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Validazione di un algoritmo per la valutazione dei rischi da ...

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452 G Ital Med Lav Erg 2007; 29:3<br />

www.gimle.fsm.it<br />

<strong>di</strong> contaminazione che può derivare <strong>da</strong>l contatto accidentale durante <strong>la</strong> loro<br />

produzione o uso non è completamente noto, né sono <strong>di</strong>sponibili <strong>da</strong>ti<br />

esaustivi che valutino il passaggio <strong>di</strong> esse attraverso <strong>la</strong> cute (1).<br />

Alc<strong>un</strong>i stu<strong>di</strong> condotti in vitro e in vivo sottolineano il potenziale ruolo<br />

<strong>dei</strong> follicoli piliferi nel processo <strong>di</strong> assorbimento: le particelle con <strong>di</strong>ametro<br />

<strong>da</strong> 3 a 10 nm potrebbero utilizzare i follicoli piliferi <strong>per</strong> penetrare<br />

attraverso <strong>la</strong> cute, mentre quelle con <strong>di</strong>ametro maggiore resterebbero nello<br />

strato corneo (2). Al contrario, Laedmann e Coll. hanno riscontrato in<br />

volontari, dopo applicazioni ripetute <strong>di</strong> <strong>un</strong> prodotto so<strong>la</strong>re contenente nanoparticelle<br />

<strong>di</strong> ossido <strong>di</strong> titanio, <strong>un</strong> limitato assorbimento nel<strong>la</strong> su<strong>per</strong>ficie<br />

più esterna dello strato corneo e nei follicoli piliferi (3). Analogamente i<br />

test effettuati in vitro con cute umana (4) e porcina (5) non hanno evidenziato<br />

alc<strong>un</strong> significativo assorbimento <strong>di</strong> nanoparticelle <strong>di</strong> ossido <strong>di</strong><br />

titanio e ossido <strong>di</strong> zinco contenute in creme so<strong>la</strong>ri applicate topicamente.<br />

Questi risultati sono simili a quelli rilevati <strong>da</strong> Cross e Coll. (6).<br />

In questo stu<strong>di</strong>o abbiamo valutato con il metodo in vitro delle Franz<br />

cells (7) il passaggio <strong>di</strong> nanoparticelle <strong>di</strong> argento rivestite con polivinilpirrolidone<br />

attraverso <strong>la</strong> cute sia integra che lesa.<br />

MATERIALI E METODI<br />

Gli es<strong>per</strong>imenti sono stati condotti utilizzando celle <strong>di</strong> Franz e lembi<br />

<strong>di</strong> cute umana proveniente <strong>da</strong> interventi <strong>di</strong> chirurgia p<strong>la</strong>stica. I campioni<br />

cutanei, privati del grasso sottocutaneo con <strong>un</strong> bisturi fino ad <strong>un</strong>o spessore<br />

me<strong>di</strong>o <strong>di</strong> 1 mm, sono stati tagliati in sezioni pari a 3x3 cm. Per 4 sezioni<br />

cutanee si è applicato il protocollo suggerito <strong>da</strong> Bronaugh (8) che<br />

simu<strong>la</strong> <strong>un</strong> <strong>da</strong>nno al<strong>la</strong> cute tramite lesione con aghi. Infine i campioni cutanei<br />

sono stati posizionati in 10 celle con il <strong>la</strong>to epidermico a contatto<br />

con il compartimento donatore e quello dermico esposto al<strong>la</strong> soluzione ricevente,<br />

costituita <strong>da</strong> soluzione fisiologica. Nel compartimento donatore<br />

delle celle, tranne che in 2 utilizzate come bianco, è stata collocata <strong>un</strong>a<br />

quantità pari a 70µg/cm 2 <strong>di</strong> nanoparticelle <strong>di</strong> argento, rivestite in polivinilpirrolidone<br />

e con <strong>un</strong> <strong>di</strong>ametro me<strong>di</strong>o <strong>di</strong> 25 nm determinato con il microscopio<br />

elettronico a trasmissione (TEM). Esse sono state <strong>di</strong>s<strong>per</strong>se in<br />

etanolo 0.14 wt % e <strong>di</strong>luite 1:10 con sudore sintetico <strong>per</strong> riprodurre le<br />

con<strong>di</strong>zioni in vivo. Le misurazioni nel<strong>la</strong> soluzione ricevente sono state effettuate<br />

me<strong>di</strong>ante Spettrometria <strong>di</strong> Assorbimento Atomico con correzione<br />

<strong>di</strong> Zeeman utilizzando lo spettrometro Perkin Elmer 4100 ZL (USA) con<br />

fornetto <strong>di</strong> grafite. Il limite <strong>di</strong> rilevabilità era <strong>di</strong> 0.1 µg/L ad <strong>un</strong>a l<strong>un</strong>ghezza<br />

d’on<strong>da</strong> <strong>di</strong> 328.1 nm. Le curve <strong>di</strong> calibrazione sono state ottenute con<br />

<strong>di</strong>versi stan<strong>da</strong>rd a 5, 10 e 20 g µ/L utilizzando <strong>un</strong>a soluzione allo 0.1% <strong>di</strong><br />

Mg(NO 3 ) 2 e <strong>un</strong>a soluzione <strong>di</strong> Pd(NO 3 ) 2 1 g/L come matrice.<br />

RISULTATI<br />

La concentrazione <strong>di</strong> argento nel<strong>la</strong> fase ricevente delle celle con cute<br />

integra, <strong>di</strong> 2 celle con cute lesa e nei bianchi, a 24 ore <strong>da</strong>ll’inizio dell’es<strong>per</strong>imento,<br />

non raggi<strong>un</strong>geva il limite <strong>di</strong> rilevazione. Solo nel<strong>la</strong> soluzione<br />

ricevente delle altre 2 celle allestite con cute <strong>da</strong>nneggiata è stata misurata<br />

<strong>un</strong>a concentrazione <strong>di</strong> argento <strong>di</strong> 0.2 µg/L (Tabel<strong>la</strong> I).<br />

CONCLUSIONI<br />

I risultati <strong>dei</strong> nostri es<strong>per</strong>imenti <strong>di</strong>mostrano che l’assorbimento <strong>di</strong> nanoparticelle<br />

d’argento rivestite in polivinilpirrolidone attraverso <strong>la</strong> cute integra<br />

è trascurabile, confermando gli stu<strong>di</strong> precedenti (3,4,5,6). I test con<br />

cute lesa evidenziano <strong>un</strong> limitato assorbimento <strong>di</strong> argento, attribuibile ad<br />

<strong>un</strong>a <strong>di</strong>minuzione del<strong>la</strong> capacità dello strato corneo <strong>di</strong> f<strong>un</strong>gere <strong>da</strong> barriera.<br />

Dati recenti <strong>di</strong> letteratura <strong>di</strong>mostrano che le nanoparticelle <strong>di</strong> <strong>di</strong>mensioni<br />

inferiori ai 10nm sono capaci <strong>di</strong> penetrare <strong>la</strong> cute passivamente attraverso<br />

<strong>la</strong> matrice lipi<strong>di</strong>ca dello strato corneo e i follicoli piliferi, raggi<strong>un</strong>gendo gli<br />

strati più profon<strong>di</strong> dell’epidermide e, talora, lo strato germinativo (9). Pertanto,<br />

allo stato attuale, sono necessarie ulteriori ricerche che consentano<br />

<strong>di</strong> chiarire il meccanismo che rego<strong>la</strong> tale assorbimento.<br />

Tabel<strong>la</strong> I. Concentrazioni <strong>di</strong> Ag rilevate<br />

nel<strong>la</strong> soluzione ricevente alle 24 ore<br />

BIBLIOGRAFIA<br />

1) Borm PJA, Robbins D, Haubald S, et al. The potential riscks of nanomaterials:<br />

a review carried out for ECETOC. Particle and Fibre<br />

Toxicology 2006; 3 (11): 1-35.<br />

2) Shaefer H, Lademann J. The role of follicu<strong>la</strong>r penetration. A <strong>di</strong>fferential<br />

view. Skin Pharmacol. Appl. 2001; 14 (1): 23-27.<br />

3) Lademann J, Weigmann HJ, Rickmeyer C, et al. Penetration of titanium<br />

<strong>di</strong>oxide microparticles in a s<strong>un</strong>screen formu<strong>la</strong>tion into the<br />

horny <strong>la</strong>yer and the follicu<strong>la</strong>r orifice. Skin Pharmacol. Appl. Physiol.<br />

1999; 12: 247-256.<br />

4) Dussert AS, Gooris E, Hemmerle J. Charaterisation of the mineral<br />

content of a physical s<strong>un</strong>screen emulsion and its <strong>di</strong>stribution onto human<br />

stratum corneum. Int. J. Cosmet. Sci. 1997; 19:119-129.<br />

5) Gamer AO, Leibold E, Van Ravenzwaay B. The in vitro absorption<br />

of microfine zinc oxide and titanium <strong>di</strong>oxide through porcine skin.<br />

Toxicol. In Vitro 2006; 20: 301-307.<br />

6) Cross SE, Brian I, Roberts MS, et al. Human skin penetration of s<strong>un</strong>screen<br />

nanoparticles: in-vitro assessment of a novel micronized zinc<br />

oxide formu<strong>la</strong>tion. Skin Pharmacol. Physiol. 2007; 20: 148-154.<br />

7) Franz TJ. On the relevance of in vitro <strong>da</strong>ta. J. Invest. Dermatol. 1975;<br />

93: 633-640.<br />

8) Bronaugh R, Steward R. Methods for in vitro <strong>per</strong>cutaneous absorption<br />

stu<strong>di</strong>es. V: <strong>per</strong>meation through <strong>da</strong>maged skin. J. Pharm. Sci.<br />

1985; 1062-1066.<br />

9) Baroli B, Ennas MG, Loffredo F, et al. Penetration of metallic nanoparticles<br />

in human full-thickness skin. J. Invest. Dermatol. 2007;<br />

127: 1701-1712.<br />

COM-02<br />

ASSORBIMENTO PERCUTANEO DI POLVERE DI CROMO<br />

ED EFFETTI DELLA DETERSIONE: RISULTATI DI UNA INDAGINE<br />

IN VITRO<br />

D’Agostin F1 , Crosera M2 , A<strong>da</strong>mi G2, Malvestio A1 , Rosani R1 ,<br />

Bovenzi M1 , Maina G3 , Larese Filon F1 1 Unità Clinica O<strong>per</strong>ativa <strong>di</strong> Me<strong>di</strong>cina del Lavoro - Università degli Stu<strong>di</strong><br />

<strong>di</strong> Trieste<br />

2 Dipartimento <strong>di</strong> Scienze Chimiche - Università degli Stu<strong>di</strong> <strong>di</strong> Trieste<br />

3 Laboratorio <strong>di</strong> Igiene Industriale - Università <strong>di</strong> Torino<br />

Corrispondenza: Francesca Larese Filon - UCO Me<strong>di</strong>cina del Lavoro -<br />

Via del<strong>la</strong> Pietà 19 -34129 Trieste, Italy - E-mail: <strong>la</strong>rese@<strong>un</strong>its.it<br />

RIASSUNTO. Le dermatiti <strong>da</strong> contatto <strong>da</strong> cromo sono frequenti nel<br />

settore e<strong>di</strong>le, metallurgico, del<strong>la</strong> <strong>la</strong>vorazione del cuoio e del<strong>la</strong> ceramica.<br />

Abbiamo valutato in <strong>un</strong> sistema in vitro l’assorbimento <strong>per</strong>cutaneo del<strong>la</strong><br />

polvere <strong>di</strong> cromo e l’effetto del<strong>la</strong> rapi<strong>da</strong> decontaminazione con <strong>un</strong> com<strong>un</strong>e<br />

detergente. Gli es<strong>per</strong>imenti sono stati condotti utilizzando il metodo<br />

delle celle a <strong>di</strong>ffusione <strong>di</strong> Franz e cute umana. La fase ricevente era costituita<br />

<strong>da</strong> soluzione fisiologica e <strong>la</strong> fase donatrice <strong>da</strong> <strong>un</strong>a sospensione <strong>di</strong><br />

polvere <strong>di</strong> cromo in sudore sintetico. In alc<strong>un</strong>i test, a 30 minuti <strong>da</strong>ll’esposizione,<br />

è stata effettuata <strong>la</strong> detersione. La concentrazione <strong>di</strong> cromo<br />

assorbita è stata analizzata con Spettroscopia <strong>di</strong> Emissione Atomica al<br />

P<strong>la</strong>sma e Spettroscopia <strong>di</strong> Assorbimento Atomico con fornetto <strong>di</strong> grafite.<br />

È stata effettuata l’analisi speciativa del cromo e determinate le concentrazioni<br />

nel<strong>la</strong> cute. Il flusso <strong>di</strong> <strong>per</strong>meazione era pari a 0.843±0.25 ng cm -<br />

2 h -1 e il <strong>la</strong>g time a 1.1± 0.7 ore. La detersione aumentava significativamente<br />

<strong>la</strong> concentrazione <strong>di</strong> cromo nel<strong>la</strong> cute, ma non il passaggio attraverso<br />

essa. I risultati <strong>di</strong>mostrano che <strong>la</strong> polvere <strong>di</strong> cromo può <strong>per</strong>meare <strong>la</strong><br />

cute e che <strong>la</strong> detersione non <strong>di</strong>minuisce l’assorbimento. Pertanto, è necessario<br />

prevenire <strong>la</strong> contaminazione quando si utilizzano sostanze tossiche.<br />

Parole chiave: cromo, assorbimento <strong>per</strong>cutaneo, in vitro, detersione.<br />

IN VITRO PERCUTANEOUS ABSORPTION OF CHROMIUM POWDER AND THE<br />

EFFECT OF SKIN CLEANSER<br />

ABSTRACT. Occupational chromium dermatitis occurs frequently<br />

among cement and metal workers, workers dealing with leather tanning

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