가지 세포를 노출시킨다. 이어서, 표준 정맥 이식 방법에 의해 

백신화시키고자 하는 피험체에 세포를 전달한다. 

단일 투약으로 방어 면역 반응을 자극시키는 것이 바람직하지만, 원하는 예방학적 효과를 달성하기 위해서는 동 

일하거나 상이한 경로에 의해 추가의 용량을 투여할 수 있다. 신생아 및 유아의 경우, 예를 들면, 충분한 면역 

수준을 유도하기 위해서는 다중 투여하는 것이 필요할 수 있다. 야생형 인플루엔자 감염에 대한 충분한 수준의 

방어를 유지하기 위해 필요에 따라 유년기 동안 일정 간격으로 계속하여 투여할 수 있다. 유사하게, 예를 들면, 

건강 관리 요원, 탁아 요원, 어린 아이의 가족 구성원, 노인 및 심폐 기능이 손상된 개체와 같이, 특히 반복적 

인 또는 중증의 인플루엔자 감염에 걸리기 쉬운 성인은 방어 면역 반응을 확립 및/또는 유지시키기 위하여 다중 

면역화를 필요로 할 수 있다. 유도된 면역 수준은 중화 분비성 및/또는 혈청 항체의 양, 원하는 방어 수준을 유 

도하고 유지시키는데 필요할 경우 조정되는 투여량 또는 반복되는 백신화의 측정에 의해 모니터할 수 있다. 

임의로, 인플루엔자 바이러스를 예방학적으로 투여하기 위한 제제는 또한 인플루엔자 항원에 대한 면역 반응을 

증진시키는 하나 이상의 애주번트를 함유한다. 적합한 애주번트로는 완전 프로인트 애주번트, 불완전 프로인트 

애주번트, 사포닌, 미네랄 겔, 예를 들면, 수산화알루미늄, 계면 활성 물질, 예를 들면, 리솔레시틴, 플루로닉 

폴리올, 다중음이온, 펩티드, 오일 또는 탄화수소 에멀전, 칼메트-게랑 간균(BCG: bacille Calmette-Guerin), 

코린박테리움 파르붐(Corynebacterium parvum), 및 합성 애주번트 QS-21을 포함한다. 

원한다면, 하나 이상의 면역자극성 분자의 투여와 함께 인플루엔자 바이러스백신을 예방학적으로 투여할 수 있 

다. 면역자극성 분자로는 면역자극성, 면역강화, 및 전염증성 활성을 갖는 다양한 사이토카인, 림포카인 및 케 

모카인, 예를 들면, 인터루킨(예로서, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-12, IL-13); 성장 인자(예로서, 과립구 대 

식세포(GM: granulocyte-macrophage)-콜로니 자극 인자(CSF: colony stimulating factor)); 및 기타 면역자극 

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성 분자, 예를 들면, 대식세포 염증 인자, Flt3 리간드, B7.1; B7.2 등을 포함한다. 면역자극성 분자는 인플루 

엔자 바이러스와 동일한 제제로 투여될 수 있거나, 별도로 투여될 수 있다. 단백질(예로서, 본 발명의 HA 및/또 

는 NA 폴리펩티드, 예로서, 서열 번호 11-20, 27-32, 또는 39-44 중 어느 것) 또는 상기 단백질을 코딩하는 핵 

산(예로서, 서열 번호 1-10, 21-26, 33-38, 또는 45 중 어느 것)을 포함하는 발현 벡터의 투여로 면역자극성 효 

과를 가져올 수 있다. 

상기 기술된 방법은 시험관내, 생체외, 또는 생체내에서 치료학적으로 또는 예방학적으로 유효한 HA 및/또는 NA 

폴리펩티드(또는 펩티드)를 코딩하는 이종성 폴리뉴클레오티드, 또는 HA 및/또는 NA RNA(예로서, 안티센스 RNA 

또는 리보자임)를 포함하는 본 발명의 벡터를 표적 세포 군집에 도입시킴으로써 질환 또는 질병, 전형적으로 인 

플루엔자를 치료학적으로 및/또는 예방학적으로 치료하는데 유용하다. 전형적으로, 관심의 대상이 되는 폴리펩 

티드(또는 펩티드)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 또는 RNA는 "발현 벡터" 및 "추가의 발현 요소"라는 표제하의 

섹션에서 상기 기술된 바와 같이 적절한 조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 임의로, 1 초과의 이종성 코딩 서 

열이 단일의 벡터 또는 바이러스에 도입된다. 예를 들어, 치료학적으로 또는 예방학적으로 활성인 HA 및/또는 

NA 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 RNA 이외에, 벡터는 또한 추가의 치료학적 또는 예방학적 폴 

리펩티드, 예로서, 항원, 공자극성 분자, 사이토카인, 항체 등, 및/또는 마커 등을 포함할 수 있다. 

특정 하위군 중 특정의 약독화 인플루엔자 바이러스 균주로 개체를 백신화하는 것이 상이한 인플루엔자 바이러 

스 균주 및/또는 하위군에 대한 교차 방어를 유도할 수 있지만, 교차 방어는 원한다면, 적어도 2개의 균주, 예 

로서, 이들 각각이 상이한 하위군을 나타내는 것인 적어도 2개의 균주로부터의 약독화 인플루엔자 바이러스로 

개체를 백신화시킴으로써 증진될 수 있다. 추가로, 백신 조합물은 임의로 범유행성 백신(예로서, 범유행성 인플 

루엔자 균주 예를 들면, 다양한 조류 균주(예로서, 본원의 서열 참조), 또는 기타 범유행성 균주에 대한 것) 및 

비-범유행성 균주의 믹스를 포함한다. 백신 혼합물(또는 다중 백신화)은 인간 균주 및/또는 비-인간 인플루엔자 

균주(예로서, 조류 및 인간 등)로부터의 성분을 포함할 수 있다. 유사하게, 본 발명의 약독화 인플루엔자 바이 

러스 백신은 임의로 기타 감염체에 대한 방어 면역 반응을 유도하는 백신과 조합될 수 있다. 

본 발명의 폴리뉴클레오티드 

인플루엔자 바이러스의 HA 및 NA 폴리뉴클레오티드 분절은 코딩 영역(ORF 코딩) 및 HA 및 NA 코딩 서열의 5' 및 

3' 양쪽인 비코딩 영역(NCR: noncoding region) 둘 모두를 포함한다는 것은 당업계에 잘 알려져 있다. 이러한 

NCRs의 예는 서열 번호 1-9(ORF 바깥쪽)에 제시되어 있다. 전체 인플루엔자 바이러스 HA 및 NA 분절의 증폭을 

촉진시키기 위하여 프라이머가 이들 NCRs로 이루어질 수 있다는 것 또한 알려져 있다(예로서, [Hoffmann et al. 

Arch Virol. 2001 Dec;146(12):2275-89] 참조). 추가로, 인플루엔자의 HA 및 NA의 NCRs이 재배열의 달성율을 

증가시킬 수 있다. 그러므로, 이러한 NCRs의 폴리뉴클레오티드 서열(그의 단편 및 변이체(예로서, 적어도 약 

60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 약 91%, 또는 적어도 약 92%, 또는 적 

어도 약 93%, 또는 적어도 약 94%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 97%, 또는 적어도 

약 98%, 또는 적어도 약 98.5%, 또는 적어도 약 98.7%, 또는 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 99.1%, 또는 적어 

도 약 99.2%, 또는 적어도 약 99.3%, 또는 적어도 약 99.4%, 또는 적어도 약 99.5%, 또는 적어도 약 99.6% 또 

는 적어도 약 99.7%, 또는 적어도 약 99.8%, 또는 적어도 약 99.9%의 동일성을 가짐) 포함)이 본 발명의 범주내 

포함된다. 임의의 범유행성 균주의 HA 및 NA 분절을 증폭시킬 때, (예로서, RT-PCR에 의한) 증폭을 위해 HA 및 

NA NCRs의 보존 영역(예로서, 관련 균주 사이에서 보존되는 영역)에 결합하는 폴리뉴클레오티드 프라이머를 제 

조하고 사용할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 본 발명의 HA 및 NA 폴리뉴클레오티드는 범유행성 바이러스 균주 

의 HA 및 NA 서열(그의 단편 및 변이체(예로서, 적어도 약 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 또는 적어 

도 90%, 또는 적어도 약 91%, 또는 적어도 약 92%, 또는 적어도 약 93%, 또는 적어도 약 94%, 또는 적어도 약 

95%, 또는 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 98.5%, 또는 적어도 약 

98.7%, 또는 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 99.1%, 또는 적어도 약 99.2%, 또는 적어도 약 99.3%, 또는 적어 

도 약 99.4%, 또는 적어도 약 99.5%, 또는 적어도 약 99.6%, 또는 적어도 약 99.7%, 또는 적어도 약 99.8%, 또 

는 적어도 약 99.9%) 포함)의 NCR 및 ORF, 둘 모두를 포함한다. 대체 실시태양에서, 본 발명의 HA 및 NA 폴리뉴 

클레오티드는 범유행성 바이러스 균주의 HA 및 NA 서열(예로서, 서열 번호 1-9)의 NCR을 제외한, ORF(단편 및 

변이체(예로서, 적어도 약 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 약 91%, 또 

는 적어도 약 92%, 또는 적어도 약 93%, 또는 적어도 약 94%, 또는 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 96%, 또는 

적어도 약 97%, 또는 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 98.5%, 또는 적어도 약 98.7%, 또는 적어도 약 99%, 또는 

적어도 약 99.1%, 또는 적어도 약 99.2%, 또는 적어도 약 99.3%, 또는 적어도 약 99.4%, 또는 적어도 약 

99.5%, 또는 적어도 약 99.6%, 또는 적어도 약 99.7%, 또는 적어도 약 99.8%, 또는 적어도 약 99.9%) 포함)를 

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포함한다. 

본 발명의 HA 및 NA 폴리뉴클레오티드, 예로서, 서열 번호 1부터 서열 번호 10, 서열 번호 21부터 서열 번호 

26, 서열 번호 33부터 서열 번호 38, 서열 번호 45, 및 그의 단편은 상기 기술된 백신에 대안으로, 또는 그 이 

외의 많은 상이한 능력으로서 임의로 사용된다. 기타의 예시적인 용도가 본원에서 설명의 목적으로 기술되어 있 

으며, 이는 실제 사용 범위를 제한하는 것으로 기술된 것은 아니다. 본 발명의 뉴클레오티드 서열을 작제, 

정제, 및 특징화하는 상이한 방법들 또한 본원에 기술되어 있다. 몇몇 실시태양에서, 본 발명의 하나 이상의 폴 

리뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산은 유리하게는 예로서, 다른 종을 감염시키는 동종성 인플루엔자 변이체 

(예로서, 본원의 서열에 상동성인 것 등)를 발견 및/또는 특징화하는 핵산 하이브리드화 실험하에서, 또는 상이 

한 인플루엔자 출현과 같은 다양한 정황하에서 상응하는 핵산 또는 관련된 핵산을 검출하기 위한 프로브로서 사 

용된다. 프로브는 DNA 또는 RNA 분자, 예를 들면, 게놈 또는 클로닝된 DNA의 제한 단편, cDNAs, PCR 증폭 생성 

물, 전사체, 및 올리고뉴클레오티드일 수 있으며, 길이가 약 10 뉴클레오티드인 올리고뉴클레오티드에서부터 1 

kb 이상인 전길이의 서열 또는 cDNAs까지로 길이가 다양할 수 있다. 예를 들어, 몇몇 실시태양에서, 본 발명의 

프로브는 예로서, 서열 번호 1부터 서열 번호 10, 서열 번호 21부터 서열 번호 26, 서열 번호 33부터 서열 번호 

38, 서열 번호 45, 또는 그에 상보적 서열 중 그로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드 서열 또는 하위서열을 포함 

한다. 별법으로, 상기 명시된 서열 중 하나의 변이체인 폴리뉴클레오티드 서열이 프로브로서 사용된다. 상기 변 

이체는 하나 또는 수개의 보존적 뉴클레오티드 변형을 포함하는 것이 가장 전형적이다. 예를 들어, 올리고뉴클 

레오티드 쌍(또는 세트)이 선택되는데, 여기서, 2개(그 이상)의 폴리뉴클레오티드 서열은 서로의 보존적 변형물 

이며, 여기서, 하나의 폴리뉴클레오티드 서열이 첫번째 변이체에 동일하게 상응하거나/하고 나머지(들)는 추가 

의 변이체에 동일하게 상응한다. 그러한 올리고뉴클레오티드 프로브 쌍은 예로서, 다형태 뉴클레오티드를 검출 

하거나, 예로서, 다른 종을 감염시키거나, 상이한(예로서, 일시적으로 또는 지리학적으로 상이한) 인플루엔자 

출현에 존재하는 본 HA 및 NA 서열에 상동성인 것과 같은 상동성 인플루엔자 HA 및 NA 변이체를 검출하는 특이 

적인 하이브리드화 실험에서 특히 유용하다. 다른 적용에서 분기성이 더욱 큰 프로브가 선택되는데, 적어도 약 

91%(또는 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 98.5%, 약 98.7%, 약 99%, 약 99.1%, 

약 99.2%, 약 99.3%, 약 99.4%, 약 99.5%, 또는 약 99.6% 이상, 약 99.7%, 약 99.8%, 약 99.9%, 이상) 동일한 

프로브가 선택된다. 

예로서, 본원의 서열로부터 유도된 서열로 예시된 것과 같은 본 발명의 프로브는 또한 당업계에서 통상적인 방 

법에 따라 추가의 유용한 폴리뉴클레오티드 서열을 동정하는데 사용될 수 있다. 한 세트의 실시태양에서, 상기 

기술된 것과 같은 하나 이상의 프로브는 예로서, 본원의 서열을 갖는 하나 이상의 프로브와 동일하거나, 그에 

대해 유의적인 서열 유사성을 갖는 서열을 포함하는 클론, 즉, 변이체, 상동체 등을 동정하기 위해 발현 생성물 

또는 염색체 분절의 라이브러리(예로서, 발현 라이브러리 또는 게놈 라이브러리)를 스크리닝하는데 사용된다. 

관련 폴리뉴클레오티드 서열을 동정하는데에는 라이브러리 스크리닝과 같은 물리적인 방법 이외에도 컴퓨터 보 

조 생물정보학적 접근법, 예로서, BLAST 및 기타 서열 상동성 검색 알고리즘 등 또한 사용될 수 있다는 것이 이 

해될 것이다. 이러한 방식에 의해 동정된 폴리뉴클레오티드 서열 또한 본 발명의 특징이 된다. 

올리고뉴클레오티드 프로브는 임의로 당업자에게 잘 알려져 있는 각종 방법에 의해 제조된다. 가장 전형적으로 

예를 들면, [Beaucage and Caruthers (1981) Tetrahedron Letts 22(20): 1859-1862]에 기재되어 있는 고체상 

포스포라미다이트 트리에스테르 방법과 같이 잘 알려져 있는 합성 방법에 의해 예로서는 자동 합성기를 사용하 

여, 또는 [Needham-Van Devanter et al. (1984) Nucl Acids Res, 12:6159-6168]에 기재되어 있는 바와 같이 제 

조된다. 올리고뉴클레오티드는 또한 당업자에게 알려져 있는 다양한 상업적 공급원으로부터 맞춤 제작될 수 있 

고, 주문될 수 있다. 필요할 경우, 올리고뉴클레오티드 정제는 전형적으로 [Pearson and Regnier (1983) J 

Chrom 255:137-149]에 기재되어 있는 바와 같이, 천연 아크릴아미드 겔 전기영동 또는 음이온-교환 HPLC에 의해 

실시된다. 합성 올리고뉴클레오티드 서열은 [Maxam and Gilbert (1980) in Grossman and Moldave (eds.) 

Academic Press, New York, Method in Enzymology 65:499-560]의 화학 분해 방법을 사용하여 확인할 수 있다. 

맞춤형 올리고 또한 당업자에게 알려져 있는 다양한 상업적 공급원으로부터 용이하게 주문될 수 있다. 

예를 들면, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드를 발현하는 세포 또는 유기체(예로서, 본 발명의 서열을 

포함하는 바이러스를 수반하는 것)의 특질과 관련되는 것과 같은 기타 상황하에서는 폴리펩티드, 펩티드 또는 

항체인 프로브가 유리하게 사용된다. 예를 들어, 본 발명의 아미노산 서열(예로서, 서열 번호 11-20, 서열 번호 

27-32, 서열 번호 39-44) 중 어느 것으로부터 유도되고/거나, 예로서, 서열 번호 1부터 서열 번호 10, 서열 번 

호 21부터 서열 번호 26, 서열 번호 33부터 서열 번호 38, 및 서열 번호 45로부터 선택된, 본 발명의 폴리뉴클 

레오티드 서열에 의해 코딩된 단리된 또는 재조합 폴리펩티드, 폴리펩티드 단편 및 펩티드는 예로서, 파지 디스 

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플레이 라이브러리, 조합 라이브러리, 폴리클로날 혈청 등으로부터 항체를 동정하고 단리시키는데 유리하게 사 

용된다. 본 발명의 폴리펩티드 단편은 본 발명의 HA 또는 NA 폴리펩티드의 아미노산 서열(예로서, 서열 번호 

11-20, 서열 번호 27-32, 및 서열 번호 39-44)의 적어도 5개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 10개의 인접 

한 아미노산 잔기, 또는 적어도 15개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 20개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 

적어도 25개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 40개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 50개의 인접한 

아미노산 잔기, 또는 적어도 60개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 70개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적 

어도 80개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 90개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 100개의 인접한 아 

미노산 잔기, 또는 적어도 125개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 150개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적 

어도 175개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 200개의 인접한 아미노산 잔기, 또는 적어도 250개의 인접한 

아미노산 잔기, 또는 적어도 350개의 인접한, 또는 적어도 400개의 인접한, 또는 적어도 450개의 인접한, 또는 

적어도 500개의 인접한, 또는 적어도 550개의 인접한 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 

폴리펩티드를 포함한다. 상기 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 상기 폴리펩티드 단편 및 항체를 코딩하는 폴 

리뉴클레오티드 또한 본 발명의 바람직한 실시태양이다. 

예로서, 서열 번호 11부터 서열 번호 20, 서열 번호 27부터 서열 번호 32, 및/또는 서열 번호 39부터 서열 번호 

44의 것으로, 및/또는 예로서, 서열 번호 1부터 서열 번호 10, 서열 번호 21부터 서열 번호 26, 서열 번호 33부 

터 서열 번호 38, 및 서열 번호 45로부터 선택되는 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 임의의 

폴리펩티드 서열 또는 하위서열에 대한 항체 또한 예를 들면, 세포 또는 조직으로부터 발현 생성물을 평가하는 

데 있어서의 프로브로서 가치가 있다. 또한, 항체는 예로서, 본원에서 제공되는 것의, 또는 예로서, 본원에 제 

시된 것으로부터 선택되는 것과 같은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 하위서열을 

포함하는 단백질의 발현을 계내에서, 조직 어레이에서, 세포, 조직 또는 유기체에서, 예를 들면, 동정되지 않은 

인플루엔자 바이러스 등으로 감염된 유기체에서 평가하는데 특히 적합하다. 항체는 직접 검출가능한 시약으로 

표지될 수 있거나, 특이 항체의 중쇄 불변 영역(즉, 이소타입)에 대하여 특이적인 2차 항체의 표지를 통해 간접 

적으로 검출될 수 있다. 특이적인 항체 생산에 관한 추가 설명은 하기에 제공한다. 

진단 분석법 

본 발명의 핵산 서열은 화학적으로 합성된 또는 재조합 폴리뉴클레오티드 단편, 예로서, 본원의 서열로부터 선 

택된 것을 사용하여 샘플 중 인플루엔자(및/또는 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니다제)를 검출하는 진단 분석법, 

헤마글루티닌-유사 및/또는 뉴라미니다제-유사 서열을 검출하는 진단 분석법, 및 임상의 인플루엔자 단리물 중 

균주간의 차이를 검출하는 진단 분석법에서 사용될 수 있다. 예를 들어, 적어도 10 내지 20개의 뉴클레오티드를 

포함하는 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니다제 서열의 단편은 당업계에 잘 알려져 있는 중합효소 연쇄 반응(PCR: 

polymerase chain reaction) 방법(예로서, 역전사-PCR)을 사용하여 핵산을 증폭시키는 프라이머로서, 및 임상 

표본에서 예를 들면, 인플루엔자 RNA와 같은 표적 유전 물질을 검출하는 핵산 하이브리드화 분석법에서의 프로 

브로서 사용될 수 있다. 

예로서, 본원에서 제공된 것으로부터 선택된 독특한 하위서열로 예시되는 것과 같은 본 발명의 프로브는 또한 

당업계에서 통상적인 방법에 따라 추가로 유용한 폴리뉴클레오티드 서열(예를 들면, 추가의 인플루엔자 균주를 

특징화하는 것)을 동정하는데 사용될 수 있다. 한 세트의 바람직한 실시태양에서, 상기 기술된 하나 이상의 프 

로브는 본원의 서열과 동일하거나, 그에 대해 유의적인 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 클론을 동정하기 

위해 발현 생성물 또는 클로닝된 바이러스 핵산의 라이브러리(즉, 발현 라이브러리 또는 게놈 라이브러리)를 스 

크리닝하는데 사용된다. 결국, 이들 동정된 서열 각각은 상기 기술된 변이체 프로브 쌍 또는 세트를 비롯한 프 

로브를 제조하는데 사용될 수 있다. 관련 폴리뉴클레오티드 서열을 동정하는데에는 라이브러리 스크리닝과 같은 

물리적인 방법 이외에도 컴퓨터 보조 생물정보학적 접근법, 예로서, BLAST 및 기타 서열 상동성 검색 알고리즘 

등 또한 사용될 수 있다는 것이 이해될 것이다. 

본 발명의 프로브는 세포, 조직, 또는 기타 생물학적 샘플(예로서, 코 세척액 또는 기관지 세정액) 중 인플루엔 

자 핵산의 존재 여부를 검출하고, 그의 실체를 결정하는데 특히 유용하다. 예를 들어, 본 발명의 프로브는 생물 

학적 샘플, 예를 들면, 피험체(예로서, 인간 피험체) 또는 모델 시스템(예를 들면, 배양된 세포 샘플)이 인플루 

엔자, 또는 특정의 인플루엔자 균주(들)에 노출되었는지, 또는 그에 감염되었는지 여부를 측정하는데 유리하게 

사용된다. 생물학적 샘플 또는 모델 시스템에서 기원한(그로부터 단리된) 핵산에 선택된 프로브가 하이브리드화 

하는지를 검출하는 것이 프로브 폴리뉴클레오티드가 선택되어진 바이러스(또는 관련 바이러스)에 노출되었는지, 

또는 그로 인해 감염되었는지를 나타낸다. 

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의도하는 적용에 따라 프로브 디자인이 영향을 받는다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 수개의 대립유전자-특 

이 프로브-표적 상호작용이 예로서 단일 DNA 칩상에서과 같이 단일 분석법으로 검출되는 경우, 모든 프로브는 

동일한 융점을 갖는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, 어레이 상의 모든 프로브에 대한 융점이 거의 유사하도록 

프로브의 길이는 조정된다(상이한 프로브가 상이한 GC 함량을 갖는 경우, 특정 Tm을 달성하기 위해서는 상이한 

프로브에 대해 상이한 길이가 필요할 수 있다는 것을 이해할 것이다). 프로브 디자인에 있어서 융점이 주된 고 

려사항이지만, 프로브 작제를 추가로 조정하기 위해서는 임의로 예를 들면, 프라이머 자가-상보성에 대해 선별 

하는 것과 같은 다른 인자가 사용된다. 

벡터, 프로모터 및 발현 시스템 

본 발명은 본원에 기술된 핵산 서열들 중 하나 이상을 혼입하고 있는 재조합 작제물을 포함한다. 그러한 작제물 

은 임의로 예로서, 서열 번호 1부터 서열 번호 10, 서열 번호 21부터 서열 번호 26, 서열 번호 33부터 서열 번 

호 38, 서열 번호 45 중 임의의 것을 포함하는 것과 같은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열 또는그의 하위서열 

이 순방향 또는 역향 배향으로 삽입되어 있는 벡터, 예를 들면, 플라스미드, 코스미드, 파지, 바이러스, 세균 

인공 염색체(BAC: bacterial artificial chromosome), 효모 인공 염색체(YAC: yeast artificial chromosome) 

등을 포함한다. 예를 들어, 삽입된 핵산은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열 중 적어도 하나의 전부 또는 그 일 

부를 포함하는 바이러스 염색체 서열 또는 cDNA를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 작제물은 예를 들어, 

상기 서열에 작동가능하게 연결되어 있는 것을 비롯한 조절 서열을 추가로 포함한다. 다수의 적합한 벡터 및 프 

로모터가 당업자에게 공지되어 있으며, 이는 상업적으로 이용가능하다. 

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 센스 또는 안티센스 RNA, 및 임의로, 폴리펩티드(또는 펩티드) 발현 생성물(예로 

서, 본 발명의 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니다제 분자, 또는 그의 단편)을 생성하는데 적합한 각종 벡터들 중 

어느 하나에 포함될 수 있다. 그러한 벡터로는 염색체, 비염색체성 및 합성 DNA 서열, 예로서, SV40의 유도체; 

세균 플라스미드; 파지 DNA; 바큘로바이러스; 효모 플라스미드; 플라스미드 및 파지 DNA, 바이러스 DNA, 예를 

들면, 백시니아, 아데노바이러스, 수두 바이러스, 슈도레이비스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 레트 

로바이러스 및 기타 다수(예로서, pCDL)의 DNA의 조합물로부터 유래된 벡터를 포함한다. 유전 물질을 세포내로 

도입할 수 있고, 복제가 바람직할 경우에는, 숙주에서 복제가능한 임의의 벡터가 사용될 수 있다. 

발현 벡터에서 관심의 대상이 되는 HA 및/또는 NA 폴리뉴클레오티드 서열은 mRNA 합성을 지시하는 적절한 전사 

제어 서열(예로서, 프로모터, 및 임의로 하나 이상의 인핸서)에 근접하게 그에 대한 배향으로 물리적으로 정렬 

된다. 즉, 관심의 대상이 되는 폴리뉴클레오티드 서열은 적절한 전사 제어 서열에 작동가능하게 연결된다. 그러 

한 프로모터의 예로는 LTR 또는 SV40 프로모터, E. 콜라이 lac 또는 trp 프로모터, 파지 람다 PL 프로모터, 및 

원핵생물 또는 진핵생물 세포 또는 그의 바이러스에서 유전자의 발현을 제어하는 것으로 알려져 있는 다른 프로 

모터를 포함한다. 

인플루엔자 바이러스 게놈 분절의 전사를 조절하기 위해 다양한 프로모터를 발현 벡터에서 사용하는 것이 적합 

하다. 특정 실시태양에서, 사이토메갈로바이러스 (CMV) DNA 의존 RNA 폴리머라제 II(Pol II) 프로모터가 사용된 

다. 원하는 경우, 예로서, 조건부 발현을 조절하기 위해 특별한 조건하에서, 또는 특별한 조직 또는 세포에서 

RNA 전사를 유도하는 다른 프로모터로 치환될 수 있다. 다수의 바이러스 및 포유동물 프로모터, 예로서, 인간 

프로모터가 이용가능하거나, 이는 주시되는 특별한 적용에 따라 단리될 수 있다. 예를 들어, 동물 및 인간 바이 

러스의 게놈으로부터 수득된 대체 프로모터로는 아데노바이러스(예를 들면, 아데노바이러스 2), 유두종 바이러 

스, B형 간염 바이러스, 폴리오마 바이러스, 및 원숭이 바이러스 40(SV40: Simian Virus 40), 및 각종 레트로바 

이러스 프로모터와 같은 프로모터를 포함한다. 기타 다수 중 포유동물 프로모터는 액틴 프로모터, 면역글로불린 

프로모터, 열 충격 프로모터 등을 포함한다. 

전사는 임의로 인핸서 서열을 포함함으로써 증가된다. 인핸서는 전형적으로 예를 들어, 10-500 bp로 그 길이가 

짧으며, 프로모터와 함께 전사를 증가시키는 역할을 하는 시스-작용성(cis-acting) DNA 요소이다. 다수의 인핸 

서 서열이 포유동물 유전자(헤모글로빈, 엘라스타제, 알부민, 알파-태아 단백질 및 인슐린) 및 진핵생물 세포 

바이러스로부터 단리되었다. 인핸서는 벡터내 이종성 코딩 서열에 대한 5' 또는 3' 위치에서 스플라이싱될 수 

있지만, 전형적으로는 프로모터에 대한 5' 위치로 삽입된다. 전형적으로, 프로모터, 및 원하는 경우, 추가의 전 

사 증진 서열은 이종성 DNA가 도입되는 숙주 세포 유형에서의 발현을 최적화하는 것으로 선택된다([Scharf et 

al. (1994) Heat stress promoters and transcription factors Results Probl Cell Differ 20: 125-62]; 

[Kriegler et al. (1990) Assembly of enhancers, promoters, and splice signals to control expression of 

transferred genes Methods in Enzymol 185: 512-27]). 임의로, 앰플리콘은 또한 번역 개시에 필요한 리보좀 

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결합 위치 또는 내부 리보좀 도입 위치(IRES: internal ribosome entry site)를 함유할 수도 있다. 

본 발명의 벡터는 또한 유리하게 전사 종결과 mRNA 안정화에 필요한 서열, 예를 들어, 폴리아데닐화 위치 또는 

종결자 서열을 포함할 수 있다. 이러한 서열은 보편적으로 진핵생물 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 5' 말단, 

경우에 따라서는 3' 말단의 비번역 부위로부터 이용가능하다. 하나의 실시태양에서, SV40 폴리아데닐화 서열은 

(-) 스트랜드 바이러스 게놈의 복제를 개시하는 PolI 프로모터로부터 (+) 스트랜드 mRNA 분자의 전사를 격리시 

키는 양방향 폴리아데닐화 부위를 제공할 수 있다. 

또한, 상기 기술한 바와 같이, 발현 벡터는 전술한 유전자들 이외에도, 임의로는 하나 이상의 선별가능한 마커 

유전자를 포함함으로써 형질전환된 숙주 세포 선별을 위한 표현형적 특징을 제공하며, 마커, 예를 들어, 디하이 

드로폴레이트 환원 효소 또는 네오마이신 내성은 진핵생물 세포 배양물에서의 선별을 위해 적합하다. 

상기 기술한 바와 같은 적절한 핵산 서열 뿐만 아니라, 적절한 프로모터 또는 제어 서열도 함유하는 벡터는 숙 

주 세포를 형질전환하여 단백질을 발현시키는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 벡터는 세균 세포내에서 복제될 수 

있지만, 가장 빈번하게는 본 발명의 목적을 위해 벡터를 포유동물 세포, 예를 들어, 베로 세포, BHK 세포, MDCK 

세포, 293 세포, COS 세포 등에 도입하는 것이 바람직할 것이다. 

그외 다른 곳에 기술되어 있는 바와 같이, 다양한 실시태양에서, 본원의 HA 및 NA 서열은 플라스미드-구제 재배 

열에 관여하는 플라스미드에 포함될 수 있다. 예로서, 2002년 10월 23일 출원된 미국 출원 번호 

제60/420,708호; 2004년 5월 24일 출원된 제60/574,117호; 2003년 4월 25일 출원된 제10/423,828호; 2004년 6 

월 12일 출원된 제60/578,962호; 및 2004년 6월 16일 출원된 제10/870,690호; 및 US20020164770(본원에서 참고 

로 인용된다)를 참조한다. 예를 들어, 본 발명의 바람직한 발현 벡터로는 pol I 프로모터 및 종결자 서열을 포 

함하는 벡터, 또는 pol I 및 pol II 프로모터 둘 모두, "pol I/pol II 프로모터 시스템"를 사용하는 벡터(예로 

서, [Zobel et al., Nucl. Acids Res. 1993, 21:3607]; US20020164770; [Neumann et al., Proc. Natl. Acad. 

Sci. USA 1999, 96:9345]; [Fodor et al., J. Virol. 1999, 73:9679]; 및 US20030035814)를 포함하나, 이에 

한정되지 않는다. 제조된 재배열체는 A/앤 아버/6/60 공여 균주(및/또는 그의 유도체 및 변형물), PR8 공여 균 

주 골격, A/레닌그라드/17 공여 균주 골격 등으로부터의 6개의 기타 인플루엔자 유전자와 함께 배열된 HA 및 NA 

유전자를 포함할 수 있다. 기타 골격 균주는 예를 들어, 20040137013 및 20030147916(본원에서 참고로 

인용된다)에 기재되어 있다. 

추가의 발현 요소 

가장 보편적으로는 인플루엔자 바이러스 HA 및/또는 NA 단백질을 코딩하는 게놈 분절은 바이러스의 기능성 단백 

질로의 번역을 포함하는, 그의 발현에 필요한 임의의 추가 서열을 포함한다. 다른 상황에서는 미니유전자, 또는 

바이러스 단백질을 코딩하는 기타 인공 작제물, 예로서, HA 및/또는 NA 단백질이 사용될 수 있다. 또한, 그러한 

경우에는 종종 이종성 코딩 서열의 효율적인 번역에 도움이 되는 특이적인 개시 신호를 포함하는 것이 바람직할 

수 있다. 이러한 신호로는 예로서, ATG 개시 코돈 및 인접 서열을 포함할 수 있다. 전체 삽입체가 확실히 번역 

될 수 있도록 하기 위해 개시 코돈은 바이러스 단백질에 대해 정확한 리딩 프레임으로 삽입된다. 외인성 전사 

요소 및 개시 코돈의 기원은 다양할 수 있으며, 이는 천연 및 합성, 둘 모두일 수 있다. 사용시 세포 시스템에 

적절한 인핸서를 포함함으로써 발현율을 증진시킬 수 있다. 

원하는 경우, 예로서, 원하는 세포 구획, 막, 또는 세포기관으로의 폴리펩티드 발현을 표적하기 위해, 또는 원 

형질막주위공간 또는 세포 배양 배지로의 폴리펩티드 분비를 지시하기 위해 추가의 발현 요소를 코딩하는 폴리 

뉴클레오티드 서열, 예를 들면, 신호 서열, 분비 또는 위치화 서열 등은 벡터내로, 보통은 관심의 대상이 되는 

폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 프레임내로 혼입될 수 있다. 그러한 서열은 당업자에게 알려져 있으며, 분비 

리더 펩티드, 세포기관 표적 서열(예로서, 핵 위치화 서열, ER 보존 신호, 미토콘드리아 전이 서열), 막 위치화 

/부착 서열(예로서, 정지 전달 서열, GPI 부착 서열) 등을 포함한다. 

본 발명의 핵산 서열에 의해 코딩되는 폴리펩티드가 번역될 것을 원하는 경우, 추가의 번역 특이 개시 신호가 

번역율을 개선시킬 수 있다. 이러한 신호로는 예로서, ATG 개시 코돈 및 인접 서열, IRES 영역 등을 포함한다. 

예를 들어, 예로서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열(예로서, 본원의 서열 중의 것)을 혼입하고 있는 코딩 서 

열, 번역 개시 코돈 및 관련 서열 요소를 포함하는 전길이의 cDNA 분자 또는 염색체 분절은 관심의 대상이 되는 

폴리뉴클레오티드 서열과 동시에 적절한 발현 벡터내로 삽입된다. 이러한 경우, 추가의 번역 제어 신호가 빈번 

히 요구되는 것은 아니다. 그러나, 유일하게 폴리펩티드 코딩 서열, 또는 그의 일부만이 삽입되는 경우에는, 예 

로서, ATG 개시 코돈을 비롯한, 외인성 번역 제어 신호가 관련 서열의 발현을 위해 종종 제공된다. 관심의 대상 

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이 되는 폴리뉴클레오티드 서열이 확실히 전사될 수 있도록 하기 위해 정확한 리딩 프레임내로 개시 코돈을 놓 

는다. 외인성 전사 요소 및 개시 코돈의 기원은 다양할 수 있으며, 이는 천연 및 합성, 둘 모두일 수 있다. 사 

용시 세포 시스템에 적절한 인핸서를 포함함으로써 발현율을 증진시킬 수 있다(예로서, [Scharf D. et al. 

(1994) Results Probl Cell Differ 20:125-62]; [Bittner et al. (1987) Methods in Enzymol 153:516-544]). 

재조합 바이러스 제조 

네거티브 스트랜드 RNA 바이러스는 유전적으로 조작될 수 있고, 재조합 역 유전자 접근법을 사용하여 회복될 수 

있다(예로서, USPN 5,166,057(Palese et al.)). 그러한 방법은 원래 인플루엔자 바이러스 게놈을 조작하는데 적 

용되었으며(([Luytjes et al. (1989) Cell 59:1107-1113]; [Enami et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 

92:11563-11567])), 예로서, 광견병([Schnell et al. (1994) EMBO J. 13:4195-4203); VSV([Lawson et al. 

(1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:4477-4481]); 홍역 바이러스([Radecke et al.(1995) EMBO J. 14:5773- 

5784]); 우역 바이러스([Baron & Barrett (1997) J. Virol. 71:1265-1271]); 인간 파라인플루엔자 바이러스 

(([Hoffman & Banerjee (1997) J. Virol. 71:3272-3277]; [Dubin et al. (1997) Virology 235:323-332])); 

SV5([He et al. (1997) Virology 237:249-260]); 개 디스템퍼 바이러스([Gassen et al. (2000) J. Virol. 

74:10737-44]); 및 센다이 바이러스(([Park et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 5537-5541]; 

[Kato et al. (1996) Genes to Cell 1:569-579]))와 같은 매우 다양한 분절형 및 비분절형 네거티브 스트랜드 

RNA 바이러스에 성공적으로 적용되어 왔다. 당업자는 본 발명의 HA 및 NA 서열을 포함하는 인플루엔자 바이러스 

를 제조할 수 있는 이러한 기법 및 유사한 기법에 정통할 것이다. 상기 방법에 따라 제조된 재조합 인플루엔자 

바이러스는 본 발명의 핵산 및/또는 폴리펩티드를 하나 이상 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스인 바, 이 또 

한 본 발명의 특징이 된다. 

세포 배양물 및 발현 숙주 

본 발명은 또한 본 발명의 벡터가 도입된(형질도입된, 형질전환 또는 형질감염된) 숙주 세포, 및 재조합 기법에 

의해 본 발명의 폴리펩티드를 제조하는 방법에 관한 것이다. 숙주 세포는 본 발명의 벡터, 예로서, 발현 벡터로 

유전적으로 조작(즉, 형질도입, 형질전환 또는 형질감염)된다. 상기 기술된 바와 같이, 벡터는 플라스미드, 바 

이러스 입자, 파지 등의 형태일 수 있다. 적절한 발현 숙주의 예로는 세균 세포, 예를 들면, E. 콜라이, 스트렙 

토마이세스(Streptomyces), 및 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium); 진균 세포, 예를 들면, 사카로 

마이세스 세레비지아(Saccharomyces cerevisiae), 피치아패스토리스(Pichiapastoris), 및 뉴로스포라 크라사 

(Neurospora crassa); 또는 곤충 세포, 예를 들면, 초파리 및 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera 

frugiperda)를 포함한다. 

본 발명의 HA 및 NA 분자를 배양하기 위해서 포유동물 세포가 가장 보편적으로는 사용된다. 인플루엔자 바이러 

스 복제를 위해 적합한 숙주 세포로는 예로서, 베로 세포, BHK 세포, MDCK 세포, 293 세포 및 COS 세포(293T 세 

포, COS7 세포 포함) 등을 포함한다. 보편적으로는 상기의 세포주들 중 2개, 예로서, MDCK 세포와, 293T 또는 

COS 세포를 포함하는 공-배양은 복제율을 개선시키는 비율, 예로서, 1:1의 비율로 사용된다. 전형적으로, 세포 

는 중성의 완충처리된 pH(예로서, 7.0 내지 7.2 사이의 pH)를 유지하는데 적합한 CO2 농도와 습도의 조절하에 

표준 시판용 배양 배지, 예를 들면, 혈청(예로서, 10% 우태아 혈청)으로 보충된 둘베코 변형 이글 배지, 또는 

무혈청 배지에서 배양된다. 임의로, 배지는 세균 성장 막기 위해 항생제, 예로서, 페니실린, 스트렙토마이신 

등, 및/또는 추가의 영양분, 예를 들면, L-글루타민, 피루브산나트륨, 비필수 아미노산, 바람직한 성장 특징을 

촉진시키기 위한 추가의 보충제, 예로서, 트립신, β-머캅토에탄올 등을 포함한다. 

공학처리된 숙주 세포는 프로모터 활성화, 형질전환체 선별, 또는 삽입된 폴리뉴클레오티드 서열의 증폭을 위해 

적절히 변형된 통상의 영양 배지에서 배양될 수 있다. 배양 조건, 예를 들면, 온도, pH 등은 전형적으로 발현을 

위해 선택되어진 특정 숙주 세포와 함께 앞서 사용되었던 것이며, 이는 당업자에게 자명할 것이며, 예로서, 

([Freshney (1994) Culture of Animal Cells, Manual of Basic Technique, 3 rd 

edition, Wiley-Liss, New 

York] 및 그 안에서 인용된 참고문헌)를 비롯한 본원에서 인용되는 참고문헌에서 자명해질 것이다. 도움이 되는 

다른 참고문헌으로는 예로서, ([Paul (1975) Cell and Tissue Culture. 5 th 

ed., Livingston, Edinburgh]; 

[Adams (1980) Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Cell Culture for 

Biochemists, Work and Burdon (eds.) Elsevier,msterdam])을 포함한다. 시험관내에서의 인플루엔자 바이러스 

제조시 특히 관심의 대상이 되는 조직 배양 방법에 관한 추가의 상세한 설명은 예로서, [Merten et al. (1996) 

Production of influenza virus in cell cultures for vaccine preparation, in Cohen and Shafferman (eds.) 

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Novel Strategies in Design and Production of vaccine](이는 그의 전문이 모든 목적을 위해 본원에서 참고로 

인용된다)에 포함되어 있다. 추가로, 본 발명에 적합화된 상기 방법에 있어서의 변형은 통상의 실험을 통해 쉽 

게 결정될 수 있으며, 당업자는 그에 대해 정통할 것이다. 

인플루엔자 바이러스(예로서, 본 발명의 HA 및/또는 NA 서열을 갖는 것)를 생산하는 세포는 혈청 함유 배지 또 

는 무혈청 배지에서 배양될 수 있다. 몇몇의 경우, 예를 들어, 정제된 바이러스 제조를 위해서는 전형적으로 무 

혈청 조건에서 숙주 세포를 배양하는 것이 바람직할 수 있다. 세포는 소규모로, 예로서, 25 ml 미만의 배지로 

배양 튜브 또는 플라스크에서, 또는 플라스크, 병 또는 반응기 배양물 중 교반시키면서 큰 플라스크에서, 회전 

식 병에서, 또는 미세담체 비드(예로서, DEAE-덱스트란 미세담체 비드, 예를 들면, 도마셀(Dormacell)(Pfeifer 

& Langen); 슈퍼비드(Superbead)(Flow Laboratories); 스티렌 공중합체-트리-메틸아민 비드, 예를 들면, 힐렉 

스(Hillex)(앤아버 소재의 SoloHill))상에서 배양될 수 있다. 미세담체 비드는 부착 세포 성장을 위해 세포 배 

양물 1 부피당 큰 표면적을 제공하는 작은 구상이다(직경 범위는 100-200 미크론이다). 예를 들어, 1 리터의 배 

지는 2000만개 초과의 미세담체 비드를 포함하며, 이는 8000 ㎠ 초과의 성장 표면을 제공한다. 예로서, 백신 제 

소를 위해 바이러스를 상업적으로 제조하는 경우, 이는 주로 생물반응기 또는 발효장치에서 세포를 배양하는 것 

이 바람직할 수 있다. 생물반응기는 1 리터 미만에서부터 100 리터 초과의 부피로 이용가능하며, 예로는 Cyto3 

생물반응기(미네소타주 미네통카 소재의 Osmonics); NBS 생물반응기(뉴저지주 에디슨 소재의 New Brunswick 

Scientific); 브라운 바이오테크 인터내셔날(B. Braun Biotech International)(독일 소재의 B. Braun Biotech, 

Melsungen)로부터 입수한 실험실용 및 시판용 규모의 생물반응기가 있다. 

배양물 부피와는 상관없이 본 발명의 다수의 바람직한 측면에서는 여과를 위해 바이러스 용액을 가열시키면서, 

재조합 및/또는 재배열 인플루엔자 바이러스가 확실히 효율적으로 회수될 수 있도록 온도에 의존하는 다중 플라 

스미드 시스템을 사용하여 배양물이 적절한 온도로 유지되게 하는 것이 중요하다(예로서, 2002년 10월 23일 출 

원된 미국 출원 번호 제60/420,708호(Multi-Plasmid System for the Production of Influenza Virus), 2003년 

4월 25일 출원된 미국 출원 번호 제10/423,828호, 및 2004년 5월 24일 출원된 미국 출원 번호 제60/574,117호 

참고). 전형적으로, 적절한 기간 동안(예로서, 바이러스 복제시 등) 온도가 정확한 수준에 있도록 하기 위해 조 

절 장치, 예로서, 온도 조절기, 또는 세포 배양물 시스템 및/또는 기타 용액의 온도를 감시하고 유지시키는 다 

른 장치가 사용된다. 

본원의 몇몇 실시태양에서(예로서, 재배열 바이러스가 벡터 상의 분절로부터 제조되는 경우) 당업계에 잘 알려 

져 있는, 진핵생물 세포내로 이종성 핵산을 도입하는 방법, 예로서, 인산칼슘 공-침전법, 전기천공법, 미세주입 

법, 리포펙션, 및 폴리아민 형질감염 시약을 사용하는 형질감염과 같은 방법에 따라 인플루엔자 게놈 분절을 포 

함하는 벡터를 숙주 세포내로 도입(예로서, 형질도입)시킨다. 예를 들면, 재조합 바이러스 등을 제조하기 위해 

제조사의 설명서에 따라 폴리아민 형질감염 시약 TransIT-LT1(Minis)을 사용하여 벡터, 예로서, 플라스미드를 

숙주 세포, 예를 들면, COS 세포, 293T 세포 또는 COS 또는 293T 세포와 MDCK 세포의 조합물로 형질감염시킬 수 

있다. 따라서, 일례로, 총 부피 200 ㎕ 중 160 ㎕의 배지, 바람직하게 무혈청 배지에 희석된 대략 2 ㎕의 

TransIT-LT1을 사용하여 대략 1 ㎍의 각각의 벡터를 숙주 세포 군집으로 도입한다. DNA:형질감염 시약 혼합물을 

실온에서 45분 동안 인큐베이션시킨 후, 800 ㎕의 배지를 첨가한다. 형질감염 혼합물을 숙주 세포에 가하고, 당 

업자에게 잘 알려져 있는 기타 방법을 통해 세포를 배양한다. 그에 따라서 세포 배양물에서 재조합 또는 재배열 

바이러스의 생산을 위해 8개의 게놈 분절(PB2, PB1, PA, NP, M, NS, HA 및 NA, 예로서, 본 발명의 것) 각각을 

혼입하고 있는 벡터를 대략 20 ㎕ TransIT-LT1과 혼합하고, 숙주 세포내로 형질감염시킨다. 임의로, 형질감염 

이전에 혈청을 함유하는 배지를 예로서, Opti-MEM I과 같은 무혈청 배지로 대체하고, 4-6시간 동안 인큐베이션 

시킨다. 

별법으로, 인플루엔자 게놈 분절을 혼입하고 있는 상기와 같은 벡터를 숙주 세포내로 도입시키기 위해 전기천공 

이 사용될 수 있다. 예를 들어, 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B 바이러스를 혼입하고 있는 플라스미드 벡터는 

유리하게 하기 방법에 따른 전기천공을 사용하여 베로 세포내로 도입된다. 간략하면, 대략 5 x 10 6 

개의 베로 세 

포, 예로서, 10% 우태아 혈청(FBS: Fetal Bovine Serum)으로 보충된 변형된 이글스 배지(MEM: Modified 

Eagle's Medium)에서 배양된 상기 세포를 0.4 ml OptiMEM에 재현탁시키고, 전기천공 큐베트에 놓는다. 25 ㎕ 이 

하의 부피로 20 ㎍의 DNA를 큐벳내 세포에 첨가한 후, 이를 가볍게 두드림으로써 서서히 혼합시킨다. 28-33 

msec 사이의 시간 상수를 사용하여 300 볼트, 950 마이크로 패러드 하에 제조사의 설명서(예로서, Capacitance 

Extender Plus가 연결된 BioRad Gene Pulser II)에 따라 전기천공을 실시한다. 서서히 가볍게 두드림으로써 세 

포를 다시 혼합하고, 전기천공 후 대략 1-2분 경과 후, 10% FBS를 포함하는 0.7 ml MEM을 큐벳에 직접 

첨가한다. 이어서, 세포를, 2 ml MEM, 10% FBS를 함유하는 6개의 웰을 갖는 표준 조직 배양 디쉬 중 2개의 웰로 

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옮긴다. 큐벳을 세척하여 임의의 남아있는 세포를 회수하고, 세척 현탁액을 2개 웰로 나눈다. 최종 부피는 대략 

3.5 mL이다. 이어서, 바이러스 성장을 허용가능 조건, 예로서, 저온 적응성 균주의 경우, 대략 33℃에서 인큐베 

이션시킨다. 

포유동물 숙주 세포에서, 다수의 발현 시스템, 예를 들면, 바이러스 기초 시스템이 사용될 수 있다. 아데노바이 

러스가 발현 벡터로서 사용되는 경우, 코딩 서열은 임의로 후기 프로모터 및 3부로 나누어진 리더 서열로 구성 

된 아데노바이러스 전사/번역 복합체로 결찰된다. 바이러스 게놈의 비필수 E1 또는 E3 영역내 삽입으로 감염된 

숙주 세포에서 관심의 대상이 되는 폴리펩티드를 발현할 수 있는 생육성 바이러스를 수득하게 될 것이다[Logan 

and Shenk (1984) Proc Natl Acad Sci 81:3655-3659]. 또한, 전사 인핸서, 예를 들면, 라우스 육종 바이러스 

(RSV: rous sarcoma virus) 인핸서는 포유동물 숙주 세포에서의 발현을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 

삽입된 서열의 발현을 조절할 수 있거나, 원하는 양식대로 발현된 단백질을 프로세싱할 수 있는 능력에 대해서 

숙주 세포 균주는 임의로 선택된다. 상기와 같은 단백질의 변형으로는 아세틸화, 카르복실화, 당화, 인산화, 지 

질화 및 아실화를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 전구체 형태를 성숙한 형태로 절단하는 것인 단백질의 번역 

후 프로세싱이 때로는 올바른 삽입, 폴딩, 및/또는 기능을 위해서는 중요하다. 숙주 세포내(예로서, 세표 표면 

상에) 추가로 적절히 위치화시키는 것도 중요하다. 상이한 숙주 세포, 예를 들면, COS, CHO, BHK, MDCK, 293, 

293T, C0S7 등은 상기와 같은 번역후 활성에 대해 특이적인 세포 기구 및 특징적인 기전을 갖고 있으며, 이는 

현 도입된 외래 단백질의 정확한 변형과 프로세싱을 확실히 하기 위해 선택될 수 있다. 

본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 재조합 단백질 또는 그에 의해 코딩된 하위서열을 갖는 재조합 단백 

질을 장기간 동안 고수율로 제조하기 위해서는 안정적인 발현 시스템이 임의로 사용된다. 예를 들어, 본 발명의 

폴리펩티드를 안정적으로 발현하는 세포를, 바이러스 복제 기점 또는 내인성 발현 요소 및 선별가능한 마커 유 

전자를 함유하는 발현 벡터를 사용하여 형질감염시킨다. 예를 들어,벡터를 도입한후, 선별 배지로 교체하기 이 

전에 영양강화 배지에서 1-2일 동안 세포를 배양한다. 선별가능한 마커의 목적은 선별에 대한 내성을 부여하는 

것이며, 선별가능한 마커가 존재함으로써 도입된 서열을 성공적으로 발현하는 세포를 배양하고 회수할 수 있다. 

따라서, 예를 들면, 단일 세포 유형으로부터 유형된 것과 같은 안정적으로 형질도입된 세포의 내성을 띤 응집물 

은 상기 세포 유형에 적절한 조직 배양 기법의 사용으로 증식시킬 수 있다. 

본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열로 형질전환된 숙주 세포는 임의로 세포 배양물로부터 코딩 

된 단백질의 발현과 회수에 적합한 조건하에서 배양된다. 상기 단백질을 발현하는 세포는 분류, 단리 및/또는 

정제될 수 있다. 재조합 세포에 의해 제조된 단백질 또는 그의 단편은 서열에 따라(예로서, 융합 단백질을 코딩 

하는 막 보존 신호 등에 따라) 및/또는 사용하는 벡터에 따라 분비되거나, 막에 결합하거나, 세포내 보존될 수 

있다. 

본 발명의 핵산에 상응하는 발현 생성물은 또한 동물이 아닌 세포, 예를 들면, 식물, 효모, 진균, 세균 등에서 

생산될 수 있다. [Sambrook, Berger and Ausubel], 그 이외에, 세포 배양물에 관한 하기의 모든 설명은 

([Payne et al. (1992) Plant Cell and Tissue Culture in Liquid Systems John Wiley & Sons, Inc. New 

York, NY]; [Gamborg and Phillips (eds.) (1995) Plant Cell Tissue and Organ Culture]; [Fundamental 

Methods Springer Lab Manual, Springer-Verlag (Berlin Heidelberg New York) and Atlas and Parks (eds.) 

The Handbook of Microbiological Media (1993) CRC Press, Boca Raton, FL])에서 찾아볼 수 있다 

세균 시스템에서 다수의 발현 벡터는 발현되는 생성물에 대해 의도되는 용도에 따라 선택될 수 있다. 예를 

들어, 항체 생산을 위해 다량의 폴리펩티드 또는 그의 단편이 필요할 경우, 쉽게 정제되는 융합 단백질을 고수 

준으로 발현시키는 벡터가 유리하게 사용된다. 그러한 벡터로는, 관심의 대상이 되는 코딩 서열, 예로서, 본원 

에서 발견되는 것 등을 포함하는 서열이 아미노-말단 번역 개시 메티오닌에 대한 서열과, 이어서 촉매적으로 활 

성인 베타 갈락토시다제 융합 단백질을 생산하는 베타 갈락토시다제의 7개의 잔기와 함께 프레임내 벡터내로 결 

찰될 수 있는 BLUESCRIPT(Stratagene)와 같은 다기능 E. 콜라이 클로닝 및 발현 벡터; pIN 벡터[Van Heeke & 

Schuster (1989) J Biol Chem 264:5503-5509]; pET 벡터(위스콘신주 매디슨 소재의 Novagen) 등을 포함하나, 

이에 한정되지 않는다. 유사하게, 효모 사카로마이세스 세레비지아에서는 구성 프로모터 또는 유도성 프로모터, 

예를 들면, 알파 인자, 알코올 옥시다제 및 PGH를 함유하는 다수의 벡터가 원하는 발현 생성물을 제조하는데 사 

용될 수 있다. 리뷰를 위해서 ([Ausubel, 하기 문헌], 및 [Grant et al, (1987); Methods in Enzymology 

153:516-544])을 참조한다. 

핵산 하이브리드화 

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비교 하이브리드화를 사용하여 본 발명의 핵산의 보존적 변이를 비롯한, 본 발명의 핵산(예로서, 서열 번호 1- 

10, 서열 번호 21-26, 서열 번호 33-38, 서열 번호 45)을 동정할 수 있다. 이러한 비교 하이브리드화 방법은 본 

발명의 핵산을 구별하는 바람직한 방법이다. 추가로, 고도로, 초고도로(ultra-high), 및 극초고도로(ultra- 

ultra-high) 엄격한 조건하에서 예로서, 본원에서 나타낸 것과 같은 것으로 제시된 핵산에 하이브리드화하는 표 

적 핵산이 본 발명의 특징이 된다. 그러한 핵산의 예로는 주어진 핵산 서열과 비교하여 하나 또는 수개의 침묵 

또는 보존적 핵산 치환을 갖는 것을 포함한다. 

시험 표적 핵산은, 완전히 매치되는 상보적 표적에 대한 하이브리드화 대비, 프로브에 대해 ½ 이상으로 하이브 

리드화할 때, 즉, 매치되지 않는 표적 핵산 중 임의의 것에 대한 하이브리드화에서 관찰되는 비의 약 5x 내지 

10x 이상인 신호 대 잡음비로 완전히 매치되는 프로브가 완전히 매치되는 상보적 표적에 결합하도록 하는 조건 

하에서, 표적에 대한 프로브의 하이브리드화의 ½ 이상인 신호 대 잡음비를 가질 때, 프로브 핵산에 특이적으로 

하이브리드화한다고 일컬어진다. 

핵산은 그것이 전형적으로 용매 중 연합할 때, "하이브리드화"한다. 핵산은 다양한 잘 특징화된 물리화학적 힘, 

예컨대, 수소 결합, 용매 배제, 염기 적층 등으로 인해 하이브리드화한다. 핵산 하이브리드화에 관한 다수의 프 

로토콜은 당업계에 잘 알려져 있다. 핵산의 하이브리드화에 관한 자세한 가이드는 [Tijssen (1993) Laboratory 

Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes part I chapter 

2, "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid probe assays," (Elsevier, 

New York)] 및 [Ausubel, Sambrook, 및 Berger and Kimmel]와 하기의 모든 문헌에 나와 있다. ([Hames and 

Higgins (1995) Gene Probes 1 IRL Press at 0xford University Press, 0xford, England, (Hames and Higgins 

1)] 및 [Hames and Higgins (1995) Gene Probes 2 IRL Press at 0xford University Press, 0xford, England 

(Hames and Higgins 2)])는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 DNA 및 RNA의 합성, 표지화, 검출 및 정량화에 대한 

상세 내용을 제공한다. 

써던 또는 노던 블로트내 필터 상에 100개 초과의 상보적 잔기를 가지는 상보적 핵산의 하이브리드화를 위한 엄 

격한 하이브리드화 조건의 한 예는 42℃에서의 1 mg의 헤파린을 갖는 50% 포르말린이고, 여기에서, 하이브리드 

화는 밤새도록 수행된다. 엄격한 세정 조건의 한 예는 15분 동안 65℃에서 0.2xSSC 세정하는 것이다(SSC 완충액 

및 기타 핵산 하이브리드화 파라미터에 관한 설명을 위해 [Sambrook, 하기 문헌]를 참조한다). 종종 고도로 엄 

격한 세정 전에, 엄격성이 낮은 세정이 선행되어, 배경 프로브 신호를 제거한다. 한 예로서의 엄격성이 낮은 세 

정은 15분 동안 40℃에서 2x SSC를 이용하여 세정하는 것이다. 일반적으로, 특별한 하이브리드화 분석법에서 비 

관련 프로브에 대해 관찰되는 것보다 5x(또는 그 이상) 더 높은 신호 대 잡음비는 특정 하이브리드화의 검출을 

가리킨다. 

하이브리드화 이후, 하이브리드화되지 않은 핵산은 일련의 세정을 거쳐 제거될 수 있는데, 그의 엄격성은 원하 

는 결과에 따라 조절될 수 있다. 엄격성이 낮은 세정 조건(예로서, 더욱 높은 염과 더욱 낮은 온도 사용)이 감 

수성을 증가시키지만, 비특이적인 하이브리드화 신호와 높은 배경 신호를 생성할 수 있다. 더욱 고도로 엄격한 

조건(예로서, 더욱 낮은 염과 Tm에 좀더 가까운, 더욱 높은 온도 사용)은 배경 신호를 낮추며, 전형적으로는 주 

로 특이적인 신호는 그대로 남아있다. 또한 [Rapley, R. and Walker, J.M. eds., Molecular Biomethods 

Handbook (Humana Press, Inc. 1998)]를 참조한다. 

핵산 하이브리드화 실험, 예를 들면, 써던 및 노던 하이브리드화와 관련하여 "엄격한 하이브리드화 세정 조건" 

은 서열에 의존하며, 이는 상이한 환경 파라미터하에서는 달라진다. 핵산의 하이브리드화에 관한 자세한 가이드 

는 [Tijssen (1993), 상기 문헌] 및 [Hames and Higgins, 1 and 2]에 나와 있다. 엄격한 하이브리드화 및 세정 

조건은 임의의 시험 핵산에 대해 실험적으로 용이하게 결정될 수 있다. 예를 들어, 고도로 엄격한 하이브리드화 

및 세정 조건을 결정할 때, 선택된 기준 세트가 충족될 때까지, 하이브리드화 및 세정 조건을 (예컨대, 하이브 

리드화 또는 세정시에 온도 증가, 염 농도 감소, 세제 농도 증가, 및/또는 포르말린과 같은 유기 용매의 농도 

증가에 의해) 점차적으로 증가시킨다. 예를 들어, 매치되지 않은 표적에 대한 프로브의 하이브리드화에서 관찰 

되는 것의 5x이상인 신호 대 잡음비로 프로브가 완전히 매치되는 상보적 표적에 결합할 때까지, 하이브리드화 

및 세정 조건을 점차적으로 증가시킨다. 

일반적으로, 특별한 하이브리드화 분석법에서 비관련 프로브에 대해 관찰되는 것보다 적어도 2x(또는 그 이상, 

예로서, 적어도 5x, 10x, 20x, 50x, 100x 이상) 더 높은 신호 대 잡음비는 특정 하이브리드화의 검출을 가리킨 

다. 두 서열간의 적어도 엄격한 하이브리드화 검출은 예로서, 본원 서열목록에서 제공하는 본 발명의 핵산과의 

상대적으로 강한 구조상의 유사성을 나타낸다. 

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"매우 엄격한" 조건은 특별한 프로브에 대한 열 융점 온도(Tm)과 동등하도록 선택된다. Tm은 시험 서열의 50%가 

완전히 매치되는 표적에 하이브리드화하는 (한정된 이온 강도 및 pH 하에서의) 온도이다. 본 발명의 목적상, 일 

반적으로, "고도로 엄격한" 하이브리드화 및 세정 조건은 한정된 이온 강도 및 pH에서 특정 서열에 대한 Tm보다 

약 5℃ 더 낮도록 선택된다(하기에서 언급하는 바, 고도로 엄격한 조건은 또한 비교 측면에서 언급될 수 있다). 

관심의 대상이 되는 뉴클레오티드 서열과 매우 가깝거나 그와 일치하는 표적 서열(예로서, "프로브")은 엄격하 

거나 고도로 엄격한 조건하에서 동정될 수 있다. 엄격성이 낮은 조건은 상보성이 더 작은 서열에 대해 

적절하다. 

"초고도로 엄격한" 하이브리드화 및 세척 조건은 하이브리드화 및 세정 조건의 엄격성이 완전히 매치되는 상보 

적 표적 핵산에 대한 프로브의 결합을 위한 신호 대 잡음비가 매치되지 않은 표적 핵산들 중 임의의 것에 대한 

하이브리드화에서 관찰되는 비의 10x 이상이 될 때까지 증가되는 조건이다. 완전히 매치되는 상보적 표적 핵산 

의 비의 ½ 이상인 신호 대 잡음비로 상기 조건 하에서 프로브에 하이브리드화하는 표적 핵산은 초고도 엄격성 

조건하에서 프로브에 결합한다고 일컬어진다. 

엄격하거나 고도로 엄격한 하이브리드화(또는 더욱더 엄격한 하이브리드화) 및 세정 조건을 결정할 때, 선택된 

기준 세트가 충족될 때까지, 하이브리드화 및 세정 조건을 (예컨대, 하이브리드화 또는 세정시에 온도 증가, 염 

농도 감소, 세제 농도 증가, 및/또는 포르말린과 같은 유기 용매의 농도 증가에 의해) 점차적으로 증가시킨다. 

예를 들어, 원하는 바와 같이 매치되지 않은 표적(예로서, 공용 데이타베이스, 예를 들면, 파일링시 진뱅크에 

존재하는 공지된 인플루엔자 서열로부터 선택되는 하나 이상의 서열 또는 하위서열을 포함하는 폴리뉴클레오티 

드 서열 및/또는 그의 상보적 폴리뉴클레오티드 서열)에 대한 프로브의 하이브리드화에서 관찰되는 비의 적어도 

2x(및 임의로 5x, 10x, 또는 100x 이상) 높은 신호 대 잡음비로 본 발명의 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 서열, 

예로서, 본원에서 제공되는 것으로부터 선택되는 서열 또는 독특한 하위서열(예로서, 서열 번호 1-10, 21-26, 

33-38, 서열 번호 45) 및/또는 그의 상보적 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 프로브가 완전히 매치되는 상보 

적 표적(또한, 본원에서 제공되는 것으로부터 선택되는 하나 이상의 핵산 서열 또는 하위서열을 포함하는 핵산 

및/또는 그의 상보적 폴리뉴클레오티드 서열)에 결합할 때까지 하이브리드화 및 세정 조건을 점차적으로 증가시 

킨다. 

본 발명의 폴리뉴클레오티드, 또는 그의 하위서열을 사용하여 신규한 표적 핵산을 수득할 수 있으며, 그러한 표 

적 핵산 또한 본 발명의 특징이 된다. 예를 들어, 그러한 표적 핵산은 엄격한 조건하에서 본 발명의 폴리뉴클레 

오티드, 예로서, 서열 번호 1-10, 21-26, 33-38, 45 중 임의의 것에 상응하는 독특한 올리고뉴클레오티드 프로 

브에 하이브리드화하는 서열을 포함한다. 

유사하게, 더 높은 엄격성 수준은 관련 하이브리드화 분석법의 하이브리드화 및/또는 세정 조건을 점차적으로 

증가시킴으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 완전히 매치되는 상보적 표적 핵산에 대한 프로브의 결합을 위한 

신호 대 잡음비가, 매치되지 않은 표적 핵산들 중 임의의 것에 대한 하이브리드화에서 관찰되는 비의 적어도 

10X, 2OX, 50X, 10OX, 또는 500X 또는 그 이상일 때까지, 하이브리드화 및 세정 조건의 엄격성을 증가시키는 조 

건이다. 특정 신호는 예로서, 형광 표지, 비색 표지, 방사성 표지 등과 같이, 관련 분석법에서 사용되는 표지에 

따라 달라질 것이다. 완전히 매치되는 상보적 표적 핵산의 비의 ½ 이상인 신호 대 잡음비로 상기 조건 하에서 

프로브에 하이브리드화하는 표적 핵산은 극초고도로 엄격한 조건하에서 프로브에 결합한다고 일컬어지며, 이 또 

한 본 발명의 특징이 된다. 

엄격한 조건하에서 서로에 대해 하이브리드화하지 않는 핵산은, 그것이 코딩하는 폴리펩티드가 실질적으로 동일 

한 경우, 여전히 실질적으로 동일하다. 이는, 예컨대, 유전 코드에 의해 허용되는 최대 코돈 퇴화를 이용하여 

핵산의 카피가 제조될 때 일어난다. 

관심의 대상이 되는 생체 분자의 클로닝, 돌연변이유발 및 발현 

본 발명에도 적용가능한 분자생물학적 기법, 예를 들면, 클로닝, 돌연변이화 세포 배양법 등을 기재하고 있는 

일반 텍스트로는 ([Berger and Kimmel, Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology 

volume 152 Academic Press, Inc., San Diego, CA (Berger)]; [Sambrook et al., Molecular Cloning - A 

Laboratory Manual (3rd Ed.), Vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 

2000 ("Sambrook")] 및 [Current Protocols in Molecular Biology, F. M. Ausubel et al., eds., Current 

Protocols, joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., 

(supplemented through 2002) ("Ausubel")])을 포함한다. 이들 텍스트는 예로서, HA 및/또는 NA 분자 생성 등 

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과 관련된 돌연변이유발, 벡터의 사용, 프로모터 및 다수의 다른 관련 주제를 기재하고 있다. 

다양한 유형의 돌연변이유발은 예로서, 본 발명의 신규의 또는 새로 단리된 HA 및/또는 NA 분자를 제조 및/또는 

단리시키기 위해, 및/또는 본 발명의 폴리펩티드(예로서, 서열 번호 11-20 또는 27-32 또는 39-44에 기재된 HA 

및 NA 분자)를 추가로 변형/돌연변이화시키기 위해서 임의로 본 발명에서 사용된다. 이들은 부위 지정, 무작위 

점 돌연변이유발, 상동 재조합(DNA 셔플링), 우라실을 함유하는 주형을 사용한 돌연변이유발, 올리고뉴클레오티 

드 지정 돌연변이유발, 포스포로티오에이트 변형 DNA 돌연변이유발, 갭이 있는 이중체 DNA를 사용한 돌연변이유 

발 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 추가적인 적합한 방법으로는 점 미스매치 수복, 수복-결핍 숙주 균주 

를 사용한 돌연변이유발, 제한-선택 및 제한-정제, 결실 돌연변이유발, 총 유전자 합성에 의한 돌연변이유발, 

더블 스트랜드 파괴 수복 등을 포함한다. 예로서, 키메라 작제물을 이용하는 것을 포함하는 돌연변이유발도 본 

발명에 포함된다. 하나의 실시태양에서, 서열, 서열 비교, 물리적 성질, 결정 구조 등과 같은 천연적으로 발생 

된 분자, 또는 변형 또는 돌연변이화된 천연적으로 발생된 분자의 공지된 정보에 의해 돌연변이유발을 주도할 

수 있다. 

본원에서 발견되는 상기 텍스트 및 일례들은 이러한 절차를 기재할 뿐만 아니라, 하기 간행물(및 그 안에서 인 

용되는 참고문헌)에도 나와 있다: ([Sieber, et al., Nature Biotechnology, 19:456-460 (2001)]; [Ling et 

al., approaches to DNA mutagenesis: an overview, Anal Biochem 254(2): 157-178 (1997)]; [Dale et al., 

Oligonucleotide-directed random mutagenesis using the phosphorothioate method, Methods Mol Biol 

57:369-374 (1996)]; [I. A. Lorimer, I. Pastan, Nucleic Acids Res 23, 3067-8 (1995)]; [W. P. C. 

Stemmer, Nature 370, 389-91 (1994)]; [Arnold, Protein engineering for unusual environments, Current 

Opinion in Biotechnology 4:450-455 (1993)]; [Bass et al., Mutant Trp repressors with new DNA-binding 

specificities, Science 242:240-245 (1988)]; [Fritz et al., Oligonucleotide-directed construction of 

mutations: a gapped duplex DNA procedure without enzymatic reactions in vitro, Nucl Acids Res 16: 

6987-6999 (1988)]; [Kramer et al., Improved enzymatic in vitro reactions in the gapped duplex DNA 

approach to oligonucleotide-directed construction of mutations, Nucl Acids Res 16:7207 (1988)]; 

[Sakamar and Khorana, Total synthesis and expression of a gene for the a-subunit of bovine rod outer 

segment guanine nucleotide-binding protein (transducin), Nucl Acids Res 14: 6361-6372 (1988)]; [Sayers 

et al., Y-T Exonucleases in phosphorothioate-based oligonucleotide-directed mutagenesis, Nucl Acids 

Res 16:791-802 (1988)]; [Sayers et al., Strand specific cleavage of phosphorothioate-containing DNA by 

reaction with restriction endonucleases in the presence ofethidium bromide, (1988) Nucl Acids Res 

16:803-814]; [Carter, Improved oligonucleotide-directed mutagenesis using M13 vectors, Methods in 

Enzymol 154: 382-403 (1987)]; [Kramer & Fritz Oligonucleotide-directed construction of mutations via 

gapped duplex DNA, Methods in Enzymol 154:350-367 (1987)]; [Kunkel, The efficiency of oligonucleotide 

directed mutagenesis, in Nucleic Acids & Molecular Biology (Eckstein, F. and Lilley, D.M.J, eds., 

Springer Verlag, Berlin)) (1987)]; [Kunkel et al., Rapid and efficient site-specific mutagenesis 

without phenotypic selection, Methods in Enzymol 154, 367-382 (1987)]; [Zoller & Smith, 

Oligonucleotide-directed mutagenesis: a simple method using two oligonucleotide primers and a single- 

stranded DNA template, Methods in Enzymol 154:329-350 (1987)]; [Carter, Site-directed mutagenesis, 

Biochem J 237:1-7 (1986)]; [Eghtedarzadeh & Henikoff, Use of oligonucleotides to generate large 

deletions, Nucl Acids Res 14:5115 (1986)]; [Mandecki, Oligonucleotide-directed double-strand Break 

repair in plasmids of Escherichia coli: a method for site-specific mutagenesis, Proc Natl Acad Sci 

USA, 83:7177-7181 (1986)]; [Nakamaye & Eckstein, Inhibition of restriction endonuclease Nci I cleavage 

by phosphorothioate groups and its application to oligonucleotide-directed mutagenesis, Nucl Acids Res 

14:9679-9698 (1986)]; [Wells et al, Importance of hydrogen-bond formation in stabilizing the 

transition state of subtilisin, Phil Trans R Soc Lond A 317:415-423 (1986)]; [Botstein & Shortle, 

Strategies and applications of in vitro mutagenesis, Science 229:1193-1201(1985)]; [Carter et al., 

Improved oligonucleotide site-directed mutagenesis using M13 vectors, Nucl Acids Res 13: 4431-4443 

(1985)]; [Grundstrom et al., Oligonucleotide-directed mutagenesis by microscale 'shot-gun' gene 

synthesis, Nucl Acids Res 13:3305-3316 (1985)]; [Kunkel, Rapid and efficient site-specific mutagenesis 

without phenotypic selection, Proc Natl Acad Sci USA 82:488-492 (1985)]; [Smith, In vitro mutagenesis, 

Ann Rev Genet 19:423-462(1985)]; [Taylor et al., The use of phosphorothioate-modified DNA in 

restriction enzyme reactions to prepare nicked DNA, Nucl Acids Res 13: 8749-8764 (1985)]; [Taylor et 

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al., The rapid generation of oligonucleotide-directed mutations at high frequency using 

phosphorothioate-modified DNA, Nucl Acids Res 13:8765-8787 (1985)]; [Wells et al., Cassette 

mutagenesis: an efficient method for generation of multiple mutations at defined sites, Gene 34:315- 

323 (1985)]; [Kramer et al., The gapped duplex DNA approach to oligonucleotide-directed mutation 

construction, Nucl Acids Res 12: 9441-9456 (1984)]; [Kramer et al., Point Mismatch Repair, Cell 

38:879-887 (1984)]; [Nambiar et al., Total synthesis and cloning of a gene coding for the ribonuclease 

S protein, Science 223:1299-1301 (1984)]; [Zoller & Smith, Oligonucleotide-directed mutagenesis of DNA 

fragments cloned into M13 vectors, Methods in Enzymol 100:468-500 (1983)]; 및 [Zoller & Smith, 

Oligonucleotide-directed mutagenesis using M13-derived vectors: an efficient and general procedure for 

the production of point mutations in any DNA fragment, Nucl Acids Res 10:6487-6500 (1982)]). 상기 방법 

들 다수에 관한 상세한 설명은 [Methods in Enzymol Volume 154]에서 찾아볼 수 있는데, 상기 문헌은 또한 상기 

방법들 중 다수의 방법에 대한 추가적인 상세 내용을, 다양한 돌연변이유발, 유전자 단리, 발현, 및 기타 방법 

을 이용한 타결 문제점에 대한 유용한 조절을 또한 기재하고 있는 [Methods in Enzymol Volume 154]에서 찾아볼 

수 있다. 

예컨대, 본 발명의 HA 및/또는 NA 분자의 라이브러리를 돌연변이화하거나, 상기를 변경시키는 것과 같은 본 발 

명의 돌연변이유발에 사용하기 위한 올리고뉴클레오티드는 전형적으로 예컨대, [Needham-VanDevanter et al., 

Nucleic Acids Res. 12:6159-6168 (1984)]에 기재된 바와 같은 자동화 합성장치를 이용하여 [Beaucage and 

Caruthers, Tetrahedron Letts. 22(20):1859-1862 (1981)]에 기재된 고체상 포스포르아미다이트 트리에스테르 

방법에 따라 화학적으로 합성된다. 

또한, 본질적으로 임의의 핵산을 다양한 상업적 공급원, 예를 들어, 더 미들랜드 써티파이드 리에이전트 컴퍼니 

(The Midland Certified Reagent Company)(mcrc@oligos.com), 더 그레이트 어메리칸 진 컴퍼니(The Great 

American Gene Company)(www.genco.com), 익스프레스젠 인코포레이티드(ExpressGen 

Inc.)(www.expressgen.com), 오페론 테크놀로지스 인코포레이티드(Operon Technologies Inc.)(미국 캘리포니아 

주 알라메다 소재) 및 기타 다수의 회사들 중 임의의 회사로부터 맞춤 제작하거나 표준 주문할 수 있다. 유사하 

게, 펩티드 및 항체는 다양한 공급원, 예를 들어, 펩티도제닌(PeptidoGenic)(pkim@ccnet.com에서 이용가능), 

HTI 바이오-프로덕트 인코포레이티드(HTI Bio-Product, Inc.)(www.htibio.com), BMA 바이오메티칼스 리미티드 

(BMA Biomedicals Ltd.)(영국 소재), 바이오. 신테시스 인코포레이티드(Bio. Synthesis Inc.), 및 기타 다수의 

회사들 중 임의의 회사로부터 맞춤 주문할 수 있다. 

본 발명은 또한 본 발명의 HA 및/또는 NA 분자 또는 기타 폴리펩티드 및/또는 핵산, 예로서, 서열 번호 1-45를 

포함하는 숙주 세포 및 유기체에 관한 것이다. 숙주 세포는 예를 들어, 클로닝 벡터 또는 발현 벡터일 수 있는 

본 발명의 벡터를 사용하여 유전공학처리(예로서, 형질전환, 형질도입 또는 형질감염)된다. 벡터는 예를 들어, 

플라스미드, 세균, 바이러스, 나형 폴리뉴클레오티드 또는 접합된 폴리뉴클레오티드의 형태일 수 있다. 전기천 

공법[From et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 5824 (1985)], 바이러스 벡터에 의한 감염, 작은 비드 또 

는 입자의 매트릭스내 또는 표면 상에서 핵산을 사용하여 작은 입자에 의한 고속 탄동 침투[Klein et al., 

Nature 327, 70-73 (1987)] 등을 비롯한 표준 방법에 의해 벡터를 세포 및/또는 미생물에 도입시킨다. 

(Berger, Sambrook, 및 Ausubel)은 각종의 적절한 형질전환 방법을 제공한다. 상기를 참조한다. 

표적 핵산을 세포에 도입시키는 수개의 공지된 방법이 이용가능하며, 이들 중 임의의 방법이 본 발명에 사용될 

수 있다. 이들은 수혜 세포와 DNA를 함유하는 세균 원형질체의 융합, 전기천공법, 추진체 포격(projectile 

bombardment), 및 바이러스 벡터를 사용한 감염 등을 포함한다. 세균 세포를 본 발명의 DNA 작제물을 함유하는 

다수의 플라스미드를 증폭시키는데 사용할 수 있다. 세균은 로그 상태(log phase)로 성장하고, 세균내 플라스미 

드는 당업계에 공지된 다양한 방법 (예컨대, [Sambrook]을 참조할 수 있다)에 의해 단리될 수 있다. 또한, 세균 

으로부터 플라스미드를 정제하기 위한 다수의 키트가 상업적으로 구입가능하다. (예컨대, 양자 모두 파마시아 

바이오테크(Pharmacia Biotech)로부터 각기 입수되는 이지프렙(EasyPrep), 플렉시프렙(FlexiPrep); 스트라 

타진(Stratagene)으로부터 입수되는 스트라타클린(StrataClean); 및 퀴아겐(Qiagen)으로부터 입수되는 퀴아프 

렙(QIAprep) 참조). 이어서, 단리되고 정제된 플라스미드를 추가 조작하여, 세포 형질 감염에 사용되거나 관 

련된 벡터에 혼입시켜 유기체를 감염시키는 다른 플라스미드를 제조한다. 전형적인 벡터는 전사 및 번역 

종결자, 전사 및 번역 개시 서열, 및 특정 표적 핵산의 발현의 조절에 유용한 프로모터를 함유한다. 벡터는 임 

의적으로 적어도 하나의 독립적인 종결자 서열, 진핵생물 또는 원핵생물 또는 양자 모두 중에서 카세트의 복제 

를 허용하는 서열(셔틀 벡터를 포함), 및 원핵생물 및 진핵생물 시스템 양자 모두에 대한 선별 마커를 함유하는 

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일반 발현 카세트를 포함한다. 벡터는 원핵생물, 진핵생물 또는 양자 모두에서 복제 및/또는 통합에 적합하다. 

[Giliman & Smith, Gene 8:81 (1979)]; [Roberts, et al., Nature, 328:731 (1987)]; [Schneider, B., et 

al., Protein Expr. Purif. 6(1)10:14 (1995)]; [Ausubel, Sambrook, Berger(모두 상기 문헌)]을 참조할 수 있 

다. 클로닝에 유용한 세균 및 박테리오파지의 카탈로그는 예를 들어, ATCC에 의해 예를 들어, ATCC에 의해 공개 

된 [The ATCC Catalogue of Bacteria and Bacteriophage (1992) Gherna et al. (eds)]에 제공되어 있다. 

또한, 분자 생물학 및 기초적인 이론적 고려사항의 서열 분석, 클로닝 및 다른 측면에 대한 추가적인 기본 절차 

는 [Watson et al. (1992) Recombinant DNA Second Edition Scientific American Books, NY]에 나와 있다. 상 

기를 참조한다. 본원 서열과 함께 유용한 추가의 벡터는 백신용 인플루엔자 바이러스 생산에 관한 상기의 섹션 

과 그 안에 인용되어 있는 참고 문헌에 설명되어 있다. 

폴리펩티드 제조 및 회수 

적합한 숙주 세포주 또는 균주의 형질도입 및 적절한 세포 밀도로의 숙주 세포 성장 이후, 적절한 수단(예로서, 

온도 변이 또는 화학적 유도)에 의해 선택된 프로모터를 유도시키고, 세포를 추가 기간 동안 배양한다. 몇몇 실 

시태양에서, 이어서 분비된 폴리펩티드 생성물, 예로서, 분비된 융합 단백질 형태의 HA 및/또는 NA 폴리펩티드 

등을 배양 배지로부터 회수한다. 다른 실시태양에서, 본 발명의 HA 및/또는 NA 폴리펩티드를 함유하는 바이러스 

입자를 세포로부터 제조한다. 별법으로, 세포를 원심분리에 의해 수거하고, 물리적 또는 화학적 수단에 의해 파 

괴시키고, 생성된 조 추출물은 추가로 정제하기 위해 보유할 수 있다. 단백질 발현에 사용되는 진핵생물 세포 

또는 미생물 세포는 동결-해동 순환, 초음파 처리, 기계적 파괴, 또는 세포 용해제 사용, 또는 당업자에게 잘 

알려져 있는 기타 다른 방법을 비롯한 임의의 종래 방법에 의해 파괴시킬 수 있다. 추가로, 본 발명의 HA 및/또 

는 NA 폴리펩티드 생성물을 발현하는 세포는 세포로부터 폴리펩티드를 분리시키지 않고 사용될 수 있다. 그러한 

상황하에서 본 발명의 폴리펩티드는 임의로 세포 표면상에서 발현되고, 이로써(예로서, 세포 표면상에서 항체에 

결합하는 HA 및/또는 NA 분자(또는 그이 단편, 예로서, 융합 단백질 등을 포함하는 것)를 가짐으로써) 

검사된다. 그러한 세포 또한 본 발명의 특징이 된다. 

황산암모늄 또는 에탄올 침전, 산 추출, 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 포스포셀룰로스 크로마토그 

래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피(예로서, 당업자에게 알려져 있는 태깅 시스템 

중 임의의 것 사용), 수산화인회석 크로마토그래피, 및 렉틴 크로마토그래피를 비롯한, 당업계에 잘 알려져 있 

는 다수의 방법들 중 임의의 것에 의해 재조합 세포 배양물로부터 발현된 폴리펩티드를 회수하고 정제할 수 있 

다. 단백질 리폴딩 단계는 성숙한 단백질의 입체형상 완성시 원하는 바에 따라 사용될 수 있다. 또한, 고성능 

액체 크로마토그래피(HPLC: high performance liquid chromatography)가 최종 정제 단계에서 사용될 수 있다. 

본원에서 언급된 참고 문헌이외에도 예로서, ([Sandana (1997) Bioseparation of Proteins, Academic Press, 

Inc.]; 및 [Bollag et al. (1996) Protein Methods. 2 nd 

Edition Wiley-Liss, NY]; [Walker (1996) The 

Protein Protocols Handbook Humana Press, NJ, Harris] 및 [Angal (1990) Protein Purification 

Applications: A Practical Approach IRL Press at 0xford, 0xford, England]; [Harris and Angal Protein 

Purification Methods: A Practical Approach IRL Press at 0xford, 0xford, England]; [Scopes (1993) 

Protein Purification: Principles and Practice 3 rd 

Edition Springer Verlag, NY]; [Janson and Ryden 

(1998) Protein Purification: Principles, High Resolution Methods and Applications, Second Edition 

Wiley-VCH, NY]; 및 [Walker (1998) Protein Protocols on CD-ROM Humana Press, NJ])에 기재되어 있는 것을 

비롯한, 다양한 정제 방법이 당업계에 잘 알려져 있다. 

본 발명의 발현된 폴리펩티드가 바이러스에서 생산될 때, 바이러스는 전형적으로 감염된(형질감염된) 세포가 성 

장한 배양 배지로부터 회수된다. 전형적으로, 인플루엔자 바이러스를 농축시키기 이전에 조배지를 정화시킨다. 

통상의 방법으로는 한외여과, 황산바륨 상에서의 흡착 및 용리, 및 원심분리를 포함한다. 예를 들어, 먼저 예로 

서, 세포 파편 및 다른 큰 입상 물질을 제거하기에 충분한 시간, 예로서, 10 내지 30분 사이 동안 1000- 

2000xg에서 원심분리하여 감염된 배양물로부터 조배지를 정화시킬 수 있다. 임의로, 이어서 예로서, 대략 3-5시 

간 동안 15,000xg에서 정화된 배지 상등액을 원심분리하여 인플루엔자 바이러스를 펠릿화시킨다. 적절한 완충액 

, 예를 들면, STE(0.01 M 트리스-HCl; 0.15 M NaCl; 0.0001 M EDTA) 또는 포스페이트 완충처리된 염(PBS: 

phosphate buffered saline)(pH 7.4)중 바이러스 펠릿을 재현탁시킨 후, 수크로스(60%-12%) 또는 주석산칼륨 

(50%-10%) 상에서 밀도 구배 원심분리에 의해 바이러스를 농축시킨다. 연속 구배 또는 단계식 구배든, 예로서, 

12% 내지 60% 사이에서 12%씩 4단계로 이루어진 수크로스 구배가 적합할 수 있다. 회수를 위해 바이러스를 가시 

대역으로 농축시키기에 충분한 시간 동안, 그리고 그러한 속도로 구배를 원심분리한다. 별법으로, 및 대부분의 

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대규모의 상업적 적용에 있어서, 연속 방식으로 작동하는 대역-원심회전자를 사용하여 밀도 구배로부터 바이러 

스를 현탁 분리한다. 조직 배양물로부터 인플루엔자 바이러스를 제조하는 것까지 당업자를 가이드하는데 충분한 

추가의 설명은 ([Furminger. Vaccine Production, in Nicholson et al. (eds.) Textbook of Influenza pp. 

324-332]; [Merten et al. (1996) Production of influenza virus in cell cultures for vaccine 

preparation, in Cohen & Shafferman (eds.) Novel Strategies in Design and Production of Vaccines pp. 

141-151], 및 미국 특허 번호 제5,690,937호)에 제공되어 있다. 원하는 경우, 안정화제로서 수크로스-포스페이 

트-글루타메이트(SPG: sucrose-phosphate-glutamate)의 존재하에 회수한 바이러스를 -8O℃에서 저장할 수 

있다. 

별법으로, 예로서, 본원에서 제공된 서열과 같은 본 발명의 아미노산 서열 또는 하위서열, 예를 들면, 서열 번 

호 11-20 또는 27-32 또는 39-44를 포함하는 폴리펩티드, 또는, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열, 예로서, 서 

열 번호 1-10 또는 21-26 또는 33-38 또는 45에 의해 코딩되는 폴리펩티드를 생산하기 위해 무세포 전사/번역 

시스템이 사용될 수 있다. 다수의 적합한 시험관내 전사 및 번역 시스템이 상업적으로 이용가능하다. 시험관내 

전사 및 번역 프로토콜에 대한 일반 가이드는 [Tymms (1995) In vitro Transcription and Translation 

Protocols: Methods in Molecular Biology Volume 37, Garland Publishing, NY]에 나와 있다. 

또한, 폴리펩티드, 또는 그의 하위서열, 예로서, 항원성 펩티드를 포함하는 하위서열은 수동으로, 또는 자동 시 

스템을 사용함으로써, 고체상 기법([Stewart et al. (1969) Solid-Phase Peptide Synthesis, WH Freeman Co, 

San Francisco]; [Merrifield J (1963) J Am Chem Soc 85:2149-2154])을 사용하는 직접적인 펩티드 합성에 의 

해 제조할 수 있다. 예시적인 자동 시스템으로는 어플라이드 바이오시스템스 431A 펩티드 합성기(Applied 

Biosystems 431A Peptide Synthesizer)(캘리포니아주 포스터 시티 소재의 퍼킨 엘머(Perkin Elmer))를 포함한 

다. 원하는 경우, 하위서열은 별도로 화학적으로 합성될 수 있거나, 화학적 방법을 사용하여 조합함으로써 전길 

이의 폴리펩티드로 제공할 수 있다. 

변형된 아미노산 

본 발명의 발현된 폴리펩티드는 하나 이상의 변형된 아미노산을 함유할 수 있다. 변형된 아미노산이 존재하는 

것은 예를 들면, (a) 폴리펩티드 혈청 반감기 증가, (b) 폴리펩티드 항원성 감소/증가, (c) 폴리펩티드 저장 안 

정성 증가라는 점 등에서 이로울 수 있다. 아미노산(들)은 예를 들어, 재조합 생산시 번역과 동시에 또는 번역 

후에 변형되거나(예로서, 포유동물 세포에서 발현하는 동안 N-X-S/T 모티프에서의 N-연결 당화), 합성 수단(예 

로서, 페길화)에 의해 변형된다. 

변형된 아미노산의 비제한적 예로는 당화된 아미노산, 황화된 아미노산, 프레닐화된(예로서, 파르네실화된, 제 

라닐제라닐화된) 아미노산, 아세틸화된 아미노산, 아실화된 아미노산, 페길화된(PEG-ylated) 아미노산, 비오틴 

화된 아미노산, 카르복실화된 아미노산, 인산화된 아미노산 등 뿐만 아니라, 예로서, 지질 부분 또는 기타 유기 

유도체화제와의 접합체 의해 변형된 아미노산을 포함한다. 아미노산 변형에 대하여 당업자를 가이드하기에 적절 

한 참고문헌은 문헌을 통해 충분히 제공받을 수 있다. 실시예 프로토콜은 [Walker (1998) Protein Protocols 

on CD-ROM Human Press, Towata, NJ]에 나와 있다. 

융합 단백질 

본 발명은 또한 본 발명의 서열(예로서, 서열 번호 11-20, 27-32, 및 39-44로 예시되는 HA 및/또는 NA 폴리펩티 

드를 코딩하는 것) 또는 그의 단편과, 예로서, 면역글로불린(또는 그의 일부), 예로서, GFP(녹색 형광 단백질: 

green fluorescent protein)를 코딩하는 서열, 기타 유사 마커 등과의 융합물을 포함하는 융합 단백질을 제공한 

다. 상기 융합 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열이 본 발명의 또다른 측면이다. 본 발명의 융합 단백질은 

임의로, 예를 들면, 본 발명의 비융합 단백질과 유사한 적용(예로서, 본원에 기술된 바와 같은 치료학적, 예방 

학적, 진단학적, 실험상의 적용 등을 포함)을 위해 사용된다. 면역글로불린 서열 및 마커 서열과의 융합 

이외에, 본 발명의 단백질은 또한 임의로 예로서, 융합 단백질을 선별할 수 있도록 하고/거나 특이적이 세포 유 

형, 영역 등에 융합 단백질을 표적화할 수 있도록 하는 서열과 융합된다. 

항체 

본 발명의 폴리펩티드는 본원에서 제공된 폴리펩티드 및/또는 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리 

펩티드, 예로서, 본원에서 제시된 것, 및 그의 보존적 변이체에 특이적인 항체를 제조하는데 사용될 수 있다. 

상기 언급된 폴리펩티드에 대해 특이적인 항체는 예로서, 표적 폴리펩티드의 활성, 분포, 및 발현과 관련하여 

진단학적, 및 치료학적 목적으로 유용하다. 

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공개특허 10-2009-0053794

 

 

 

 

 

 

 

 

본 발명의 폴리펩티드에 대해 특이적인 항체는 당업계에 잘 알려져 있는 방법에 의해 생성될 수 있다. 그러한 

항체로는 폴리클로날, 모노클로날, 키메라, 인간화된, 단일 쇄, Fab 단편 및 Fab 발현 라이브러리에 의해 생산 

된 단편을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 

폴리펩티드는 항체 생산을 위한 생물학적 활성을 필요로 하지 않는다(예로서, 전길이의 기능성 헤마글루티닌 또 

는 뉴라미니다제는 필요없다). 그러나, 폴리펩티드 또는 올리고펩티드는 항원성이어야 한다. 특이적인 항체를 

유도하는데 사용되는 펩티드는 적어도 약 4개의 아미노산, 및 종종 적어도 5개 또는 10개의 아미노산으로 이루 

어진 아미노산 서열을 갖는다. 짧은 폴리펩티드 스트레치는 또다른 단백질, 예를 들면, 키홀 림펫 헤모시아닌, 

및 키메라 분자에 대해 생산된 항체와 함께 융합될 수 있다. 

폴리클로날 및 모노클로날 항체를 생산하는 여러 방법들이 당업자에게 알려져 있으며, 이는 본 발명의 폴리펩티 

드, 및/또는 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드 등에 특이적인 항체를 생산하도록 적 

합화될 수 있다. 예로서, ([Coligan (1991) Current Protocols in Immunology Wiley/Greene, NY]; [Paul 

(ed.) (1998) Fundamental Immunology, Fourth Edition, Lippincott-Raven, Lippincott Williams & Wilkins]; 

[Harlow and Lane (1989) Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Press, NY]; [Stites et al. 

(eds.) Basic and Clinical Immunology (4th ed.) Lange Medical Publications, Los Altos, CA] 및 상기 문헌 

에서 인용된 참고문헌; [Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2d ed.) Academic 

Press, New York, NY]; 및 [Kohler and Milstein (1975) Nature 256:495-497])를 참조한다. 항제를 제조하는 

다른 적합한 기법은 파지 또는 유사 벡터에서 재조합 항체 라이브러리를 선별하는 것을 포함한다. ([Huse et 

al. (1989) Science 246:1275-1281]; 및 [Ward, et al. (1989) Nature 341:544-546])를 참조한다. 특이적인 모 

노클로날 및 폴리클로날 항체 및 항혈청은 보통 예로서, 적어도 약 0.1 μM, 적어도 약 0.01 μM 이상, 및 전형 

적으로 및 적어도 약 0.001 μM 이상의 KD로 결합할 것이다. 

특정의 치료학적 적용에 있어서, 인간화된 항체가 바람직할 수 있다. 키메라 (인간화된) 항체를 제조하는 것에 

관한 상세한 방법은 미국 특허 5,482,856에서 찾아볼 수 있다. 인간화 및 기타 항체 생산 및 공학처리 기법에 

관한 추가 설명은 ([Borrebaeck (ed.) (1995) Antibody Engineering, 2 nd 

Edition Freeman and Company, NY 

(Borrebaeck)]; [McCafferty et al. (1996) Antibody Engineering, Practical Approach IRL at 0xford Press, 

0xford, England (McCafferty)], 및 [Paul (1995) Antibody Engineering Protocols Humana Press, Towata, NJ 

(Paul)])에서 찾아볼 수 있다. 구체적인 방법에 관한 추가 설명은 예로서, [Ostberg et al. (1983), Hybridoma 

2: 361-367], 미국 특허 번호 제4,634,664호(Ostberg) 및 미국 특허 번호 제4,634,666호(Engelman et al.)에서 

찾아볼 수 있다. 

면역반응성에 의한 폴리펩티드 정의 

본 발명의 폴리펩티드는 다양한 새로운 폴리펩티드 서열(예로서, HA 및 NA 분자 포함)을 제공하기 때문에 폴리 

펩티드는 또한 예로서, 면역학적 분석법에 의해 인지될 수 있는 새로운 구조적 특징을 제공한다. 본 발명의 폴 

리펩티드 뿐만 아니라, 항혈청이 결합하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항혈청을 생성하는 것이 본 발명 

의 특징이 된다. 

예를 들어, 본 발명은 서열 본원에서 제공된 서열(예로서, 서열 번호 11-20, 27-32, 및 39-44) 등의 하나 이상 

으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 면역원에 대해 생성된 항체 또는 항혈청에 특이적으로 결합하거나, 

특이적으로 면역반응성인 폴리펩티드(예로서, HA 및 NA 분자)를 제공한다. 다른 상동체와의 교차 반응성을 제거 

하기 위해 파일링시 공개 데이터베이스에서 찾아볼 수 있는 HA 및/또는 NA 분자, 예로서, "대조군" 폴리펩티드 

(들)로 항체 또는 항혈청을 공제한다. 기타 대조군 서열이 핵산 서열에 상응하는 경우, 상기 핵산에 의해 코딩 

되는 폴리펩티드가 생산되고 항체/항혈청 공제 목적을 위해 사용된다. 

하나의 전형적인 형식으로 면역분석법은 본원의 서열(예로서, 서열 번호 11-20, 27-32, 및 39-44) 등 또는 그의 

실질적인 하위서열(즉, 제공된 전길이의 서열의 적어도 약 30%)에 상응하는 서열을 하나 이상 포함하는 하나 이 

상의 폴리펩티드에 대해 유발된 폴리클로날 항혈청을 사용한다. 본 서열로부터 유래된 잠재적 폴리펩티드 면역 

원의 세트는 이하 "면역원성 폴리펩티드"로 집합적으로 지칭된다. 생성된 항혈청은 임의로 대조군 헤마글루티닌 

및/또는 뉴라미니다제 동족체에 대한 낮은 교차 반응성을 가지도록 선택되고, 임의의 그러한 교차 반응성은 면 

역분석법에 폴리클로날 항혈청을 사용하기 이전에, 대조군 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니다제 동족체들 중 하 

나 이상을 사용하여, 예컨대, 면역흡착에 의해 제거된다. 

면역분석법에 사용하기 위한 항혈청을 생산하기 위해, 본원에 기술된 바와 같이 면역원성 폴리펩티드들 중 하나 

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이상을 생산하고 정제한다. 예를 들어, 재조합 단백질은 재조합 세포에서 생산된다. (마우스의 실제 유전적 동 

일성으로 인해 결과가 더욱 재현가능하기 때문에 본 분석법에 사용되는) 마우스의 교배 균주를, 표준 애주번트, 

예컨대, 프로인트 애주번트, 및 표준 마우스 면역화 프로토콜과 조합하여 면역원성 단백질(들)로 면역화한다(예 

로서, 특이적 면역반응성을 측정하기 위해 사용될 수 있는 항체 생산, 면역분석법 포맷 및 조건에 관한 표준 기 

재에 대해, [Harlow and Lane (1988) Antibodies, Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New 

York]을 참조한다). 항체에 대한 추가의 참고 및 논의가 또한 본원에 나와 있고, 이는 면역반응성에 의해 폴리 

펩티드를 한정하기 위해 여기에 적용될 수 있다. 별법으로, 본원에 개시된 서열로부터 유래된 하나 이상의 합성 

또는 재조합 폴리펩티드는 운반체 단백질에 접합되어, 면역원으로 사용된다. 

폴리클로날 혈청을 수집하여, 면역분석법, 예를 들어, 고체 지지체 상에 고정화된 면역원성 단백질 중 하나 이 

상을 이용한 고체상 면역분석에 대해 적정한다. 10 6 

이상의 역가를 갖는 폴리클로날 항혈청을 선택하고, 풀링하 

여, 대조군 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니다제 폴리펩티드(들)를 차감함으로써, 차감되고 풀링되며 적정된 폴 

리클로날 항혈청을 생산한다. 

차감되고 풀링되며 적정된 폴리클로날 항혈청을 비교 면역분석법에서 대조군 동족체에 대한 교차 반응성에 대해 

시험한다. 이러한 비교 분석법에서, 대조군 동족체에 대한 결합에 비해, 면역원성 폴리펩티드에 대한 적정된 폴 

리클로날 항혈청의 결합에 대해 적어도 약 5-10배 더 높은 신호 대 잡음비를 초래하는, 차감되고 적정된 폴리클 

로날 항혈청에 대한 차별적 결합 조건을 결정한다. 즉, 결합 반응의 엄격성은 알부민 또는 탈지분유와 같은 비 

특이적 경쟁자의 첨가, 및/또는 염 조건, 온도 등의 조정에 의해 조정될 수 있다. 이러한 결합 조건은, 시험 폴 

리펩티드(폴리펩티드는 면역원성 폴리펩티드 및/또는 대조군 폴리펩티드와 비교됨)가, 풀링되고 차감된 폴리클 

로날 항혈청에 의해 특이적으로 결합되는지의 여부를 결정하기 위한 후속 분석법에 사용된다. 특히, 차별적 결 

합 조건하에서 대조군 수용체 동족체보다 적어도 2-5x 더 높은 신호 대 잡음비를 나타내고, 면역원성 폴리펩티 

드(들)에 비해 적어도 약 ½의 신호 대 잡음비를 나타내는 시험 폴리펩티드는 공지된 수용체 등과 비교하여 면 

역원성 폴리펩티드와 실질적으로 구조상에 있어 유사성을 공유하며, 이로써 이는 본 발명의 폴리펩티드가 된다. 

또다른 일례로, 경쟁적 결합 포맷으로 면역분석법을 사용하여 시험 폴리펩티드를 검출한다. 예를 들어, 언급한 

바와 같이, 대조군 폴리펩티드를 이용한 면역흡착에 의해, 교차 반응 항체를 풀링된 항혈청 혼합물로부터 제거 

한다. 이어서, 면역원성 폴리펩티드(들)를, 차감되고 풀링된 항혈청에 노출된 고체 지지체에 고정화시킨다. 시 

험 단백질을 차감되고 풀링된 항혈청에 결합하기 위해 경쟁하도록 분석에 가한다. 고정화된 단백질(들) 대비, 

차감되고 풀링된 항혈청에 대해 경쟁하는 시험 단백질(들)의 능력을, 결합을 위해 경쟁하도록 분석에 첨가된 면 

역원성 폴리펩티드(들)(면역원성 폴리펩티드는 풀링된 항혈청에 결합하기 위해 고정화된 면역원성 폴리펩티드와 

효과적으로 경쟁함)의 능력과 비교한다. 표준 계산법을 이용하여, 시험 단백질에 대한 교차 반응도(%)를 계산한 

다. 

병행 분석법에서, 풀링되고 차감된 항혈청에 결합하기 위해 경쟁하는 대조군 단백질의 능력을, 임의적으로 항혈 

청에 결합하기 위해 경쟁하는 면역원성 폴리펩티드(들)의 능력과 비교하여 결정한다. 이에 다시, 표준 계산법을 

이용하여, 대조군 폴리펩티드(들)에 대한 교차 반응도(%)를 계산한다. 교차 반응도(%)가 대조군 폴리펩티드에 

비해 시험 폴리펩티드의 교차 반응도(%)의 적어도 5-10x인 경우, 및/또는 시험 폴리펩티드의 결합이 면역원성 

폴리펩티드의 결합 범위 내인 경우, 시험 폴리펩티드는 풀링되고 차감된 항혈청에 특이적으로 결합하는 것으로 

일컬어진다. 

일반적으로, 면역흡착되고 풀링된 항혈청을 본원에 기재된 경쟁적 결합 면역분석에 사용하여, 임의의 시험 폴리 

펩티드를 면역원성 및/또는 대조군 폴리펩티드(들)와 비교한다. 이러한 비교를 행하기 위해, 면역원성, 시험 폴 

리펩티드 및 대조군 폴리펩티드는 광범위한 농도 범위에서 각기 분석되고, 예컨대, 고정된된 대조군, 시험 또는 

면역원성 단백질에 대한 차감된 항혈청의 결합을 50% 억제시키는데 필요한 각 폴리펩티드의 양은 표준 기법을 

이용하여 결정된다. 경쟁 분석에서 결합을 위해 필요한 시험 폴리펩티드의 양이, 필요한 면역원성 폴리펩티드의 

양의 2배 미만인 경우, 시험 폴리펩티드는 면역원성 단백질에 대해 발생된 항체에 특이적으로 결합하는 것으로 

일컬어지는데, 단, 그 양은 대조군 폴리펩티드에서의 양의 약 5-10x로 높다. 

하나의 추가의 특이성 결정으로서, 풀링된 항혈청은, 면역흡착에 사용되는 면역원성 폴리펩티드(들)에 대한 생 

산된 면역원성 폴리펩티드 차감의 풀링된 항혈청의 결합이 검출가능하지 않거나 거의 검출가능하지 않을 

때까지, (대조군 폴리펩티드보다는) 면역원성 폴리펩티드(들)로 임의적으로 완전히 면역흡착된다. 이어서, 상기 

완전히 면역흡착된 항혈청을 시험 폴리펩티드와의 반응성에 대해 시험한다. 반응성이 관찰되지 않거나 거의 관 

찰되지 않을 경우(즉, 면역원성 폴리펩티드에 대한 완전히 면역흡착된 항혈청의 결합에 대해 관찰되는 신호 대 

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잡음비의 2x 이하인 경우), 시험 폴리펩티드는 면역원성 단백질에 의해 도출되는 항혈청에 의해 특이적으로 결 

합된다. 

핵산 및 폴리펩티드 서열 변이체 

본원에 기술되어 있는 바, 본 발명은 핵산 폴리뉴클레오티드 서열 및 폴리펩티드 아미노산 서열, 예로서, 헤마 

글루티닌 및 뉴라미니다제 서열, 및 예로서, 상기 서열을 포함하는 조성물 및 방법을 제공한다. 상기 서열의 예 

는 본원에 개시되어 있다(예로서, 서열 번호 1-45). 그러나, 당업자는 본 발명이 반드시 본원에 개시된 서열만 

으로 제한되는 것은 아니며, 본 발명은 또한 예로서, HA 및/또는 NA 분자를 코딩하는 것과 같이, 본원에 개시된 

기능을 갖는 다수의 관련 및 비관련 서열을 제공한다는 것을 이해할 것이다. 

당업자는 또한 개시된 서열의 변이체 다수가 본 발명에 포함된다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 기능적으로 

동일한 서열을 제공하는 개시된 서열의 보존적 변이는 본 발명에 포함된다. 적어도 하나의 개시된 서열에 하이 

브리드화하는, 핵산 폴리뉴클레오티드 서열의 변이체는 본 발명에 포함되는 것으로 간주된다. 예로서, 표준 서 

열 비교 기법에 의해 측정된 바, 본원에 개시된 서열의 독특한 하위서열 또한 본 발명에 포함된다. 

침묵 변이 

유전 코드의 축퇴에 기인하여 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 임의의 각종 핵산 서열 및/또는 본 발명의 바이 

러스가 임의로 생산되는데, 이중 일부는 본원의 HA 및 NA 핵산 및 폴리펩티드 서열과 낮은 수준의 서열 동일성 

을 가질 수 있다. 하기는 다수의 생물학 및 생화학 교재에서 찾아볼 수 있는, 유전 코드를 열거한 전형적인 코 

돈 표를 제공한다. 

표 1 

코돈표는 다수의 아미노산이 1개 초과의 코돈에 의해 코딩된다는 것을 보여준다. 예를 들어, 코돈 AGA,GG, CGA, 

CGC, CGG, 및 CGU 모두 아미노산 아르기닌을 코딩한다. 따라서, 코돈에 의해 아르기닌으로 명시되는 본 발명의 

핵산 중 모든 위치의 코돈은 코딩되는 폴리펩티드는 바꾸지 않으면서 상기 기술된 상응하는 코돈들 중 어느 것 

으로 변경될 수 있다. RNA 서열에서 U는 DNA 서열에서 T에 상응하는 것으로 이해된다 . 

상기 "침묵 변이"는 하기 논의되는 "보존적으로 변형된 변이" 중 한가지 종류에 속한다. 당업자는 핵산 중 각 

코돈(단, 통상 메티오닌에 대해 유일한 코돈인 ATG, 및 통상 트립토판에 대해 유일한 코돈인 TTG는 제외)은 표 

준 기법에 의해 기능적으로 동일한 폴리펩티드를 코딩하도록 변형될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 폴 

리펩티드를 코딩하는 핵산의 각각의 침묵 변이는 임의의 기술되 서열에 내재되어 있다. 그러므로, 본 발명은 가 

능한 코돈 선택에 기초한 조합을 선택함으로써 이루어질 수 있는 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 

각각의 모든 가능한 변이를 명백히 제공한다. 이러한 조합은 본 발명의 헤마글루티닌 또는 뉴라미니다제 폴리펩 

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티드를 코딩하는 핵산 서열에 적용되는 것과 같이 표준 트리플렛 유전 코드(예로서, 표 1에 기재되어 있는 것, 

또는 당업계에서 통상 이용되는 것)에 따라 이루어진다. 본원의 모든 핵산의 상기와 같은 모든 변이를 구체적으 

로 제공하며, 유전 코드와 함께 서열을 참작하여 기술된다. 당업자는 전체적으로 본원에 기술된 방법을 사용하 

여 이들 침묵 치환을 이룰 수 있다. 

보존적 변이 

유전 코드의 축퇴에 기인하여 "침묵 치환"(즉, 코딩된 폴리펩티드를 바꾸지 않는 핵산 서열내 치환)이 아미노산 

을 코딩하는 본 발명의 모든 핵산 서열의 내포된 특징이 된다. 유사하게, 아미노산 서열에 있어서 하나 또는 수 

개의 아미노산의 "보존적 아미노산 치환"은 성질이 고도로 유사한 다른 아미노산으로 치환된 것이며, 이는 또한 

개시된 작제물, 예를 들면, 본원의 것과 고도로 유사한 것으로서 용이하게 동정되어 진다. 각각의 개시된 서열 

의 상기와 같은 보존적 변이가 본 발명의 특징이 된다. 

특정 핵산 서열의 "보존적 변이"란 동일하거나 본질적으로 동일한 아미노산을 코딩하는 핵산을 지칭하거나, 핵 

산이 아미노산 서열을 코딩하지 않을 경우, 본질적으로 동일한 서열을 지칭하는 것이며, 하기 표 2를 참조한다. 

코딩 서열에 있어서 단일의 아미노산 또는 작은 비율의 아미노산 (전형적으로 5% 미만, 더욱 전형적으로 4%, 

3%, 2%, 또는 1% 미만)을 변경, 부가 또는 결실시키는 개개의 치환, 결실 또는 부가는 변경을 통해 아미노산을 

결실시키거나, 아미노산을 부가하거나, 아미노산을 화학적으로 유사한 아미노산으로 치환시키는 "보존적으로 변 

형된 변이"라는 것을 당업자는 이해할 것이다. 따라서, 본 발명의 열거된 폴리펩티드 서열의 "보존적 변이"는 

작은 비율의, 전형적으로 5% 미만, 더욱 전형적으로 4%, 3%, 2%, 또는 1% 미만의, 폴리펩티드 서열의 아미노산 

이 동일한 보존적 치환기를 갖는 보존적으로 선택된 아미노산으로 치환된 것을 포함한다. 마지막으로, 핵산 분 

자의 코딩된 활성을 변경시키지 않는 서열 첨가, 예를 들면, 비기능성 서열의 첨가가 기본 핵산의 보존적 변이 

이다. 

표 2 

보존적 치환군 

1 알라닌(A) 세린(S) 트레오닌(T) 

2 아스파르트산(D) 글루탐산(E) 

3 아스파라긴(N) 글루타민(Q) 

4 아르기닌(R) 리신(K) 

5 이소류신(I) 류신(L) 메티오닌(M) 발린(V) 

6 페닐알라닌(F) 티로신(Y) 트립토판(W) 

독특한 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드 하위서열 

하나의 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 HA 및 NA 분자의 서열, 예로서, 서열 번호 1-10, 21-26, 33-38, 및 

45로부터 선택되는 핵산 중 독특한 하위서열을 포함하는 핵산을 제공한다. 독특한 하위서열은 파일링시 진뱅크 

또는 기타 유사 공용 데이타베이스에서 발견되는 것과 같은 핵산에 상응하는 핵산과 비교할 때 독특한 것이다. 

예로서, 디폴트 매개 변수에 대한 BLAST 세트를 사용하여 정렬시킬 수 있다. 임의의 독특한 하위서열은 예를 들 

면, 본 발명의 핵산을 동정하기 위한 프로브로서 유용하다. 상기를 참조한다. 

유사하게, 본 발명은 본원에 개시된 HA 및 NA 분자의 서열, 예로서, 서열 번호 11-20, 27-32, 및 39-44로부터 

선택되는 폴리펩티드 중 독특한 하위서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 여기서, 독특한 하위서열은 파일 

링시 진뱅크 또는 기타 유사 공용 데이타베이스에서 발견되는 폴리뉴클레오티드 서열에 상응하는 아미노산과 같 

은 것에 상응하는 폴리펩티드와 비교할 때 독특한 것이다. 

본 발명은 또한 엄격한 조건하에서 본 발명의 HA 및 NA 분자의 서열로부터 선택되는 폴리펩티드 중 독특한 하위 

서열을 코딩하는 독특한 코딩 올리고뉴클레오티드에 하이브리드화하는 표적 핵산을 제공하는데, 여기서, 독특한 

하위서열은 대조군 폴리펩티드(예로서, 파일링시 진뱅크 또는 기타 유사 공용 데이타베이스에서 발견되는 것에 

상응하는 핵산과 같은 서열)중 임의의것에 상응하는 폴리펩티드와 비교하여 독특한 것이다. 독특한 서열은 상기 

언급한 바와 같이 결정된다. 

서열 비교, 동일성, 및 상동성 

2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열과 관련하여 사용될 때 "동일성(%)" 또는 "~%가 동일"이라는 용어는 최대 

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로 일치하도록 비교 및 정렬된 경우, 하기 기술하는 서열 비교 알고리즘(또는 당업자가 사용 가능한 기타 알고 

리즘)들 중 하나를 사용하여 측정하거나, 시각적 관찰에 의하여 측정하였을 때, 동일한 2개 이상의 서열 또는 

하위서열, 또는 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 특정 비율로 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 

지칭한다. 

2개의 핵산 또는 폴리펩티드(예로서, HA 또는 NA 분자를 코딩하는 DNAs, 또는 HA 또는 NA 분자의 아미노산 

서열)와 관련하여 "실질적으로 동일하다"라는 표현은 최대로 일치하도록 비교 및 정렬된 경우, 서열 비교 알고 

리즘을 사용하여 측정하거나, 시각적 관찰에 의하여 측정하였을 때, 적어도 약 90%, 바람직하게 91%, 가장 바람 

직하게 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 98.5%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 

99.8%, 99.9% 이상의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기 동일성을 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한 

다. 상기와 같이 "실질적으로 동일한" 서열은 전형적으로 실제 그 유래와는 상관없이 "상동성"인 것으로 간주된 

다. 바람직하게, "실질적인 동일성"은 길이가 적어도 약 200 잔기인, 적어도 약 250 잔기인, 적어도 약 300 잔 

기, 350 잔기, 400 잔기, 425 잔기, 450 잔기, 475 잔기, 480 잔기, 490 잔기, 495 잔기, 499 잔기, 500 잔기, 

502 잔기, 559 잔기, 565 잔기, 또는 566 잔기인 아미노산 서열 영역, 또는 비교되는 두 서열 전체 길이에 걸쳐 

존재한다. 

서열 비교 및 상동성 측정에 있어서, 전형적으로 하나의 서열은 시험 서열이 비교되는 참고 서열로서의 기능을 

한다. 서열 비교 알고리즘을 사용할 때, 시험 및 참고 서열은 컴퓨터에 입력되며, 하위서열 좌표는 필요할 경우 

지정되고, 서열 알고리즘 프로그램의 매개 변수는 지정된다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 참고 서열에 대한 

시험 서열(들)의 서열 동일성(%)을 프로그램 매개 변수에 입각하여 계산한다. 

비교를 위한 서열의 최적 정렬은 예를 들어, 국소 상동성 알고리즘[Smith & Waterman, Adv Appl Math 2:482 

(1981)], 상동성 정렬 알고리즘[Needleman & Wunsch, J Mol Biol 48:443 (1970)], 유사성 검색 방법[Pearson & 

Lipman, Proc Natl Acad Sci USA 85:2444 (1988)], 알고리즘, 예를 들면, GAP, BESTFIT, FASTA, 및 

TFASTA(Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI)의 

컴퓨터에 의한 실행, 또는 시각에 의한 관찰(예를 들어, 일반적으로 [Ausubel et al, 상기 분헌])에 의해 수행 

될 수 있다. 

서열 동일성(%)과 서열 유사성(%)을 측정하는데에 적합한 알고리즘의 일례로서는 BLAST 알고리즘이 있으며, 이 

알고리즘에 관하여는 [Altschul et al., J Mol Biol 215:403-410 (1990)]에 기재되어 있다. BLAST 분석법을 수 

행하기 위한 소프트웨어는 국립 생명 공학 정보 센터(National Center for Biotechnology 정 

보)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)을 통해 공개적으로 이용가능하다. 상기 BLAST 알고리즘에는 첫번째로 의문 

서열 중의 길이 W의 짧은 단어를 확인하여 높은 점수 서열 쌍(HSP: high scoring sequence pair)을 확인하는 

것이 포함되며, 이것은 데이터베이스 서열에서 동일한 길이의 단어를 갖도록 정렬되는 경우 일부 양성-값 역치 

점수 T를 매치 또는 만족시킨다. T는 이웃 단어 점수 역치로서 언급된다[Altschul et al., 상기 문헌]. 상기 초 

기 이웃 단어 적중은 이를 함유하는 더 긴 HSP를 찾기 위해 검색을 시작하기 위한 근원으로서 작용한다. 

이어서, 단어 적중은 누적 정렬 점수가 증가될 수 있는 한, 각 서열에 따라 양 방향으로 확장된다. 누적 점수는 

뉴클레오티드 서열에 대해, 매개변수 M(매치 잔기의 쌍에 대한 보상 점수; 항상 > 0) 및 N(미스매치 잔기에 대 

한 패널티 점수; 항상 < 0)을 사용하여 계산한다. 아미노산 서열에 대해, 점수 매트릭스는 누적 점수를 계산하 

기 위해 사용된다. 각 방향으로의 단어 적중의 확장은, 누적 정렬 점수가 최대 달성 값으로부터의 수량 X에 의 

해 떨어지고; 하나 이상의 음성-점수 잔기 정렬의 축적으로 인해 누적 점수가 0 또는 미만이 되거나; 어느 한쪽 

의 서열의 말단이 도달한 경우 중단된다. BLAST 알고리즘 파라미터 W, T, 및 X는 정렬의 민감성 및 속도를 측정 

한다. BLASTN 프로그램(뉴클레오티드 서열에 대해)은 디폴트로서 단어 길이(W) 11, 기대값(E) 10, 컷오프 100, 

M=5, N=-4 및 두 가닥의 비교를 사용한다. 아미노산 서열에 대해, BLASTP 프로그램은 디폴트로서 단어 길이(W) 

3, 및 기대값(E) 10 을 사용하고, BLOSUM62 점수 매트릭스([Henikoff & Henikoff (1989) Proc Natl Acad Sci 

USA 89:10915] 참조)를 사용한다. 

서열 동일성(%)을 계산하는 것 이외에도, BLAST 알고리즘은 또한 2개의 서열 사이의 유사성을 통계학적으로 분 

석하기도 한다(예를 들어, [Karlin & Altschul. Proc Natl Acad Sci USA 90:5873-5787 (1993)] 참조). BLAST 

알고리즘에 의해 제공되는 유사성에 관한 한가지 척도는, 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열이 우연히 매 

치될 확률에 대한 지표를 제공하는 최소 총 확률(P(N))이다. 예를 들어, 시험 핵산과 참고 핵산 비교시 최소 총 

확률이 약 0.1 미만, 더욱 바람직하게 약 0.01 미만 및 가장 바람직하게 약 0.001 미만이면, 이 핵산은 참고 서 

열과 유사한 것으로 간주된다. 

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유용한 서열 정렬 알고리즘의 또다른 예는 PILEUP 이다. PILEUP는 진행적, 쌍 방식(pairwise) 정렬을 사용하여 

관련 서열의 군으로부터 복합 서열 정렬을 만든다. 이것은 또한 정렬을 만들기 위해 사용되는 클러스터링 관계 

를 보여주는 트리(tree)를 플롯화할 수 있다. PILEUP는 [Feng & Doolittle (1987) J. Mol Evol. 35:351-360]의 

진행적 정렬 방법의 간소화를 사용한다. 사용되는 방법은 [Higgins & Sharp (1989) CABIOS5:51-153]에 의해 기 

재된 방법과 유사하다. 프로그램은 5,000개의 최대 길이로 300개까지의 서열을 정렬시킬 수 있다. 복합 정렬 절 

차는 2개의 가장 유사한 서열의 쌍 방식 정렬로 시작하여, 2개의 정렬된 서열의 클러스터를 생성한다. 이어서, 

상기 클러스터를 다음을 가장 관련된 서열 또는 정렬된 서열의 클러스터에 정렬시킬 수 있다. 서열의 2개의 클 

러스터를 2개의 개별 서열의 쌍 방식 정렬의 단순 확장에 의해 정렬시킨다. 최종 정렬은 일련의 진행적, 쌍 방 

식 정렬에 의해 달성된다. 프로그램을 사용하여 또한 클러스터링 관계를 보여주는 수지상도 또는 수형도를 플롯 

화할 수 있다. 프로그램은 서열 비교의 영역에 대등한 특정 서열 및 그의 아미노산 또는 뉴클레오티드를 지정함 

으로써 실행된다. 

복합 DNA 및 아미노산 서열 정렬에 적합한 알고리즘에 관한 추가의 예는 CLUSTALW 프로그램이다[Thompson, J. 

D. et al. (1994) Nucl. Acids. Res. 22: 4673-4680]. CLUSTALW는 서열 군 간의 복합 쌍 방식 비교를 

수행하고, 이들을 상동성에 기초하여 복합 정렬로 조립한다. 갭 오픈 및 갭 확장 패널티는 각각 10 및 0.05일 

수 있다. 아미노산 정렬을 위해, BLOSUM 알고리즘을 단백질 중량 매트릭스로서 사용할 수 있다. 예로서, 

[Henikoff and Henikoff (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915-10919]를 참조한다. 

디지털 시스템 

본 발명은 예로서, 본원에 제시된 서열, 및 그의 다양한 침묵 치환 및 보존적 치환을 비롯한, 본원의 핵산 및 

단리된 또는 재조합 폴리펩티드에 대한 본원의 서열 정보에 상응하는 문자열을 포함하는 디지털 시스템, 

예로서, 컴퓨터, 컴퓨터 판독 매체 및 통합 시스템을 제공한다. 통합 시스템은 추가로 문자열에 상응하는 유전 

자를 만들기 위한 유전자 합성 장치와 같은 것을 포함할 수 있다. 

당업계에 공지되어 있는 다양한 방법들을 사용하여 상이한 문자열 사이의 상동성 또는 유사성을 검출할 수 있거 

나(상기 참조), 상기를 사용하여 예를 들면, 출력 파일을 제어하는 것과 같이, 서열 등을 포함하는 정보를 제시 

하는 원리를 제공하는 기타 바람직한 기능을 실행할 수 있다. 예로는 상기 논의된 바 있는 BLAST를 포함한다. 

본 발명의 컴퓨터 시스템은 예로서, 본원에서 언급된 것과 같은 서열을 포함하는 하나 이상의 데이타 파일 또는 

데이타 베이스와 함께, 상기와 같은 프로그램을 포함할 수 있다. 

따라서, 다양한 HA 또는 NA 서열 또는 단편 등간의 다양한 엄격성과 길이에서의 다양한 유형의 상동성 및 유사 

성이 검출될 수 있으며, 본원의 통합 시스템에서 인지할 수 있다. 예를 들어, 생체중합체 서열의 비교 분석을 

위해, 워드 프로세싱에서의 스펠 체크를 위해, 및 다양한 데이타베이스로부터의 데이타 검색을 위해 많은 상동 

성 측정 방법이 디자인되었다. 천연 폴리뉴클레오티드에서 4개의 주 뉴클레오염기간의 이중 나선 쌍방식의 상보 

적 상호작용을 이해하면서, 상보적인 상동성 폴리뉴클레오티드 열의 어닐링을 모의하는 모델 또한 전형적으로 

본원의 서열에 상응하는 문자열에서 실시되는 서열 정렬 또는 기타 실행에 대한 기초로서 사용될 수 있다(예로 

서, 워드 프로세싱 조작, 서열 또는 하위서열 문자열을 포함하는 도면 제작, 출력 표 등). 

따라서, 표준 데스트탑 응용법, 예를 들면, 워드 프로세싱(예로서, 마이크로소프트 워드 또는 코렐 워드 퍼펙 

트) 및 데이타베이스 소프트웨어(예로서, 스프레드시트 소프트웨어, 예를 들면, 마이크로소프트 Excel, 코 

렐 콰트로 프로, 또는 데이타베이스 프로그램, 예를 들면, 마이크로소프트 액세스, 패러독스, 유전자 워 

크스, 또는 마크로벡터 또는 기타 유사 프로그램)은 본 발명의 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티 

드(핵산 또는 단백질, 또는 그 둘 모두)에 상응하는 문자열을 입력함으로써 본 발명에 적합화될 수 있다. 예를 

들어, 본 발명의 시스템은 본원 서열에 상응하는 문자열을 조작하기 위해 사용자 인터페이스(예로서, 표준 작동 

시스템에서 GUI, 예를 들면, 윈도우스, 매킨토시, 또는 리눅스 시스템)과 함께 사용되는 것과 같은, 적절한 문 

자열 정보를 갖는 상기의 소프트웨어를 포함할 수 있다. 언급한 바와 같이, 전문 정렬 프로그램, 예를 들면, 

BLAST 또한 핵산 또는 단백질(상응하는 문자열)의 정렬을 위해 본 발명의 시스템내로 혼입될 수 있다. 

본 발명에서 시스템은 전형적으로 본원 서열 중 어느 것을 포함하는 소프트웨어 시스템으로 입력되는 데이타 세 

트를 갖는 디지털 컴퓨터를 포함한다. 컴퓨터는 예로서, PC(인텔 x86 또는 펜티움 칩-호환 DOS, OS2 윈도스 

윈도우스NT, 윈도우스95, 윈도우스2000, 윈도우스98, 리눅스 기반 기계, 매킨토시, 파워 PC, 또는 

유닉스 기반(예로서, SUN 워크 스테이션) 기계) 또는 당업자에게 알려져 있는 다른 상업적으로 이용가능한 컴 

퓨터일 수 있다. 서열을 정렬하거나, 그외 조작하기 위한 소프트웨어가 이용가능하며, 예를 들면, 

비주얼베이직, PERL, 포트란, 베이직, 자바 등과 같은 표준 프로그래밍 언어를 사용함으로써 당업자에 의해 쉽 

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게 제작될 수 있다. 

임의의 제어 장치 또는 컴퓨터는 임의로 대개 음극선관("CRT: cathode ray tube") 디스플레이, 평판 디스플레이 

(예로서, 능동 매트릭스형 액정 표시 장치, 액정 표시 장치) 등인 모니터를 포함한다. 컴퓨터 회로는 대개 다수 

의 집적 회로 칩, 예를 들면, 마이크로프로세서, 메모리, 인터페이스 회로 등을 포함하는 박스내 위치한다. 박 

스는 또한 임의로 하드 디스크 장치, 플로피 디스크 장치, 고용량 이동식 드라이브 예를 들면, 기록가능 CD- 

ROM, 및 기타의 일반적인 주변 소자를 포함한다. 입력 장치, 예를 들면, 키보드 또는 마우스는 임의로 관련 컴 

퓨터 시스템에서 비교되거나, 그밖에 조작되는 서열을 사용자가 입력하고, 사용자가 선택할 수 있도록 

제공된다. 

컴퓨터는 전형적으로 예를 들면, GUI와 같이, 세트 파라미터 영역으로의 사용자 입력 형태로, 또는 사전에 프로 

그래밍된 명령 형태로, 예를 들면, 각종의 상이한 특정 연산에 대해 사전에 프로그래밍되는 것과 같은 형태로 

사용자 명령을 받아들이는 적절한 소프트웨어를 포함한다. 이어서, 소프트웨어는 이들 명령을 원하는 연산을 수 

행할 수 있도록 예로서, 적절한 메카니즘 또는 전송 제어 장치의 연산을 명령하기 위한 적절한 언어로 전환시킨 

다. 소프트웨어는 또한 핵산 합성(예로서, 본원의 서열 또는 서열 정렬에 기초한 핵산 합성), 차별적인 유전자 

발현에 대한 샘플 비교, 또는 기타 연산을 제어하는 출력 소자를 포함할 수 있다. 

키트 및 시약 

본 발명은 임의로 키트로서 사용자에게 제공된다. 예를 들어, 본 발명의 키트는 본원에 기술된(예로서, 본 발명 

의 HA 및/또는 NA 분자를 포함하거나 갖는) 하나 이상의 핵산, 폴리펩티드, 항체, 또는 세포주를 포함한다. 키 

트는 진단용 핵산 또는 폴리펩티드, 예로서, 항체, 프로브 세트, 예로서, 적합한 용기내 패킹된 cDNA 마이크로 

어레이, 또는 기타 핵산, 예를 들면, 하나 이상의 발현 벡터를 포함할 수 있다. 키트는 또한 발현 생성물을 표 

지하기 위한 하나 이상의 추가 시약, 예로서, 기질, 표지, 프라이머, 튜브 및/또는 기타 부속물, 샘플 수집을 

위한 시약, 완충액, 하이브리드화 챔버, 커버 슬립 등을 추가로 포함한다. 키트는 임의로 진단용 세트 등의 발 

견 또는 적용을 위한 키트 성분의 바람직한 사용 방법을 설명하는 설명서 세트 또는 사용자 매뉴얼을 추가로 포 

함한다. 

설명서에 따라 사용할 때, 키트는 예로서 질환 상태 또는 증상을 평가하기 위해, 약제학적 제제 또는 기타 치료 

중재가 세포 또는 유기체의 질환 상태 또는 증상의 진행에 미치는 효과를 평가하기 위해, 또는 백신으로서의 사 

용을 위해 또는 기타의 것을 위해 키트가 사용될 수 있다. 

추가의 측면에서, 본 발명은 본원의 방법, 조성물, 시스템 및 장치를 구현하는 시스템 키트를 제공한다. 본 발 

명의 시스템 키트은 임의로 하기의 (1) 장치, 시스템, 시스템 성분 또는 장치 성분; (2) 본원에 기술된 방법 실 

시 설명서 및/또는 본원의 장치 또는 장치 성분 작동 설명서 및/또는 본원의 조성물 사용 설명서 중 하나 이상 

을 포함한다. 추가의 측면에서, 본 발명은 본원의 임의의 장치, 장치 성분, 조성물 또는 키트의 용도, 본원의 

임의의 방법 또는 분석법의 실시, 및/또는 본원의 임의의 분석법 또는 방법을 실시하기 위한 임의의 장치 또는 

키트의 용도를 제공한다. 

추가로, 키트는 적절한 포장재, 키트 성분을 담고 있는 용기, 본원의 방법 실시 설명서 등을 함께 상기 언급한 

하나 이상의 번역 시스템(예로서, 세포)을 포함할 수 있다. 유사하게, 번역 시스템의 생성물(예로서, 단백질 예 

를 들면, HA 및/또는 NA 분자)은 예로서, 키트 성분을 담고 있는 용기, 본원의 방법 실시 설명서 등과 함께 키 

트 형태로 제공될 수 있다. 

본 발명의 방법 및 조성물의 사용을 촉진시키기 위하여 임의의 백신 성분 및/또는 조성물, 예로서, 요막액 중 

재배열된 바이러스 등, 및 실험 목적용 또는 치료학적 백신 목적용의 인플루엔자 바이러스의 패킹 및 감염에 유 

용한, 예를 들면, 완충액, 세포, 배양 배지와 같은 추가 성분이 키트 형태로 패킹될 수 있다. 전형적으로, 키트 

는 상기 성분들 이외에도 예로서, 본 발명의 방법 실시 설명서, 포장재 및 용기를 포함할 수 있는 추가의 물질 

을 포함한다. 

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서 열 목 록 

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SEQUENCE LISTING 

MedImmune, Vaccines Inc. 

MedImmune, Vaccines Inc./ National Institutes of Health 

Yang, Chin-Fen 

Kemble, George 

Subbarao, Kanta 

Murphy, Brian 

INFLUENZA HEMAGGLUTININ AND NEURAMINIDASE VARIANTS 

FL260PCT 

60/942,804 

2007-06-08 

60/821,832 

2006-08-09 

45 

PatentIn version 3.3 

1 

1767 

DNA 

Influenza A virus 

1 

agcaaaagca ggggttcaat ctgtcaaaat ggagaaaata gtgcttcttt ttgcaatagt 60 

cagtcttgtt aaaagtgatc agatttgcat tggttaccat gcaaacaact cgacagagca 120 

ggttgacaca ataatggaaa agaacgttac tgttacacat gcccaagaca tactggaaaa 180 

gaaacacaac gggaagctct gcgatctaga tggagtgaag cctctaattt tgagagattg 240 

tagcgtagct ggatggctcc tcggaaaccc aatgtgtgac gaattcatca atgtgccgga 300 

atggtcttac atagtggaga aggccaatcc agtcaatgac ctctgttacc caggggattt 360 

caatgactat gaagaattga aacacctatt gagcagaata aaccattttg agaaaattca 420 

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gatcatcccc aaaagttctt ggtccagtca tgaagcctca ttaggggtga gctcagcatg 480 

tccataccag ggaaagtcct cctttttcag aaatgtggta tggcttatca aaaagaacag 540 

tacataccca acaataaaga ggagctacaa taataccaac caagaagatc ttttggtact 600 

gtgggggatt caccatccta atgatgcggc agagcagaca aagctctatc aaaacccaac 660 

cacctatatt tccgttggga catcaacact aaaccagaga ttggtaccaa gaatagctac 720 

tagatccaaa gtaaacgggc aaagtggaag gatggagttc ttctggacaa ttttaaagcc 780 

gaatgatgca atcaacttcg agagtaatgg aaatttcatt gctccagaat atgcatacaa 840 

aattgtcaag aaaggggact caacaattat gaaaagtgaa ttggaatatg gtaactgcaa 900 

caccaagtgt caaactccaa tgggggcgat aaactctagc atgccattcc acaatataca 960 

ccctctcacc attggggaat gccccaaata tgtgaaatca aacagattag tccttgcgac 1020 

tgggctcaga aatagccctc aaagagagac tcgaggatta tttggagcta tagcaggttt 1080 

tatagaggga ggatggcagg gaatggtaga tggttggtat gggtaccacc atagcaatga 1140 

gcaggggagt gggtacgctg cagacaaaga atccactcaa aaggcaatag atggagtcac 1200 

caataaggtc aactcgatca ttgacaaaat gaacactcag tttgaggccg ttggaaggga 1260 

atttaacaac ttagaaagga gaatagagaa tttaaacaag aagatggaag acgggttcct 1320 

agatgtctgg acttataatg ctgaacttct ggttctcatg gaaaatgaga gaactctaga 1380 

ctttcatgac tcaaatgtca agaaccttta cgacaaggtc cgactacagc ttagggataa 1440 

tgcaaaggag ctgggtaacg gttgtttcga gttctatcat aaatgtgata atgaatgtat 1500 

ggaaagtgta agaaatggaa cgtatgacta cccgcagtat tcagaagaag cgagactaaa 1560 

aagagaggaa ataagtggag taaaattgga atcaatagga atttaccaaa tactgtcaat 1620 

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공개특허 10-2009-0053794

ttattctaca gtggcgagtt ccctagcact ggcaatcatg gtagctggtc tatccttatg 1680 

gatgtgctcc aatgggtcgt tacaatgcag aatttgcatt taaatttgtg agttcagatt 1740 

gtagttaaaa acacccttgt ttctact 1767 

2 

1398 

DNA 


2 

agcaaaagca ggagttcaaa atgaatccaa atcagaagat aataaccatc gggtcaatct 60 

gtatggtaac tggaatagtt agcttaatgt tacaaattgg gaacatgatc tcaatatggg 120 

tcagtcattc aattcacaca gggaatcaac accaatctga accaatcagc aatactaatt 180 

ttcttactga gaaagctgtg gcttcagtaa aattagcggg caattcatct ctttgcccca 240 

ttaacggatg ggctgtatac agtaaggaca acagtataag gatcggttcc aagggggatg 300 

tgtttgttat aagagagccg ttcatctcat gctcccactt ggaatgcaga actttctttt 360 

tgactcaggg agccttgctg aatgacaagc actccaatgg gactgtcaaa gacagaagcc 420 

ctcacagaac attaatgagt tgtcctgtgg gtgaggctcc ctccccatat aactcaaggt 480 

ttgagtctgt tgcttggtca gcaagtgctt gccatgatgg caccagttgg ttgacgattg 540 

gaatttctgg cccagacaat ggggctgtgg ctgtattgaa atacaatggc ataataacag 600 

acactatcaa gagttggagg aacaacatac tgagaactca agagtctgaa tgtgcatgtg 660 

taaatggctc ttgctttact gtaatgactg acggaccaag taatggtcag gcatcacata 720 

agatcttcaa aatggaaaaa gggaaagtgg ttaaatcagt cgaattggat gctcctaatt 780 

- 96 - 

공개특허 10-2009-0053794

atcactatga ggaatgctcc tgttatccta atgccggaga aatcacatgt gtgtgcaggg 840 

ataattggca tggctcaaat cggccatggg tatctttcaa tcaaaatttg gagtatcaaa 900 

taggatatat atgcagtgga gttttcggag acaatccacg ccccaatgat ggaacaggta 960 

gttgtggtcc ggtgtcctct aacggggcat atggggtaaa agggttttca tttaaatacg 1020 

gcaatggtgt ctggatcggg agaaccaaaa gcactaattc caggagcggc tttgaaatga 1080 

tttgggatcc aaatgggtgg actgaaacgg acagtagctt ttcagtgaaa caagatatcg 1140 

tagcaataac tgattggtca ggatatagcg ggagttttgt ccagcatcca gaactgacag 1200 

gactagattg cataagacct tgtttctggg ttgagttgat cagagggcgg cccaaagaga 1260 

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3 

1767 

DNA 


3 

agcaaaagca ggggttcaat ctgtcaaaat ggagaaaata gtgcttcttt ttgcaatagt 60 

cagtcttgtt aaaagtgatc agatttgcat tggttaccat gcaaacaact cgacagagca 120 

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gacacacaac gggaagctct gcgatctaga tggagtgaag cctctaattt tgagagattg 240 

tagtgtagct ggatggctcc tcggaaaccc aatgtgtgac gaattcatca atgtgccgga 300 

atggtcttac atagtggaga aggccaatcc agccaatgac ctctgttacc caggggattt 360 

- 97 - 

공개특허 10-2009-0053794

caacgactat gaagaattga aacacctatt gagcagaata aaccattttg agaaaattca 420 

gatcatcccc aaaaattctt ggtccagtca tgaagcctca ttaggggtga gctcagcatg 480 

tccataccaa ggaaagtcct cctttttcag gaatgtggta tggcttatca aaaagaacaa 540 

tgcataccca acaataaaga ggagctacaa taataccaac caagaagatc ttttggtatt 600 

gtgggggatt caccatccta atgatgcggc agagcagact aggctctatc aaaacccaac 660 

cacctacatt tccgttggga catcaacact aaaccagaga ttggtaccaa aaatagctac 720 

tagatccaaa gtaaacgggc aaaatggaag gatggagttc ttctggacaa ttttaaaacc 780 

gaatgatgca atcaacttcg agagcaatgg aaatttcatt gctccagaat atgcatacaa 840 

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caccaagtgt caaactccaa tgggggcgat aaactctagt atgccattcc acaatataca 960 

ccctctcacc atcggggaat gccccaaata tgtgaaatca aacagattag tccttgcgac 1020 

tgggctcaga aatagccctc aaagagagac tcgaggatta tttggagcta tagcaggttt 1080 


gcaggggagt gggtacgctg cagacaaaga atccactcaa aaggcaatag atggagtcac 1200 

caataaggtc aactcgatca ttgacaaaat gaacactcag tttgaggccg ttggaaggga 1260 

atttaataac ttagaaagga gaatagagaa tttaaacaag aagatggaag acggattcct 1320 

agatgtctgg acttataatg ctgaacttct ggttctcatg gaaaatgaga gaactctaga 1380 


tgcaaaggag ctgggtaacg gttgtttcga gttctatcac aaatgtgata atgaatgtat 1500 

- 98 - 

공개특허 10-2009-0053794

ggaaagtgta agaaacggaa cgtatgacta cccgcagtat tcagaagaag caagactaaa 1560 

aagagaggaa ataagtggag taaaattgga gtcaatagga acttaccaaa tactgtcaat 1620 

ttattctaca gtggcgagtt ccctagcact ggcaatcatg gtagctggtc tatctttatg 1680 

gatgtgctcc aatgggtcgt tacaatgcag aatttgcatt taaatttgtg agttcagatt 1740 


4 

1458 

DNA 


4 

agcaaaagca ggagttcaaa atgaatccaa atcagaagat aacaaccatt ggatcaatct 60 

gtatggtaat tggaatagtt agcttgatgt tacaaattgg gaacataatc tcaatatggg 120 

ttagtcattc aattcaaaca gggaatcaac accaggctga accatgcaat caaagcatta 180 

ttacttatga aaacaacacc tgggtaaacc agacatatgt caacatcagc aataccaatt 240 

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tgtttgttat aagagagccg ttcatctcat gctcccactt ggaatgcaga actttctttt 420 

tgactcaggg agccttgctg aatgacaagc attctaatgg gaccgtcaaa gacagaagcc 480 

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acactatcaa gagttggagg aacaacataa tgagaactca agagtctgaa tgtgcatgtg 720 

- 99 - 

공개특허 10-2009-0053794

taaatggctc ttgctttact gttatgactg atggaccaag taatgggcag gcttcataca 780 

aaatcttcag aatagaaaaa gggaaagtag ttaaatcagc cgaattaaat gcccctaatt 840 

atcactatga ggagtgctcc tgttatcctg atgctggaga aatcacatgt gtgtgcaggg 900 

ataactggca tggctcaaat cggccatggg tatctttcaa tcaaaatttg gagtatcgaa 960 

taggatatat atgcagtgga gttttcggag acaatccacg ccccaatgat gggacaggca 1020 

gttgtggtcc ggtgtcccct aaaggggcat atggaataaa agggttctca tttaaatacg 1080 

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tagctataac cgattggtca ggatatagcg ggagttttgt ccagcatcca gaactgacag 1260 

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gttggtcttg gccagacggt gctgagttgc cattcaccat tgacaagtag tttgttcaaa 1440 

aaactccttg tttctact 1458 

5 

1767 

DNA 


5 

agcaaaagca ggggtataat ctgtcaaaat ggagaaaata gtgcttcttc ttgcaacagt 60 

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agttgacaca ataatggaaa agaatgttac tgttacacat gcccaagaca tactggaaag 180 

- 100 - 

공개특허 10-2009-0053794

gacacacaac gggaagctct gcgatctaaa tggagtgaag cctctgattt tgagggattg 240 

tagtgtagct ggatggctcc tcggaaaccc tatgtgtgac gaattcatca atgtgccgga 300 

atggtcttac atagtggaga aggccagtcc agccaatgac ctctgttatc cagggaattt 360 

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- 101 - 

공개특허 10-2009-0053794


tgcaaaggag ctgggtaatg gttgtttcga attctatcac aaatgtgata acgaatgtat 1500 

ggaaagtgta aaaaacggaa cgtatgacta cccgcagtat tcagaagaag caagactaaa 1560 

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6 

1401 

DNA 


6 

agcaaaagca ggagtttaaa atgaatccaa atcagaagat aataaccatt ggatcaatct 60 

gcatggtagt tgggataatc agcttgatgt tacaaattgg aaacacaata tcagtatggg 120 

tcagccacat aattaaaact tggcacccaa accagcctga accatgcaac caaagcatca 180 

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- 102 - 

공개특허 10-2009-0053794

ttggaatttc cggtccggat aatggggctg tggctgtgtt gaaatacaat ggcataataa 600 

cagacaccat caagagttgg aggaacaaca cactgaggac gcaagagtct gaatgtgcat 660 

gtgtgaatgg ttcttgtttt actgtaatga cagatggacc gagtaatgaa caggcctcat 720 

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7 

1767 

DNA 


7 

agcaaaagca ggggtataat ctgtcaaaat ggagaaaata gtgcttcttc ttgcaacagt 60 

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- 103 - 

공개특허 10-2009-0053794

agttgacaca ataatggaaa agaatgttac tgttacacat gcccaagaca tactggaaag 180 

gacacacaac gggaagctct gcgatctaaa tggagtgaag cctctgattt tgagggattg 240 

tagtgtagct ggatggctcc tcggaaaccc tatgtgtgac gaattcatca atgtgccgga 300 

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caacgactat gaagaactga aacacctatt gagcagaata aaccattttg agaaaattca 420 

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gtgggggatt caccatccta atgatgcggc agagcagaca aggctctatc aaaacccaac 660 

cacctacatt tccgttggaa catcaacact gaaccagaga ttggtttcag aaatagctac 720 

tagacccaaa gtaaacgggc aaagtggaag aatggagttc ttctggacaa ttttaaagcc 780 

gaatgatgcc atcaatttcg agagtaatgg aaatttcatt gctccagaat atgcatacaa 840 


caccaagtgt caaactccaa tgggggcaat aaactctagt atgccattcc acaacataca 960 

ccccctcacc atcggggaat gccccaaata tgtgaaatca aacagattag tccttgcaac 1020 

tggactcaga aatacccctc aacgagagac gcgaggacta tttggagcta tagcaggttt 1080 


gcaggggagt ggatacgctg cagaccaaga atccacacaa aaggcaatag atggagtcac 1200 

caataaggtc aactcgatca ttaacaaaat gaacactcag tttgaggccg ttggaaggga 1260 

- 104 - 

공개특허 10-2009-0053794

atttaataac ttggaaagga ggatagagaa tttaaacaag aaaatggaag acggattcct 1320 

agatgtctgg acttacaatg ccgaacttct ggttctcatg gaaaatgaga gaactctaga 1380 


tgcaaaggag ctgggtaatg gttgtttcga attctatcac aaatgtgata acgaatgtat 1500 

ggaaagtgta aaaaacggaa cgtatgacta cccgcagtat tcagaagaag caagactaaa 1560 

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gatgtgctcc aatggatcgt tacaatgcag aatttgcatt taaatttgtg agttcagatt 1740 


8 

1401 

DNA 


8 

agcaaaagca ggagtttaaa atgaatccaa atcagaagat aataaccatt ggatcaatct 60 

gcatggtagt tgggataatc agcttgatgt tacaaattgg aaacacaata tcagtatggg 120 

tcagccacat aattaaaact tggcacccaa accagcctga accatgcaac caaagcatca 180 

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tcttgaccca aggagcccta ttgaatgaca agcattctaa tgggaccgtc aaagacagga 420 

gcccctatag aactttaatg agctgtcctg ttggtgaggc cccttcccca tacaactcaa 480 

- 105 - 

공개특허 10-2009-0053794



cagacaccat caagagttgg aggaacaaca cactgaggac gcaagagtct gaatgtgcat 660 


acaagatttt caagatagaa aaggggaggg tagtcaaatc agttgagttg aacgccccta 780 


gggataattg gcatggctcg aaccgaccat gggtgtcttt caatcagaat ctggagtatc 900 

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acggcaatgg tgtttggatc gggagaacca aaagcactag ttccaggagc ggttttgaaa 1080 

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tcatagcgat aactgattgg tcaggataca gcgggagttt tattcaacat ccagaactga 1200 

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tgggttggtc ttggccagac ggtgctgagt tgccatacac cattgacaag tagtttgttc 1380 


9 

1690 

DNA 


9 

- 106 - 

공개특허 10-2009-0053794

ttaaccactc aagatggaag caataccact aataactata ctactagtag taacagcaag 60 

caatgcagac aaaatctgca tcggctacca atcaacaaac tccacagaaa ccgtagacac 120 

gctaacagaa aacaatgttc ctgtgacaca tgccaaagaa ttgctccaca cagagcacaa 180 

tgggatgctg tgtgcaacaa atctgggacg tcctcttatt ctagacactt gcaccattga 240 

aggactgatc tatggcaacc cttcttgtga tctactgttg ggaggaagag aatggtccta 300 

catcgtcgaa agaccatcgg ctgttaatgg aatgtgttac cccgggaatg tagaaaacct 360 

agaggaacta aggtcatttt ttagttctgc tagttcctac caaagaatcc agatctttcc 420 

agacacaatc tggaatgtgt cttacagtgg aacaagcaaa gcatgttcag attcattcta 480 

caggagcatg agatggttga ctcaaaagaa caacgcttac cctattcaag acgcccaata 540 

cacaaataat agaggaaaga gcattctttt catgtggggc ataaatcacc cacctaccga 600 

tactgcacag acaaatctgt acacaaggac tgacacaaca acaagtgtgg caacagaaga 660 

tataaatagg accttcaaac cagtgatagg gccaaggccc cttgtcaatg gtctgcaggg 720 

aagaattgat tattattggt cggtattgaa accaggtcag acattgcgag taagatccaa 780 

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cctgaagact gatttaaaca gtggtagctg tgtagtgcaa tgtcaaacag aaagaggtgg 900 

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agactcaact caaagggcaa ttgacaaaat aacgtccaaa gtgaataata tagtcgataa 1200 

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공개특허 10-2009-0053794

aatgaacaag caatatgaaa ttattgatca tgaattcagc gaggttgaaa atagactcaa 1260 

tatgatcaat aataagattg atgaccagat acaagacata tgggcatata acgctgaatt 1320 

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ggaatctgaa ggaacttaca aaatcctcac catttattcg actgtcgcct catctcttgt 1620 

gattgcaatg gggtttgctg ccttcttgtt ctgggccatg tccaatggat cttgcagatg 1680 

caacatttga 1690 

10 

1428 

DNA 


10 

aaatgaatcc aaatcagaag ataatagcaa ttggctctgt ttctctaact attgcgacaa 60 

tatgcctcct catgcagatt gctatcttag caacgactat gacactacat ttcaagcaga 120 

atgaatgcat caactcctcg aataatcaag tagtgccatg tgaaccaatc ataatagaaa 180 

ggaacataac agagatagtg catttgaata gtactacctt agagaaggaa atttgtccta 240 

aagtagcaga ctacaggaat tggtcaaaac cacaatgtca aatcacaggg ttcgctcctt 300 

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- 108 - 

공개특허 10-2009-0053794

tggagaacaa acactcaaac ggcacagcac atgatagaac tcctcataga acccttttaa 480 

tgaatgagtt gggtgttccg tttcatttgg caaccaaaca agtgtgcata gcatggtcca 540 

gctcaagctg ccatgatggg aaagcatggt tacatgtttg tgtcactggg gatgatagaa 600 

atgcaacggc tagcatcatt tatgatggga tacttgttga cagtattggt tcatggtcta 660 

aaaacatcct cagaactcag gagtcagaat gcgtttgcat caatggaacc tgtgcagtag 720 

taatgactga tggaagtgca tcaggaaggg ctgacactag aatactattt attagagagg 780 

ggaaaattgc acacattagc ccattgtcag gaagtgctca gcatgtggag gaatgctcct 840 

gttacccccg atatccagaa gttagatgtg tttgcagaga caattggaag ggatccaata 900 

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gacttgttgg cgacacacca agaaatgatg ataggtctag cagcagcaac tgcagagatc 1020 

ctaataacga gagaggggcc ccaggagtaa aagggtgggc ctttgacaat ggaaatgaca 1080 

tttggatggg aagaacaatc aaaaaggatt cgcgctcagg ttatgagact ttcagggtca 1140 

ttggtggttg gaccactgct aattccaagt cacagataaa tagacaagtc atagttgaca 1200 

gtgataactc gtctgggtat tctggtatct tctctgttga aggcaaaagc tgcatcaaca 1260 

ggtgttttta cgtggagttg ataagaggaa gaccaaagga gactagggtg tggtggactt 1320 

caaatagcat cattgtattt tgtggaactt caggtaccta tggaacaggc tcatggcctg 1380 

atggggcgaa tatcaatttc atgcctatat aagctttcgc aattttag 1428 

11 

564 

PRT 


- 109 - 

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11 

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 

1 5 10 15 

Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val 

20 25 30 

Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile 

35 40 45 

Leu Glu Lys Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys 

50 55 60 

Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn 

65 70 75 80 

Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val 

85 90 95 

Glu Lys Ala Asn Pro Val Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn 

100 105 110 

Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu 

115 120 125 

Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Ser His Glu Ala Ser 

130 135 140 

Leu Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Lys Ser Ser Phe Phe 

145 150 155 160 

Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Thr Tyr Pro Thr Ile 

165 170 175 

Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp 

- 110 - 

공개특허 10-2009-0053794

180 185 190 

Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln 

195 200 205 

Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg 

210 215 220 

Leu Val Pro Arg Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 

225 230 235 240 

Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn 

245 250 255 

Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile 

260 265 270 

Val Lys Lys Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 

275 280 285 

Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser 

290 295 300 

Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys 

305 310 315 320 

Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser 

325 330 335 

Pro Gln Arg Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 

340 345 350 

Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His 

355 360 365 

Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln 

- 111 - 

공개특허 10-2009-0053794

370 375 380 

Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys 

385 390 395 400 

Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn Asn Leu Glu 

405 410 415 

Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp 

420 425 430 

Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg 

435 440 445 

Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val 

450 455 460 

Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn Gly Cys Phe 

465 470 475 480 

Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Arg Asn 

485 490 495 

Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg 

500 505 510 

Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly Ile Tyr Gln Ile 

515 520 525 

Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ile Met 

530 535 540 

Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys 

545 550 555 560 

Arg Ile Cys Ile 

- 112 - 

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12 

449 

PRT 



Met Asn Pro Asn Gln Lys Ile Ile Thr Ile Gly Ser Ile Cys Met Val 

1 5 10 15 

Thr Gly Ile Val Ser Leu Met Leu Gln Ile Gly Asn Met Ile Ser Ile 

20 25 30 

Trp Val Ser His Ser Ile His Thr Gly Asn Gln His Gln Ser Glu Pro 

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Ile Ser Asn Thr Asn Phe Leu Thr Glu Lys Ala Val Ala Ser Val Lys 

50 55 60 

Leu Ala Gly Asn Ser Ser Leu Cys Pro Ile Asn Gly Trp Ala Val Tyr 

65 70 75 80 

Ser Lys Asp Asn Ser Ile Arg Ile Gly Ser Lys Gly Asp Val Phe Val 

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Ile Arg Glu Pro Phe Ile Ser Cys Ser His Leu Glu Cys Arg Thr Phe 

100 105 110 

Phe Leu Thr Gln Gly Ala Leu Leu Asn Asp Lys His Ser Asn Gly Thr 


Val Lys Asp Arg Ser Pro His Arg Thr Leu Met Ser Cys Pro Val Gly 

130 135 140 

Glu Ala Pro Ser Pro Tyr Asn Ser Arg Phe Glu Ser Val Ala Trp Ser 

- 113 - 

공개특허 10-2009-0053794

145 150 155 160 

Ala Ser Ala Cys His Asp Gly Thr Ser Trp Leu Thr Ile Gly Ile Ser 

165 170 175 

Gly Pro Asp Asn Gly Ala Val Ala Val Leu Lys Tyr Asn Gly Ile Ile 


Thr Asp Thr Ile Lys Ser Trp Arg Asn Asn Ile Leu Arg Thr Gln Glu 


Ser Glu Cys Ala Cys Val Asn Gly Ser Cys Phe Thr Val Met Thr Asp 

210 215 220 

Gly Pro Ser Asn Gly Gln Ala Ser His Lys Ile Phe Lys Met Glu Lys 

225 230 235 240 

Gly Lys Val Val Lys Ser Val Glu Leu Asp Ala Pro Asn Tyr His Tyr 

245 250 255 

Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Asn Ala Gly Glu Ile Thr Cys Val Cys 

260 265 270 

Arg Asp Asn Trp His Gly Ser Asn Arg Pro Trp Val Ser Phe Asn Gln 

275 280 285 

Asn Leu Glu Tyr Gln Ile Gly Tyr Ile Cys Ser Gly Val Phe Gly Asp 

290 295 300 

Asn Pro Arg Pro Asn Asp Gly Thr Gly Ser Cys Gly Pro Val Ser Ser 

305 310 315 320 

Asn Gly Ala Tyr Gly Val Lys Gly Phe Ser Phe Lys Tyr Gly Asn Gly 

325 330 335 

Val Trp Ile Gly Arg Thr Lys Ser Thr Asn Ser Arg Ser Gly Phe Glu 

340 345 350 

- 114 - 

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Met Ile Trp Asp Pro Asn Gly Trp Thr Glu Thr Asp Ser Ser Phe Ser 

355 360 365 

Val Lys Gln Asp Ile Val Ala Ile Thr Asp Trp Ser Gly Tyr Ser Gly 

370 375 380 

Ser Phe Val Gln His Pro Glu Leu Thr Gly Leu Asp Cys Ile Arg Pro 

385 390 395 400 

Cys Phe Trp Val Glu Leu Ile Arg Gly Arg Pro Lys Glu Ser Thr Ile 

405 410 415 

Trp Thr Ser Gly Ser Ser Ile Ser Phe Cys Gly Val Asn Ser Asp Thr 

420 425 430 

Val Gly Trp Ser Trp Pro Asp Gly Ala Glu Leu Pro Phe Thr Ile Asp 

435 440 445 

Lys 

13 

564 

PRT 


13 

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 

1 5 10 15 


20 25 30 


35 40 45 

- 115 - 

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Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys 

50 55 60 


65 70 75 80 


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Glu Lys Ala Asn Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn 

100 105 110 



Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Asn Ser Trp Ser Ser His Glu Ala Ser 

130 135 140 

Leu Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Lys Ser Ser Phe Phe 

145 150 155 160 

Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Thr Ile 

165 170 175 



Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gln 



210 215 220 

Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Asn Gly 

- 116 - 

공개특허 10-2009-0053794

225 230 235 240 


245 250 255 


260 265 270 

Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly 

275 280 285 


290 295 300 


305 310 315 320 

Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser 

325 330 335 


340 345 350 


355 360 365 

Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser Thr Gln 

370 375 380 

Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asp Lys 

385 390 395 400 


405 410 415 


420 425 430 

- 117 - 

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435 440 445 


450 455 460 


465 470 475 480 

Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Arg Asn 

485 490 495 

Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Lys Arg 

500 505 510 

Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly Thr Tyr Gln Ile 

515 520 525 


530 535 540 


545 550 555 560 


14 

469 

PRT 


14 

Met Asn Pro Asn Gln Lys Ile Thr Thr Ile Gly Ser Ile Cys Met Val 

1 5 10 15 

- 118 - 

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Ile Gly Ile Val Ser Leu Met Leu Gln Ile Gly Asn Ile Ile Ser Ile 

20 25 30 

Trp Val Ser His Ser Ile Gln Thr Gly Asn Gln His Gln Ala Glu Pro 

35 40 45 

Cys Asn Gln Ser Ile Ile Thr Tyr Glu Asn Asn Thr Trp Val Asn Gln 

50 55 60 

Thr Tyr Val Asn Ile Ser Asn Thr Asn Phe Leu Thr Glu Lys Ala Val 

65 70 75 80 

Ala Ser Val Thr Leu Ala Gly Asn Ser Ser Leu Cys Pro Ile Ser Gly 

85 90 95 

Trp Ala Val Tyr Ser Lys Asp Asn Gly Ile Arg Ile Gly Ser Lys Gly 

100 105 110 

Asp Val Phe Val Ile Arg Glu Pro Phe Ile Ser Cys Ser His Leu Glu 


Cys Arg Thr Phe Phe Leu Thr Gln Gly Ala Leu Leu Asn Asp Lys His 

130 135 140 

Ser Asn Gly Thr Val Lys Asp Arg Ser Pro His Arg Thr Leu Met Ser 

145 150 155 160 

Cys Pro Val Gly Glu Ala Pro Ser Pro Tyr Asn Ser Arg Phe Glu Ser 

165 170 175 

Val Ala Trp Ser Ala Ser Ala Cys His Asp Gly Thr Ser Trp Leu Thr 


Ile Gly Ile Ser Gly Pro Asp Asn Gly Ala Val Ala Val Leu Lys Tyr 


- 119 - 

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Asn Gly Ile Ile Thr Asp Thr Ile Lys Ser Trp Arg Asn Asn Ile Met 

210 215 220 

Arg Thr Gln Glu Ser Glu Cys Ala Cys Val Asn Gly Ser Cys Phe Thr 

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Val Met Thr Asp Gly Pro Ser Asn Gly Gln Ala Ser Tyr Lys Ile Phe 

245 250 255 

Arg Ile Glu Lys Gly Lys Val Val Lys Ser Ala Glu Leu Asn Ala Pro 

260 265 270 

Asn Tyr His Tyr Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Asp Ala Gly Glu Ile 

275 280 285 

Thr Cys Val Cys Arg Asp Asn Trp His Gly Ser Asn Arg Pro Trp Val 

290 295 300 

Ser Phe Asn Gln Asn Leu Glu Tyr Arg Ile Gly Tyr Ile Cys Ser Gly 

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Val Phe Gly Asp Asn Pro Arg Pro Asn Asp Gly Thr Gly Ser Cys Gly 

325 330 335 

Pro Val Ser Pro Lys Gly Ala Tyr Gly Ile Lys Gly Phe Ser Phe Lys 

340 345 350 

Tyr Gly Asn Gly Val Trp Ile Gly Arg Thr Lys Ser Thr Asn Ser Arg 

355 360 365 

Ser Gly Phe Glu Met Ile Trp Asp Pro Asn Gly Trp Thr Gly Thr Asp 

370 375 380 

Ser Asn Phe Ser Val Lys Gln Asp Ile Val Ala Ile Thr Asp Trp Ser 

385 390 395 400 

- 120 - 

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Gly Tyr Ser Gly Ser Phe Val Gln His Pro Glu Leu Thr Gly Leu Asp 

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Cys Ile Arg Pro Cys Phe Trp Val Glu Leu Ile Arg Gly Arg Pro Lys 

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Glu Ser Thr Ile Trp Thr Ser Gly Ser Ser Ile Ser Phe Cys Gly Val 

435 440 445 

Asn Ser Asp Thr Val Gly Trp Ser Trp Pro Asp Gly Ala Glu Leu Pro 

450 455 460 

Phe Thr Ile Asp Lys 

465 

15 

564 

PRT 


15 

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Thr Val Ser Leu Val Lys Ser 

1 5 10 15 


20 25 30 


35 40 45 

Leu Glu Arg Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asn Gly Val Lys 

50 55 60 


65 70 75 80 


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85 90 95 

Glu Lys Ala Ser Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asn Phe Asn 

100 105 110 



Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asn His Asp Ala Ser 

130 135 140 

Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Leu Gly Arg Ser Ser Phe Phe 

145 150 155 160 

Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Ser Tyr Pro Thr Ile 

165 170 175 






210 215 220 

Leu Val Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 

225 230 235 240 


245 250 255 


260 265 270 


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275 280 285 


290 295 300 


305 310 315 320 

Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Thr 

325 330 335 


340 345 350 


355 360 365 

Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Glu Ser Thr Gln 

370 375 380 

Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asn Lys 

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405 410 415 


420 425 430 


435 440 445 


450 455 460 


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465 470 475 480 

Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn 

485 490 495 

Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Asn Arg 

500 505 510 

Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly Thr Tyr Gln Ile 

515 520 525 


530 535 540 


545 550 555 560 


16 

450 

PRT 


16 


1 5 10 15 

Val Gly Ile Ile Ser Leu Met Leu Gln Ile Gly Asn Thr Ile Ser Val 

20 25 30 

Trp Val Ser His Ile Ile Lys Thr Trp His Pro Asn Gln Pro Glu Pro 

35 40 45 


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Cys Asn Gln Ser Ile Asn Phe Tyr Thr Glu Gln Ala Ala Ala Ser Val 

50 55 60 

Thr Leu Ala Gly Asn Ser Ser Leu Cys Pro Ile Ser Gly Trp Ala Ile 

65 70 75 80 

Tyr Ser Lys Asp Asn Ser Ile Arg Ile Gly Ser Lys Gly Asp Val Phe 

85 90 95 

Val Ile Arg Glu Pro Phe Ile Ser Cys Ser His Leu Glu Cys Arg Thr 

100 105 110 

Phe Phe Leu Thr Gln Gly Ala Leu Leu Asn Asp Lys His Ser Asn Gly 


Thr Val Lys Asp Arg Ser Pro Tyr Arg Thr Leu Met Ser Cys Pro Val 

130 135 140 

Gly Glu Ala Pro Ser Pro Tyr Asn Ser Arg Phe Glu Ser Val Ala Trp 

145 150 155 160 

Ser Ala Ser Ala Cys His Asp Gly Ile Ser Trp Leu Thr Ile Gly Ile 

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Ser Gly Pro Asp Asn Gly Ala Val Ala Val Leu Lys Tyr Asn Gly Ile 


Ile Thr Asp Thr Ile Lys Ser Trp Arg Asn Asn Thr Leu Arg Thr Gln 


Glu Ser Glu Cys Ala Cys Val Asn Gly Ser Cys Phe Thr Val Met Thr 

210 215 220 

Asp Gly Pro Ser Asn Glu Gln Ala Ser Tyr Lys Ile Phe Lys Ile Glu 

225 230 235 240 


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Lys Gly Arg Val Val Lys Ser Val Glu Leu Asn Ala Pro Asn Tyr His 

245 250 255 

Tyr Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Asp Ala Gly Glu Ile Thr Cys Val 

260 265 270 

Cys Arg Asp Asn Trp His Gly Ser Asn Arg Pro Trp Val Ser Phe Asn 

275 280 285 

Gln Asn Leu Glu Tyr Gln Ile Gly Tyr Ile Cys Ser Gly Val Phe Gly 

290 295 300 

Asp Ser Pro Arg Pro Asn Asp Gly Thr Gly Ser Cys Gly Pro Val Ser 

305 310 315 320 

Leu Asn Gly Ala Tyr Gly Val Lys Gly Phe Ser Phe Lys Tyr Gly Asn 

325 330 335 

Gly Val Trp Ile Gly Arg Thr Lys Ser Thr Ser Ser Arg Ser Gly Phe 

340 345 350 

Glu Met Ile Trp Asp Pro Asn Gly Trp Thr Glu Thr Asp Ser Ser Phe 

355 360 365 

Ser Leu Lys Gln Asp Ile Ile Ala Ile Thr Asp Trp Ser Gly Tyr Ser 

370 375 380 

Gly Ser Phe Ile Gln His Pro Glu Leu Thr Gly Leu Asn Cys Met Arg 

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Pro Cys Phe Trp Val Glu Leu Ile Arg Gly Arg Pro Lys Glu Lys Thr 

405 410 415 

Ile Trp Thr Ser Gly Ser Ser Ile Ser Phe Cys Gly Val Asn Ser Asp 

420 425 430 


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Thr Val Gly Trp Ser Trp Pro Asp Gly Ala Glu Leu Pro Tyr Thr Ile 

435 440 445 

Asp Lys 

450 

17 

564 

PRT 


17 

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Leu Ala Thr Val Ser Leu Val Lys Ser 

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20 25 30 


35 40 45 

Leu Glu Arg Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asn Gly Val Lys 

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65 70 75 80 


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Glu Lys Ala Ser Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asn Phe Asn 

100 105 110 




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Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asn His Asp Ala Ser 

130 135 140 

Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Leu Gly Arg Ser Ser Phe Phe 

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Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Ser Tyr Pro Thr Ile 

165 170 175 






210 215 220 

Leu Val Ser Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly 

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245 250 255 


260 265 270 


275 280 285 


290 295 300 


305 310 315 320 


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Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Thr 

325 330 335 


340 345 350 


355 360 365 

Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Gln Glu Ser Thr Gln 

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Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile Asn Lys 

385 390 395 400 


405 410 415 


420 425 430 


435 440 445 


450 455 460 


465 470 475 480 

Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser Val Lys Asn 

485 490 495 

Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg Leu Asn Arg 

500 505 510 

Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Met Gly Thr Tyr Gln Ile 


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515 520 525 


530 535 540 


545 550 555 560 


18 

450 

PRT 


18 


1 5 10 15 

Val Gly Ile Ile Ser Leu Met Leu Gln Ile Gly Asn Thr Ile Ser Val 

20 25 30 

Trp Val Ser His Ile Ile Lys Thr Trp His Pro Asn Gln Pro Glu Pro 

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50 55 60 


65 70 75 80 


85 90 95 

Val Ile Arg Glu Pro Phe Ile Ser Cys Ser His Leu Glu Cys Arg Thr 

- 130 - 

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100 105 110 




130 135 140 


145 150 155 160 


165 170 175 



Ile Thr Asp Thr Ile Lys Ser Trp Arg Asn Asn Thr Leu Arg Thr Gln 



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Lys Gly Arg Val Val Lys Ser Val Glu Leu Asn Ala Pro Asn Tyr His 

245 250 255 


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275 280 285 


- 131 - 

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290 295 300 


305 310 315 320 

Leu Asn Gly Ala Tyr Gly Val Lys Gly Phe Ser Phe Lys Tyr Gly Asn 

325 330 335 


340 345 350 

Glu Met Ile Trp Asp Pro Asn Gly Trp Thr Glu Thr Asp Ser Ser Phe 

355 360 365 


370 375 380 

Gly Ser Phe Ile Gln His Pro Glu Leu Thr Gly Leu Asn Cys Met Arg 

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405 410 415 


420 425 430 

Thr Val Gly Trp Ser Trp Pro Asp Gly Ala Glu Leu Pro Tyr Thr Ile 

435 440 445 

Asp Lys 

450 


558 

PRT 



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Met Glu Ala Ile Pro Leu Ile Thr Ile Leu Leu Val Val Thr Ala Ser 

1 5 10 15 

Asn Ala Asp Lys Ile Cys Ile Gly Tyr Gln Ser Thr Asn Ser Thr Glu 

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Thr Val Asp Thr Leu Thr Glu Asn Asn Val Pro Val Thr His Ala Lys 

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Glu Leu Leu His Thr Glu His Asn Gly Met Leu Cys Ala Thr Asn Leu 

50 55 60 

Gly Arg Pro Leu Ile Leu Asp Thr Cys Thr Ile Glu Gly Leu Ile Tyr 

65 70 75 80 

Gly Asn Pro Ser Cys Asp Leu Leu Leu Gly Gly Arg Glu Trp Ser Tyr 

85 90 95 

Ile Val Glu Arg Pro Ser Ala Val Asn Gly Met Cys Tyr Pro Gly Asn 

100 105 110 

Val Glu Asn Leu Glu Glu Leu Arg Ser Phe Phe Ser Ser Ala Ser Ser 


Tyr Gln Arg Ile Gln Ile Phe Pro Asp Thr Ile Trp Asn Val Ser Tyr 

130 135 140 

Ser Gly Thr Ser Lys Ala Cys Ser Asp Ser Phe Tyr Arg Ser Met Arg 

145 150 155 160 

Trp Leu Thr Gln Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Ile Gln Asp Ala Gln Tyr 

165 170 175 

Thr Asn Asn Arg Gly Lys Ser Ile Leu Phe Met Trp Gly Ile Asn His 


- 133 - 

공개특허 10-2009-0053794

Pro Pro Thr Asp Thr Ala Gln Thr Asn Leu Tyr Thr Arg Thr Asp Thr 


Thr Thr Ser Val Ala Thr Glu Asp Ile Asn Arg Thr Phe Lys Pro Val 

210 215 220 

Ile Gly Pro Arg Pro Leu Val Asn Gly Leu Gln Gly Arg Ile Asp Tyr 

225 230 235 240 

Tyr Trp Ser Val Leu Lys Pro Gly Gln Thr Leu Arg Val Arg Ser Asn 

245 250 255 

Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Gly His Ile Leu Ser Gly Glu Ser 

260 265 270 

His Gly Arg Ile Leu Lys Thr Asp Leu Asn Ser Gly Ser Cys Val Val 

275 280 285 

Gln Cys Gln Thr Glu Arg Gly Gly Leu Asn Thr Thr Leu Pro Phe His 

290 295 300 

Asn Val Ser Lys Tyr Ala Phe Gly Asn Cys Pro Lys Tyr Val Gly Val 

305 310 315 320 

Lys Ser Leu Lys Leu Ala Val Gly Leu Arg Asn Val Pro Ala Arg Ser 

325 330 335 

Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp 

340 345 350 

Ser Gly Leu Val Ala Gly Trp Tyr Gly Phe Gln His Ser Asn Asp Gln 

355 360 365 

Gly Val Gly Ile Ala Ala Asp Arg Asp Ser Thr Gln Arg Ala Ile Asp 

370 375 380 

- 134 - 

공개특허 10-2009-0053794

Lys Ile Thr Ser Lys Val Asn Asn Ile Val Asp Lys Met Asn Lys Gln 

385 390 395 400 

Tyr Glu Ile Ile Asp His Glu Phe Ser Glu Val Glu Asn Arg Leu Asn 

405 410 415 

Met Ile Asn Asn Lys Ile Asp Asp Gln Ile Gln Asp Ile Trp Ala Tyr 

420 425 430 

Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr Leu Asp Glu 

435 440 445 

His Asp Ala Asn Val Asn Asn Leu Tyr Asn Lys Val Lys Arg Ala Leu 

450 455 460 

Gly Ser Asn Ala Met Glu Asp Gly Lys Gly Cys Phe Glu Leu Tyr His 

465 470 475 480 

Lys Cys Asp Asp Gln Cys Met Glu Thr Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asn 

485 490 495 

Arg Arg Lys Tyr Lys Glu Glu Ser Arg Leu Glu Arg Gln Lys Ile Glu 

500 505 510 

Gly Val Lys Leu Glu Ser Glu Gly Thr Tyr Lys Ile Leu Thr Ile Tyr 

515 520 525 

Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Ile Ala Met Gly Phe Ala Ala Phe 

530 535 540 

Leu Phe Trp Ala Met Ser Asn Gly Ser Cys Arg Cys Asn Ile 

545 550 555 

20 

469 

PRT 

- 135 - 

공개특허 10-2009-0053794


20 

Met Asn Pro Asn Gln Lys Ile Ile Ala Ile Gly Ser Val Ser Leu Thr 

1 5 10 15 

Ile Ala Thr Ile Cys Leu Leu Met Gln Ile Ala Ile Leu Ala Thr Thr 

20 25 30 

Met Thr Leu His Phe Lys Gln Asn Glu Cys Ile Asn Ser Ser Asn Asn 

35 40 45 

Gln Val Val Pro Cys Glu Pro Ile Ile Ile Glu Arg Asn Ile Thr Glu 

50 55 60 

Ile Val His Leu Asn Ser Thr Thr Leu Glu Lys Glu Ile Cys Pro Lys 

65 70 75 80 

Val Ala Asp Tyr Arg Asn Trp Ser Lys Pro Gln Cys Gln Ile Thr Gly 

85 90 95 

Phe Ala Pro Phe Ser Lys Asp Asn Ser Ile Arg Leu Ser Ala Gly Gly 

100 105 110 

Asp Ile Trp Val Thr Arg Glu Pro Tyr Val Ser Cys Gly Leu Gly Lys 


Cys Tyr Gln Phe Ala Leu Gly Gln Gly Thr Thr Leu Glu Asn Lys His 

130 135 140 

Ser Asn Gly Thr Ala His Asp Arg Thr Pro His Arg Thr Leu Leu Met 

145 150 155 160 

Asn Glu Leu Gly Val Pro Phe His Leu Ala Thr Lys Gln Val Cys Ile 

165 170 175 

- 136 - 

공개특허 10-2009-0053794

Ala Trp Ser Ser Ser Ser Cys His Asp Gly Lys Ala Trp Leu His Val 


Cys Val Thr Gly Asp Asp Arg Asn Ala Thr Ala Ser Ile Ile Tyr Asp 


Gly Ile Leu Val Asp Ser Ile Gly Ser Trp Ser Lys Asn Ile Leu Arg 

210 215 220 

Thr Gln Glu Ser Glu Cys Val Cys Ile Asn Gly Thr Cys Ala Val Val 

225 230 235 240 

Met Thr Asp Gly Ser Ala Ser Gly Arg Ala Asp Thr Arg Ile Leu Phe 

245 250 255 

Ile Arg Glu Gly Lys Ile Ala His Ile Ser Pro Leu Ser Gly Ser Ala 

260 265 270 

Gln His Val Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Arg Tyr Pro Glu Val Arg 

275 280 285 

Cys Val Cys Arg Asp Asn Trp Lys Gly Ser Asn Arg Pro Val Leu Tyr 

290 295 300 

Ile Asn Met Ala Asn Tyr Ser Ile Asp Ser Ser Tyr Val Cys Ser Gly 

305 310 315 320 

Leu Val Gly Asp Thr Pro Arg Asn Asp Asp Arg Ser Ser Ser Ser Asn 

325 330 335 

Cys Arg Asp Pro Asn Asn Glu Arg Gly Ala Pro Gly Val Lys Gly Trp 

340 345 350 

Ala Phe Asp Asn Gly Asn Asp Ile Trp Met Gly Arg Thr Ile Lys Lys 

355 360 365 

- 137 - 

공개특허 10-2009-0053794

Asp Ser Arg Ser Gly Tyr Glu Thr Phe Arg Val Ile Gly Gly Trp Thr 

370 375 380 

Thr Ala Asn Ser Lys Ser Gln Ile Asn Arg Gln Val Ile Val Asp Ser 

385 390 395 400 

Asp Asn Ser Ser Gly Tyr Ser Gly Ile Phe Ser Val Glu Gly Lys Ser 

405 410 415 

Cys Ile Asn Arg Cys Phe Tyr Val Glu Leu Ile Arg Gly Arg Pro Lys 

420 425 430 

Glu Thr Arg Val Trp Trp Thr Ser Asn Ser Ile Ile Val Phe Cys Gly 

435 440 445 

Thr Ser Gly Thr Tyr Gly Thr Gly Ser Trp Pro Asp Gly Ala Asn Ile 

450 455 460 

Asn Phe Met Pro Ile 

465 

21 

1737 

DNA 


21 

agcaaaagca ggggatacaa aatgaacact caaatcctgg tattcgctct ggtggcgagc 60 

attccgacaa atgcagacaa gatctgcctt gggcatcatg ccgtgtcaaa cgggactaaa 120 

gtaaacacat taactgagag aggagtggaa gtcgttaatg caactgaaac ggtggaacga 180 

acaaacgttc ccaggatctg ctcaaaaggg aaaaggacag ttgacctcgg tcaatgtgga 240 

cttctgggaa caatcactgg gccaccccaa tgtgaccaat tcctagaatt ttcggccgac 300 

- 138 - 

공개특허 10-2009-0053794

ttaattattg agaggcgaga aggaagtgat gtctgttatc ctgggaaatt cgtgaatgaa 360 

gaagctctga ggcaaattct cagagagtca ggcggaattg acaaggagac aatgggattc 420 

acctacagcg gaataagaac taatggaaca accagtgcat gtaggagatc aggatcttca 480 

ttctatgcag agatgaaatg gctcctgtca aacacagaca atgctgcttt cccgcaaatg 540 

actaagtcat acaagaacac aaggaaagac ccagctctga taatatgggg gatccaccat 600 

tccggatcaa ctacagaaca gaccaagcta tatgggagtg gaaacaaact gataacagtt 660 

gggagttcta attaccaaca gtcctttgta ccgagtccag gagcgagacc acaagtgaat 720 

ggccaatctg gaagaattga ctttcattgg ctgatactaa accctaatga cacggtcact 780 

ttcagtttca atggggcctt catagctcca gaccgtgcaa gctttctgag agggaagtcc 840 

atgggaattc agagtgaagt acaggttgat gccaattgtg aaggagattg ctatcatagt 900 

ggagggacaa taataagtaa tttgcccttt cagaacataa atagcagggc agtaggaaaa 960 

tgtccgagat atgttaagca agagagtctg ctgttggcaa caggaatgaa gaatgttccc 1020 

gaaatcccaa agaggaggag gagaggccta tttggtgcta tagcgggttt cattgaaaat 1080 

ggatgggaag gtttgattga tgggtggtat ggcttcaggc atcaaaatgc acaaggggag 1140 

ggaactgctg cagattacaa aagcacccaa tcagcaattg atcaaataac agggaaatta 1200 

aatcggctta tagaaaaaac taaccaacag tttgagttaa tagacaacga attcactgag 1260 

gttgaaaggc aaattggcaa tgtgataaac tggaccagag attccatgac agaagtgtgg 1320 

tcctataacg ctgaactctt agtagcaatg gagaatcagc acacaattga tctggccgac 1380 

tcagaaatga acaaactgta cgaacgagtg aagagacaac tgagagagaa tgccgaagaa 1440 

gatggcactg gttgcttcga aatatttcac aagtgtgatg acgactgcat ggccagtatt 1500 

- 139 - 

공개특허 10-2009-0053794

agaaacaaca cctatgatca cagcaagtac agggaagaag caatacaaaa tagaatacag 1560 

attgacccag tcaaactaag cagcggctac aaagatgtga tactttggtt tagcttcggg 1620 

gcatcatgtt tcatacttct ggccattgca atgggccttg tcttcatatg tgtgaagaat 1680 

ggaaacatgc ggtgcactat ttgtatataa gtttggaaaa acacccttgt ttctact 1737 

22 

1465 

DNA 


22 

agcaaaagca gggtgatcga gaatgaatcc aaatcagaaa ctatttgcat tatctggagt 60 

ggcaatagca cttagtgtac tgaacttatt gataggaatc tcaaacgtcg gattgaacgt 120 

atctctacat ctaaaggaaa aaggacccaa acaggaggag aatttaacat gcacgaccat 180 

taatcaaaac aacactactg tagtagaaaa cacatatgta aataatacaa caataattac 240 

caagggaact gatttgaaaa caccaagcta tctgctgttg aacaagagcc tgtgcaatgt 300 

tgaagggtgg gtcgtgatag caaaagacaa tgcagtaaga tttggggaaa gtgaacaaat 360 

cattgttacc agggagccat atgtatcatg cgacccaaca ggatgcaaaa tgtatgcctt 420 

gcaccaaggg actaccatta ggaacaaaca ttcaaatgga acgattcatg acagaacagc 480 

tttcagaggt ctcatctcca ctccattggg cactccacca accgtaagta acagtgactt 540 

tatgtgtgtt ggatggtcaa gcacaacttg ccatgatggg attgctagga tgactatctg 600 

tatacaagga aataatgaca atgctacagc aacggtttat tacaacagaa ggctgaccac 660 

taccattaag acctgggcca gaaacattct gaggactcaa gaatcagaat gtgtgtgcca 720 

- 140 - 

공개특허 10-2009-0053794

caatggcaca tgtgcagttg taatgaccga cggatcggct agtagtcaag cctatacaaa 780 

agtaatgtat ttccacaagg gattagtagt taaggaggag gagttaaggg gatcagccag 840 

acatattgag gaatgctcct gttatggaca caatcaaaag gtgacctgtg tgtgcagaga 900 

taactggcag ggagcaaaca ggcctattat agaaattgat atgagcacat tggagcacac 960 

aagtagatac gtgtgcactg gaattctcac agacaccagc agacctgggg acaaatctag 1020 

tggtgattgt tccaatccaa taactgggag tcccggcgtt ccgggagtga agggattcgg 1080 

gtttctaaat ggggataaca catggcttgg taggaccatc agccccagat caagaagtgg 1140 

attcgaaatg ttgaaaatac ctaatgcagg tactgatccc aattctagaa tagcagaacg 1200 

acaggaaatt gtcgacaata acaattggtc aggctattcc ggaagcttta ttgactattg 1260 

gaatgataac agtgaatgct acaatccatg cttttacgta gagttaatta gaggaagacc 1320 

cgaagaggct aaatacgtat ggtgggcaag taacagtcta attgccctat gtggaagccc 1380 

attcccagtt gggtctggtt ccttccccga tggggcacaa atccaatact tttcgtaaaa 1440 

tgcaaaaaaa ctccttgttt ctact 1465 

23 

1754 

DNA 


23 

agcaaaagca ggggatacaa aatgaatact caaattttgg cattcattgc ttgtatgctg 60 

attggaacta aaggagacaa aatatgtctt gggcaccatg ctgtggcaaa tgggacaaaa 120 

gtgaacacac taacagagag gggaattgaa gtagtcaatg ccacggagac ggtggaaact 180 

gtaaatatta aaaaaatatg cactcaagga aaaaggccaa cagatctggg acaatgtgga 240 

- 141 - 

공개특허 10-2009-0053794

cttctaggaa ccctaatagg acctccccaa tgcgatcaat ttctggagtt tgacgctaat 300 

ttgataattg aacgaagaga aggaaccgat gtgtgctatc ccgggaagtt cacaaatgaa 360 

gaatcactga ggcagatcct tcgagggtca ggaggaattg ataaagagtc aatgggtttc 420 

acctatagtg gaataagaac caatggggcg acgagtgcct gcagaagatc aggttcttct 480 

ttctatgcgg agatgaagtg gttactgtcg aattcagaca atgcggcatt tccccaaatg 540 

actaagtcgt ataggaatcc caggaacaaa ccagctctga taatctgggg agtgcatcac 600 

tctggatcag ctactgagca gaccaaactc tatggaagtg gaaacaagtt gataacagta 660 

ggaagctcga aataccagca atcattcact ccaagtccgg gagcacggcc acaagtgaat 720 

ggacaatcag gaaggattga ttttcattgg ctactccttg accccaatga cacagtgacc 780 

ttcactttca atggggcatt catagcccct gacagggcaa gtttctttag aggagaatcg 840 

ctaggagtcc agagtgatgt tcctttggat tctggttgtg aaggggattg cttccacagt 900 

gggggtacga tagtcagttc cctgccattc caaaacatca accctagaac agtggggaaa 960 

tgccctcgat atgtcaaaca gacaagcctc cttttggcta caggaatgag aaacgtccca 1020 

gagaacccca agcaggccta ccggaaacgg atgaccagag gcctttttgg agcgattgct 1080 

ggattcatag agaatggatg ggaaggtctc atcgatggat ggtatggttt cagacatcaa 1140 

aatgcacaag gagaaggaac tgcagctgac tacaaaagca cccaatctgc aatagatcag 1200 

atcacaggca aattgaatcg tctgattgac aaaacaaacc agcagtttga actgatagac 1260 

aatgaattca gtgagataga acaacaaatc gggaatgtca ttaactggac acgagactca 1320 

atgactgagg tatggtcgta taatgctgag ctgttggtgg caatggagaa tcagcataca 1380 

- 142 - 

공개특허 10-2009-0053794

atagatcttg cagactcaga aatgaacaaa ctttacgaac gcgtcagaaa acaactaagg 1440 

gaaaatgctg aagaagatgg aactggatgc tttgagatat tccataagtg tgatgatcag 1500 

tgtatggaga gcataaggaa caacacttat gaccataccc aatacaggac agagtcattg 1560 

cagaatagaa tacagataga cccagtgaaa ttgagtagtg gatacaaaga cataatctta 1620 

tggtttagct tcggggcatc atgttttctt cttctagcca ttgcaatggg attggttttc 1680 

atttgcataa agaatggaaa catgcggtgc actatttgta tatagtttga gaaaaaaaca 1740 

cccttgtttc tact 1754 

24 

1453 

DNA 


24 

agcaaaagca ggtgcgagat gaatccgaat cagaagataa taacaatcgg ggtagtgaat 60 

accactctgt caacaatagc ccttctcatt ggagtgggaa acttagtttt caacacagtc 120 

atacatgaga aaataggaga ccatcaaata gtgacccatc caacaataat gacccctgaa 180 

gtaccgaact gcagtgacac tataataaca tacaataaca ctgttataaa caacataaca 240 

acaacaataa taactgaagc agaaaggcct ttcaagtctc cactaccgct gtgccccttc 300 

agaggattct tcccttttca caaggacaat gcaatacgac tgggtgaaaa caaagacgtc 360 

atagtcacaa gggagcctta tgttagctgc gataatgaca actgctggtc ctttgctctc 420 

gcacaaggag cattgctagg gactaaacat agcaatggga ccattaaaga cagaacacca 480 

tataggtctc taattcgttt cccaatagga acagctccag tactaggaaa ttacaaagag 540 

atatgcattg cttggtcgag cagcagttgc tttgacggga aagagtggat gcatgtgtgc 600 

- 143 - 

공개특허 10-2009-0053794

atgacaggga atgataatga tgcaagtgcc cagataatat atggaggaag aatgacagac 660 

tccattaaat catggaggaa ggacatacta agaacccagg agtctgaatg tcaatgcatt 720 

gacgggactt gtgttgttgc tgtcacagat ggccctgctg ctaatagtgc agatcacagg 780 

gtttactgga tacgggaggg aagaataata aagtatgaaa atgttcccaa aacaaagata 840 

caacacttag aagaatgttc ctgctatgtg gacattgatg tttactgtat atgtagggac 900 

aattggaagg gctctaacag accttggatg agaatcaaca acgagactat actggaaaca 960 

ggatatgtat gtagtaaatt tcactcagac acccccaggc cagctgaccc ttcaataatg 1020 

tcatgtgact ccccaagcaa tgtcaatgga ggacccggag tgaaggggtt tggtttcaaa 1080 

gctggcaatg atgtatggtt aggtagaaca gtgtcaacta gtggtagatc gggctttgaa 1140 

attatcaaag ttacagaagg gtggatcaac tctcctaacc atgtcaaatc aattacacaa 1200 

acactagtgt ccaacaatga ctggtcaggc tattcaggta gcttcattgt caaagccaag 1260 

gactgttttc agccctgttt ttatgttgag cttatacgag ggaggcccaa caagaatgat 1320 

gacgtctctt ggacaagtaa tagtatagtt actttctgtg gactagacaa tgaacctgga 1380 

tcgggaaatt ggccagatgg ttctaacatt gggtttatgc ccaagtaata gaaaaaagca 1440 

ccttgtttct act 1453 

25 

1733 

DNA 


25 

agcgaaagca ggggatacaa aatgaatact caaattttgg cattcattgc ttgtatgctg 60 

- 144 - 

공개특허 10-2009-0053794

attggaacta aaggagacaa aatatgtctt gggcaccatg ctgtggcaaa tgggacaaaa 120 

gtgaacacac taacagagag gggaattgaa gtagtcaatg ccacggagac ggtggaaact 180 

gtaaatatta agaaaatatg cactcaagga aaaaggccaa cagatctggg acaatgtgga 240 

cttctaggaa ccctaatagg acctccccaa tgcgatcaat ttctggagtt tgacgctaat 300 

ttgataattg aacgaagaga aggaaccgat gtgtgctatc ccgggaagtt cacaaatgaa 360 

gaatcactga ggcagatcct tcgagggtca ggaggaattg ataaagagtc aatgggtttc 420 

acctatagtg gaataagaac caatggggcg acgagtgcct gcagaagatc aggttcttct 480 

ttctatgcgg agatgaagtg gttactgtcg aattcagaca atgcggcatt tccccaaatg 540 

actaagtcgt ataggaatcc caggaacaaa ccagctctga taatctgggg agtgcatcac 600 

tctggatcag ctactgagca gaccaaactc tatggaagtg gaaacaagtt gataacagta 660 

ggaagctcga aataccagca atcattcact ccaagtccgg gagcacggcc acaagtgaat 720 

ggacaatcag gaaggattga ttttcattgg ctactccttg accccaatga cacagtgacc 780 

ttcactttca atggggcatt catagcccct gacagggcaa gtttctttag aggagaatcg 840 

ctaggagtcc agagtgatgt tcctttggat tctggttgtg aaggggattg cttccacagt 900 

gggggtacga tagtcagttc cctgccattc caaaacatca accctagaac agtggggaaa 960 

tgccctcgat atgtcaaaca gacaagcctc cttttggcta caggaatgag aaacgtccca 1020 

gagaacccca agaccagagg cctttttgga gcgattgctg gattcataga gaatggatgg 1080 

gaaggtctca tcgatggatg gtatggtttc agacatcaaa atgcacaagg agaaggaact 1140 

gcagctgact acaaaagcac ccaatctgca atagatcaga tcacaggcaa attgaatcgt 1200 

ctgattgaca aaacaaacca gcagtttgaa ctgatagaca atgaattcag tgagatagaa 1260 

- 145 - 

공개특허 10-2009-0053794

caacaaatcg ggaatgtcat taactggaca cgagactcaa tgactgaggt atggtcgtat 1320 

aatgctgagc tgttggtggc aatggagaat cagcatacaa tagatcttgc agactcagaa 1380 

atgaacaaac tttacgaacg cgtcagaaaa caactaaggg aaaatgctga agaagatgga 1440 

actggatgct ttgagatatt ccataagtgt gatgatcagt gtatggagag cataaggaac 1500 

aacacttatg accataccca atacaggaca gagtcattgc agaatagaat acagatagac 1560 

ccagtgaaat tgagtagtgg atacaaagac ataatcttat ggtttagctt cggggcatca 1620 

tgttttcttc ttctagccat tgcaatggga ttggttttca tttgcataaa gaatggaaac 1680 

atgcggtgca ctatttgtat atagtttgag aaaaaaacac ccttgtttct act 1733 

26 

1453 

DNA 


26 

agcaaaagca ggtgcgagat gaatccgaat cagaagataa taacaatcgg ggtagtgaat 60 

accactctgt caacaatagc ccttctcatt ggagtgggaa acttagtttt caacacagtc 120 

atacatgaga aaataggaga ccatcaaata gtgacccatc caacaataat gacccctgaa 180 

gtaccgaact gcagtgacac tataataaca tacaataaca ctgttataaa caacataaca 240 

acaacaataa taactgaagc agaaaggcct ttcaagtctc cactaccgct gtgccccttc 300 

agaggattct tcccttttca caaggacaat gcaatacgac tgggtgaaaa caaagacgtc 360 

atagtcacaa gggagcctta tgttagctgc gataatgaca actgctggtc ctttgctctc 420 

gcacaaggag cattgctagg gactaaacat agcaatggga ccattaaaga cagaacacca 480 

- 146 - 

공개특허 10-2009-0053794

tataggtctc taattcgttt cccaatagga acagctccag tactaggaaa ttacaaagag 540 

atatgcattg cttggtcgag cagcagttgc tttgacggga aagagtggat gcatgtgtgc 600 

atgacaggga atgataatga tgcaagtgcc cagataatat atggaggaag aatgacagac 660 

tccattaaat catggaggaa ggacatacta agaacccagg agtctgaatg tcaatgcatt 720 

gacgggactt gtgttgttgc tgtcacagat ggccctgctg ctaatagtgc agatcacagg 780 

gtttactgga tacgggaggg aagaataata aagtatgaaa atgttcccaa aacaaagata 840 

caacacttag aagaatgttc ctgctatgtg gacattgatg tttactgtat atgtagggac 900 

aattggaagg gctctaacag accttggatg agaatcaaca acgagactat actggaaaca 960 

ggatatgtat gtagtaaatt tcactcagac acccccaggc cagctgaccc ttcaataatg 1020 

tcatgtgact ccccaagcaa tgtcaatgga ggacccggag tgaaggggtt tggtttcaaa 1080 

gctggcaatg atgtatggtt aggtagaaca gtgtcaacta gtggtagatc gggctttgaa 1140 

attatcaaag ttacagaagg gtggatcaac tctcctaacc atgtcaaatc aattacacaa 1200 

acactagtgt ccaacaatga ctggtcaggc tattcaggta gcttcattgt caaagccaag 1260 

gactgttttc agccctgttt ttatgttgag cttatacgag ggaggcccaa caagaatgat 1320 

gacgtctctt ggacaagtaa tagtatagtt actttctgtg gactagacaa tgaacctgga 1380 

tcgggaaatt ggccagatgg ttctaacatt gggtttatgc ccaagtaata gaaaaaagca 1440 

ccttgtttct act 1453 

27 

562 

PRT 


- 147 - 

공개특허 10-2009-0053794

27 

Met Asn Thr Gln Ile Leu Val Phe Ala Leu Val Ala Ser Ile Pro Thr 

1 5 10 15 

Asn Ala Asp Lys Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ser Asn Gly Thr 

20 25 30 

Lys Val Asn Thr Leu Thr Glu Arg Gly Val Glu Val Val Asn Ala Thr 

35 40 45 

Glu Thr Val Glu Arg Thr Asn Val Pro Arg Ile Cys Ser Lys Gly Lys 

50 55 60 

Arg Thr Val Asp Leu Gly Gln Cys Gly Leu Leu Gly Thr Ile Thr Gly 

65 70 75 80 

Pro Pro Gln Cys Asp Gln Phe Leu Glu Phe Ser Ala Asp Leu Ile Ile 

85 90 95 

Glu Arg Arg Glu Gly Ser Asp Val Cys Tyr Pro Gly Lys Phe Val Asn 

100 105 110 

Glu Glu Ala Leu Arg Gln Ile Leu Arg Glu Ser Gly Gly Ile Asp Lys 


Glu Thr Met Gly Phe Thr Tyr Ser Gly Ile Arg Thr Asn Gly Thr Thr 

130 135 140 

Ser Ala Cys Arg Arg Ser Gly Ser Ser Phe Tyr Ala Glu Met Lys Trp 

145 150 155 160 

Leu Leu Ser Asn Thr Asp Asn Ala Ala Phe Pro Gln Met Thr Lys Ser 

165 170 175 

Tyr Lys Asn Thr Arg Lys Asp Pro Ala Leu Ile Ile Trp Gly Ile His 

- 148 - 

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His Ser Gly Ser Thr Thr Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gly Ser Gly Asn 


Lys Leu Ile Thr Val Gly Ser Ser Asn Tyr Gln Gln Ser Phe Val Pro 

210 215 220 

Ser Pro Gly Ala Arg Pro Gln Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg Ile Asp 

225 230 235 240 

Phe His Trp Leu Ile Leu Asn Pro Asn Asp Thr Val Thr Phe Ser Phe 

245 250 255 

Asn Gly Ala Phe Ile Ala Pro Asp Arg Ala Ser Phe Leu Arg Gly Lys 

260 265 270 

Ser Met Gly Ile Gln Ser Glu Val Gln Val Asp Ala Asn Cys Glu Gly 

275 280 285 

Asp Cys Tyr His Ser Gly Gly Thr Ile Ile Ser Asn Leu Pro Phe Gln 

290 295 300 

Asn Ile Asn Ser Arg Ala Val Gly Lys Cys Pro Arg Tyr Val Lys Gln 

305 310 315 320 

Glu Ser Leu Leu Leu Ala Thr Gly Met Lys Asn Val Pro Glu Ile Pro 

325 330 335 

Lys Arg Arg Arg Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 

340 345 350 

Asn Gly Trp Glu Gly Leu Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln 

355 360 365 

Asn Ala Gln Gly Glu Gly Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ser Thr Gln Ser 

- 149 - 

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370 375 380 

Ala Ile Asp Gln Ile Thr Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile Glu Lys Thr 

385 390 395 400 

Asn Gln Gln Phe Glu Leu Ile Asp Asn Glu Phe Thr Glu Val Glu Arg 

405 410 415 

Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ser Met Thr Glu Val 

420 425 430 

Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 

435 440 445 

Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Lys 

450 455 460 

Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Glu Asp Gly Thr Gly Cys Phe Glu 

465 470 475 480 

Ile Phe His Lys Cys Asp Asp Asp Cys Met Ala Ser Ile Arg Asn Asn 

485 490 495 

Thr Tyr Asp His Ser Lys Tyr Arg Glu Glu Ala Ile Gln Asn Arg Ile 

500 505 510 

Gln Ile Asp Pro Val Lys Leu Ser Ser Gly Tyr Lys Asp Val Ile Leu 

515 520 525 

Trp Phe Ser Phe Gly Ala Ser Cys Phe Ile Leu Leu Ala Ile Ala Met 

530 535 540 

Gly Leu Val Phe Ile Cys Val Lys Asn Gly Asn Met Arg Cys Thr Ile 

545 550 555 560 

Cys Ile 

- 150 - 

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28 

471 

PRT 


28 

Met Asn Pro Asn Gln Lys Leu Phe Ala Leu Ser Gly Val Ala Ile Ala 

1 5 10 15 

Leu Ser Val Leu Asn Leu Leu Ile Gly Ile Ser Asn Val Gly Leu Asn 

20 25 30 

Val Ser Leu His Leu Lys Glu Lys Gly Pro Lys Gln Glu Glu Asn Leu 

35 40 45 

Thr Cys Thr Thr Ile Asn Gln Asn Asn Thr Thr Val Val Glu Asn Thr 

50 55 60 

Tyr Val Asn Asn Thr Thr Ile Ile Thr Lys Gly Thr Asp Leu Lys Thr 

65 70 75 80 

Pro Ser Tyr Leu Leu Leu Asn Lys Ser Leu Cys Asn Val Glu Gly Trp 

85 90 95 

Val Val Ile Ala Lys Asp Asn Ala Val Arg Phe Gly Glu Ser Glu Gln 

100 105 110 

Ile Ile Val Thr Arg Glu Pro Tyr Val Ser Cys Asp Pro Thr Gly Cys 


Lys Met Tyr Ala Leu His Gln Gly Thr Thr Ile Arg Asn Lys His Ser 

130 135 140 

Asn Gly Thr Ile His Asp Arg Thr Ala Phe Arg Gly Leu Ile Ser Thr 

- 151 - 

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145 150 155 160 

Pro Leu Gly Thr Pro Pro Thr Val Ser Asn Ser Asp Phe Met Cys Val 

165 170 175 

Gly Trp Ser Ser Thr Thr Cys His Asp Gly Ile Ala Arg Met Thr Ile 


Cys Ile Gln Gly Asn Asn Asp Asn Ala Thr Ala Thr Val Tyr Tyr Asn 


Arg Arg Leu Thr Thr Thr Ile Lys Thr Trp Ala Arg Asn Ile Leu Arg 

210 215 220 

Thr Gln Glu Ser Glu Cys Val Cys His Asn Gly Thr Cys Ala Val Val 

225 230 235 240 

Met Thr Asp Gly Ser Ala Ser Ser Gln Ala Tyr Thr Lys Val Met Tyr 

245 250 255 

Phe His Lys Gly Leu Val Val Lys Glu Glu Glu Leu Arg Gly Ser Ala 

260 265 270 

Arg His Ile Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Gly His Asn Gln Lys Val Thr 

275 280 285 

Cys Val Cys Arg Asp Asn Trp Gln Gly Ala Asn Arg Pro Ile Ile Glu 

290 295 300 

Ile Asp Met Ser Thr Leu Glu His Thr Ser Arg Tyr Val Cys Thr Gly 

305 310 315 320 

Ile Leu Thr Asp Thr Ser Arg Pro Gly Asp Lys Ser Ser Gly Asp Cys 

325 330 335 

Ser Asn Pro Ile Thr Gly Ser Pro Gly Val Pro Gly Val Lys Gly Phe 

340 345 350 

- 152 - 

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Gly Phe Leu Asn Gly Asp Asn Thr Trp Leu Gly Arg Thr Ile Ser Pro 

355 360 365 

Arg Ser Arg Ser Gly Phe Glu Met Leu Lys Ile Pro Asn Ala Gly Thr 

370 375 380 

Asp Pro Asn Ser Arg Ile Ala Glu Arg Gln Glu Ile Val Asp Asn Asn 

385 390 395 400 

Asn Trp Ser Gly Tyr Ser Gly Ser Phe Ile Asp Tyr Trp Asn Asp Asn 

405 410 415 

Ser Glu Cys Tyr Asn Pro Cys Phe Tyr Val Glu Leu Ile Arg Gly Arg 

420 425 430 

Pro Glu Glu Ala Lys Tyr Val Trp Trp Ala Ser Asn Ser Leu Ile Ala 

435 440 445 

Leu Cys Gly Ser Pro Phe Pro Val Gly Ser Gly Ser Phe Pro Asp Gly 

450 455 460 

Ala Gln Ile Gln Tyr Phe Ser 

465 470 

29 

567 

PRT 


29 

Met Asn Thr Gln Ile Leu Ala Phe Ile Ala Cys Met Leu Ile Gly Thr 

1 5 10 15 

Lys Gly Asp Lys Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ala Asn Gly Thr 

20 25 30 

- 153 - 

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Lys Val Asn Thr Leu Thr Glu Arg Gly Ile Glu Val Val Asn Ala Thr 

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Glu Thr Val Glu Thr Val Asn Ile Lys Lys Ile Cys Thr Gln Gly Lys 

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Arg Pro Thr Asp Leu Gly Gln Cys Gly Leu Leu Gly Thr Leu Ile Gly 

65 70 75 80 

Pro Pro Gln Cys Asp Gln Phe Leu Glu Phe Asp Ala Asn Leu Ile Ile 

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Glu Arg Arg Glu Gly Thr Asp Val Cys Tyr Pro Gly Lys Phe Thr Asn 

100 105 110 

Glu Glu Ser Leu Arg Gln Ile Leu Arg Gly Ser Gly Gly Ile Asp Lys 


Glu Ser Met Gly Phe Thr Tyr Ser Gly Ile Arg Thr Asn Gly Ala Thr 

130 135 140 


145 150 155 160 

Leu Leu Ser Asn Ser Asp Asn Ala Ala Phe Pro Gln Met Thr Lys Ser 

165 170 175 

Tyr Arg Asn Pro Arg Asn Lys Pro Ala Leu Ile Ile Trp Gly Val His 


His Ser Gly Ser Ala Thr Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gly Ser Gly Asn 


Lys Leu Ile Thr Val Gly Ser Ser Lys Tyr Gln Gln Ser Phe Thr Pro 

- 154 - 

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210 215 220 


225 230 235 240 

Phe His Trp Leu Leu Leu Asp Pro Asn Asp Thr Val Thr Phe Thr Phe 

245 250 255 

Asn Gly Ala Phe Ile Ala Pro Asp Arg Ala Ser Phe Phe Arg Gly Glu 

260 265 270 

Ser Leu Gly Val Gln Ser Asp Val Pro Leu Asp Ser Gly Cys Glu Gly 

275 280 285 

Asp Cys Phe His Ser Gly Gly Thr Ile Val Ser Ser Leu Pro Phe Gln 

290 295 300 

Asn Ile Asn Pro Arg Thr Val Gly Lys Cys Pro Arg Tyr Val Lys Gln 

305 310 315 320 

Thr Ser Leu Leu Leu Ala Thr Gly Met Arg Asn Val Pro Glu Asn Pro 

325 330 335 

Lys Gln Ala Tyr Arg Lys Arg Met Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile 

340 345 350 

Ala Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Leu Ile Asp Gly Trp Tyr 

355 360 365 

Gly Phe Arg His Gln Asn Ala Gln Gly Glu Gly Thr Ala Ala Asp Tyr 

370 375 380 

Lys Ser Thr Gln Ser Ala Ile Asp Gln Ile Thr Gly Lys Leu Asn Arg 

385 390 395 400 

Leu Ile Asp Lys Thr Asn Gln Gln Phe Glu Leu Ile Asp Asn Glu Phe 

405 410 415 

- 155 - 

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Ser Glu Ile Glu Gln Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp 

420 425 430 

Ser Met Thr Glu Val Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met 

435 440 445 

Glu Asn Gln His Thr Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu 

450 455 460 

Tyr Glu Arg Val Arg Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Glu Asp Gly 

465 470 475 480 

Thr Gly Cys Phe Glu Ile Phe His Lys Cys Asp Asp Gln Cys Met Glu 

485 490 495 

Ser Ile Arg Asn Asn Thr Tyr Asp His Thr Gln Tyr Arg Thr Glu Ser 

500 505 510 

Leu Gln Asn Arg Ile Gln Ile Asp Pro Val Lys Leu Ser Ser Gly Tyr 

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Lys Asp Ile Ile Leu Trp Phe Ser Phe Gly Ala Ser Cys Phe Leu Leu 

530 535 540 

Leu Ala Ile Ala Met Gly Leu Val Phe Ile Cys Ile Lys Asn Gly Asn 

545 550 555 560 

Met Arg Cys Thr Ile Cys Ile 

565 

30 

469 

PRT 


30 

- 156 - 

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Met Asn Pro Asn Gln Lys Ile Ile Thr Ile Gly Val Val Asn Thr Thr 

1 5 10 15 

Leu Ser Thr Ile Ala Leu Leu Ile Gly Val Gly Asn Leu Val Phe Asn 

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Thr Ile Met Thr Pro Glu Val Pro Asn Cys Ser Asp Thr Ile Ile Thr 

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Tyr Asn Asn Thr Val Ile Asn Asn Ile Thr Thr Thr Ile Ile Thr Glu 

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Phe Phe Pro Phe His Lys Asp Asn Ala Ile Arg Leu Gly Glu Asn Lys 

100 105 110 

Asp Val Ile Val Thr Arg Glu Pro Tyr Val Ser Cys Asp Asn Asp Asn 


Cys Trp Ser Phe Ala Leu Ala Gln Gly Ala Leu Leu Gly Thr Lys His 

130 135 140 

Ser Asn Gly Thr Ile Lys Asp Arg Thr Pro Tyr Arg Ser Leu Ile Arg 

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Phe Pro Ile Gly Thr Ala Pro Val Leu Gly Asn Tyr Lys Glu Ile Cys 

165 170 175 

Ile Ala Trp Ser Ser Ser Ser Cys Phe Asp Gly Lys Glu Trp Met His 


- 157 - 

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Val Cys Met Thr Gly Asn Asp Asn Asp Ala Ser Ala Gln Ile Ile Tyr 


Gly Gly Arg Met Thr Asp Ser Ile Lys Ser Trp Arg Lys Asp Ile Leu 

210 215 220 

Arg Thr Gln Glu Ser Glu Cys Gln Cys Ile Asp Gly Thr Cys Val Val 

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Ala Val Thr Asp Gly Pro Ala Ala Asn Ser Ala Asp His Arg Val Tyr 

245 250 255 

Trp Ile Arg Glu Gly Arg Ile Ile Lys Tyr Glu Asn Val Pro Lys Thr 

260 265 270 

Lys Ile Gln His Leu Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Val Asp Ile Asp Val 

275 280 285 

Tyr Cys Ile Cys Arg Asp Asn Trp Lys Gly Ser Asn Arg Pro Trp Met 

290 295 300 

Arg Ile Asn Asn Glu Thr Ile Leu Glu Thr Gly Tyr Val Cys Ser Lys 

305 310 315 320 

Phe His Ser Asp Thr Pro Arg Pro Ala Asp Pro Ser Ile Met Ser Cys 

325 330 335 

Asp Ser Pro Ser Asn Val Asn Gly Gly Pro Gly Val Lys Gly Phe Gly 

340 345 350 

Phe Lys Ala Gly Asn Asp Val Trp Leu Gly Arg Thr Val Ser Thr Ser 

355 360 365 

Gly Arg Ser Gly Phe Glu Ile Ile Lys Val Thr Glu Gly Trp Ile Asn 

370 375 380 

- 158 - 

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Ser Pro Asn His Val Lys Ser Ile Thr Gln Thr Leu Val Ser Asn Asn 

385 390 395 400 

Asp Trp Ser Gly Tyr Ser Gly Ser Phe Ile Val Lys Ala Lys Asp Cys 

405 410 415 

Phe Gln Pro Cys Phe Tyr Val Glu Leu Ile Arg Gly Arg Pro Asn Lys 

420 425 430 

Asn Asp Asp Val Ser Trp Thr Ser Asn Ser Ile Val Thr Phe Cys Gly 

435 440 445 

Leu Asp Asn Glu Pro Gly Ser Gly Asn Trp Pro Asp Gly Ser Asn Ile 

450 455 460 

Gly Phe Met Pro Lys 

465 

31 

560 

PRT 


31 

Met Asn Thr Gln Ile Leu Ala Phe Ile Ala Cys Met Leu Ile Gly Thr 

1 5 10 15 

Lys Gly Asp Lys Ile Cys Leu Gly His His Ala Val Ala Asn Gly Thr 

20 25 30 

Lys Val Asn Thr Leu Thr Glu Arg Gly Ile Glu Val Val Asn Ala Thr 

35 40 45 

Glu Thr Val Glu Thr Val Asn Ile Lys Lys Ile Cys Thr Gln Gly Lys 

50 55 60 

- 159 - 

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Arg Pro Thr Asp Leu Gly Gln Cys Gly Leu Leu Gly Thr Leu Ile Gly 

65 70 75 80 

Pro Pro Gln Cys Asp Gln Phe Leu Glu Phe Asp Ala Asn Leu Ile Ile 

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Glu Arg Arg Glu Gly Thr Asp Val Cys Tyr Pro Gly Lys Phe Thr Asn 

100 105 110 

Glu Glu Ser Leu Arg Gln Ile Leu Arg Gly Ser Gly Gly Ile Asp Lys 


Glu Ser Met Gly Phe Thr Tyr Ser Gly Ile Arg Thr Asn Gly Ala Thr 

130 135 140 


145 150 155 160 

Leu Leu Ser Asn Ser Asp Asn Ala Ala Phe Pro Gln Met Thr Lys Ser 

165 170 175 

Tyr Arg Asn Pro Arg Asn Lys Pro Ala Leu Ile Ile Trp Gly Val His 


His Ser Gly Ser Ala Thr Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gly Ser Gly Asn 


Lys Leu Ile Thr Val Gly Ser Ser Lys Tyr Gln Gln Ser Phe Thr Pro 

210 215 220 


225 230 235 240 

Phe His Trp Leu Leu Leu Asp Pro Asn Asp Thr Val Thr Phe Thr Phe 

245 250 255 

- 160 - 

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Asn Gly Ala Phe Ile Ala Pro Asp Arg Ala Ser Phe Phe Arg Gly Glu 

260 265 270 

Ser Leu Gly Val Gln Ser Asp Val Pro Leu Asp Ser Gly Cys Glu Gly 

275 280 285 

Asp Cys Phe His Ser Gly Gly Thr Ile Val Ser Ser Leu Pro Phe Gln 

290 295 300 

Asn Ile Asn Pro Arg Thr Val Gly Lys Cys Pro Arg Tyr Val Lys Gln 

305 310 315 320 

Thr Ser Leu Leu Leu Ala Thr Gly Met Arg Asn Val Pro Glu Asn Pro 

325 330 335 

Lys Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn Gly 

340 345 350 

Trp Glu Gly Leu Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln Asn Ala 

355 360 365 

Gln Gly Glu Gly Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ser Thr Gln Ser Ala Ile 

370 375 380 

Asp Gln Ile Thr Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile Asp Lys Thr Asn Gln 

385 390 395 400 

Gln Phe Glu Leu Ile Asp Asn Glu Phe Ser Glu Ile Glu Gln Gln Ile 

405 410 415 

Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ser Met Thr Glu Val Trp Ser 

420 425 430 

Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr Ile Asp 

435 440 445 

- 161 - 

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Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg Lys Gln 

450 455 460 

Leu Arg Glu Asn Ala Glu Glu Asp Gly Thr Gly Cys Phe Glu Ile Phe 

465 470 475 480 

His Lys Cys Asp Asp Gln Cys Met Glu Ser Ile Arg Asn Asn Thr Tyr 

485 490 495 

Asp His Thr Gln Tyr Arg Thr Glu Ser Leu Gln Asn Arg Ile Gln Ile 

500 505 510 

Asp Pro Val Lys Leu Ser Ser Gly Tyr Lys Asp Ile Ile Leu Trp Phe 

515 520 525 

Ser Phe Gly Ala Ser Cys Phe Leu Leu Leu Ala Ile Ala Met Gly Leu 

530 535 540 

Val Phe Ile Cys Ile Lys Asn Gly Asn Met Arg Cys Thr Ile Cys Ile 

545 550 555 560 

32 

469 

PRT 


32 

Met Asn Pro Asn Gln Lys Ile Ile Thr Ile Gly Val Val Asn Thr Thr 

1 5 10 15 

Leu Ser Thr Ile Ala Leu Leu Ile Gly Val Gly Asn Leu Val Phe Asn 

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Thr Val Ile His Glu Lys Ile Gly Asp His Gln Ile Val Thr His Pro 

35 40 45 

- 162 - 

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Thr Ile Met Thr Pro Glu Val Pro Asn Cys Ser Asp Thr Ile Ile Thr 

50 55 60 

Tyr Asn Asn Thr Val Ile Asn Asn Ile Thr Thr Thr Ile Ile Thr Glu 

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Ala Glu Arg Pro Phe Lys Ser Pro Leu Pro Leu Cys Pro Phe Arg Gly 

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Phe Phe Pro Phe His Lys Asp Asn Ala Ile Arg Leu Gly Glu Asn Lys 

100 105 110 

Asp Val Ile Val Thr Arg Glu Pro Tyr Val Ser Cys Asp Asn Asp Asn 


Cys Trp Ser Phe Ala Leu Ala Gln Gly Ala Leu Leu Gly Thr Lys His 

130 135 140 

Ser Asn Gly Thr Ile Lys Asp Arg Thr Pro Tyr Arg Ser Leu Ile Arg 

145 150 155 160 

Phe Pro Ile Gly Thr Ala Pro Val Leu Gly Asn Tyr Lys Glu Ile Cys 

165 170 175 

Ile Ala Trp Ser Ser Ser Ser Cys Phe Asp Gly Lys Glu Trp Met His 


Val Cys Met Thr Gly Asn Asp Asn Asp Ala Ser Ala Gln Ile Ile Tyr 


Gly Gly Arg Met Thr Asp Ser Ile Lys Ser Trp Arg Lys Asp Ile Leu 

210 215 220 

Arg Thr Gln Glu Ser Glu Cys Gln Cys Ile Asp Gly Thr Cys Val Val 

225 230 235 240 

- 163 - 

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Ala Val Thr Asp Gly Pro Ala Ala Asn Ser Ala Asp His Arg Val Tyr 

245 250 255 

Trp Ile Arg Glu Gly Arg Ile Ile Lys Tyr Glu Asn Val Pro Lys Thr 

260 265 270 

Lys Ile Gln His Leu Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Val Asp Ile Asp Val 

275 280 285 

Tyr Cys Ile Cys Arg Asp Asn Trp Lys Gly Ser Asn Arg Pro Trp Met 

290 295 300 

Arg Ile Asn Asn Glu Thr Ile Leu Glu Thr Gly Tyr Val Cys Ser Lys 

305 310 315 320 

Phe His Ser Asp Thr Pro Arg Pro Ala Asp Pro Ser Ile Met Ser Cys 

325 330 335 

Asp Ser Pro Ser Asn Val Asn Gly Gly Pro Gly Val Lys Gly Phe Gly 

340 345 350 

Phe Lys Ala Gly Asn Asp Val Trp Leu Gly Arg Thr Val Ser Thr Ser 

355 360 365 

Gly Arg Ser Gly Phe Glu Ile Ile Lys Val Thr Glu Gly Trp Ile Asn 

370 375 380 

Ser Pro Asn His Val Lys Ser Ile Thr Gln Thr Leu Val Ser Asn Asn 

385 390 395 400 

Asp Trp Ser Gly Tyr Ser Gly Ser Phe Ile Val Lys Ala Lys Asp Cys 

405 410 415 

Phe Gln Pro Cys Phe Tyr Val Glu Leu Ile Arg Gly Arg Pro Asn Lys 

420 425 430 

- 164 - 

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Asn Asp Asp Val Ser Trp Thr Ser Asn Ser Ile Val Thr Phe Cys Gly 

435 440 445 

Leu Asp Asn Glu Pro Gly Ser Gly Asn Trp Pro Asp Gly Ser Asn Ile 

450 455 460 

Gly Phe Met Pro Lys 

465 

33 

1743 

DNA 


33 

agcaaaagca ggggaaaatg attgcagtca ttataatagc ggtactggca acggccggaa 60 

aatcagacaa gatctgcatt gggtatcatg ccaacaattc aacaacacaa gtggatacga 120 

tacttgagaa gaatgtaacc gtcacacact cagttgaatt gctggagaac caaaaagaag 180 

aaagattctg caagatcttg aacaaggccc ctctcgattt aagaggatgt accatagagg 240 

gttggatctt ggggaatccc caatgcgacc tattgcttgg tgatcaaagc tggtcatata 300 

tagtggaaag acctacagct caaaatggga tctgctaccc aggaattttg aatgaagtag 360 

aagaactgaa ggcacttatt ggatcaggag aaagagtgga gagatttgaa atgtttccca 420 

aaagtacatg ggcaggagta gacaccagca gtggggtaac aaaggcttgc ccttatacta 480 

gtggttcgtc tttctacaga aacctcctat ggataataaa aaccaagtcc gcagcatatc 540 

cagtaattaa gggaacctac aataacactg gaagccagcc aatcctctat ttctggggtg 600 

tgcaccatcc tcctgacacc aatgagcaaa acactttgta tggctctggt gatcgatatg 660 

- 165 - 

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tcaggatggg aactgaaagc atgaattttg ccaagagccc agaaattgcg gcaaggcctg 720 

ctgtgaatgg tcaaagaggc agaattgatt attactggtc tgttttaaag ccgggggaaa 780 

ccttgaatgt ggaatctaat ggaaatctaa tcgccccttg gtatgcatac aaatttgtca 840 

gcaccaatag taaaggagcc gtcttcaagt caaatttacc aatcgagaac tgtgatgcca 900 

catgccagac tattgcagga gtcttaagaa ccaataaaac atttcagaat gtaagccctc 960 

tgtggatagg agaatgcccc aaatatgtga aaagtgaaag tttgaggctt gcaactggac 1020 

taagaaatat tccacagatt gagactagag gacttttcgg agctatcgca gggtttattg 1080 

aaggaggatg gactggaatg atagatgggt ggtatggcta tcaccatgaa aattctcaag 1140 

gctcagggta tgcggcagac agagaaagca ctcaaagggc tatagacgga attacaaata 1200 

aggtcaattc cattatagac aaaatgaaca cacaattcga agctatagac cacgaattct 1260 

caaatttgga gagaagaatt gacagtctga acaaaagaat ggaagatgga tttctggacg 1320 

tttggacata caatgctgaa ctgttggttc ttcttgaaaa cgaaaggaca ctagacctac 1380 

atgacgcgaa tgtgaagaac ctgtatgaaa aggtcaaatc acaactacgg gacaatgcta 1440 

atgatctagg aaatggatgc tttgaatttt ggcataagtg tgacaatgaa tgcatagagt 1500 

ctgtcaaaaa tggtacctat gactatccca aatatcagga tgaaagcaaa ttgaacaggc 1560 

aggaaataga atcggtgaag ctggagaacc ttggtgtgta tcaaatcctc gccatttata 1620 

gtacggtatc gagcagtcta gtcttggtag ggctgattat agcaatgggt ctttggatgt 1680 

gttcaaatgg ttcaatgcaa tgcaggatat gtatataatt aagaaaaaca cccttgttct 1740 

act 1743 

34 

- 166 - 

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1460 

DNA 


34 

agcaaaagca gggtcaagat gaatccaaat cagaagattc tatgcacatc tgctactgcc 60 

attgcaatag gcacaattgc tgtattaata ggaatagcaa acctgggttt gaacatagga 120 

ctacacctga aaccgagctg caactgctcc aaccctcctc ctgaaacaac aaatgtaagc 180 

caaacaataa taaacaatta ctacaatgaa acaaatgtta cccaaataag taacacaaac 240 

attcaacata tggggggaac cgaaaaggac ttcaacaatc tgactaaagg gctctgcaca 300 

ataaattcat ggcatatatt cggaaaggac aatgctataa gaatagggga gaactctgat 360 

gttttagtca caagagagcc atatgtttct tgtgatccag atgaatgcag attctatgct 420 

ctcagccaag gaacaacaat acggggaaag cactcaaatg gaacaataca cgatagatcc 480 

caataccgtg ctttagtgag ctggccttta tcatcaccac ccactgtgta caataccaga 540 

gtagaatgca ttggatggtc cagtacaagc tgccatgatg ggaaagcacg aatgtctata 600 

tgtgtctcag gtcccaacaa caatgcatca gcagtgattt ggtacaaagg gcggcctatc 660 

acggaaatca atacgtgggc ccgaaacata ttgagaaccc aagaatctga gtgtgtatgc 720 

cacaatggaa tatgtccagt agtgttcact gacggttctg ccaccggtcc agcagaaact 780 

aggatatact atttcaaaga ggggaaaatc ctcaaatggg agccactaac tggaaccgcc 840 

aagcacattg aagaatgctc ttgctatggg aaagactcag aaataacgtg cacatgtaga 900 

gacaattggc aaggctcgaa tagaccagta atacaaataa accccacaat gatgactcac 960 

actagtcaat acatatgcag ccctgtcctc acagacaatc cacgccccaa tgaccccacg 1020 

- 167 - 

공개특허 10-2009-0053794

gtaggcaagt gtaatgatcc ttatccagga aacaacaata atggagtcaa aggattctca 1080 

tatttagatg gtgacaatac atggctagga agaacgataa gcacagcctc taggtctggg 1140 

tatgaaatgc tgaaagtgcc taatgcattg acagatgata gatcaaaacc tactcaaggt 1200 

cagacaattg tattaaacac agactggagt ggttacagtg ggtctttcat tgattactgg 1260 

gcaaaagggg agtgctatag agcatgcttc tacgttgagc tgatccgtgg aaggccaaaa 1320 

gaggacaaag tgtggtggac cagtaatagt atagtgtcga tgtgttccag cacagagttc 1380 

cttggacaat ggaactggcc agatggggct aaaatagagt acttcctcta agatgtagaa 1440 

aaaagaccct tgtttctact 1460 

35 

1747 

DNA 


35 

agcaaaagca ggggaaaatg attgcaatca ttgtaatagc aatactggca gcagccggaa 60 

aatcagacaa gatctgcatt gggtatcatg ccaacaattc aacaacacag gtagatacga 120 

tacttgagaa gaatgtgact gtcacacact caattgaatt gctggaaaat cagaaggaag 180 

aaagattctg caagatattg aacaaggccc ctctcgactt aagggaatgt accatagagg 240 

gttggatctt ggggaatccc caatgcgacc tattgcttgg tgatcaaagc tggtcataca 300 

ttgtggaaag acctactgct caaaacggga tctgctaccc aggaacctta aatgaggtag 360 

aagaactgag ggcacttatt ggatcaggag aaagggtaga gagatttgag atgtttcccc 420 

aaagcacctg gcaaggagtt gacaccaaca gtggaacaac aagatcctgc ccttattcta 480 

ctggtgatcc gtctttctac agaaacctcc tatggataat aaaaaccaag acagcagaat 540 

- 168 - 

공개특허 10-2009-0053794

atccagtaat taagggaatt tacaacaaca ctggaaccca gccaatcctc tatttctggg 600 

gtgtgcatca tcctcctaac accgacgagc aagatactct gtatggctct ggtgatcgat 660 

acgttagaat gggaactgaa agcatgaatt ttgccaagag tccggaaatt gcggcaaggc 720 

ctgctgtgaa tggacaaaga ggcagaattg attattattg gtcggtttta aaaccagggg 780 

aaaccttgaa tgtggaatct aatggaaatc taatcgcccc ttggtatgca tacaaatttg 840 

tcaacacaaa tagtaaagga gccgtcttca ggtcagattt accaatcgag aactgcgatg 900 

ccacatgcca gactattgca ggggttctaa ggaccaataa aacatttcag aatgtgagtc 960 

ccctgtggat aggagaatgt cccaaatacg tgaaaagtga aagtctgagg cttgcaactg 1020 

gactaagaaa tgttccacag attgaaacta gaggactctt cggagctatt gcagggttta 1080 

ttgaaggagg atggactggg atgatagatg ggtggtatgg ctatcaccat gaaaattctc 1140 

aagggtcagg atatgcagcg gacagagaaa gcactcaaaa ggctgtaaac agaattacaa 1200 

ataaggtcaa ttccatcatc aacaaaatga acacacaatt tgaagctgtc gatcacgaat 1260 

tttcaaatct ggagaggaga atcgacaatc tgaacaaaag aatgcaagat ggatttctgg 1320 

atgtttggac atacaatgct gaactgttgg ttcttcttga aaacgaaaga acactagaca 1380 

tgcatgacgc aaatgtgaag aacctacatg aaaaggtcaa atcacaacta agggacaatg 1440 

ctaacgatct agggaatggt tgctttgaat tttggcataa gtgtgacaat gaatgcatag 1500 

agtctgtcaa aaatggtaca tatgactatc ccaaatacca gactgaaagc aaattaaaca 1560 

ggctaaaaat agaatcagta aagctagaga accttggtgt gtatcaaatt cttgccattt 1620 

atagtacggt atcgagcagc ctagtgttgg tagggctgat catggcaatg ggtctttgga 1680 

- 169 - 

공개특허 10-2009-0053794

tgtgttcaaa tggttcaatg cagtgcaatg tgtgtatatg attaagaaaa acacccttgt 1740 

ttctact 1747 

36 

1401 

DNA 


36 

agcaaaagca ggagtttaac atgaatccaa atcagaagat aataaccatt gggtcaatct 60 

gtatggtagt tggaataatc agcttgatgt tacaaattgg aaacataata tcaatatggg 120 

ttagccacat aattcagact gggcatccaa accagcctgg gccatgcaat caaagcatca 180 

atttttacac tgagcaggct gcagcttcag tgacattagc gggtaattcc tctctctgcc 240 

ctattagtgg atgggctata tacagtaaag acaatagtat aagaattggt tccaaagggg 300 

atgtgtttgt tatgagagaa ccattcgttt catgctccca tttggaatgc agaacctttt 360 

tcttgactca aggagcccta ttgaatgaca agcattctaa tgggaccgtt aaagacagaa 420 

gcccctatag aactttaatg agctgtcctg ttggtgaggc tccttcccca tacaactcaa 480 



cagacaccat caagagttgg aggaacaaca tactgaggac acaagagtct gaatgtgcat 660 


acaagatttt caagatagag aaggggaaag tagtcaaatc agttgagttg aacgccccta 780 


gggataattg gcatggctcg aaccgaccgt gggtgtcttt caatcagaat ctggagtatc 900 

- 170 - 

공개특허 10-2009-0053794

aaataggata tatatgcagt ggggttttcg gagacagtcc acgccccaat gatggaacag 960 

gcagttgcgg tccagtgtct cttaacggag agtatggagt aaaagggttt tcatttaagt 1020 

acggtgatgg tgtttggatc gggagaacca aaagcactag ttccaggagc gggtttgaaa 1080 

tgatttggga tccaaatggg tggaccgaaa cagatagtaa cttctcattg aagcaagaca 1140 

tcatagcaat aactgattgg tcaggataca gcgggagttt tgtccaacat ccagaactga 1200 

caggattaaa ttgcatgagg ccttgcttct gggttgaact aatcagaggg aggcccaaag 1260 


tgggttggtc ttggccagac ggtgctgagg tgccattcac cattgacaag tagtttgttc 1380 


37 

1745 

DNA 


37 

agcaaaagca ggggaaaatg attgcaatca taatacttgc aatagtggtc tctaccagca 60 

agtcagacag gatctgcatt ggttaccatg caaacaactc gacaacacaa gtggacacaa 120 

tattagagaa gaatgtgaca gtgacacact cagtggagct cctagaaaac cagaaggaga 180 

atagattctg cagagtcttg aataaagcgc cactggatct aatggactgc accactgagg 240 

gttggatcct tggaaacccc cgatgtgata acttactcgg tgatcaaagt tggtcataca 300 

tagtagagag gcctgatgcc caaaatggga tatgttaccc aggggtattg aaggagacgg 360 

aagagctgaa agcactcatt gggtctatag atagcataca aagatttgaa atgtttccca 420 

- 171 - 

공개특허 10-2009-0053794

agagcacgtg gaccggggta gatactaata gcggagttac gagcgcttgc ccctacaatg 480 

gtgaatcttc cttttacagg aatctgttgt ggataataaa aataagatct gatccgtact 540 

cattgatcaa ggggacatat accaatacag gctctcagcc aatcttatat ttctggggtg 600 

tgcaccatcc tccagatgaa gttgagcaag ctaacttgta tggaattggt acccggtatg 660 

ttaggatggg aactgaaagt atgaattttg ccaaaggtcc tgaaatagca ggcagaccac 720 

ctgcgaatgg gcaacgagga agaattgatt attattggtc tgtgttgaag ccaggagaaa 780 

ccttgaatgt ggaatccaat ggaaatttaa tagctccttg gtatgcttac aagttcacta 840 

gttccagaaa caagggagct attttcaaat cagaccttcc aattgagaat tgtgatgctg 900 

tctgtcaaac tttagctgga gcaataaata caaacaaaac cttccaaaat attagtccag 960 

tctggattgg agaatgcccc aaatatgtta aaagtaagag cctaaaacta gcaactggtc 1020 

tgagaaatgt tccacaggca gaaacaagag gattgtttgg agcaatagct gggtttatag 1080 

aaggaggatg gacaggtatg gtagacggat ggtacggata ccaccatgaa aattcacagg 1140 

ggtctggtta tgcagcagat aaagaaagca ctcagaaagc aatagacggg atcaccaata 1200 

aagtcaattc aatcattgac aaaatgaaca cacaatttga ggcagtagag catgagttct 1260 

caagtctcga aaggagaata ggcaatctga acaaaagaat ggaagatgga tttttagacg 1320 

tgtggacata caatgctgaa cttctggttc tactggaaaa tgagaggact ttggacatgc 1380 

atgatgctaa tgtaaagaat ctacatgaaa aggtgaaatc acaattaagg gataatgcaa 1440 

aggatttggg taatgggtgt tttgaatttt ggcacaaatg cgacaatgaa tgcatcaact 1500 

cagttaaaaa tggcacatat gactacccaa agtaccagga agagagcaga cttaataggc 1560 

aggaaataaa atcagtgatg ctggaaaatc tgggagtata ccaaatcctt gctatttata 1620 

- 172 - 

공개특허 10-2009-0053794

gtacggtatc gagcagtctg gttttggtgg gactgatcat tgccatgggt ctttggatgt 1680 

gctcaaatgg ctcaatgcaa tgcaagatat gtatataatt agaaaaaaac acccttgttt 1740 

ctact 1745 

38 

1467 

DNA 


38 

agcaaaagca ggagtgaaaa tgaatccaaa tcagaggata ataacaattg gatccgtctc 60 

tctaactatt gcaacagtgt gtttcctcat gcagattgcc atcctagcaa cgactgtgac 120 

actgcatttc aaacaaaatg aatgcagcat tcccgcaaac aaccaagtaa cgccatgtga 180 

accaatagta atagagagga acataacaga gatagtgtat ttgaataata ctaccataga 240 

aaaagagatt tgtcctgaag tagtagaata caggaattgg tcaaaaccgc aatgtcaaat 300 

tacagggttt gctcctttct ccaaggacaa ctcaattcgg ctttctgctg gtggggacat 360 

ttggataaca agagaacctt atgtgtcatg cgaccccagt aaatgttatc aatttgcact 420 

cgggcagggg accacgctgg acaacaaaca ctcaaatggc acaatacatg atagaatccc 480 

tcatcggacc cttttgatga atgaattggg tgttccgttt catttgggaa ccaaacaagt 540 

gtgcatagca tggtccagct caagctgtca tgatgggaaa gcatggttgc acgtttgtgt 600 

cactggggat gatagaaatg caactgctag tttcatttat gatgggatgc ttattgacag 660 

tattggttcc tggtctcaaa atatcctcag gactcaggag tcagaatgcg tttgtatcag 720 

tggaacttgt acagtagtaa tgactgatgg aagtgcatca ggaagggcag acactagaat 780 

- 173 - 

공개특허 10-2009-0053794

actattcatt agagagggga aaattgtcca cattagtcca ttgtcaggaa gtgctcagca 840 

tgtagaggaa tgttcttgtt atccccggta cccaaacgtc agatgtgtct gcagagacaa 900 

ctggaagggc tctaataggc ccgttataga tataaatatg gcagattata gcattgactc 960 

aagttatgtg tgctcaggac ttgttggaga cacaccaagg aacgatgata gctctagcag 1020 

cagcaactgc agggatccta ataatgagag agggaaccca ggagtgaaag ggtgggcctt 1080 

tgataatgga aatgatgtgt ggatgggaag aacaatcagt aaagattcgc gctcaggcta 1140 

tgagaccttc aaggtcattg gtggttgggc cattgctaat tccaagtcac agaccaatag 1200 

acaagtcata gttgataata acaactggtc tggttattct ggtattttct ctgttgaaag 1260 

caaaggctgc atcaataggt gtttttatgt ggagttgata agaggaaggc cacaggagac 1320 

tagagtatgg tggacctcaa acagtattgt cgtattttgt ggcacttcag ggacatatgg 1380 

aacaggctca tggcctgatg gggcgaatat cgatttcatg cctatataag ctttcgcaat 1440 

tttagaaaaa aactccttgt ttctact 1467 

39 

566 

PRT 


39 

Met Ile Ala Val Ile Ile Ile Ala Val Leu Ala Thr Ala Gly Lys Ser 

1 5 10 15 

Asp Lys Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Thr Gln Val 

20 25 30 

Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Glu Leu 

35 40 45 

- 174 - 

공개특허 10-2009-0053794

Leu Glu Asn Gln Lys Glu Glu Arg Phe Cys Lys Ile Leu Asn Lys Ala 

50 55 60 

Pro Leu Asp Leu Arg Gly Cys Thr Ile Glu Gly Trp Ile Leu Gly Asn 

65 70 75 80 

Pro Gln Cys Asp Leu Leu Leu Gly Asp Gln Ser Trp Ser Tyr Ile Val 

85 90 95 

Glu Arg Pro Thr Ala Gln Asn Gly Ile Cys Tyr Pro Gly Ile Leu Asn 

100 105 110 

Glu Val Glu Glu Leu Lys Ala Leu Ile Gly Ser Gly Glu Arg Val Glu 


Arg Phe Glu Met Phe Pro Lys Ser Thr Trp Ala Gly Val Asp Thr Ser 

130 135 140 

Ser Gly Val Thr Lys Ala Cys Pro Tyr Thr Ser Gly Ser Ser Phe Tyr 

145 150 155 160 

Arg Asn Leu Leu Trp Ile Ile Lys Thr Lys Ser Ala Ala Tyr Pro Val 

165 170 175 

Ile Lys Gly Thr Tyr Asn Asn Thr Gly Ser Gln Pro Ile Leu Tyr Phe 


Trp Gly Val His His Pro Pro Asp Thr Asn Glu Gln Asn Thr Leu Tyr 


Gly Ser Gly Asp Arg Tyr Val Arg Met Gly Thr Glu Ser Met Asn Phe 

210 215 220 

Ala Lys Ser Pro Glu Ile Ala Ala Arg Pro Ala Val Asn Gly Gln Arg 

- 175 - 

공개특허 10-2009-0053794

225 230 235 240 

Gly Arg Ile Asp Tyr Tyr Trp Ser Val Leu Lys Pro Gly Glu Thr Leu 

245 250 255 

Asn Val Glu Ser Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Ala Tyr Lys 

260 265 270 

Phe Val Ser Thr Asn Ser Lys Gly Ala Val Phe Lys Ser Asn Leu Pro 

275 280 285 

Ile Glu Asn Cys Asp Ala Thr Cys Gln Thr Ile Ala Gly Val Leu Arg 

290 295 300 

Thr Asn Lys Thr Phe Gln Asn Val Ser Pro Leu Trp Ile Gly Glu Cys 

305 310 315 320 

Pro Lys Tyr Val Lys Ser Glu Ser Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg 

325 330 335 

Asn Ile Pro Gln Ile Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly 

340 345 350 

Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr 

355 360 365 

His His Glu Asn Ser Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Arg Glu Ser 

370 375 380 

Thr Gln Arg Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile 

385 390 395 400 

Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Ile Asp His Glu Phe Ser Asn 

405 410 415 

Leu Glu Arg Arg Ile Asp Ser Leu Asn Lys Arg Met Glu Asp Gly Phe 

420 425 430 

- 176 - 

공개특허 10-2009-0053794

Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn 

435 440 445 

Glu Arg Thr Leu Asp Leu His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu 

450 455 460 

Lys Val Lys Ser Gln Leu Arg Asp Asn Ala Asn Asp Leu Gly Asn Gly 

465 470 475 480 

Cys Phe Glu Phe Trp His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Ile Glu Ser Val 

485 490 495 

Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Gln Asp Glu Ser Lys Leu 

500 505 510 

Asn Arg Gln Glu Ile Glu Ser Val Lys Leu Glu Asn Leu Gly Val Tyr 

515 520 525 

Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ser Ser Ser Leu Val Leu Val 

530 535 540 

Gly Leu Ile Ile Ala Met Gly Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Met 

545 550 555 560 

Gln Cys Arg Ile Cys Ile 

565 

40 

470 

PRT 


40 

Met Asn Pro Asn Gln Lys Ile Leu Cys Thr Ser Ala Thr Ala Ile Ala 

1 5 10 15 

- 177 - 

공개특허 10-2009-0053794

Ile Gly Thr Ile Ala Val Leu Ile Gly Ile Ala Asn Leu Gly Leu Asn 

20 25 30 

Ile Gly Leu His Leu Lys Pro Ser Cys Asn Cys Ser Asn Pro Pro Pro 

35 40 45 

Glu Thr Thr Asn Val Ser Gln Thr Ile Ile Asn Asn Tyr Tyr Asn Glu 

50 55 60 

Thr Asn Val Thr Gln Ile Ser Asn Thr Asn Ile Gln His Met Gly Gly 

65 70 75 80 

Thr Glu Lys Asp Phe Asn Asn Leu Thr Lys Gly Leu Cys Thr Ile Asn 

85 90 95 

Ser Trp His Ile Phe Gly Lys Asp Asn Ala Ile Arg Ile Gly Glu Asn 

100 105 110 

Ser Asp Val Leu Val Thr Arg Glu Pro Tyr Val Ser Cys Asp Pro Asp 


Glu Cys Arg Phe Tyr Ala Leu Ser Gln Gly Thr Thr Ile Arg Gly Lys 

130 135 140 

His Ser Asn Gly Thr Ile His Asp Arg Ser Gln Tyr Arg Ala Leu Val 

145 150 155 160 

Ser Trp Pro Leu Ser Ser Pro Pro Thr Val Tyr Asn Thr Arg Val Glu 

165 170 175 

Cys Ile Gly Trp Ser Ser Thr Ser Cys His Asp Gly Lys Ala Arg Met 


Ser Ile Cys Val Ser Gly Pro Asn Asn Asn Ala Ser Ala Val Ile Trp 


- 178 - 

공개특허 10-2009-0053794

Tyr Lys Gly Arg Pro Ile Thr Glu Ile Asn Thr Trp Ala Arg Asn Ile 

210 215 220 

Leu Arg Thr Gln Glu Ser Glu Cys Val Cys His Asn Gly Ile Cys Pro 

225 230 235 240 

Val Val Phe Thr Asp Gly Ser Ala Thr Gly Pro Ala Glu Thr Arg Ile 

245 250 255 

Tyr Tyr Phe Lys Glu Gly Lys Ile Leu Lys Trp Glu Pro Leu Thr Gly 

260 265 270 

Thr Ala Lys His Ile Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Gly Lys Asp Ser Glu 

275 280 285 

Ile Thr Cys Thr Cys Arg Asp Asn Trp Gln Gly Ser Asn Arg Pro Val 

290 295 300 

Ile Gln Ile Asn Pro Thr Met Met Thr His Thr Ser Gln Tyr Ile Cys 

305 310 315 320 

Ser Pro Val Leu Thr Asp Asn Pro Arg Pro Asn Asp Pro Thr Val Gly 

325 330 335 

Lys Cys Asn Asp Pro Tyr Pro Gly Asn Asn Asn Asn Gly Val Lys Gly 

340 345 350 

Phe Ser Tyr Leu Asp Gly Asp Asn Thr Trp Leu Gly Arg Thr Ile Ser 

355 360 365 

Thr Ala Ser Arg Ser Gly Tyr Glu Met Leu Lys Val Pro Asn Ala Leu 

370 375 380 

Thr Asp Asp Arg Ser Lys Pro Thr Gln Gly Gln Thr Ile Val Leu Asn 

385 390 395 400 

- 179 - 

공개특허 10-2009-0053794

Thr Asp Trp Ser Gly Tyr Ser Gly Ser Phe Ile Asp Tyr Trp Ala Lys 

405 410 415 

Gly Glu Cys Tyr Arg Ala Cys Phe Tyr Val Glu Leu Ile Arg Gly Arg 

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Pro Lys Glu Asp Lys Val Trp Trp Thr Ser Asn Ser Ile Val Ser Met 

435 440 445 

Cys Ser Ser Thr Glu Phe Leu Gly Gln Trp Asn Trp Pro Asp Gly Ala 

450 455 460 

Lys Ile Glu Tyr Phe Leu 

465 470 

41 

567 

PRT 


41 

Met Ile Ala Ile Ile Val Ile Ala Ile Leu Ala Ala Ala Gly Lys Ser 

1 5 10 15 

Asp Lys Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Thr Gln Val 

20 25 30 

Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Ile Glu Leu 

35 40 45 

Leu Glu Asn Gln Lys Glu Glu Arg Phe Cys Lys Ile Leu Asn Lys Ala 

50 55 60 

Pro Leu Asp Leu Arg Glu Cys Thr Ile Glu Gly Trp Ile Leu Gly Asn 

65 70 75 80 

- 180 - 

공개특허 10-2009-0053794

Pro Gln Cys Asp Leu Leu Leu Gly Asp Gln Ser Trp Ser Tyr Ile Val 

85 90 95 

Glu Arg Pro Thr Ala Gln Asn Gly Ile Cys Tyr Pro Gly Thr Leu Asn 

100 105 110 

Glu Val Glu Glu Leu Arg Ala Leu Ile Gly Ser Gly Glu Arg Val Glu 


Arg Phe Glu Met Phe Pro Gln Ser Thr Trp Gln Gly Val Asp Thr Asn 

130 135 140 

Ser Gly Thr Thr Arg Ser Cys Pro Tyr Ser Thr Gly Asp Pro Ser Phe 

145 150 155 160 

Tyr Arg Asn Leu Leu Trp Ile Ile Lys Thr Lys Thr Ala Glu Tyr Pro 

165 170 175 

Val Ile Lys Gly Ile Tyr Asn Asn Thr Gly Thr Gln Pro Ile Leu Tyr 


Phe Trp Gly Val His His Pro Pro Asn Thr Asp Glu Gln Asp Thr Leu 


Tyr Gly Ser Gly Asp Arg Tyr Val Arg Met Gly Thr Glu Ser Met Asn 

210 215 220 

Phe Ala Lys Ser Pro Glu Ile Ala Ala Arg Pro Ala Val Asn Gly Gln 

225 230 235 240 

Arg Gly Arg Ile Asp Tyr Tyr Trp Ser Val Leu Lys Pro Gly Glu Thr 

245 250 255 

Leu Asn Val Glu Ser Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Ala Tyr 

260 265 270 

- 181 - 

공개특허 10-2009-0053794

Lys Phe Val Asn Thr Asn Ser Lys Gly Ala Val Phe Arg Ser Asp Leu 

275 280 285 

Pro Ile Glu Asn Cys Asp Ala Thr Cys Gln Thr Ile Ala Gly Val Leu 

290 295 300 

Arg Thr Asn Lys Thr Phe Gln Asn Val Ser Pro Leu Trp Ile Gly Glu 

305 310 315 320 

Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Glu Ser Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu 

325 330 335 

Arg Asn Val Pro Gln Ile Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala 

340 345 350 

Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly 

355 360 365 

Tyr His His Glu Asn Ser Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Arg Glu 

370 375 380 

Ser Thr Gln Lys Ala Val Asn Arg Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile 

385 390 395 400 

Ile Asn Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Asp His Glu Phe Ser 

405 410 415 

Asn Leu Glu Arg Arg Ile Asp Asn Leu Asn Lys Arg Met Gln Asp Gly 

420 425 430 

Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu 

435 440 445 

Asn Glu Arg Thr Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu His 

450 455 460 

- 182 - 

공개특허 10-2009-0053794

Glu Lys Val Lys Ser Gln Leu Arg Asp Asn Ala Asn Asp Leu Gly Asn 

465 470 475 480 

Gly Cys Phe Glu Phe Trp His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Ile Glu Ser 

485 490 495 

Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Gln Thr Glu Ser Lys 

500 505 510 

Leu Asn Arg Leu Lys Ile Glu Ser Val Lys Leu Glu Asn Leu Gly Val 

515 520 525 

Tyr Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ser Ser Ser Leu Val Leu 

530 535 540 

Val Gly Leu Ile Met Ala Met Gly Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser 

545 550 555 560 

Met Gln Cys Asn Val Cys Ile 

565 

42 

450 

PRT 


42 


1 5 10 15 

Val Gly Ile Ile Ser Leu Met Leu Gln Ile Gly Asn Ile Ile Ser Ile 

20 25 30 

Trp Val Ser His Ile Ile Gln Thr Gly His Pro Asn Gln Pro Gly Pro 

35 40 45 

- 183 - 

공개특허 10-2009-0053794


50 55 60 


65 70 75 80 


85 90 95 

Val Met Arg Glu Pro Phe Val Ser Cys Ser His Leu Glu Cys Arg Thr 

100 105 110 




130 135 140 


145 150 155 160 


165 170 175 



Ile Thr Asp Thr Ile Lys Ser Trp Arg Asn Asn Ile Leu Arg Thr Gln 



210 215 220 


225 230 235 240 

Lys Gly Lys Val Val Lys Ser Val Glu Leu Asn Ala Pro Asn Tyr His 

- 184 - 

공개특허 10-2009-0053794

245 250 255 


260 265 270 


275 280 285 


290 295 300 


305 310 315 320 

Leu Asn Gly Glu Tyr Gly Val Lys Gly Phe Ser Phe Lys Tyr Gly Asp 

325 330 335 


340 345 350 

Glu Met Ile Trp Asp Pro Asn Gly Trp Thr Glu Thr Asp Ser Asn Phe 

355 360 365 


370 375 380 

Gly Ser Phe Val Gln His Pro Glu Leu Thr Gly Leu Asn Cys Met Arg 

385 390 395 400 


405 410 415 


420 425 430 

Thr Val Gly Trp Ser Trp Pro Asp Gly Ala Glu Val Pro Phe Thr Ile 

- 185 - 

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Asp Lys 

450 

435 440 445 

43 

566 

PRT 


43 

Met Ile Ala Ile Ile Ile Leu Ala Ile Val Val Ser Thr Ser Lys Ser 

1 5 10 15 

Asp Arg Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Thr Gln Val 

20 25 30 

Asp Thr Ile Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Glu Leu 

35 40 45 

Leu Glu Asn Gln Lys Glu Asn Arg Phe Cys Arg Val Leu Asn Lys Ala 

50 55 60 

Pro Leu Asp Leu Met Asp Cys Thr Thr Glu Gly Trp Ile Leu Gly Asn 

65 70 75 80 

Pro Arg Cys Asp Asn Leu Leu Gly Asp Gln Ser Trp Ser Tyr Ile Val 

85 90 95 

Glu Arg Pro Asp Ala Gln Asn Gly Ile Cys Tyr Pro Gly Val Leu Lys 

100 105 110 

Glu Thr Glu Glu Leu Lys Ala Leu Ile Gly Ser Ile Asp Ser Ile Gln 


Arg Phe Glu Met Phe Pro Lys Ser Thr Trp Thr Gly Val Asp Thr Asn 

- 186 - 

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130 135 140 

Ser Gly Val Thr Ser Ala Cys Pro Tyr Asn Gly Glu Ser Ser Phe Tyr 

145 150 155 160 

Arg Asn Leu Leu Trp Ile Ile Lys Ile Arg Ser Asp Pro Tyr Ser Leu 

165 170 175 

Ile Lys Gly Thr Tyr Thr Asn Thr Gly Ser Gln Pro Ile Leu Tyr Phe 


Trp Gly Val His His Pro Pro Asp Glu Val Glu Gln Ala Asn Leu Tyr 


Gly Ile Gly Thr Arg Tyr Val Arg Met Gly Thr Glu Ser Met Asn Phe 

210 215 220 

Ala Lys Gly Pro Glu Ile Ala Gly Arg Pro Pro Ala Asn Gly Gln Arg 

225 230 235 240 

Gly Arg Ile Asp Tyr Tyr Trp Ser Val Leu Lys Pro Gly Glu Thr Leu 

245 250 255 

Asn Val Glu Ser Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Ala Tyr Lys 

260 265 270 

Phe Thr Ser Ser Arg Asn Lys Gly Ala Ile Phe Lys Ser Asp Leu Pro 

275 280 285 

Ile Glu Asn Cys Asp Ala Val Cys Gln Thr Leu Ala Gly Ala Ile Asn 

290 295 300 

Thr Asn Lys Thr Phe Gln Asn Ile Ser Pro Val Trp Ile Gly Glu Cys 

305 310 315 320 

Pro Lys Tyr Val Lys Ser Lys Ser Leu Lys Leu Ala Thr Gly Leu Arg 

325 330 335 

- 187 - 

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Asn Val Pro Gln Ala Glu Thr Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly 

340 345 350 

Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr 

355 360 365 

His His Glu Asn Ser Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu Ser 

370 375 380 

Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile Ile 

385 390 395 400 

Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Glu His Glu Phe Ser Ser 

405 410 415 

Leu Glu Arg Arg Ile Gly Asn Leu Asn Lys Arg Met Glu Asp Gly Phe 

420 425 430 

Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn 

435 440 445 

Glu Arg Thr Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu His Glu 

450 455 460 

Lys Val Lys Ser Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Asp Leu Gly Asn Gly 

465 470 475 480 

Cys Phe Glu Phe Trp His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Ile Asn Ser Val 

485 490 495 

Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Gln Glu Glu Ser Arg Leu 

500 505 510 

Asn Arg Gln Glu Ile Lys Ser Val Met Leu Glu Asn Leu Gly Val Tyr 

515 520 525 

- 188 - 

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Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ser Ser Ser Leu Val Leu Val 

530 535 540 

Gly Leu Ile Ile Ala Met Gly Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Met 

545 550 555 560 

Gln Cys Lys Ile Cys Ile 

565 

44 

469 

PRT 


44 

Met Asn Pro Asn Gln Arg Ile Ile Thr Ile Gly Ser Val Ser Leu Thr 

1 5 10 15 

Ile Ala Thr Val Cys Phe Leu Met Gln Ile Ala Ile Leu Ala Thr Thr 

20 25 30 

Val Thr Leu His Phe Lys Gln Asn Glu Cys Ser Ile Pro Ala Asn Asn 

35 40 45 

Gln Val Thr Pro Cys Glu Pro Ile Val Ile Glu Arg Asn Ile Thr Glu 

50 55 60 

Ile Val Tyr Leu Asn Asn Thr Thr Ile Glu Lys Glu Ile Cys Pro Glu 

65 70 75 80 

Val Val Glu Tyr Arg Asn Trp Ser Lys Pro Gln Cys Gln Ile Thr Gly 

85 90 95 

Phe Ala Pro Phe Ser Lys Asp Asn Ser Ile Arg Leu Ser Ala Gly Gly 

100 105 110 

- 189 - 

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Asp Ile Trp Ile Thr Arg Glu Pro Tyr Val Ser Cys Asp Pro Ser Lys 


Cys Tyr Gln Phe Ala Leu Gly Gln Gly Thr Thr Leu Asp Asn Lys His 

130 135 140 

Ser Asn Gly Thr Ile His Asp Arg Ile Pro His Arg Thr Leu Leu Met 

145 150 155 160 

Asn Glu Leu Gly Val Pro Phe His Leu Gly Thr Lys Gln Val Cys Ile 

165 170 175 

Ala Trp Ser Ser Ser Ser Cys His Asp Gly Lys Ala Trp Leu His Val 


Cys Val Thr Gly Asp Asp Arg Asn Ala Thr Ala Ser Phe Ile Tyr Asp 


Gly Met Leu Ile Asp Ser Ile Gly Ser Trp Ser Gln Asn Ile Leu Arg 

210 215 220 

Thr Gln Glu Ser Glu Cys Val Cys Ile Ser Gly Thr Cys Thr Val Val 

225 230 235 240 

Met Thr Asp Gly Ser Ala Ser Gly Arg Ala Asp Thr Arg Ile Leu Phe 

245 250 255 

Ile Arg Glu Gly Lys Ile Val His Ile Ser Pro Leu Ser Gly Ser Ala 

260 265 270 

Gln His Val Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Arg Tyr Pro Asn Val Arg 

275 280 285 

Cys Val Cys Arg Asp Asn Trp Lys Gly Ser Asn Arg Pro Val Ile Asp 

290 295 300 


공개특허 10-2009-0053794

Ile Asn Met Ala Asp Tyr Ser Ile Asp Ser Ser Tyr Val Cys Ser Gly 

305 310 315 320 

Leu Val Gly Asp Thr Pro Arg Asn Asp Asp Ser Ser Ser Ser Ser Asn 

325 330 335 

Cys Arg Asp Pro Asn Asn Glu Arg Gly Asn Pro Gly Val Lys Gly Trp 

340 345 350 

Ala Phe Asp Asn Gly Asn Asp Val Trp Met Gly Arg Thr Ile Ser Lys 

355 360 365 

Asp Ser Arg Ser Gly Tyr Glu Thr Phe Lys Val Ile Gly Gly Trp Ala 

370 375 380 

Ile Ala Asn Ser Lys Ser Gln Thr Asn Arg Gln Val Ile Val Asp Asn 

385 390 395 400 

Asn Asn Trp Ser Gly Tyr Ser Gly Ile Phe Ser Val Glu Ser Lys Gly 

405 410 415 

Cys Ile Asn Arg Cys Phe Tyr Val Glu Leu Ile Arg Gly Arg Pro Gln 

420 425 430 

Glu Thr Arg Val Trp Trp Thr Ser Asn Ser Ile Val Val Phe Cys Gly 

435 440 445 

Thr Ser Gly Thr Tyr Gly Thr Gly Ser Trp Pro Asp Gly Ala Asn Ile 

450 455 460 

Asp Phe Met Pro Ile 

465 

45 

1464 

DNA 


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45 

agcaaaagca gggtgatcga gaatgaatcc aaatcagaaa ctatttgcat tatctggagt 60 

ggcaatagca cttagtgtac tgaacttatt gataggaatc tcaaacgtcg gattgaacgt 120 

atctctacat ctaaaggaaa aaggacccaa acaggaggag aatttaacat gcacgaccat 180 

taatcaaaac aacactactg tagtagaaaa cacatatgta aataatacaa caataattac 240 

caagggaact gatttgaaaa caccaagcta tctgctgttg aacaagagcc tgtgcaatgt 300 

tgaagggtgg gtcgtgatag caaaagacaa tgcagtaaga tttggggaaa gtgaacaaat 360 

cattgttacc agggagccat atgtatcatg cgacccaaca ggatgcaaaa tgtatgcctt 420 

gcaccaaggg actaccatta ggaacaaaca ttcaaatgga acgattcatg acagaacagc 480 

tttcagaggt ctcatctcca ctccattggg cactccacca accgtaagta acagtgactt 540 

tatgtgtgtt ggatggtcaa gcacaacttg ccatgatggg attgctagga tgactatctg 600 

tatacaagga aataatgaca atgctacagc aacggtttat tacaacagaa ggctgaccac 660 

taccattaag acctgggcca gaaacattct gaggactcaa gaatcagaat gtgtgtgcca 720 

caatggcaca tgtgcagttg taatgaccga cggatcggct agtagtcaag cctatacaaa 780 

agtaatgtat ttccacaagg gattagtagt taaggaggag gagttaaggg gatcagccag 840 

acatattgag gaatgctcct gttatggaca caatcaaaag gtgacctgtg tgtgcagaga 900 

taactggcag ggagcaaaca ggcctattat agaaattgat atgagcacat tggagcacac 960 

aagtagatac gtgtgcactg gaattctcac agacaccagc agacctgggg acaaatctag 1020 

tggtgattgt tccaatccaa taactgggag tcccggcgtt ccgggagtga agggattcgg 1080 


공개특허 10-2009-0053794

gtttctaaat ggggataaca catggcttgg taggaccatc agccccagat caagaagtgg 1140 

attcgaaatg ttgaaaatac ctaatgcagg tactgatccc aattctagaa tagcagaacg 1200 

acaggaaatt gtcgacaata acaattggtc aggctattcc ggaagcttta ttgactattg 1260 

gaatgataac agtgaatgct acaatccatg cttttacgta gagttaatta gaggaagacc 1320 

cgaagaggct aaatacgtat ggtgggcaag taacagtcta attgccctat gtggaagccc 1380 

attcccagtt gggtctggtt ccttccccga tggggcacaa atccaatact tttcgtaaaa 1440 

tgcaaaaaca cccttgtttc tact 1464 


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(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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