(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

(19) 대한민국특허청(KR) 

(12) 공개특허공보(A) 

(51) 국제특허분류(Int. Cl.) 

A61K 39/235 (2006.01) C12N 15/861 

(2006.01) 

(21) 출원번호 10-2012-7005335 

(22) 출원일자(국제) 2010년07월30일 

심사청구일자 없음 

(85) 번역문제출일자 2012년02월28일 

(86) 국제출원번호 PCT/US2010/043951 

(87) 국제공개번호 WO 2011/014794 

국제공개일자 2011년02월03일 

(30) 우선권주장 

61/230,617 2009년07월31일 미국(US) 

전체 청구항 수 : 총 58 항 

(54) 발명의 명칭 아데노바이러스계 벡터 

(57) 요 약 

(11) 공개번호 10-2012-0052369 

(43) 공개일자 2012년05월23일 

(71) 출원인 

팍스박스, 인코포레이티드 

미국 캘리포니아 92121 샌디에고 소랜토 밸리 볼 

러바드 3985 에이 

(72) 발명자 

메이올 티머시 피. 

미국 캘리포니아 92121 샌디에이고 소렌토 밸리 

불러바드 3985에이 

알렉산더 제프 

미국 캘리포니아 92121 샌디에이고 소렌토 밸리 

불러바드 3985에이 

(74) 대리인 

본 발명은 인플루엔자 바이러스와 같은 감염성 병원체로부터 항원을 발현할 수 있는 복제 수행성 아데노바이러 

스 벡터를 제공한다. 아데노바이러스 벡터는 감염성 병원체에 대해 피검체를 백신화하는데 사용될 수 있다. 

아데노바이러스 벡터는 항원을 암호화하는 이종 서열을 포함한다. 이종 서열은 특이적인 E3 결실내 또는 근처 

를 포함하는, 아데노바이러스 벡터내 각종 위치내로 삽입될 수 있고/있거나 아데노바이러스 헥손 암호화 영역 

내로 통합될 수 있다. 아데노바이러스 벡터는 어떠한 아데노바이러스 혈청형, 특히 Ad4 또는 Ad7 혈청형으로 

부터 기원할 수 있다. 

대 표 도 - 도15 

- 1 - 

장훈 

공개특허 10-2012-0052369

특허청구의 범위 

청구항 1 

제1의 이종 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 포함하는 백신으로서, 

상기 아데노바이러스 벡터는 복제 수행성(replication competent)이며 부분 E3 결실을 가지며, 상기 제1의 이 

종 서열은 부분 E3 결실을 함유하는 위치내로 통합되는 백신. 

청구항 2 

청구항 1에 있어서, 상기 아데노바이러스 벡터가 Ad2, Ad3, Ad4, Ad5, Ad6, Ad7, Ad11, Ad20, Ad21, Ad22, 

Ad23, Ad24, Ad25, Ad26, Ad28, Ad34, Ad35, Ad40, Ad41, Ad48, Ad49, 또는 Ad50로부터 기원하는 백신. 

청구항 3 

청구항 1에 있어서, 상기 아데노바이러스 벡터가 침팬지 혈청형 Ad C1, Ad C3, Ad C6, Ad C7, 또는 Ad68로부 

터 기원하는 백신. 

청구항 4 

청구항 1에 있어서, 상기 부분 E3 결실이 E3 영역내 적어도 1, 2 또는 3개의 개방 판독 프레임(open reading 

frame)의 결실을 포함하는 백신. 

청구항 5 

청구항 1에 있어서, 상기 부분 E3 결실이, 기능이 공지되지 않은 적어도 1, 2 또는 3개의 개방 판독 프레임의 

결실을 포함하는 백신. 

청구항 6 

청구항 1에 있어서, 상기 부분 E3 결실이 Ad5의 ADP 영역에 상응하는 영역의 결실을 포함하는 백신. 

청구항 7 

청구항 1에 있어서, 상기 아데노바이러스 벡터가 Ad4로부터 기원하고 부분 E3 결실이 E3 24.8k, E3 6.3k, 및 

E3 29.7k의 결실을 포함하는 백신. 

청구항 8 

청구항 1에 있어서, 상기 아데노바이러스 벡터가 Ad7로부터 기원하고 부분 E3 결실이 E3 20.1k, E3 20.6k, 및 

E3 7.7k의 결실을 포함하는 백신. 

청구항 9 

청구항 1에 있어서, 상기 제1의 이종 서열의 발현이 아데노바이러스 프로모터의 조절하에 있는 백신. 

청구항 10 

청구항 9에 있어서, 상기 제1의 이종 서열의 발현이 내인성 아데노바이러스 프로모터의 조절하에 있는 백신. 

청구항 11 

청구항 10에 있어서, 상기 제1의 이종 서열의 발현이 내인성 주요 레이트 프로모터(Major Late promoter) 및 

3부 리더(tripartite leader)의 조절하에 있는 백신. 

청구항 12 

공개특허 10-2012-0052369 

청구항 1에 있어서, 상기 제1의 이종 서열의 발현이 비-아데노바이러스 프로모터의 조절하에 있는 백신. 

- 2 -

청구항 13 

청구항 12에 있어서, 상기 제1의 이종 서열의 발현이 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터의 조절하에 있는 

백신. 

청구항 14 

청구항 12에 있어서, 상기 제1의 이종 서열의 발현이 CMV 프로모터 및 아데노바이러스 3부 리더의 조절하에 

있는 백신. 

청구항 15 

청구항 1에 있어서, 상기 제1의 이종 서열이 아데노바이러스 스플라이스 수용체에 작동적으로 연결된 백신. 

청구항 16 

청구항 15에 있어서, 상기 제1의 이종 서열이 천연의 E3 24.8k 스플라이스 수용체에 작동적으로 연결된 백신. 

청구항 17 

청구항 1에 있어서, 상기 제1의 이종 서열이 아데노바이러스 폴리A 시그날 서열에 작동적으로 연결된 백신. 

청구항 18 

청구항 17에 있어서, 상기 제1의 이종 서열이 Ad5 E3 폴리A 시그날 서열에 작동적으로 연결된 백신. 

청구항 19 

청구항 1에 있어서, 상기 제1의 이종 서열이 감염성 병원체의 면역원성 단백질을 암호화하는 백신. 

청구항 20 

청구항 19에 있어서, 상기 감염성 병원체가 바이러스, 세균, 원생생물 및 진균으로 이루어진 그룹 중에서 선 

택되는 백신. 

청구항 21 

청구항 20에 있어서, 상기 감염성 병원체가 인플루엔자, 인간 면역결핍성 바이러스 또는 인간 파필로마 바이 

러스인 백신. 

청구항 22 

청구항 20에 있어서, 상기 감염성 병원체가 바실러스(Bacillus), 시겔라(Shigella), 마이코박테리움 

(Mycobacterium) 또는 플라스모디움(Plasmodium)인 백신. 

청구항 23 

청구항 1에 있어서, 상기 제1의 이종 서열이 인플루엔자 헤마글루티닌, 인플루엔자 뉴라미니다제, 인플루엔자 

M2, M2e의 다합체, HTL 에피토프의 다합체, 또는 CTL 에피토프의 다합체를 암호화하는 백신. 

청구항 24 

청구항 1에 있어서, 상기 제1의 이종 서열이 감염성 병원체의 면역원성 단백질을 암호화하는 제1의 ORF, 및 

상기 감염성 병원체로부터의 에피토프의 다합체를 암호화하는 제2의 ORF를 포함하는 백신. 

청구항 25 


상기 아데노바이러스 벡터가 복제 수행성이며, 상기 제1의 이종 서열의 발현이 아데조바이러스 프로모터의 조 

절하에 있는 백신. 

청구항 26 

- 3 - 


청구항 25에 있어서, 상기 아데노바이러스 프로모터가 내인성 아데노바이러스 프로모터인 백신. 

청구항 27 

청구항 25에 있어서, 상기 제1의 이종 서열이 내인성 주요 레이트 프로모터 및 3부 리더의 조절하에 있는 백 

신. 

청구항 28 

청구항 25에 있어서, 상기 아데노바이러스 벡터가 완전한 또는 부분 E3 결실을 포함하고, 여기서 제1의 이종 

서열이 완전한 또는 부분 E3 결실을 함유하는 위치내로 토합되는 백신. 

청구항 29 


상기 아데노바이러스 벡터는 Ad2, Ad3, Ad4, Ad5, Ad6, Ad7, Ad11, Ad20, Ad21, Ad22, Ad23, Ad24, Ad25, 

Ad26, Ad28, Ad34, Ad35, Ad40, Ad41, Ad48, Ad49, Ad50, Ad C1, Ad C3, Ad C6, Ad C7, 또는 Ad68로부터 기원 

하고, 복제 수행성이며, 완전한 E3 결실을 갖는 백신. 

청구항 30 

제1의 이종 서열 및 제2의 이종 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 포함하는 백신으로서, 

상기 제2의 이종 서열은 아데노바이러스 헥손 영역내로 통합되며, 상기 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 비 

-헥손 영역내로 통합되고, 여기서 아데노바이러스 벡터는 복제 수행성인 백신. 

청구항 31 


Ad23, Ad24, Ad25, Ad26, Ad28, Ad34, Ad35, Ad40, Ad41, Ad48, Ad49, 또는 Ad50로부터 기원한 백신. 

청구항 32 


터 기원한 백신. 

청구항 33 

청구항 30에 있어서, 상기 아데노바이러스 벡터가 부분 E3 결실을 포함하고, 여기서 제1의 이종 서열이 부분 

E3 결실을 함유하는 위치내로 통합되는 백신. 

청구항 34 

청구항 30에 있어서, 상기 제1의 이종 서열의 발현이 아데노바이러스 프로모터의 조절하에 있는 백신. 

청구항 35 

청구항 30에 있어서, 상기 제1의 이종 서열의 발현이 내인성 아데노바이러스 프로모터의 조절하에 있는 백신. 

청구항 36 

청구항 30에 있어서, 상기 제2의 이종 서열이 아데노바이러스 벡터의 헥손 영역내로 통합되는 백신. 

청구항 37 

청구항 30에 있어서, 상기 제2의 이종 서열이 HVR1, HVR2, HVR4, 또는 HVR5내로 통합되는 백신. 

청구항 38 

청구항 30에 있어서, 상기 제2의 이종 서열이 바이러스의 막 단백질의 영역을 암호화하는 백신. 

청구항 39 

- 4 - 


청구항 30에 있어서, 상기 제2의 이종 서열이 보존된 바이러스 막 단백질의 세포외 부분을 암호화하는 백신. 

청구항 40 

청구항 30에 있어서, 상기 제2의 이종 서열이 인플루엔자 M2 단백질, 인플루엔자 매트릭스 CTL, 인플루엔자 

NP 에피토프, 다른 혈청형의 아데노바이러스로부터의 하나 이상의 HVR, 또는 이의 조합물을 암호화하는 백신. 

청구항 41 

청구항 30에 있어서, 상기 제2의 이종 서열이 인플루엔자 M2의 M2e의 하나 이상의 카피를 암호화하는 백신. 

청구항 42 

청구항 30에 있어서, 상기 제2의 이종 서열이 인플루엔자 M2의 M2e의 하나 이상의 카피를 암호화하고, 

여기서, 각각의 M2 카피가 상이한 HVR내로 통합되며, 여기서 M2e 중의 하나 이상의 카피가 HVR1, HVR2, HVR4, 

HVR5 또는 이의 조합물내로 통합되는 백신. 

청구항 43 

청구항 30에 있어서, 상기 제2의 이종 서열이 서열 번호 318 (H5 M2e), 서열 번호 321 (H7 M2e), 서열 번호 

327 (H9 M2e), 서열 번호 312 (인간 M2e), 서열 번호 337 (NP), 또는 서열 번호 336 (매트릭스 CTL)의 서열을 

포함하는 백신. 

청구항 44 


상기 제2의 이종 서열이 바이러스의 막 단백질의 영역을 암호화하고 내인성 아데노바이러스 서열에 근접하며, 

상기 제2의 이종 서열이 아데노바이러스 벡터의 헥손 영역내로 통합된 백신. 

청구항 45 

청구항 44에 있어서, 상기 제2의 이종 서열이 인플루엔자 M2 단백질, 인플루엔자 매트릭스 CTL, 인플루엔자 

NP 에피토프, 다른 혈청형의 아데노바이러스로부터의 하나 이상의 HVR, 또는 이의 조합물의 영역을 암호화하 

는 백신. 

청구항 46 



청구항 47 



청구항 48 


상기 제2의 이종 서열이 스페이서 서열에 의해 플랭킹(flanking)된 바이러스의 막 단백질의 영역을 암호화하 

고, 상기 제2의 이종 서열이 아데노바이러스 벡터의 헥손 영역내로 통합되는 백신. 

청구항 49 

청구항 48에 있어서, 상기 스페이서 서열이 "LGS" 펩타이드를 암호화하는 백신. 

청구항 50 




- 5 -

[0001] 

[0002] 

[0003] 

[0004] 

[0005] 

청구항 51 



청구항 52 

청구항 1, 25, 29, 30, 44 및 48 중 어느 한 항에 있어서, 경구, 비강내, 설하, 소낭내, 직장 또는 질내 투여 

용으로 제형화된 백신. 

청구항 53 

청구항 1, 25, 29, 30, 44 및 48 중 어느 한 항에 있어서, 허용되는 담체를 추가로 포함하는 백신. 

청구항 54 

단일 투여량이 약 10 3 

내지 약 10 13 

중 어느 한 항에 따른 백신의 용량 단위. 

청구항 55 

개의 아데노바이러스 입자를 포함하는, 청구항 1, 25, 29, 30, 44 및 48 

피검체에서 감염성 병원체에 대한 면역 반응을 유도하는 방법에 있어서, 상기 피검체에게 청구항 1, 25, 29, 

30, 44 및 48 중 어느 한 항에 따른 백신을 투여함을 포함하는 방법. 

청구항 56 

청구항 55에 있어서, 백신의 1회 이상의 투여량이 피검체에게 투여되는 방법. 

청구항 57 

청구항 55에 있어서, 상기 감염성 병원체가 인플루엔자, HIV, HPV, 바실러스, 플라스모디움, 마이코박테리아 

또는 시겔라인 방법. 

청구항 58 

청구항 55에 있어서, 피검체가 감염성 병원체에 의해 유도된 감염을 가진 방법. 

명 세 서 

기 술 분 야 

관련 출원의 상호 참조 

본원은 2009년 7월 31일자 출원된 미국 가특허원 제61/230,617호를 우선권으로 주장하며, 이의 전문은 참조함 

으로써 본원에 통합된다. 

전자 출원된 텍스트 파일의 설명 

본원과 함께 전자 출원된 텍스트 파일의 내용은 이의 전문은 참조함으로써 본원에 통합된다: 서열 목록의 컴 

퓨터 판독가능한 포맷 사본(파일명: PAXV_004_01WO_SeqList_ST25.txt, 기록일: 2010년 7월 30일, 파일 크기 

62 킬로바이트). 

배 경 기 술 


아데노바이러스는 기본 조사, 및 유전자 치료요법 및 백신에서 이들의 잠재적인 용도를 위한 대상으로 감염제 

로 광범위하게 연구되어 왔다. 49개의 인간 아데노바이러스 혈청형이 확인되었으며 이들은 핵산 비교, 섬유 

단백질 특성, 및 생물학적 특징을 기초로 하여, 6개의 아속(A 내지 F)으로 구분되어져 있다. 예를 들어, 그 

룹 A는 혈청형 12 및 31을 포함하고, 그룹 B는 혈청형 3 및 7을 포함하며, 그룹 C는 혈청형 2 및 5를 포함하 

고, 그룹 D는 혈청형 8 및 30을 포함하며, 그룹 E는 혈청형 4를 포함하고, 그룹 F는 혈청형 40 및 41을 포함 

- 6 -

[0006] 

[0007] 

[0008] 

[0009] 

[0010] 

[0011] 

[0012] 

[0013] 

[0014] 

한다. 

일반적인 구조 측면에서, 지금까지 시험한 모든 아데노바이러스는 외피(envelope)가 없는, 직경이 약 80 나노 

미터인 규칙적인 20면체이다. 아데노바이러스는 코어 단백질로 착화되어 있고 아데노바이러스 캡시드로 둘러 

싸인 선형의, 이본쇄 DNA를 함유한다. 개개 바이러스는 SDS 겔 위에서 이들의 감소하는 크기의 순서로, 로마 

숫자(II-XII)로 지정된 약 11개의 상이한 단백질을 함유한다. 

캡시드는 7개의 구조 단백질: II(헥손), III(펜톤), IIIa, IV(섬유), VI, VII, 및 IX로 구성된다. 캡시드는 

252개의 캡소머(capsomere)를 포함하며, 이중 240개는 헥손 캡소머이고 12개는 펜톤 캡소머이다. 헥손 단백 

질의 삼합체인, 헥손 캡소머는 캡시드 단백질의 약 75%를 구성한다. 펜톤 단백질의 오합체(pentamer)인, 펜 

톤 캡소머는 비리온(virion)의 12개 꼭지점 각각에 위치한다. 각각의 펜톤 캡소머는 6개의 인접한 헥손 캡소 

머 및 섬유에 결합되어 있다. 일반적으로 섬유 단백질의 삼합체인 섬유는 펩톤 캡소머로부터 투사된다. 헥 

손 단백질 및, 보다 적은 정도로, 섬유 단백질은 아데노바이러스의 주요 항원 결정인자를 포함하며 또한 혈청 

형 특이성을 결정한다. 

연구자들은 이에 대해 중화 항체가 유발되는 단백질의 영역을 한정하기 위한 노력으로 상이한 아데노바이러스 

혈청형의 캡시드 단백질, 및 특히 헥손 단백질의 구조를 실험하여 비교해왔다. 이에 대해 중화 항체가 지시 

되는 헥손 단백질내 우세한 영역은 루프 1 및 2(즉, 각각 LI 또는 l1, 및 LII 또는 l2)내에 존재하는 것으로 

여겨지며, 이는 헥손 캡소머의 기저로부터 바깥방향으로 투사된다. 상이한 아데노바이러스 헥손 단백질로부 

터의 루프 1 및 2의 분석은, 헥손 단백질이 혈청형간에 현저히 상이한 위치에 상응하는 7개의 별개의 초가변 

영역(HVR1 내지 HVR7)을 나타내었다. 

아데노바이러스 비리온의 코어는 선형의 이본쇄 DNA 게놈을 함유하며 단백질 V, VII, X (mu), IVa2, 및 말단 

단백질(TP)과 관련되어 있다. 상이한 아데노바이러스의 게놈 구조는 보존되어 있으며 시기선택 기능을 가진 

것으로 제안되어 왔고, 여기서, 게놈의 끝이 먼저 전사된다(이미디에이트 얼리 유전자(immediate early gene) 

E1 및 E4는 선형 게놈의 반대편 말단에 위치한다). E1 및 E4의 얼리 전사는 게놈의 중심 영역의 개방을 초래 

함으로써 중심 영역의 전사를 허용한다. 

아데노바이러스 게놈은 전형적으로 8개의 RNA 폴리머라제 II 전사 단위: 5개의 얼리 단위, E1A, E1B, E2A- 

E2B, E3, 및 E4; 2개의 지연된 얼리 단위, IX 및 IVa2; 및 주요 레이트 전사 단위(Major Late 

transcriptional unit)를 포함한다. 주요 레이트 전사 단위는 또한 대안의 스플라이싱 부위의 용도를 기초로 

하여 L1 내지 L5 영역으로 추가로 세분된다. 전사 단위는 흔히 유사한 기능의 단백질을 발현한다. 예를 들 

어, E1A 단위는 세포 감염시 S-상의 전사 및 유도의 활성화에 관여하는 2개의 단백질을 암호화하며; E1B 전사 

단위는 세포 세포자멸사를 억제하는 2개의 단백질을 암호화하고; E3 전사 단위는 면역 반응의 회피에 포함되 

며; 주요 레이트 전사 단위는 캡시드의 조립에 필수적인 구조 단백질을 암호화한다. 

유전자 치료요법 및 백신화의 목적을 위해, 재조합 아데노바이러스 벡터를 이종 유전자 및 항원을 암호화하고 

발현하도록 설계하여 왔다. Ad2 및 Ad5 혈청형은 이와 관련하여 가장 집중적으로 사용되어 왔다. 이종 서열 

은 얼리 전사 단위 및, 헥손, 펜톤 및 섬유와 같은 각종 구조 단백질의 암호화 영역을 포함하는 아데노바이러 

스 게놈내로 삽입되어 왔다. 많은 경우에, 아데노바이러스 게놈내 결실(예를 들면, E1 영역내)을 사용하여 

복제-결핍성 아데노바이러스 벡터를 생성하여 왔으며, 이는 일반적으로 인간 피검체에 투여하기에 안전한 것 

으로 고려되어 왔다. 이러한 집중적인 연구 및 개발에도 불구하고, 예를 들면, 감염성 질병용 백신으로서 적 

합한 새로운 재조합 아데노바이러스 벡터에 대한 당해 분야의 요구가 남아 있다. 

발명의 내용 

발명의 요약 

본 발명은 효과적인 백신으로서의 용도를 찾는 재조합 아데노바이러스 벡터에 관한 것이다. 본 발명은 부분 

적으로는 이종 서열을 고 수준으로 발현하는 신규한 재조합 아데노바이러스 벡터의 개발을 기초로 한다. 본 

발명은 또한, 부분적으로는 숙주 면역 반응을 개선시키고 기존의 중화 항체를 피하도록 설계된 신규한 재조합 

아데노바이러스 벡터의 개발을 기초로 한다. 본 발명은 또한 부분적으로, 항원-특이적이고/이거나 공통의 인 

플루엔자 백신으로서 사용될 신규한 재조합 아데노바이러스 벡터의 개발을 기초로 한다. 


따라서, 하나의 양태에서, 본 발명은 제1의 이종 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 포함하는 백신을 제 

공하며, 여기서, 아데노바이러스 벡터는 복제 수행성(replication competent)이며 부분적 E3 결실을 갖는다. 

특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 Ad2, Ad3, Ad4, Ad5, Ad6, Ad7, Ad11, Ad20, Ad21, Ad22, Ad23, 

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[0015] 

[0016] 

Ad24, Ad25, Ad26, Ad28, Ad34, Ad35, Ad40, Ad41, Ad48, Ad49, 또는 Ad50 아데노바이러스로부터 기원한다. 

다른 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 침팬지 아데노바이러스, 예를 들면, Ad C1, Ad C3, Ad C6, Ad C7, 

또는 Ad68로부터 기원한다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 부분적인 E3 결실을 함유하는 위치내로 통 

합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열의 조절하에 또는 

이에 작동적으로 연결되어 있다. 예를 들어, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 메이저 레이트 프로모터 

(Major Late 프로모터: MLP), 아데노바이러스 3부 리더(tripartite leader: TPL) 서열, 아데노바이러스 스플 

라이스 수용체 서열, 및/또는 아데노바이러스 폴리-아데닐화 시그날 서열의 조절하에 있을 수 있다. 특정 구 

체예에서, 제1의 이종 서열은 비-아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열, 예를 들면, 사이토메갈로바이 

러스(CMV), 로우스 육종 바이러스(rous sarcoma 바이러스: RSV), 또는 시미안 바이러스(simian 바이러스) 

40(SV40)로부터의 인핸서, 프로모터, 인트론 서열, 및/또는 이러한 성분들의 특정 조합을 포함하고/하거나 이 

의 조절하에 있다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 발현을 증가시키도록 변형된다. 예를 들어, 제1의 

이종 서열은 코돈 최적화되고/되거나 변형되어 컨센수스 코작 서열(consensus Kozak sequence)을 포함할 수 

있다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자 바이러스, 인간 파필로마 바이러스(HPV), 인간 면역 

결핍성 바이러스(HIV), 바실러스(Bacillus), 시겔라(Shigella), 마이코박테리움(Mycobacterium), 플라스모디 

움(Plasmodium) 등과 같은 감염성 병원체로부터의 면역원성 폴리펩타이드를 암호화한다. 특정 구체예에서, 

제1의 이종 서열은 적어도 2개의 별개 폴리펩타이드 및/또는 감염성 병원체로부터의 면역원성 에피토프의 다 

합체를 암호화한다. 

다른 양태에서, 본 발명은 제1의 이종 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 포함하는 백신을 제공하며, 여 

기서, 아데노바이러스 벡터는 복제 수행성이고 완전한 E3 결실을 갖는다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스 

벡터는 Ad2, Ad3, Ad4, Ad5, Ad6, Ad7, Ad11, Ad20, Ad21, Ad22, Ad23, Ad24, Ad25, Ad26, Ad28, Ad34, Ad35, 

Ad40, Ad41, Ad48, Ad49, 또는 Ad50 아데노바이러스로부터 기원한다. 다른 구체예에서, 아데노바이러스 벡터 

는 침팬지 아데노바이러스, 예를 들면, Ad C1, Ad C3, Ad C6, Ad C7, 또는 Ad68로부터 기원한다. 특정 구체 

예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 E3 결실을 함유하는 위치내로 통합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서 

열은 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열의 조절하에 있거나 이에 작동적으로 연결되어 있다. 예를 

들어, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 주요 레이트 프로모터(MLP), 아데노바이러스 3부 리더(TPL) 서열, 

아데노바이러스 스플라이스 수용체, 및/또는 아데노바이러스 폴리-아데닐화 시그날 서열의 조절하에 있거나 

이에 작동적으로 연결될 수 있다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 비-아데노바이러스 전사 및/또는 해 

독 조절 서열, 예를 들면, 사이토메갈로바이러스(CMV), 로우즈 육종 바이러스(RSV), 또는 시미안 바이러스 

40(SV40)으로부터의 인핸서, 프로모터, 인트론 서열 및/또는 리더 서열, 또는 이러한 성분들의 특정 조합을 

포함하고/하거나 이의 조절하에 있다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 발현을 증가하도록 변형된다. 

예를 들어, 제1의 이종 서열은 코돈 최적화되고/되거나 변형되어 컨센서스 코작 서열을 포함할 수 있다. 특 

정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자 바이러스, 인간 파필로마 바이러스(HPV), 인간 면역결핍성 바 

이러스(HIV), 바실러스, 시겔라, 마이코박테리움, 플라스모디움 등과 같은 감염성 병원체로부터의 면역원성 

폴리펩타이드를 암호화한다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 감염성 병원체로부터의 면역원성 에피토프 

의 2개 이상의 별개의 폴리펩타이드 및/또는 다합체를 암호화한다. 


다른 양태에서, 본 발명은 제1의 이종 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 포함하는 백신을 제공하며, 여 

기서, 상기 아데노바이러스 벡터는 복제 적경성이고, 여기서, 제1의 이종 서열의 발현은 아데노바이러스 전사 

및/또는 해독 조절 서열의 조절하에 있다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 Ad2, Ad3, Ad4, Ad5, 

Ad6, Ad7, Ad11, Ad20, Ad21, Ad22, Ad23, Ad24, Ad25, Ad26, Ad28, Ad34, Ad35, Ad40, Ad41, Ad48, Ad49, 또 

는 Ad50 아데노바이러스로부터 기원한다. 다른 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 침팬지 아데노바이러스, 

예를 들면, Ad C1, Ad C3, Ad C6, Ad C7, 또는 Ad68로부터 기원한다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스는 완 

전하거나 부분적인 E3 결실을 갖는다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전하거나 부분적인 E3 결실을 

함유하는 위치내로 통합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 MLP의 조절하에 있거나 

이에 작동적으로 연결된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 MLP 및 아데노바이러스 TPL 

서열의 조절하에 있거나 이에 작동적으로 연결된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 또한 아데노바이러 

스 스플라이스 수용체 서열 및/또는 아데노바이러스 폴리-아데닐화 시그날 서열의 조절하에 있거나 이에 작동 

적으로 연결된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 발현을 증가시키도록 변형된다. 예를 들어, 제1의 

이종 서열은 코돈 최적화되고/되거나 변형되어 컨센서스 코작 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, 제1의 이 

종 서열은 인플루엔자 바이러스, 인간 파필로마 바이러스(HPV), 인간 면역결핍성 바이러스(HIV), 뎅기열 바이 

러스(Dengue Fever 바이러스), 스트렙토코커스, 바실러스, 시겔라, 마이코박테리움, 플라스모디움 등과 같은 

- 8 -

[0017] 

[0018] 


[0020] 

[0021] 

[0022] 

감염성 병원체로부터의 면역원성 폴리펩타이드를 암호화한다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 적어도 2 

개의 별개의 폴리펩타이드 또는, 감염성 병원체로부터의 면역원성 에피토프의 다합체를 암호화한다. 

다른 양태에서, 본 발명은 제1의 이종 서열 및 제2의 이종 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 포함하는 

백신을 제공하고, 여기서, 제2의 이종 서열은 아데노바이러스 헥손 영역내로 통합되며, 여기서, 제1의 이종 

서열은 아데노바이러스 비-헥손 영역내로 통합되고 여기서, 아데노바이러스 벡터는 복제 수행성이다. 특정 

구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 Ad2, Ad3, Ad4, Ad5, Ad6, Ad7, Ad11, Ad20, Ad21, Ad22, Ad23, Ad24, 

Ad25, Ad26, Ad28, Ad34, Ad35, Ad40, Ad41, Ad48, Ad49, 또는 Ad50 아데노바이러스로부터 기원한다. 다른 

구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 침팬지 아데노바이러스, 예를 들면, Ad C1, Ad C3, Ad C6, Ad C7, 또는 

Ad68로부터 기원한다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스는 완전하거나 부분적인 E3 결실을 갖는다. 특정 구 

체예에서, 제1의 이종 서열은 완전하거나 부분적인 E3 결실을 함유하는 위치내로 통합된다. 특정 

구체예에서, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열의 조절하에 있거나 이에 작동적 

으로 연결된다. 예를 들어, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 주요 레이트 프로모터(MLP), 아데노바이러스 

3부 리더(TPL) 서열, 아데노바이러스 스플라이스 수용체 서열, 및/또는 아데노바이러스 폴리-아데닐화 시그날 

서열의 조절하에 있거나 이에 작동적으로 연결될 수 있다. 

특정 구체예에서, 제2 이종 서열은 헥손 영역의 하나 이상의 초가변성 영역내로 통합된다. 예를 들어, 제2 

이종 서열은 헥손 HVR1, HVR2, HVR4, 또는 HVR5 서열, 또는 이의 조합에 통합될 수 있다. 특정 구체예에서, 

제2 이종 서열은 바이러스 막 단백질(예를 들면, 인테그랄 막 단백질 또는 말초 막 단백질)의 부위를 암호화 

한다. 예를 들면, 제2 이종 서열은 보존된 바이러스 막 단백질의 세포외 부분을 암호화할 수 있다. 특정 구 

체예에서, 제2 이종 서열은 인플루엔자 M2 단백질, 인플루엔자 매트릭스 단백질, 인플루엔자 NP 단백질, 또는 

상이한 혈청형을 가진 아데노바이러스로부터의 헥손 초가변 영역중 일부를 암호화한다. 특정 구체예에서, 제 

2 이종 서열은 바이러스 막 단백질, 또는 이의 단편과 같은 단백질의 2개 이상의 카피를 암호화한다. 

특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 하나 이상의 추가의 이종 서열을 포함하며, 여기서, 각각의 추가의 

이종 서열은 헥손 영역내로 통합되고 제2 이종 서열과는 상이하다. 예를 들면, 추가의 이종 서열은 상이한 

혈청형을 가진 아데노바이러스로부터의 초가변 영역 모두일 수 있다. 

다른 양태에서, 본 발명은 제2 이종 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 포함하는 백신을 제공하며, 여기 

서, 제2 이종 서열은 바이러스의 막 단백질의 영역을 암호화하고 아데노바이러스 벡터의 헥손 영역내로 통합 

된다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 Ad2, Ad3, Ad4, Ad5, Ad6, Ad7, Ad11, Ad20, Ad21, Ad22, 

Ad23, Ad24, Ad25, Ad26, Ad28, Ad34, Ad35, Ad40, Ad41, Ad48, Ad49, 또는 Ad50 아데노바이러스로부터 기원 

한다. 다른 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 침팬지 아데노바이러스, 예를 들면, Ad C1, Ad C3, Ad C6, 

Ad C7, 또는 Ad68로부터 기원한다. 특정 구체예에서, 제2 이종 서열은 내인성 아데노바이러스 서열에 인접한 

다. 다른 구체예에서, 제2 이종 서열은 스페이서에 의해 플랭킹(flanking)되어 있다. 특정 구체예에서, 스 

페이서는 펩타이드 서열 "LGS"를 암호화한다. 특정 구체예에서, 제2 이종 서열은 인플루엔자 바이러스로부터 

기원한다. 예를 들어, 제2 이종 서열은 인플루엔자 M2, 인플루엔자 매트릭스 또는 인플루엔자 NP 폴리펩타이 

드 또는 이의 단편을 암호화할 수 있다. 

또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 기술된 재조합 아데노바이러스 벡터-계 백신을 사용한 백신화 방법을 제 

공한다. 특정 구체예에서, 백신화는 인플루엔자, 인간 파필로마 바이러스(HPV), 인간 면역결핍성 바이러스 

(HIV), 뎅기열 바이러스, 스트렙토코커스, 바실러스, 시겔라, 마이코박테리움 또는 플라스모디움에 대한 것이 

다. 

도면의 간단한 설명 

도 1은 pPV-Ad4vax 재조합 아데노바이러스 벡터의 생산에 관여하는 각종 클로닝 단계의 도해이다. 

도 2는 각종 개방 판독 프레임의 위치, E3의 예시적인 부분 및 완전한 결실의 종점, 및 이종 서열이 영역내로 

통합될 수 있는 대표적인 위치를 설명하는 Ad4 E3 영역의 도해이다. 

도 3은 아데노바이러스 게놈내 각종 전사 단위의 위치를 나타내는 도해이다. 


도 4는 4개의 상이한 Ad4 H5-HA 바이러스로 감염된 A549 세포로부터의 헤마글루티닌 발현의 웨스턴 블롯 

(western blot)에 의한 검출을 도시한다. A549 세포(6-웰 플레이트내 50-70% 합치성)을 2.5 x 10 7 

vp/mL의 

각각의 바이러스로 감염시키고 37℃에서 CO2 항온처리기 속에서 항온처리하였다. 각각 24 또는 48시간 후, 

- 9 -

전체 세포 분해물을 제조하였다. 단백질을 SDS-PAGE로 분리하고, 니트로셀룰로즈로 이동시키고 블롯을 항체 

로 프로빙(probing)하여, 나타낸 바와 같이 HA, β-액틴 및 α-튜불린을 검출하였다. 둘다 감염되지 않고 관 

련되지 않은 재조합체 바이러스인, 마커 레인 및 대조군을 또한 확인한다. 모든 재조합체 바이러스는 실질적 

으로 보다 낮은 수준의 HA를 발현한 최적화되지 않은 CMV 바이러스인, PXVX0113을 제외하고는 HA를 풍부하게 

발현한다. 

도 5는 웨스턴 블롯 분석에 의해 검출된 것으로서 본 발명의 2개의 상이한 아데노바이러스 벡터로부터의 인플 

루엔자 HA 단백질의 발현을 입증한다. PXVX0101 벡터는 부분적인 E3 결실 및, HA를 암호화하는 이종 서열을 

함유하며, 여기서, 이종 서열은 부분적인 E3 결실내로 및 내인성 MLP의 조절하에 삽입된다. PXVX0111 벡터는 

완전한 E3 결실 및, HA를 암호화하는 이종 서열을 함유하며, 여기서, 이종 서열은 E3 결실과 근접하게 삽입되 

며 CMV 프로모터를 포함한다. 

도 6은 PXVX0101로 감염된 A549 세포의 H3 HA 항원 및 아데노바이러스 단백질에 대한 실시간 PCR에 의한 mRNA 

발현을 나타낸다. 

도 7은 FACS 검정에서 HA의 표면 발현을 입증하며, 여기서, A549 세포는 PXVX0101 및 PXVX0111로 감염된다. 

도 8a 및 8b는 본 발명의 아데노바이러스 벡터의 생산을 시험하는데 사용될 수 있는 1-단계 성장 검정 및, 3 

개의 상이한 세포주에서 PXVX0101 및 PXVX0111에 대한 검정의 결과를 기술하는 흐름도를 나타낸다. 

도 9a 및 9b는 인플루엔자 바이러스(A) 또는 PVXV0101 (B)로 감염된 A549 세포에서 적혈구 세포의 응집을 나 

타낸다. 

도 10은 키메라 헥손 암호화 서열을 생성하는데 사용될 수 있는 헥손 서열을 생성하는데 있어 관여된 각종 클 

로닝 단계의 도해이다. 

도 11은 키메라 서열을 작제하는데 사용되는 헥손 암호화 서열의 단편내 헥손 HVR 1-6 영역의 위치의 도해이 

다. 

도 12는 헥손 HVR 서열을 교체하는데 사용될 수 있는 각종 인플루엔자 에피토프 서열을 도시한 것이다. H5 

M2e(서열 번호 339-341), H7 M2e(서열 번호 342-343); H9 M2e(서열 번호 344-345); 인간 M2e(서열 번호 346- 

347); NP(서열 번호 348-349); 매트릭스 CTL 58-66(서열 번호 350-351). 

도 13은 일련의 키메라 Ad4 헥손 작제물을 도시하며, 어떤 HVR가 인플루엔자 M2, 매트릭스, 및/또는 NP 서열, 

또는 다른 Ad7 헥손 HVR 서열과 대체될 수 있는지를 나타낸다. 

도 14는 PXVX0103 및 PXVX0116 재조합 아데노바이러스에 의해 유도된 마우스에서 HA-특이적인 항체 반응을 도 

시한다. 

도 15는 Ad4-H5-Vtn 벡터 설계(PXVX0103)를 개략적으로 나타낸다. 다중염기성 도메인이 제거된, H5 HA 천연 

암호화 서열은 A/VietNam/1194/2004 인플루엔자 바이러스로부터 기원하였으며, Ad4 바이러스 E3 유전자 영역 

내로 삽입되었다. Ad4 바이러스 E3 24.8K, E3 6.8K 및 E3 29.7K 유전자가 결실되어 HA 삽입유전자를 수용하 

였으며, E3 24.8K의 스플라이스 수용체 부위가 보유되어 HA 삽입유전자의 발현을 유도하였다. Ad5로부터 기 

원한 E3A 폴리아데닐화 시그날 서열은 HA 암호화 서열의 하부에 위치하였다. 

도 16. (A)는 H5 HA의 세포 표면 발현을 입증하는 PXVX0103의 특성화를 나타낸다. HA(H5-Vtn) 표면 발현은 

1x10 6 

A549 세포를 상이한 수준의 PXVX0103(나타낸 바와 같음)로 48시간 동안, 마우스 항-조류 H5 모노클로날 

항체(클론 19C11, 제조원: Advanced ImmunoChemical)로 표면을 염색하기 전에, 감염시켜 확인하였다. 검출은 

염소 항-마우스 IgG-PE 제2 항체를 사용하였다. Ad4 야생형을 Ad4-H5-Vtn 감염된 세포(주)와 비교하기 위한 

대조군(빗금친 영역)으로 사용하였다. 증가하는 양의 Ad4-H5-Vtn과 함께 우측으로의 유의적인 이동은, 세포 

가 세포 표면에서 풍부한 수준의 H5 단백질을 발현함을 나타낸다. (B) 동일한 시료의 웨스턴 분석을 (A)에서 

유동 세포분석법에 사용하였다. 


도 17은 PXVX0103로부터 발현된 재조합체 HA (Vtn)가 바이러스-감염된 A549 세포의 적혈구 세포 로제팅 

(rosetting)에 의해 입증되는 바와 같이 기능성임을 나타낸다. (A) PXVX0103 또는 (B) Ad4-wt로 24시간 동안 

감염되고, 세척된 후, 인간 공여자 적혈구 세포(RBC)의 존재하에 항온처리한 A549 세포의 대표적인 사진이 나 

타나 있다. 로제트는 A549 세포 표면(거대 세포) 상의 바이러스-발현된 HA와, RBC(보다 작은 세포)의 표면에 

서 발견된 N-아세틸뉴라민산(세포에서 발견된 우세한 시알릭 산) 사이의 상호작용의 신호로서 백색 화살표로 

- 10 -

나타낸다. 이는 HA가 정확하게 폴딩된 경우에만 나타날 것이다. 

도 18은 Ad4-H5-Vtn(PXVX0103) 바이러스 성장이 각종 인간 세포주 대 Ad4 야생형 바이러스에서 약화됨을 나타 

낸다. Ad4-H5-Vtn 바이러스의 성장을 Ad4 WT 바이러스의 성장과 몇가지 인간 세포주: A549(폐 암종; A), 

H1299(폐 암종; B), HepG2(간세포 암종; C), HuTu 80(십이지장 샘암종; D) 및 MRC-5(배아 폐 섬유모세포; E) 

에서 비교하였다. 

도 19는 Ad4-특이적인 중화 항체 역가(A) 및 Ad4wt 면역화(B) 다음의 Ad4-특이적인 세포 면역성을 도시한다. 

마우스를 마우스당 1 x 10 9 

vp의 Ad4wt 바이러스로 비강내 면역화시켜 벡터에 대한 기존의 면역성을 확립하였 

다. 면역화한지 4주 후, 10마리의 개개 마우스를 방혈시키고 Ad4-특이적인 중화 항체 역가를 측정하였다(A). 

2마리의 마우스를 참수시키고 비장을 혼주(pooling)시켜 IFN-γ ELISPOT(B)에 의해 검정된 것으로서, Ad4wt 

바이러스-특이적인 세포 면역성을 측정하였다. 

도 20은 Ad4-H5-Vtn 백신 면역화 및 H5N1 리어설턴트 바이러스 챌린지(H5N1 reassortant viral challenge)한 

다음에 Ad4-H5-Vtn 백신-유도된 HAI 항체 역가(A) 및 HA-특이적인 세포 면역 반응(B)을 부스팅(boosting)함을 

도시한다. 마우스 그룹을 Ad4 WT 바이러스로 면역화(예비-처리)하여 기존의 면역성을 확립하였다. 예비-처 

리된 및 순수한 마우스를 후속적으로 Ad4-H5-Vtn 백신: 마우스당 1 x 10 9 

, 1 x 10 8 

, 1 x 10 7 

및 1 x 10 6 

투여량 적정으로 비강내 면역화하고, H5N1 리어설턴트 바이러스 챌린지를 수행하여 HAI 항체 역가를 측정한 

다음에 백신 면역화 후 6주째에 및 다시 5일 후에 방혈시켰다. 그룹으로부터의 3마리의 마우스를 방혈시키고 

혈청을 혼주시켜 HAI 항체 역가(A)를 측정하였다. 2마리의 마우스를 또한 동시에 H5N1 챌린지 전 및 후에 참 

수시키고 비장세포를 혼주시켜 IFN-γ ELISPOT에 의해 평가된 4개의 H5 HA (Vtn)-기원한 15-머 펩타이드(15- 

mer peptide)에 대해 특이적인 H5 HA-특이적인 세포 면역성을 측정하였다. (B) 마우스를 Ad4 WT 바이러스로 

예비-처리하고 H5N1 리어설턴트 바이러스로 챌린징하여 인플루엔자 바이러스 챌린지 5일 후 검출가능한 HAI 

항체 역가 및 H5HA-특이적인 세포 반응이 없음을 입증하였다. 

도 21은, 고 투여량의 Ad4-H5-Vtn 백신으로 면역화시킨 마우스가 체중 감소를 나타내지 않았고(A), 치명적인 

H5N1 리어설턴트 바이러스 챌린지에서 생존하였으며(B) 폐에서 H5N1 리어설턴트 바이러스가 감소되었음(C)을 

나타낸다. 마우스 그룹을 Ad4 WT 바이러스로 면역화시켜 기존의 면역성을 확립하였다. 마우스를 후속적으로 

Ad4-H5-Vtn 백신의 투여량 적정으로 비강내 면역화하였다. Ad4-H5-Vtn 백신 면역화 6주 후, 마우스를 치사 

투여량의 H5N1 리어설턴트 바이러스로 챌린지하였다. 마우스의 중량을 매일 평가하고(A), 마우스의 생존을 

14일 기간에 걸쳐 평가하고(B) H5N1 리어설턴트 바이러스 챌린지한지 5일 후에, 폐를 마우스의 소세트로부터 

회수하여 면역화되지 않은 마우스에 대해 상대적인 바이러스 역가의 감소 퍼센트로서 나타낸 바와 같은 인플 

루엔자-특이적인 바이러스 역가를 측정하였다(C). 

도 22는 Ad4-H5-Vtn (PXVX0103)가 다중 투여 경로에 의해 전달된 경우 토끼에서 H5 HA 삽입유전자에 대한 면 

역 반응을 유도함을 나타낸다. ELISA 검정을 14일후(A)에 이어 첫번째 면역화 또는 제2 면역화를 수반하는 

14일을 나타내는 43일 후(B)에 수집하였다. ELISA 데이타를 종점 측정으로 분석하고 분석을 표에 나타내었다 

(C). 

도 23은, Ad4-H5-Vtn(PXVX0103) 인플루엔자 백신이 설하, 질내 및 직장 경로에 의해 전달된 경우 마우스에서 

유의적인 H5 HA-특이적인 항체 반응을 유도함을 나타낸다. ELISA 검정을 설하(A), 질내(B), 또는 직장(C) 

투여 경로에 의한 재조합체 Ad4-H5-Vtn 바이러스 입자를 사용한 제2 면역화 후 2 내지 4주째에 수집한 혈액 

시료에서 수행하였다. 

도 24는 rAd4 벡터로 감염된 A549 세포로부터의 가용성(PA) 및 세포 결합된(PA + GPI) 재조합체 PA 둘다의 웨 

스턴 분석에 의한 입증을 나타낸다. rAd4로 감염된 A549 세포로부터 전체 세포 분해물(좌측 패널) 또는 세포 

배양 상층액(우측 패널)을 SDS-PAGE 겔 상에서 분리한 후 웨스턴 블롯으로 분석하였다. 니트로셀룰로즈 막을 

항-PA 마우스 모노클로날 항체로 프로빙하였다. 재조합체 단백질 발현의 확인은 양성 대조군으로서 평행하게 

로딩된 시판되는 재조합체 PA(rPA)에 대해 참조하여 수행하였다. Ad4 야생형 바이러스(Ad4 WT)로 감염된 

A549 및 A549는 음성 대조군을 나타내며, rPA에 대한 특이성을 입증한다. 단백질 수준은 총 단백질 수준에 

의해 상대적인 양으로 나타낸다. 

도 25는 Ad4-PA-감염된 A549 세포에서 검출된 rPA의 세포 표면 발현을 나타낸다. A549 세포를 100의 MOI로 

감염시키고, PA의 세포 표면 발현을 FACS 분석에 의해 24시간 배양 후 PA-특이적인 모노클로날 항체를 사용하 

여 측정하였다. 각각의 그룹에 대한 평균 형광성 강도(MFI)를 우측에 나타낸다. 

- 11 - 


vp의

도 26은, PXVX0212 및 PXVX0214 재조합체 Ad4-PA 아데노바이러스가 2개의 인간 세포주에서 Ad4 WT과 비교하여 

약화된 성장을 나타냄을 도시한다. rAd4 수준의 시간 과정을 A549(폐 암종) 또는 MRC-5(배아 폐 섬유모세포, 

이배체) 세포의 rAd4-PA 바이러스 감염 후 TCID50으로 측정하였다. 세포 파열 크기를 참조로서 최소 감염성 

수준(A549에 대해 1시간 후 및 MRC-5에 대해 24시간 후)을 사용하여 감염에 있어서의 차이에 대해 교정함으로 

써 계산하였다. 

도 27은 rAd4-감염된 A549로부터의 세포 분해물이 치사 독소 챌린지로부터 마우스를 보호함을 나타낸다. 마 

우스(6/그룹)를 Ad4 WT, 재조합체 Ad4-PA, 또는 재조합체 Ad4-PA-GPI의 5 x 10 8 

x 10 6 

바이러스 입자로 감염시킨 5 

세포와 동등한 전체 세포 분해물의 복강내 주사(IP)로 면역화하였다. 양성 대조군으로서, 10㎍ rPA를 

피하(S.C.) 투여하였다. 면역화한지 5주 후 마우스를 치사 독소(120㎍ PA와 60㎍ LF의 조합)로 정맥내 챌린 

지하고 매일 모니터링하였다. 

도 28은, rPA에 대한 항체 반응이 rAd4-PA 감염된 A549 세포 분해물의 IP 전달 후 검출되었음을 나타낸다. 

항체 반응을 재조합체 Ad4-PA 아데노바이러스로 감염된 A549 세포로부터의 전체 세포 분해물로 복강내 면역 

화시킨 마우스로부터 수득하였다. 항체 반응을 면역화 후 21일째에 ELISA(좌측 패널) 및, 독소 중화 검정에 

근거한 시험관내 대식구(우측 패널) 둘다에 의해 분석하였다. EC50을 6마리 동물/그룹으로부터 계산하였다. 

도 29는 정제된 rAd4 PA 바이러스를 사용하여 마우스를 비강내 면역화한 후 수행된 치사 챌린지 실험의 개략 

도를 나타낸다. 마우스를 0일째에 나타낸 5개의 상이한 항원(n=25/그룹)중 하나로 면역화시켰다. rAd4 바이 

러스를 동물당 50-62.5 μ L PBS 중 1 x 10 10 

vp로서 비강내(I.N.) 투여하였다. 양성 대조군에게 10㎍ 재조합 

체 보호성 항원(rPA) 단독 또는 1mg의 수산화알루미늄 겔(Rehydragel HPA)에 흡착된 10㎍의 rPA를 함유한 100 

μL PBS의 최종 용적으로 정맥내 주사하였다. 세포 면역성(IFN-γ ELISPOT 및 IL-4 ELISPOT)을 2마리 마우스 

/그룹으로부터 혼주된 비장 세포내에서 면역화 후 27일째에 측정하였다. 독소 챌린지 #1(면역화후 20일째, 

n=10/그룹)에서 생존한 마우스를 54일째에 세포 면역성에 대해 검정하였다. 동일한 9마리 동물/그룹(5개 그 

룹)을 ELISA 및 독소 중화 검정 둘다를 위해 면역화 후 14 및 40일 후에 방혈하였다. 그룹당 총 10마리의 마 

우스를 또한 면역화 후 46일째에 치사 독소 챌린지(120㎍ PA 및 60㎍ 치사 인자의 조합을 사용)하였다. 생존 

을 챌린지 후 30일 동안 모니터링하였다. 

도 30은 정제된 Ad4-PA 및 Ad4-PA-GPI 바이러스로 비강내 면역화한 후 14일 및 40일째에 혈청중에서 측정한 

항체 반응을 나타낸다. ELISA로 분석한 항-PA IgG 반응을 좌측 패널에 나타내고, 시험관내 쥐 대식구 계 독 

소 중화 검정으로 측정한 독소 중화 항체(TNA)를 우측 패널에 나타내었다. EC50을 시료의 일련 희석으로부터 

데이타에 대해 S자 곡선 투여량-반응 곡선 피트를 사용하여 계산하였다. 

도 31은 rAd4-PA 바이러스로 면역화한 경우 치사 독소 챌린지로부터 마우스의 보호를 나타낸 생존 곡선을 나 

타낸다. 마우스(n=10/그룹)을 5개의 상이한 면역원(rPA, rPA + alum, Ad4 야생형, Ad4-PA, 및 Ad4-PA-GPI) 

중 하나로 0일째에 면역화하고, 면역화 후 20일 및 46일째에 치사 독소(100μL의 총 용적의 PBS중 60㎍ PA 및 

30㎍ LF)로 챌린지하였다. 생존을 30일 동안 모니터링하였다. 좌측 패널은 면역화 후 20일째에 챌린지 후 

생존을 나타낸다. 우측 패널은 면역화 후 46일째에 챌린지 후 생존을 나타낸다. 

도 32는 치사 독소 챌린지 후 검출되는 세포 매개된 면역 반응을 유도하는 rAd4-PA 바이러스를 사용한 마우스 

의 면역화를 나타낸다. 세포 매개된 면역 반응(IFN-γ ELISPOT 및 IL-4 ELISPOT)을 면역화 후 27일째에 0일 

째에 5개의 상이한 면역원(rPA, rPA + alum, Ad4 야생형, Ad4-PA, 및 Ad4-PA-GPI) 중 하나로 면역화한 마우스 

(2마리 마우스/그룹)로부터 혼주된 비장세포내에서 측정하였다. 독소 챌린지 #1(면역화 후 20일째, n=10/그 

룹)에서 생존한 마우스를 54일째(챌린지 후 34일째)에 세포 면역 반응에 대해 검정하였다. 좌측 패널: IFN- 

γ ELISPOT에 의해 측정한 Th1 반응. 우측 패널: IL-4 ELISPOT에 의해 측정한 Th2 반응. 

도 33은 52.5K 폴리펩타이드의 Ad4-CMV-HTL24 (PXVX0109) 발현을 나타낸다. (A) GPGPG 스페이서 서열(서열 

번호 353)에 의해 각각 분리된 24개의 인플루엔자 헬퍼 에피토프를 함유하는 HTL24 폴리펩타이드 유전자의 개 

략도. (B) CMV 프로모터(PXVX0109)에 의해 유도된 HTL24 발현 및 E3 영역의 완전한 결실을 갖는 재조합체 Ad4 

바이러스로 감염된 A549 세포로부터 세포 분해물의 웨스턴 블롯 분석. 양성 대조군으로서, A549 세포를 

A/Uruguay/716/2007(A/Brisbane/10/2007-유사) 인플루엔자(NYMC X-175C 리어설턴트, NIBSC)로 감염시켰다. 

PVXV0109 재조합 아데노바이러스는 52.5kDa에서 이주하는 밴드에 의해 나타난 바와 같이 HTL24 폴리펩타이드 

를 효율적으로 발현한다. 

- 12 - 


[0023] 

[0024] 

[0025] 

[0026] 

[0027] 

발명을 실시하기 위한 구체적인 내용 

상세한 설명 

본원에 사용된 것으로서, 다음 용어들은 하기 의미를 가질 것이다. 

용어 "아데노바이러스 벡터"는 야생형, 돌연변이체 및/또는 재조합 아데노바이러스 게놈 뿐만 아니라 이러한 

게놈을 포함하는 아데노바이러스도 나타낸다. 아데노바이러스 벡터는 어떠한 아데노바이러스 혈청형의 게놈 

중 모두 또는 일부 뿐만 아니라 이의 조합(즉, 하이브리드 게놈)도 포함할 수 있다. 

용어 "감염성 병원체"는 인간을 감염시킬 수 있고 건강에 유해를 끼질 수 있고/있거나 면역 반응을 유발시킬 

수 있는 모든 제제를 나타낸다. 특정 구체예에서, 감염성 병원체는 인플루엔자 바이러스, 레트로바이러스[예 

를 들면, HIV, 로우스 육종 바이러스(RSV), 인간 내인성 레트로바이러스 K(HERV-K)], 인간 내인성 레트로바이 

러스 K(HERV-K), 파필로마바이러스(예를 들면, 인간 파필로마 바이러스), 피코르나바이러스(예를 들면, A형 

간염, 폴리오바이러스), 헤파드나바이러스(예를 들면, B형 간염), 플라비바이러스(예를 들면, C형 간염, 황색 

열 바이러스, 뎅기열 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 웨스트 나일 바이러스(West Nile 바이러스), 토가바이러 

스[예를 들면, 치쿤군야 바이러스(chikungunya 바이러스), 이스턴 말 뇌염(Eastern equine encephalitis: 

EEE) 바이러스, 웨스턴 말 뇌염(Western equine encephalitis: WEE) 바이러스, 베네쥬엘라 말 뇌염 

(Venezuelan equine encephalitis: VEE) 바이러스], 헤르페스바이러스(예를 들면, 사이토메갈로바이러스), 파 

라믹소바이러스(파라인플루엔자 바이러스, 폐렴 바이러스, 기관지염 바이러스, 일반 감기 바이러스, 홍역 바 

이러스, 볼거리 바이러스), 라브도바이러스(rhabdo바이러스)[예를 들면, 라비스 바이러스(Rabies 바이러스)], 

필로바이러스[예를 들면, 에볼라 바이러스(Ebola 바이러스)], 분야바이러스(bunya바이러스)[예를 들면, 한타 

바이러스(Hanta바이러스), 리프트 발리 열 바이러스(Rift Valley Fever 바이러스)], 칼리키바이러스(calici바 

이러스)[예를 들면, 노로바이러스(Noro바이러스)], 또는 레오바이러스(reo바이러스)[예를 들면, 로타바이러스 

(Rota바이러스), 엡슈타인-바르 바이러스(Epstein-Barr 바이러스), 헤르페스 단성 바이러스(Herpes simplex 

바이러스) 제1형 및 제2형]과 같은 바이러스이다. 


다른 구체예에서, 감염성 병원체는 그람-음성 세균, 그람-양성 세균, 또는 다른 유형의 세균과 같은 원핵세포 

유기체이다. 이러한 원핵세포 유기체는 바실러스[예를 들면, 바실러스 안트라키스(Bacillus anthracis)], 마 

이코박테리움(Mycobacterium)[예를 들면, 마이코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 마이 

코박테리움 레프라에(Mycobacterium Leprae)], 시겔라(Shigella)[예를 들면, 시겔라 소네이(Shigella 

sonnei), 시겔라 디센테리아에(Shigella dysenteriae), 시겔라 플렉스네리(Shigella flexneri)], 헬리코박터 

(Helicobacter)[예를 들면, 헬리코박터 필로리(Helicobacter pylori)], 살모넬라(Salmonella)[예를 들면, 살 

모넬라 엔테리카(Salmonella enterica), 살모넬라 티피(Salmonella typhi), 살모넬라 티피무리움(Salmonella 

typhimurium)], 네이세리아(Neisseria)[예를 들면, 네이세리아 고노로에아에(Neisseria gonorrhoeae), 네이세 

리아 메닌기티디스(Neisseria meningitidis)], 모락셀라(Moraxella)[예를 들면, 모락셀라 카타랄리스 

(Moraxella catarrhalis)], 해모필루스(Haemophilus)[예를 들면, 해모필루스 인플루엔자에(Haemophilus 

Influenzae)], 클렙시엘라(Klebsiella)[예를 들면, 클렙시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae)], 레지오 

넬라(Legionella)[예를 들면, 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila)], 슈도모나스(Pseudomonas)[예를 

들면, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)], 아키네토박터(Acinetobacter)[예를 들면, 아키네 

토박터 바우만니이(Acinetobacter baumannii)], 리스테리아(Listeria)[예를 들면, 리스테리아 모노시토게네스 

(Listeria monocytogenes)], 스타필로코쿠스(Staphylococcus)[예를 들면, 메티실린-내성, 다중약물-내성 또는 

옥사실린-내성 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)], 스트렙토코쿠스(Streptococcus)[예를 들 

면, 스트렙토코쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae), 스트렙토코쿠스 피오게네스(Streptococcus 

pyogenes), 스트렙토코쿠스 아갈락티아에(Streptococcus agalactiae)], 코리네박테리움(Corynebacterium)[예 

를 들면, 코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterium diphtheria)], 클로스트리디움(Clostridium)[예를 

들면, 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum), 클로스트리디움 테타니(Clostridium tetani), 클로 

스트리디움 디피실레(Clostridium difficile)], 클라미디아(Chlamydia)[예를 들면, 클라미디아 뉴모니아 

(Chlamydia pneumonia), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis)], 캄필로박터(Camphylobacter)[예 

를 들면, 캄필로박터 제주니(Camphylobacter jejuni)], 보르데텔라(Bordetella)[예를 들면, 보르데텔라 페르 

투시스(Bordetella pertussis)], 엔테로코쿠스(Enterococcus)[예를 들면, 엔테로코쿠스 파에칼리스 

(Enterococcus faecalis), 엔테로코쿠스 파에쿰(Enterococcus faecum), 반코마이신-내성 엔테로코쿠스 

(Vancomycin-resistant enterococcus: VRE)], 비브리오(Vibrio)[예를 들면, 비브리오 콜레라에(Vibrio 

cholerae)], 예르시니아(Yersinia)[예를 들면, 예르시니아 페스티스(Yersinia pestis)], 부르콜데리아 

- 13 -

[0028] 

[0029] 

[0030] 

[0031] 

[0032] 

[0033] 

[0034] 

(Burkholderia)[예를 들면, 부르콜데리아 세파시아 복합체(Burkholderia cepacia complex)], 콕시엘라 

(Coxiella)[예를 들면, 콕시엘라 부르네티(Coxiella burnetti)], 프란키셀라(Francisella)[예를 들면, 프란키 

셀라 툴라렌시스(Francisella tularensis)], 및 에스케리키아(Escherichia)[예를 들면, 장독소생성, 장출혈성 

또는 시가 독소-생산 이. 콜라이(E. coli), 예를 들면, ETEC, EHEC, EPEC, EIEC, 및 EAEC)]를 포함하나, 이에 

한정되지 않는다. 

또 다른 구체예에서, 감염성 병원체는 진핵세포 유기체이다. 진핵세포 유기체의 예는 플라스모디움 

(Plasmodium)[예를 들면, 플라스모디움 팔키파룸(Plasmodium falciparum), 플라스모디움 비박스(Plasmodium 

vivax), 플라스모디움 오발레(Plasmodium ovale), 플라스모디움 말라리아에(Plasmodium malariae), 플라스모 

디운 디아레아(Plasmodium diarrhea)], 및 진균, 예를 들면, 칸디다(Candida)[예를 들면, 칸디다 알비칸스 

(Candida albicans)], 아스퍼질러스(Aspergillus)[예를 들면, 아스퍼질러스 푸미가투스(Aspergillus 

fumigatus)], 크립토코쿠스(Cryptococcus)[예를 들면, 크립토코쿠스 네오포르만스( Cryptococcus 

neoformans)], 히스토플라스마(Histoplasma)[예를 들면, 히스토플라스마 캅슐라툼(Histoplasma capsulatum)], 

뉴모시스티스(Pneumocystis)[예를 들면, 뉴모시스티스 지로베시이(Pneumocystis jirovecii)], 및 코키디오이 

데스(Coccidioides)[예를 들면, 코키디오이데스 임미티스(Coccidioides immitis)]를 포함하나, 이에 한정되지 

않는다. 

용어 "암"은 세포의 특수 집단의 증식에 있어서 비정상적인 증가로 특징화되는 의학적 상태를 나타낸다. 암 

세포는 예를 들면, 피부, 근육, 폐, 심장, 간, 신장, 신경 조직 등을 포함하는 어떠한 조직 또는 기관으로부 

터 기원할 수 있다. 특정 구체예에서, 암은 양성(예를 들면, 양성 종양)이다. 다른 구체예에서, 암은 악성 

(예를 들면, 악성 종양)이다. 특정 구체예에서, 암은 전이성(즉, 암 세포가 기원한 이들의 위치로부터 다른 

조직 또는 기관으로 이주할 수 있다)이다. 

추가의 용어는, 명세서 전반에서, 필요할 경우 정의할 것이다. 

본 발명은 재조합 아데노바이러스 백신에 관한 것이다. 본 발명은 부분적으로는 이종 서열을 고 수준으로 발 

현하는 신규한 재조합 아데노바이러스 벡터의 개발에 기초한다. 본 발명은 또한 부분적으로는 숙주 면역 반 

응을 개선시키고 기존의 중화 항체를 극복하도록 설계된 신규한 재조합 아데노바이러스 벡터의 개발에 기초한 

다. 본 발명은 또한 부분적으로 항원-특이적이고/이거나 공통의 인플루엔자 백신으로서 사용될 신규한 재조 

합 아데노바이러스 벡터의 개발에 기초한다. 

따라서, 하나의 양태에서, 본 발명은 제1의 이종 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터를 제공한다. 본원에 

사용된 것으로서, "이종 서열"은 아데노바이러스 벡터내로 통합시, 핵산 서열과 아데노바이러스 서열의 비-천 

연적으로 존재하는 근접위치를 생성하는 핵산 서열이다. 전형적으로, 이종 서열은 기원이 아데노바이러스가 

아닌 핵산 서열을 포함할 것이다. 예를 들면, 이종 서열은, 기원이 전체적으로, 대부분 또는 부분적으로 비- 

아데노바이러스(예를 들면, 아데노바이러스 및 비-아데노바이러스 서열의 모자이크)일 수 있다. 그러나, 일 

부 예에서, 이종 서열은 전체적으로 기원이 아데노바이러스일 수 있으며, 예를 들면, 아데노바이러스의 하나 

의 유형으로부터의 아데노바이러스 서열이 상이한 유형의 아데노바이러스로부터 생성된 아데노바이러스 벡터 

내로 통합될 수 있다. 예를 들어, 아데노바이러스의 하나의 유형으로부터의 헥손 또는 섬유 단백질을 암호화 

하는 아데노바이러스 서열은 상이한 유형의 아데노바이러스로부터 생성된 아데노바이러스 벡터내로 통합되어 

상이한 혈청형으로부터의 섬유 단백질과의 재조합 아데노바이러스 및/또는 키메라 헥손 및 섬유 단백질과의 

아데노바이러스를 생산할 수 있다. 제1의 이종 서열을 포함하는 아데노바이러스 벡터는 예를 들면, 감염성 

병원체 또는 암성 세포에 대한 백신으로서 유용할 수 있다. 따라서, 제1의 이종 서열은 감염성 병원체로부터 

의 항원을 암호화할 수 있다. 대안적으로, 제1의 이종 서열은 암 세포와 관련된 항원을 암호화할 수 있다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 감염성 병원체에 의해 생산된 단백질의 모든 또는 부분을 암호화한다. 

단백질 또는 이의 단편(예를 들면, 분해 생성물, 구조적 도메인, 제2 구조의 단위(들), B-세포 에피토프, 세 

포독성 T 림프구(CTL) 에피토프, 헬퍼 T 림프구(HTL) 에피토프 등)은 감염성 병원체의 표면에 위치할 수 

있다. 예를 들면, 단백질 또는 이의 단편은 고도로 항원성이고/이거나, 세포 표적화에 포함되고/되거나 세포 

도입에 포함될 수 있다. 달리는, 단백질 또는 이의 단편(예를 들면, 분해 생성물, 구조 도메인, 제2 구조의 

단위(들), THL 또는 CTL 에피토프 등)은 감염성 병원체에 대해 내부에 위치할 수 있다. 예를 들어, 단백질 

또는 이의 단편은 세포내 단백질, 외피보유 바이러스의 캡시드 또는 코어 단백질, 비-외피보유 바이러스의 코 

어 단백질 등일 수 있다. 


특정 구체예에서, 에피토프, 구조 도메인 또는 제2 구조의 단위는 진화적으로 보존되어 있다. 본원에 사용된 

- 14 -

[0035] 

[0036] 

것으로서, 용어 "진화적으로 보존된"은, 서열이 특수한 감염성 병원체의 균주의 다양한 세트 중에서 적어도 

약 50% 보존됨을 의미한다. 바이러스의 경우, 다양한 균주 세트는 감염시킬 수 있어서 백신에 대한 표적 집 

단에서 질병 또는 병을 유발할 수 있는 각각의 확인된 소분류(예를 들면, 혈청형)으로부터의 적어도 하나의 

분리체, 또는 이러한 균주에서 공지된 다양성을 포함하는 대표적인 수의 감염성 분리체를 포함한다. 예를 들 

면, 특정 구체예에서, 인플루엔자 균주의 다양한 세트는 H1N1 균주(예를 들면, A/Wilson-Smith/33, A/New 

Caledonia/20/99, A/Swine Korea/S10/2004, A/Brevig Mission/1/1918, A/Pureto Rico/8/34/Mount Sinai, 

A/California/7/2009, A/California/05/2009, A/California/08/2009, A/Texas/04/2009, 

A/swine/Saskatchewan/18789/02, A/mallard/Alberta/130/2003, A/mallard/Alberta/2001, A/swine/Cotes 

D'Armor/1482/99, A/swine/Betzig/2/2001, 및/또는 A/turkey/Germany/3/91), H3N2 균주(예를 들면, 

A/Perth/16/2009), H2N2 균주(예를 들면, A/Japan/305/57, A/Ann Arbor/6/60, A/Canada/720/05, 

A/mallard/NY/6750/78, A/mallard/Potsdam/177-4/83, 및/또는 A/duck/Hokkaido/95/2001), N3N2 균주(예를 들 

면, A/Hong Kong/1/66, A/Charlottesville/03/2004, A/Canterbury/129/2005, A/Fujian/411/01-like, 

A/duck/Korea/S9/2003, A/swine/Texas/4199-2/98, A/turkey/Ohio/313053/2004, 및/또는 A/turkey/North 

Carolina/12344/03), H5N1 균주(예를 들면, A/swine/Shandong/2/03, A/goose/Guangdong/1/96, 

A/duck/Hunan/114/05, A/Viet Nam/1203/2004, A/Viet Nam/DT-036/2005, A/Vietnam/1194/2004, 

A/Vietnam/1203/2004, A/Anhui/1/2005, A/Egypt/2321/2007, A/Egypt/3300-NAMRU3/2008, 

A/grebe/Novosibirsk/29/2005, A/Bar-headed goose/Mondolia/1/05, A/cat/Thailand/KU-02/04, A/Hong 

Kong/213/03, A/chicken/Guangdong/174/04, 및/또는 A/HK/159/97), H6N1 균주(예를 들면, A/teal/Hong 

Kong/1073/99), H6N2 균주(예를 들면, A/chicken/California/0139/2001, 및/또는 

A/guillemot/Sweden/3/2000), H6N9 균주(예를 들면, A/goose/Hong Kong/W217/97), H7N1 균주(예를 들면, 

A/FPV/Rostock/34), H7N3 균주(예를 들면, A/chicken/British Columbia/04, 및/또는 

A/turkey/Italy/220158/2002), H7N7 균주(예를 들면, A/chicken/Netherlands/1/2003, A/Netherlands/219/03, 

A/FPV/Dobson/27, 및/또는 A/chicken/FPV/Weybridge), H9N2 균주(예를 들면, A/shorebird/Delaware/9/96, 

A/swine/Korea/S452/2004, A/duck/Hong Kong/Y439/97, A/Hong Kong/1073/99, A/HK/2108/2003, A/quail/Hong 

Kong/G1/97, A/duck/Hong Kong/Y280/97, A/chicken HK/FY23/03, 및/또는 A/chicken HK/G9/97), 및 B 인플루엔 

자 균주(예를 들면, B/Brisbane/60/2008)를 포함하는 인간, 돼지 및/또는 조류에서 질병과 관련된 대표적인 

균주를 포함한다. 특정 구체예에서, 인플루엔자 균주의 다양한 세트는 상술한 균주 모두, 및 인간, 돼지 또 

는 조류에서 질병과 관련된 것으로 공지된 추가의 인플루엔자 균주를 포함한다. 세균, 원생생물, 진균 등과 

같은 세포 병원체의 경우, 다양한 균주의 세트는 감염시킴으로써 백신에 대한 표적 집단에서 질병 또는 병을 

유발하는 각각의 종으로부터의 적어도 하나의 분리체, 또는 이러한 균주에서 공지된 다양성을 포함하는 대표 

적인 수의 감염성 분리체를 포함한다. 특정 구체예에서, 에피토프 및/또는 구조적 모티프는 적어도 60%, 

70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 보존된다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 감염성 병원체에 의해 생산된 단백질내에 존재하는 다수의 에피토프(예 

를 들면, B 세포, CTL, 또는 HTL 에피토프) 및/또는 구조적 모티프(예를 들면, 단백질 도메인 또는 제2 구조 

의 단위)를 암호화한다. 특정 구체예에서, 하나 이상의 다수의 에피토프 및/또는 구조적 모티프는 진화적으 

로 보존된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 적어도 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40개 이상의 에피토 

프 및/또는 구조적 모티프를 암호화한다. 다수의 에피토프 및/또는 구조적 모티프는 단일 단백질 또는 다수 

의 단백질로부터 기원할 수 있다. 특정 구체예에서, 다수의 에피토프 및/또는 구조적 모티프는 단일 에피토 

프 또는 구조적 모티프의 다합체로 이루어지거나 이를 포함한다. 다른 구체예에서, 다수의 에피토프 및/또는 

구조적 모티프는 상이한 에피토프 및/또는 구조적 모티프의 다합체를 포함한다. 예를 들어, 다합체는 단일 

단백질로부터의 2개 이상의 에피토프 및/또는 구조적 모티프 또는 2개 이상의 단백질 각각으로부터의 하나 이 

상의 에피토프 및/또는 구조적 모티프를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 것으로서, "다합체"는 함께 연결되 

어, 단일의 보다 큰 폴리펩타이드를 형성하는 일련의 별개 폴리펩타이드를 포함하는 단백질 서열이다. 특정 

구체예에서, 링커 서열은 다합체내 인접한 별개의 폴리펩타이드를 연결하는데 사용된다. 당해 분야의 숙련가 

들은 다합체내 링커로서 작용할 수 있는 짧은 펩타이드 서열을 용이하게 확인할 수 있다. 


특정 구체예에서, 다수의 에피토프는 다수의 HTL 에피토프를 포함하며, 여기서, 각각의 HTL 에피토프는 HLA 

부류 II-결합 펩타이드를 포함한다. 본원에 사용된 것으로서, "HLA 부류 II-결합 펩타이드"는 IC50 < 1000 nM 

인 HLA 부류 II 분자에 결합하는 펩타이드이다. 일반적으로, HLA 부류 II-결합 펩타이드는, 길이가 약 6 내 

지 약 25개 아미노산, 또는 약 13 내지 약 21개 아미노산이다. 특정 구체예에서, 상기 다수의 HTL 에피토프 

중 하나 이상은 HLA-DRB1*0101, HLA-DRB1*0301, HLA-DRB1*0401, HLA-DRB1*0402, HLA-DRB1*0404, HLA- 

- 15 -

[0037] 

DRB1*0405, HLA-DRB1*0701, HLA-DRB1*0801, HLA-DRB1*0802, HLA-DRB1*0901, HLA-DRB1*1001, HLA-DRB1*1101, 

HLA-DRB1*1107, HLA-DRB1*1201, HLA-DRB1*1301, HLA-DRB1*1302, HLA-DRB1*1333, HLA-DRB1*1401, HLA- 


HLA-DRB3*0301, HLA-DRB4*0101 및 HLA-DRB5*0101, HLA-DRB5-0202로 이루어진 그룹 중에서 선택된 HLA 부류 II 

분자에 결합하는 HLA 부류 II-결합 펩타이드를 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 다수의 HTL 에피토프중 하 

나 이상은 예를 들면, 문헌[참조: Doytchinova and Flower (2005) J Immunol 174:7085 및/또는 Southwood et 

al. (1998) J Immunol 160:3363]에 기술된 바와 같은 HLA-DR1, HLA-DR3, HLA-DR4, HLA-DR5, HLA-DR9 슈퍼타입 

(supertype) 변이체로 이루어진 그룹 중에서 선택된 HLA 부류 II 분자에 결합하는 HLA 부류 II-결합 펩타이드 

를 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 다수의 HTL 에피토프 중 하나 이상은 다수의 HLA 부류 II-분자(예를 들 

면, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 이상)에 결합하는 HLA 부류 II-결합 펩타이드를 포함한다. 다수의 

HLA 부류 II 분자는 예를 들면, HLA-DRB1*0101, HLA-DRB1*0301, HLA-DRB1*0401, HLA-DRB1*0402, HLA- 


HLA-DRB1*1101, HLA-DRB1*1107, HLA-DRB1*1201, HLA-DRB1*1301, HLA-DRB1*1302, HLA-DRB1*1333, HLA- 


HLA-DRB3*0215, HLA-DRB3*0301, HLA-DRB4*0101 및 HLA-DRB5*0101, HLA-DRB5-0202로 이루어진 그룹 중에서 선 

택될 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 다수의 HTL 에피토프 중 하나 이상은 예를 들면, 문헌[참조: 

Doytchinova and Flower (2005) J Immunol 174:7085 및/또는 Southwood et al. (1998) J Immunol 160:3363]에 

기술된 바와 같은 HLA-DR1, HLA-DR3, HLA-DR4, HLA-DR5, HLA-DR9 슈퍼타입 변이체로 이루어진 그룹 중에서 선 

택된 HLA 부류 II 분자에 결합하는 HLA 부류 II-결합 펩타이드를 포함한다. 특정 구체예에서, 다수의 HTL 에 

피토프는 HLA-DRB1*0101, HLA-DRB1*0301, HLA-DRB1*0401, HLA-DRB1*0402, HLA-DRB1*0404, HLA-DRB1*0405, 

HLA-DRB1*0701, HLA-DRB1*0801, HLA-DRB1*0802, HLA-DRB1*0901, HLA-DRB1*1001, HLA-DRB1*1101, HLA- 

DRB1*1107, HLA-DRB1*1201, HLA-DRB1*1301, HLA-DRB1*1302, HLA-DRB1*1333, HLA-DRB1*1401, HLA-DRB1*1403, 

HLA-DRB1*1447, HLA-DRB1*1501, HLA-DRB1*1601, HLA-DRB3*0101, HLA-DRB3*0201, HLA-DRB3*0215, HLA- 

DRB3*0301, HLA-DRB4*0101 및 HLA-DRB5*0101, HLA-DRB5-0202로 이루어진 그룹에서 각각의 HLA 부류 II 분자에 

집합적으로 결합하는 HLA 부류 II-결합 에피토프를 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 다수의 HTL 에피토프 

중 하나 이상은 예를 들면, 문헌[참조: Doytchinova and Flower (2005) J Immunol 174:7085 및/또는 

Southwood et al. (1998) J Immunol 160:3363]에 기술된 바와 같은 HLA-DR1, HLA-DR3, HLA-DR4, HLA-DR5, 

HLA-DR9 슈퍼타입 변이체로 이루어진 그룹 중에서 선택된 HLA 부류 II 분자에 결합하는 HLA 부류 II-결합 펩 

타이드를 포함한다. 


특정 구체예에서, 다수의 에피토프는 다수의 CTL 에피토프를 포함하며, 여기서, 각각의 CTL 에피토프는 HLA 

부류 I-결합 펩타이드를 포함한다. 본원에 사용된 것으로서, "HLA 부류 I-결합 펩타이드"는 IC50 < 500 nM인 

HLA 부류 II 분자에 결합하는 펩타이드이다. 일반적으로, HLA 부류 I-결합 펩타이드는, 길이가 약 8 내지 약 

13개 아미노산, 또는 약 8, 9, 10, 또는 11개 아미노산이다. 특정 구체예에서, 상기 다수의 CTL 에피토프중 

하나 이상은 예를 들면, 문헌[참조: Sidney et al. (2008) BMC Immunol 9:1]에 기술된 바와 같은 HLA-A01, 

HLA-A02, HLA-A03, HLA-A24, HLA-B07, HLA-B08, HLA-B27, HLA-B58, HLA-B62 및 HLA-B44 슈퍼타입 변이체로 이 

루어진 그룹 중에서 선택된 HLA 부류 I 분자에 결합하는 HLA 부류 I-결합 단백질을 포함한다. 특정 구체예에 

서, 상기 다수의 CTL 에피토프 중 하나 이상은 다수의 HLA 부류 I 분자(예를 들면, 적어도 2, 3, 4, 5, 또는 

6개)에 결합하는 HLA 부류 I-결합 단백질을 포함한다. 예를 들면, CTL 에피토프는 다수의 HLA-A01 슈퍼타입 

변이체(예를 들면, A*0101, A*2601, A*2602, A*2603, A*2902, A*3001, A*3002, A*3003, A*3004, 및 A*3201로 

이루어진 그룹 중에서 선택됨); 다수의 HLA-A02 슈퍼타입 변이체(예를 들면, A*0201, A*0202, A*0203, 

A*0204, A*0205, A*0206, A*0207, A*0214, A*0217, A*6802, 및 A*6901로 이루어진 그룹 중에서 선택됨); 다 

수의 HLA-A03 슈퍼타입 변이체(예를 들면, A*0301, A*1101, A*3101, A*3301, A*6601, A*6801, 및 A*7401로 이 

루어진 그룹 중에서 선택됨); 다수의 HLA-A24 슈퍼타입 변이체(예를 들면, A*2301, A*2402, 및 A*2902로 이루 

어진 그룹 중에서 선택됨); 다수의 HLA-B07 슈퍼타입 변이체(예를 들면, B*0702, B*0703, B*0705, B*1508, 

B*3501, B*3503, B*4201, B*5101, B*5102, B*5103, B*5301, B*5401, B*5501, B*5502, B*5601, B*6701, 및 

B*7801로 이루어진 그룹 중에서 선택됨); 다수의 HLA-B08 슈퍼타입 변이체(예를 들면, B*0801 및 B*0802로 이 

루어진 그룹 중에서 선택됨); 다수의 HLA-B27 슈퍼타입 변이체(예를 들면, B*1402, B*1503, B*1509, B*1510, 

B*1518, B*2702, B*2703, B*2704, B*2705, B*2706, B*2707, B*2709, B*3801, B*3901, B*3902, B*3909, 

B*4801, 및 B*7301로 이루어진 그룹 중에서 선택됨); 다수의 HLA-B44 슈퍼타입 변이체(예를 들면, B*1801, 

B*3701 B*4001, B*4002,, B*4006, B*4402, B*4403, 및 B*4501로 이루어진 그룹 중에서 선택됨); 다수의 HLA- 

- 16 -

[0038] 

[0039] 

[0040] 

B58 슈퍼타입 변이체(예를 들면, B*1516, B*1517, B*5701, B*5702, B*5801, 및 B*5802로 이루어진 그룹 중에 

서 선택됨); 또는 다수의 HLA-B62 슈퍼타입 변이체(예를 들면, B*1501, B*1502, B*1512, B*1513, B*4601, 및 

B*5201로 이루어진 그룹 중에서 선택됨)을 포함한다. 특정 구체예에서, 다수의 CTL 에피토프는 HLA-A01, 

HLA-A02, HLA-A03, HLA-A24, HLA-B07, HLA-B08, HLA-B58, HLA-B62 및 HLA-B44 슈퍼타입 각각으로부터의 적어 

도 하나의 HLA 부류 I 분자에 총체적으로 결합하는 HLA 부류 I-결합 펩타이드를 포함한다. 

인간 연구는, 세포 면역 반응이 인플루엔자 감염을 조절하는데 있어서 역활을 함을 나타낸다[참조: 예를 

들면, McMichael et al. (1983), New England J. Med. 309(1):13; Sonoguchi et al. (1985), J Infect. 

Disease 151(1):81]. 세포 면역 반응의 보호성 효과는 노인[참조: 예를 들면, Almanzar et al. (2007), 

Wien. Med. Wochenschr 157/5-6:116, McElhaney et al. (2006), J Immunol. 176:6333], 및 또한 유아[참조: 

예를 들면, Forest et al. (2008) Clin. 백신 Immunol. 15(7):1042]에서 특히 관련될 수 있다. 확인된 에피 

토프에 대해 특이적인 면역원성을 평가하기 위하여, 리콜 반응(recall response)을 인간 공여자 말초 혈액 단 

핵 세포(PBMC) 및 펩타이드를 사용하여 수행할 수 있다. 에피토프-특이적인 리콜 반응은 앞서의 인플루엔자 

바이러스 감염의 결과이며, 이러한 T 세포의 존재는 천연적으로 발생되므로 백신 포함의 탁월한 선택임을 추 

정할 수 있다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열에 의해 암호화된 CTL 또는 HTL 에피토프는 ELISPOT 검정 

분석시 배경 반응보다 적어도 2배 높은, 예를 들면, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 

1300, 1400, 1500, 2000, 2500, 3000 이상의 인간 인터페론 감마(IFN-γ) 반응[상세하게는, 1 x 10 6 

세포 당 

스폿 형성 세포(Spot Forming 세포: SFC)]을 생성하는 능력을 갖는다. 선택된 CTL 또는 HTL 펩타이드는 2가 

지 방식으로 시험할 수 있다: (1) PBMC를 해동시키고 배지 속에 5일 동안 둔 후, 반응을 IFN-γ ELISPOT 검정 

으로 측정하는 직접적인 생체외 단계, 및 (2) 이어서 민감성을 증가시키기 위해 펩타이드를 사용한 배양 

단계. 나타낸 에피토프로부터 현저한 반응은 배경 반응 플러스의 평균보다 큰 반응(2.0 x 표준 편차)으로 정 

의될 수 있다. 당해 방법을 위해 배경 반응을 측정하는 것이 중요하다. 배경 반응은 HIV, HBV, HCV 및 플라 

스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum)과 같은 공여체가 노출되지 않은 병원체로부터의 슈퍼타입 CTL 및 

HTL 결합 펩타이드를 사용하여 측정할 수 있다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열에 의해 암호화된 CTL 또 

는 HTL 에피토프는 진화적으로 보존되며 ELISPOT 검정 분석시, 배경 반응보다 적어도 2배 높은, 예를 들면, 

300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000, 2500, 3000 이상의 인간 

IFN-γ 반응을 생성하는 능력을 갖는다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열에 의해 암호화된 CTL 또는 HTL 

에피토프는 진화적으로 보존되어 있으며, ELISPOT 검정 분석시, 배경 반응보다 적어도 2배 높은, 예를 들면, 

300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 2000, 2500, 3000 이상인 인간 

IFN-γ 반응을 생성하는 능력을 가지며, HLA 부류 I 또는 부류 II 분자 각각에 대한 결합(즉, 하나 이상에 결 

합하는)을 생성한다. HLA 부류 I 및 부류 II 분자에 결합하는 이들의 능력 및 인간 IFN-γ 반응을 생성하는 

이들의 능력에 대한 CTL 또는 HTL 에피토프를 시험하는 방법은 예를 들면, 2007년 5월 18일자로 출원된 WO 

2008/054540(Alexander et al.), 2007년 7월 23일자로 출원된, WO 2008/039267(Alexander et al.), 및 문헌 

[참조: Assarsson et al. (2008), J Virol 82:12241]에 기술되어 있으며, 이들 각각의 내용은 참조함으로써 

본원에 통합된다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자 바이러스로부터의 항원을 암호화한다. 적합한 인플루엔자 

항원은 헤마글루티닌(HA), 뉴라미니다제(NA), M2, 또는 이의 단편(예를 들면, 하나 이상의 HTL 또는 CTL 에피 

토프)와 같은 표면 항원일 수 있다. 다른 적합한 인플루엔자 항원은 M1, NP, NS1, NS2, PA, PB1, 및 PB2, 또 

는 이의 단편(예를 들면, 하나 이상의 HTL 또는 CTL 에피토프)를 포함한다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 길이의 인플루엔자 HA 단백질, 또는 외부 부위(즉, 인플루엔자 

바이러스의 외부 표면에 위치하는 부위), HA1 단편, HA2 단편, 또는 하나 이상의 에피토프(예를 들면, 

B-세포, HTL, 또는 CTL 에피토프)와 같은 이의 부위를 암호화한다. 특정 구체예에서, 부위, 단편, 또는 에 

피토프는 진화적으로 보존된 서열로부터 기원한다. 특정 구체예에서, 에피토프는 HLA 부류 I 또는 부류 II 

분자 각각에 대한 결합을 생성하고/하거나 인간 공여체 PBMC를 사용한 ELISPOT 검정 분석시 인간 인터페론 감 

마(IFN-γ) 반응을 생성하는 능력을 가진 것으로 나타난 HTL 또는 CTL 에피토프이다. 위에서 논의한 바와 같 

이, HTL 또는 CTL 에피토프는 연쇄체(concatamer)를 형성할 수 있으며, 여기서, 단일의 HTL 또는 CTL 에피토 

프는 반복되고/되거나 여기서, 다수의 HTL 및/또는 CTL 에피토프는 함께 결합된다. 특정 구체예에서, 제1의 

이종 서열은 표 1에 나타낸 그룹(즉, 서열 번호 1 내지 12) 중에서 선택된 하나 이상의 HA HTL 에피토프를 암 

호화한다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 2에 나타낸 그룹(즉, 서열 번호 62-67) 중에서 선택된 하 

나 이상의 HA CTL 에피토프를 암호화한다. 

- 17 - 


[0041] 

[0042] 

[표 1] 

- 18 - 


[0043] 

[0044] 

[0045] 

[0046] 

[표 2] 


특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 길이의 인플루엔자 NA 단백질, 또는 외부 부위(즉, 인플루엔자 

바이러스의 외부 표면에 위치한 부위)와 같은 이의 부위, 단편, 또는 에피토프(예를 들면, 하나 이상의 B-세 

포, HTL, 또는 CTL 에피토프)를 암호화한다. 특정 구체예에서, 부위, 단편, 또는 에피토프는 진화적으로 보 

- 19 -

[0047] 

[0048] 

[0049] 

존된 서열로부터 기원한다. 특정 구체예에서, 에피토프는 HLA 부류 I 또는 부류 II 분자 각각에 대한 결합을 

생성하고/하거나 인간 PBMC를 사용한 ELISPOT 검정 분석시 인간 인터페론 감마(IFN-γ) 반응을 생성하는 능력 

을 갖는 HTL 또는 CTL 에피토프이다. 위에서 논의한 바와 같이, HTL 또는 CTL 에피토프는 연쇄체를 형성할 

수 있고, 여기서, 단일의 HTL 또는 CTL 에피토프가 반복되고/되거나 여기서, 다수의 HTL 및/또는 CTL 에피토 

프는 함께 결합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 하나 이상의 서열 번호 19의 카피를 암호화한다 

(표 1 참조). 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 3에 나타낸 그룹(즉, 서열 번호 86-109) 중에서 선택 

된 하나 이상의 NA CTL 에피토프를 암호화한다. 

[표 3] 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 길이의 인플루엔자 M2 단백질, 또는 이의 부위, 예를 들면, 외부 

부위(즉, 인플루엔자 바이러스의 외부 부위에 위치한 부위인, M2e), 단편, 또는 에피토프(예를 들면, 하나 이 

상의 B-세포, HTL, 또는 CTL 에피토프)를 암호화한다. 특정 구체예에서, 부위, 단편, 또는 에피토프는 진화 

적으로 보존된 서열로부터 기원한다. 예를 들면, 특정 구체예에서, 외부 M2 부위는 표 4에 나타낸 서열을 갖 

는다. 제1의 이종 서열은 2개 이상의 M2 단편 또는 부위(예를 들면, 표 4에 나타낸 단일의 M2e 서열의 2개 

이상의 반복물 또는 표 4에 나타낸 2개 이상의 M2e 서열)을 암호화할 수 있다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 

서열은 서열 번호 312, 서열 번호 318, 서열 번호 321, 서열 번호 327, 또는 이의 특정 조합(예를 들면, 모든 

4개 서열의 적어도 하나의 카피)를 포함하는 반복된 서열을 암호화한다. 특정 구체예에서, M2 에피토프는 

HLA 부류 I 또는 부류 II 분자 각각에 대한 결합을 생성하고/하거나 인간 PBMC를 사용한 ELISPOT 검정 분석의 

펩타이드 재자극시 인간 인터페론 감마(IFN-γ) 반응을 생성하는 능력을 갖는 것으로 나타난 HTL 또는 CTL 에 

피토프이다. 위에서 논의한 바와 같이, HTL 또는 CTL 에피토프는 연쇄체를 형성할 수 있고, 여기서, 단일의 

HTL 또는 CTL 에피토프는 반복되고/되거나 다수의 HTL 및/또는 CTL 에피토프가 함께 결합된다. 특정 구체예 

에서, 제1의 이종 서열은 서열 번호 18의 하나 이상의 카피(참조: 표 1)를 암호화한다. 다른 구체예에서, 제 

1의 이종 서열은 표 5에 나타낸 그룹(참조: 서열 번호 80 내지 85) 중에서 선택된 하나 이상의 M2 CTL 에피토 

프를 암호화한다. 

- 20 - 


[0050] 

[0051] 

[표 4] 

- 21 - 


[0052] 

[0053] 

[0054] 

[0055] 

[표 5] 


특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 길이의 인플루엔자 M1 단백질, 또는 이의 부위, 예를 들면, 에피 

토프(예를 들면, 하나 이상의 HTL 또는 CTL 에피토프)를 암호화한다. 특정 구체예에서, 부위 또는 에피토프 

는 진화적으로 보존된 서열로부터 기원한다. 특정 구체예에서, 에피토프는 HLA 부류 I 또는 부류 II 분자 각 

각에 대한 결합을 생성하고/하거나 인간 PBMC를 사용한 ELISPOT 검정 분석시 인간 인터페론 감마(IFN-γ) 반 

응을 생성하는 능력을 가진 HTL 또는 CTL 에피토프이다. 위에서 논의한 바와 같이, HTL 또는 CTL 에피토프는 

연쇄체를 형성할 수 있고 여기서, 단일의 HTL 또는 CTL 에피토프는 반복되고/되거나 여기서, 다수의 HTL 및/ 

또는 CTL 에피토프는 함께 결합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 1에 나타낸 그룹(즉, 서열 번 

호 13-17) 중에서 선택된 하나 이상의 M1 HTL 에피토프를 암호화한다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 

표 6에 나타낸 그룹(즉, 서열 번호 68-79) 중에서 선택된 하나 이상의 M1 CTL 에피토프를 암호화한다. 

- 22 -

[0056] 

[0057] 

[0058] 

[표 6] 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 길이의 인플루엔자 NP 단백질, 또는 이의 부위, 예를 들면, 에피 



각에 대한 결합을 생성하고/하거나, 인간 PBMC를 사용한 ELISPOT 검정 분석시 인간 인터페론 감마(IFN-γ) 반 

응을 생성하는 능력을 갖는 것으로 나타난 HTL 또는 CTL 에피토프이다. 위에서 논의한 바와 같이, HTL 또는 

CTL 에피토프는 연쇄체를 형성할 수 있고, 여기서, 단일의 HTL 또는 CTL 에피토프는 반복되고/되거나 여기서, 

다수의 HTL 및/또는 CTL 에피토프는 함께 결합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 1에 나타낸 그 

룹(즉, 서열 번호 20-26) 중에서 선택된 하나 이상의 NP HTL 에피토프를 암호화한다. 다른 구체예에서, 제1 

의 이종 서열은 표 7에 나타낸 그룹(즉, 서열 번호 110-139) 중에서 선택된 하나 이상의 NP CTL 에피토프를 

암호화한다. 여전히 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 서열 번호 337(즉, LELRSRYWAIRTRSGGNTNQQRAS)의 

NP 서열의 하나 이상의 카피를 암호화한다. 

- 23 - 


[0059] 

[0060] 

[0061] 

[표 7] 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 길이의 인플루엔자 NS1 단백질, 또는 이의 부위, 예를 들면, 에 

피토프(예를 들면, 하나 이상의 HTL 또는 CTL 에피토프)를 암호화한다. 특정 구체예에서, 부위 또는 에피토 

프는 진화적으로 보존된 서열로부터 기원한다. 특정 구체예에서, 에피토프는 HLA 부류 I 또는 부류 II 분자 

각각에 대한 결합을 생성하고/하거나, 인간 PBMC를 사용한 ELISPOT 검정 분석시 인간 인터페론 감마(IFN-γ) 

반응을 생성하는 능력을 가진 것으로 나타난 HTL 또는 CTL 에피토프이다. 위에서 논의한 바와 같이, HTL 또 

는 CTL 에피토프는 연쇄체를 형성할 수 있고 여기서, 단일의 HTL 또는 CTL 에피토프는 반복되고/되거나 여기 

서, 다수의 HTL 및/또는 CTL 에피토프는 함께 결합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 1에 나타난 

그룹(즉, 서열 번호 27-29) 중에서 선택된 하나 이상의 NS1 HTL 에피토프를 암호화한다. 다른 구체예에서, 

제1의 이종 서열은 표 8에 나타난 그룹(즉, 서열 번호 140-152) 중에서 선택된 하나 이상의 NS1 CTL 에피토프 

를 암호화한다. 

- 24 - 


[0062] 

[0063] 

[0064] 

[0065] 

[0066] 

[0067] 

[표 8] 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 길이의 인플루엔자 NS2 단백질, 또는 이의 부위, 예를 들면 에피 


진화적으로 보존된 서열로부터 기원한다. 특정 구체예에서, 에피토프는 HLA 부류 I 또는 부류 II 분자 각각 

에 대한 결합을 생성하고/하거나, 인간 PBMC를 사용한 ELISPOT 검정 분석시 인간 인터페론 감마(IFN-γ) 반응 

을 생성하는 능력을 가진 것으로 나타난 HTL 또는 CTL 에피토프이다. 위에서 논의한 바와 같이, HTL 또는 

CTL 에피토프는 연쇄체를 형성할 수 있고 여기서, 단일의 HTL 또는 CTL 에피토프는 반복되고/되거나 여기서, 

다수의 HTL 및/또는 CTL 에피토프는 함께 결합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 1에 나타난 그 

룹(즉, 서열 번호 30-33)으로부터 선택된 하나 이상의 NS2 HTL 에피토프를 암호화한다. 다른 구체예에서, 

제1의 이종 서열은 표 9에 나타낸 그룹(즉, 서열 번호 153-163) 중에서 선택된 하나 이상의 NS2 CTL 에피토 


[표 9] 


특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 길이의 인플루엔자 PA 단백질, 또는 이의 부위, 예를 들면, 에피 



각에 대한 결합을 생성하고/하거나, 인간 PBMC를 사용한 ELISPOT 검정 분석시 인간 인터페론 감마(IFN-γ) 반 

응을 생성하는 능력을 지닌 것으로 나타난 HTL 또는 CTL 에피토프이다. 위에서 논의한 바와 같이, HTL 또는 

CTL 에피토프는 연쇄체를 형성할 수 있고 여기서, 단일의 HTL 또는 CTL 에피토프는 반복되고/되거나 여기서, 

다수의 HTL 및/또는 CTL 에피토프는 함께 결합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 1에 나타낸 그 

- 25 -

[0068] 

[0069] 

[0070] 

[0071] 

룹(즉, 서열 번호 34-40) 중에서 선택된 하나 이상의 PA HTL 에피토프를 암호화한다. 다른 구체예에서, 제1 

의 이종 서열은 표 10에 나타낸 그룹(즉, 서열 번호 164-205) 중에서 선택된 하나 이상의 PA CTL 에피토프를 

암호화한다. 

[표 10] 


특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 길이의 인플루엔자 PB1 단백질, 또는 이의 부위, 예를 들면, 에 

- 26 -

[0072] 

[0073] 




반응을 생성하는 능력을 지닌 것으로 나타난 HTL 또는 CTL 에피토프이다. 위에서 논의한 바와 같이, HTL 또 


서, 다수의 HTL 및/또는 CTL 에피토프는 함께 결합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 1에 나타낸 

그룹(즉, 서열 번호 41-54) 중에서 선택된 하나 이상의 PB1 HTL 에피토프를 암호화한다. 다른 구체예에서, 

제1의 이종 서열은 표 11에 나타낸 그룹(즉, 서열 번호 206-264) 중에서 선택된 하나 이상의 PB1 CTL 에피토 


[표 11] 

- 27 - 


[0074] 

[0075] 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 길이의 인플루엔자 PB2 단백질, 또는 이의 부위, 예를 들면, 에 




반응을 생성하는 능력을 가진 것으로 나타난 HTL 또는 CTL 에피토프이다. 위에서 논의한 바와 같이, HTL 또 


서, 다수의 HTL 및/또는 CTL 에피토프는 함께 결합된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 1에 나타난 

그룹(즉, 서열 번호 55-61) 중에서 선택된 하나 이상의 PB2 HTL 에피토프를 암호화한다. 다른 구체예에서, 

제1의 이종 서열은 표 12에 나타낸 그룹(즉, 서열 번호 265-309) 중에서 선택된 하나 이상의 PB2 CTL 에피토 


- 28 - 


[0076] 

[0077] 

[0078] 

[0079] 

[표 12] 


특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 1에 나열된 다수의 HTL 에피토프(즉, 서열 번호 1-61)을 암호화하고, 

여기서 다수의 HTL 에피토프는 다수의 인플루엔자 단백질로부터의 에피토프를 포함한다. 암호화된 서열은 예 

- 29 -

[0080] 

[0081] 

를 들면, 상이한 인플루엔자 단백질로부터의 HTL 에피토프의 다합체를 암호화할 수 있다. 특정 구체예에서, 

다수의 HTL 에피토프는, 부분적으로, 결합된 HLA 부류 II 대립인자의 서열, 수 및 유형의 보존 퍼센트(예를 

들면, HLA 부류 II 대립인자의 광범위한 스펙트럼에 대한 결합을 보증하기 위해), 인간 PBMC를 사용한 

ELISPOT 검정 분석시 IFN-γ 반응, 또는 이의 특정 조합을 기초로 선택된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 

서열은 표 13에 나열된 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 HTL 에피토프를 암호화한다. 특정 구체예에서, 제1 

의 이종 서열은 표 13에 나열된 HTL 에피토프의 모두의 다합체를 암호화한다. 

[표 13] 

- 30 - 


[0082] 

[0083] 

다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표 2-3 및 5-12에 나열된 다수의 CTL 에피토프(즉, 서열 번호 62-309)를 

암호화하며, 여기서, 다수의 CTL 에피토프는 다수의 인플루엔자 단백질로부터의 에피토프를 암호화한다. 암 

호화된 서열은 예를 들면, 상이한 인플루엔자 단백질로부터의 CTL 에피토프의 다합체를 암호화한다. 특정 구 

체예에서, 다수의 CTL 에피토프는, 부분적으로, 결합된 HLA 부류 I 대립인자의 서열, 수 및 유형의 보존 퍼센 

트(예를 들면, HLA 부류 I 대립인자의 광범위한 스펙트럼에 대한 결합을 보증하기 위해), 인간 PBMC를 사용한 

ELISPOT 검정 분석시 IFN-γ 반응, 또는 이의 특정 조합을 기초로 선택된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 

서열은 표 14에 나열된 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 CTL 에피토프를 암호화한다. 특정 구체예에서, 제1 

의 이종 서열은 표 14에 나열된 CTL 에피토프의 모두의 다합체를 암호화한다. 

- 31 - 


[0084] 

[0085] 

[0086] 

[0087] 

[표 14] 


제1의 이종 서열은 본원에 기재된 어떠한 감염성 병원체로부터의 면역원성 단백질 또는 항원을 암호화할 수 

- 32 -

[0088] 

있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 제1의 이종 서열은 바이러스, 세균, 원생생물 및/또는 진균으로부터의 

면역원성 단백질을 암호화한다. 하나의 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자 바이러스, 폴리오바이러 

스, 인간 면역결핍성 단백질(HIV), 인간 파필로마 바이러스(HPV), 치쿤구니야 바이러스(chikungunya 

바이러스), 및/또는 뎅기열 바이러스로부터의 면역원성 단배질을 암호화한다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 

서열은 바실러스[예를 들면, 바실루스 안트라키스(Bacillus anthracis)], 마이코박테리움(Mycobacterium)[예 

를 들면, 마이코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 마이코박테리움 레프라에 

(Mycobacterium Leprae)], 시겔라(Shigella)[예를 들면, 시겔라 손네이(Shigella sonnei), 시겔라 디센테리아 

에(Shigella dysenteriae), 시겔라 플렉스네리(Shigella flexneri)], 스트렙토코커스(Streptococcus), 및/또 

는 에스케리키아(Escherichia)(예를 들면, 장독소생성, 장출혈성 또는 시가 독소-생산 이.콜라이)로부터의 면 

역원성 단백질을 암호화한다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 이. 콜라이(ETEC), 장병원성 이. 콜라이 

(EPEC), 장침입성 이. 콜라이(EIEC), 장출혈성 이. 콜라이(EHEC), 및/또는 장집합성(enteroaggregative) 이. 

콜라이(EAEC)로부터의 면역원성 단백질을 암호화한다. 여전히 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 부르콜 

데리아(Burkholderia)[예를 들면, 부르콜데리아 세파키아 복합체(Burkholderia cepacia complex)], 슈도모나 

스(Pseudomonas)[예를 들면, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)], 클로스트리디움 

(Clostridium)[예를 들면, 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum), 클로스트리디움 테타니 

(Clostridium tetani), 클로스트리디움 디피킬레(Clostridium difficile)], 스타필로코커스(Staphylococcus) 

[예를 들면, 메티실린 내성, 다중약물 내성, 또는 옥사실린 내성 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus 

aureus)], 엔테로코쿠스(Enterococcus)[예를 들면, 엔테로코쿠스 파에칼리스(Enterococcus faecalis), 엔테로 

코쿠스 파에쿰(Enterococcus faecum), 반코마이신-내성 엔테로코쿠스(VRE)], 스트렙토코쿠스[예를 들면, 스트 

렙토코쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae), 스트렙토코쿠스 피오게네스(Streptococcus pyogenes), 스 

트렙토코쿠스 아갈락티아에(Streptococcus agalactiae)], 및/또는 비브리오(예를 들면, 비브리오 콜레라에)로 

부터의 면역원성 단백질을 암호화한다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 캄필로박터(Camphylobacter)[예 

를 들면, 캄필로박터 제주니(Camphylobacter jejuni)], 보르데텔라(Bordetella)[예를 들면, 보르데텔라 페르 

투시스(Bordetella pertussis)], 클라미디아(Chlamydia)[예를 들면, 클라미디아 뉴모니아(Chlamydia 

pneumonia), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis)], 코리네박테리움(예를 들면, 코리네박테리움 

디프테리아), 레지오넬라(Legionella)[예를 들면, 레지오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila)], 리스테리 

아(Listeria)[예를 들면, 리스테리아 모노시토게네스(Listeria monocytogenes), 나이세리아(Neisseria)[예를 

들면, 나이세리아 고노로에아에(Neisseria gonorrhoeae), 나이세리아 메닌기티디스(Neisseria meningitidis), 

살모넬라(예를 들면, 살모넬라 엔테리카(Salmonella enterica), 살모넬라 티피(Salmonella typhi), 삼로넬라 

티피무리움(Salmonella typhimurium)], 예르시니아(Yersinia)[예를 들면, 예르신아 페스티스(Yersinia 

pestis)], 해모필루스(Haemophilus)[예를 들면, 헤모필루스 인플루엔자에(Haemophilus Influenzae), 헬리코박 

터(Helicobacter)[예를 들면, 헬리코박터 필로리(Helicobacter pylori)], 콕시엘라(Coxiella)[예를 들면, 콜 

시엘라 부르네티(Coxiella burnetti)], 및/또는 프란키셀라(Francisella)[예를 들면, 프란키셀라 툴라렌시스 

(Francisella tularensis)]로부터의 면역원성 단백질을 암호화한다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인 

플루엔자, HIV, HPV, 바실러스 안트라키스, 플라스모디움 및/또는 시겔라로부터의 면역원성 단백질을 암호화 

한다. 여전히 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자, HIV, 및/또는 바실러스 안트라키스로부터의 

면역원성 단백질을 암호화한다. 


제1의 이종 서열에 의해 암호화된 인플루엔자 항원은 예를 들면, 1918년의 스페인 독감(Spanish flu)(H1N1), 

1957년의 아시아 독감(Asian flu)(H2N2), 1968년의 홍콩 독감(Hong Kong flu)(H3N2), 1997년의 홍콩 독감 

(H5N1), 2004년의 베트남 독감(Vietnam flu)(H5N1), 2009년의 돼지 독감(H1N1) 등과 관련된 균주를 포함하는, 

현재 존재하거나 후속적으로 분리된 어떠한 인플루엔자 균주로부터 기원할 수 있다. 따라서, 예를 들면, HA 

항원은 H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, 또는 B HA 항원일 수 있는 

반면, NA 항원은 예를 들면, N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7, N8, 또는 N9 NA 항원일 수 있다. 일부 

구체예에서, HA 항원은 H1, H3, H5, 또는 B HA 항원일 수 있다. 본 발명의 이종 서열의 기초일 수 있는 인플 

루엔자 균주의 비-제한적인 예는 다음을 포함한다: A/goose/Guangdong/1/96 (H5N1); A/Brevig Mission/1/1918 

(H1N1); A/Wilson-Smith/33 (H1N1); A/Puerto Rico/8/34/ Mount Sinai (H1N1); A/Fort Monmouth/1/47 (H1N1); 

A/USSR/90/1977 (H1N1); A/New Caledonia/20/1999(H1N1); A/Solomon Islands/3/2006(H1N1); 

A/Brisbane/59/2007(H1N1); A/California/7/2009 (H1N1); A/California/14/2009 (H1N1); 

A/California/08/2009 (H1N1); A/California/05/2009 (H1N1); A/Texas/04/2009 (H1N1); 

A/Mexico/InDRE4114/2009 (H1N1); A/New York/1669/2009 (H1N1); A/Canada-AB/RV1532/2009 (H1N1); 

A/Leningrad/134/47/57 (H2N2); A/Ann Arbor/6/60 (H2N2); A/Berlin/3/64 (H2N2); A/Tokyo/3/67 (H2N2); 

- 33 -

[0089] 

[0090] 

[0091] 

A/Singapore/1/57 (H2N2); A/Hong Kong/1/68 (H3N2); A/Albany/1/76 (H3N2); A/Panama/2007/99 (H3N2); 

A/Wisconsin/67/05(H3N2); A/Hong Kong/1774/99 (H3N2); A/Moscow/10/99 (H3N2); A/Hiroshima/52/2005(H3N2); 

A/California/7/2004(H3N2); A/New York/55/2004(H3N2); A/Brisbane/10/2007(H3N2); A/Perth/16/2009 (H3N2); 

A/goose/Guiyang/337/2006 (H5N1) clade 4; A/HK/156/97 (H5N1); A/HK/483/97 (H5N1); A/Viet Nam/1194/2004 

(H5N1) clade 1; A/Viet Nam/1203/2004 (H5N1) clade 1; A/duck/NCVD1/07 (H5N1); A/chicken/Viet Nam/NCVD- 

21/07 (H5N1); A/Indonesia/5/05 (H5N1) clade 2.1; A/Turkey/65-596/06 (H5N1) clade 2.2; 

A/chicken/India/NIV33487/2006 (H5N1) clade 2.2; A/turkey/Turkey/1/2005 (H5N1) clade 2.2; 

A/Egypt/902782/2006 (H5N1); A/Egypt/2321/2007 (H5N1); A/Egypt/3300-NAMRU3/2008 (H5N1); A/Anhui/1/2005 

(H5N1); A/China/GD01/2006 (H5N1); A/common magpie/Hong Kong/50525/07 (H5N1) clade 2.3.2; A/Japanese 

white-eye/Hong Kong/1038/2006 (H5N1) clade 2.3.4; A/chicken/Viet Nam/NCVD-15/2007 (H5N1); 

A/chicken/Italy/2335/2000 (H7N1); A/turkey/Italy/3675/99 (H7N1); A/chicken/New York/21211-2/05 (H7N2); 

A/New York/107/03 (H7N2); A/chicken/British Columbia/GSC human B/04 (H7N3); A/Canada/ rv504/04 (H7N3); 

A/chicken/British Columbia/CN-6/04 (H7N3); A/equine/San Paulo/4/76 (H7N7); A/seal/Mass/1/1980 (H7N7); 

A/chicken/Victoria/1/1985 (H7N7); A/chicken/Netherlands/2586/2003(H7N7); 

A/mallard/California/HKWF1971/2007 (H7N7); A/chicken/Beijing/1/94 (H9N2); A/quail/Hong Kong/G1/1997 

(H9N2); A/Korea/KBNP-0028/2000 (H9N2); A/chicken/Hong Kong/G9/97 (H9N2); A/chicken/Hong Kong/CSW153/ 

2003 (H9N2); A/chicken/Shantou/6781/2005 (H9N2); A/chicken/Jiangsu/L1/2004 (H9N2); A/Hong Kong/1073/99 

(H9N2); A/Hong Kong/2108/2003 (H9N2); A/chicken/Shiraz/AIV-IR004/2007(H9N2); 

A/chicken/Zibo/L2/2008(H9N2); A/chicken/Henan/L1/2008(H9N2); A/avian/Israel/313/2008(H9N2) 및 

B/Brisbane/60/2008. 추가의 인플루엔자 균주는 당해 분야의 숙련가에 의해 용이하게 확인될 수 있다. 예를 

들어, WO 2008/054540의 표 1은 생물공학 정보의 국립 센터(National Center for Biotechnology Information: 

NCBI)에 대한 웹사이트에서와 같이, 지금까지 분리된 상이한 인플루엔자 균주의 집중적인 목록을 제공한다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 H1, H3, H5, 또는 B 인플루엔자 바이러스로부터 선택된 인플루엔자 HA 

항원을 암호화한다. HA 항원은 일부 구체예에서, A/Vietnam/1194/2004, A/Vietnam/1203/2004, 

A/Anhui/1/2005, A/Egypt/2321/2007, A/Egypt/3300-NAMRU3/2008, A/Perth/16/2009, A/California/05/2009, 또 

는 B/Brisbane/60/2008로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 균주로부터 기원할 수 있다. 일부 구체 

예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자 NP 또는 M1 항원을 암호화한다. 하나의 구체예에서, NP 또는 M1 항원 

은 A/Texas/04/2009 또는 A/California/08/2009 인플루엔자 균주로부터 기원한다. 

다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인간 파필로마 바이러스(HPV)로부터의 항원을 암호화한다. HPV는 특정 

의 공지되거나 후에 발견된 균주(예를 들면, HPV-1, HPV-2, HPV-6, HPV-11, HPV-16, HPV-18, HPV-31, HPV-45 

등)일 수 있다. 하나의 구체예에서, 제1의 이종 서열은 HPV-16 또는 HPV-18 균주로부터의 항원을 

암호화한다. 특정 구체예에서, HPV 항원은 완전한 길이의 L1 단백질 또는 이의 단편(예를 들면, 진화적으로 

보존된 에피토프 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)와 같은 표면 항원이다. 하나의 구체예에서, 제1의 이종 서 

열은 완전히 또는 부분적으로 코돈-최적화된 완전한 길이의 L1 단백질을 암호화한다. 다른 구체예에서, HPV 

항원은 완전한 길이의 L2 또는 이의 단편(예를 들면, 진화적으로 보존된 에피토프 및/또는 HTL 또는 CTL 에피 

토프)이다. 다른 구체예에서, HPV 항원은 L1 하이브리드 폴리펩타이드 또는 L1/L2 하이브리드 폴리펩타이드 

이다. 예를 들면, 하나의 특정 구체예에서, HPV 항원은 L2 폴리펩타이드의 단편(예를 들면, L2 단편은 L1 폴 

리펩타이드의 루프내로 삽입될 수 있다)을 포함하는 L1 폴리펩타이드이다. 여전히 다른 구체예에서, HPV 항 

원은 완전한 길이의 E6 또는 E7 단백질, 또는 이의 단편(예를 들면, 진화적으로 보존된 에피토프 및/또는 HTL 

또는 CTL 에피토프)이다. 여전히 다른 구체예에서, HPV 항원은 L1, L2 및/또는 E6 및 E7 단백질을 포함하는 

융합 단백질이다. 예를 들면, 일부 구체예에서, HPV 항원은 E7 단백질에 융합된 L1/L2 하이브리드 폴리펩타 

이드를 포함하는 융합 단백질이다. 다른 구체예에서, HPV 항원은 E6 단백질에 융합된 L1/L2 하이브리드 폴리 

펩타이드를 포함하는 융합 단백질이다. 


다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인간 면역결핍성 바이러스(HIV)로부터의 항원을 암호화한다. HIV는 특 

정의 공지되거나 후에 발견된 균주(예를 들면, HIV-1, HIV-2 등)일 수 있다. 특정 구체예에서, HIV 항원은 

표면 항원, 예를 들면, 완전한 길이의 Env 단백질(예를 들면, gp160) 또는 이의 단편 또는 올리고머(예를 들 

면, gp140, gp120, gp41, 진화적으로 보존된 에피토프, 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)일 수 있다. 다른 구 

체예에서, HIV 항원은 완전한 길이의 캡시드 단백질 (p24), 매트릭스 단백질(p17), 또는 이의 단편(예를 

들면, 진화적으로 보존된 에피토프 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)이다. 다른 구체예에서, HIV 항원은 Tat 

(예를 들면, p16 또는 p14), Rev(p19), Vif(p23), Vpr(p14), Nef(p27), Vpu(p16), 또는 Gag 단백질이다. HIV 

- 34 -

[0092] 

[0093] 

[0094] 

[0095] 

[0096] 

항원은 특정의 HIV 단백질, 완전한 길이의 또는 달리는 예를 들면, HTL 또는 CTL 에피토프일 수 있고, 어떠한 

진화적으로 보존된 서열일 수 있다. 일부 구체예에서, HIV 항원 서열은 이종 삼합체화 도메인(예를 들면, 

GCN4으로부터와 같은 효모 효모 GCN으로부터, 및 T4 박테리오파아지 피브리틴-FT 모티프) 또는 해독 후 변형 

을 위한 특정의 시그날 서열, 예를 들면, 글리코실포스파티딜이노시톨(GPI) 앵커 부위(anchor site)를 함유하 

도록 가공될 수 있다. 예를 들면, 하나의 구체예에서, HIV 외피 단백질, 예를 들어, gp140 또는 gp120는 GPI 

앵커 부위를 함유하도록 변형될 수 있다. 다른 구체예에서, HIV gp140 서열은 이종 GCN 삼합체화 도메인 및/ 

또는 GPI 앵커 부위를 함유하도록 변형될 수 있다. 일부 구체예에서, GCN 삼합체화 도메인 또는 GPI 앵커 부 

위는 HIV 외피 단백질 서열(예를 들면, HIV gp140 서열)의 카복실 말단에 융합된다. 

다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 바실러스 세균으로부터의 항원을 암호화한다. 바실러스는 다수의 변원 

성 종(예를 들면, 비. 안트라키스(B. anthracis), 비. 세레우스(B. cereus) 등) 중 어느 것일 수 있으며 이러 

한 종의 어떠한 공지되거나 후에 발견된 분리체일 수 있다. 특정 구체예에서, 바실러스 항원은 세포막내 잔 

류하는 단백질과 같은 표면 항원, 또는 이의 단편(예를 들면, 진화적으로 보존된 에피토프, 및/또는 HTL 또는 

CTL 에피토프)일 수 있다. 다른 구체예에서, 바실러스 항원은 세포내 단백질 또는 이의 단편(예를 들면, 진 

화적으로 보존된 에피토프, 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)이다. 특정 구체예에서, 바실러스 항원은 숙주 

세포 도입과 관련된다. 예를 들면, 항원은 표적 세포-결합 단백질(예를 들면, 보호성 항원(PrAg or PA)), 메 

탈로펩티다제(예를 들면, 치사 인자(LF)), 아데닐레이트 사이클라제(예를 들면, 부종 인자(EF)), 또는 이의 

단편(예를 들면, 진화적으로 보존된 에피토프, 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)일 수 있다. 일부 

구체예에서, 바실러스 항원은 테르모라이신 분해 부위를 결실하도록 변형될 수 있거나 GPI 앵커를 함유할 수 

있다. 하나의 구체예에서, 제1의 이종 서열은 보호성 항원 또는 써모라이신 분해 부위를 제거하도록 변형되 

거나 GPI 앵커를 함유하는 변형된 보호성 항원을 암호화한다. 

다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 시겔라 세균으로부터의 항원을 암호화한다. 시겔라는 다수의 병원성 종 

[예를 들면, 에스. 소네이(S. sonnei), 에스. 디센테리아에(S. dysenteriae), 에스. 플렉스네리(S. flexneri) 

등] 중 어느 것일 수 있으며 이러한 종의 어떠한 공지되거나 후에 발견된 분리체일 수 있다. 특정 구체예에 

서, 시겔라 항원은 통합 막 단백질 또는 말초 막 단백질, 또는 이의 단편(예를 들면, 진화적으로 보존된 에피 

토프, 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)와 같은 세포 막에 잔류하거나 이와 관련된 단백질과 같은 표면 항원이 

다. 예를 들면, 항원은 Karp 균주 p56과 같은 외부 막 단백질일 수 있다. 다른 구체예에서, 시겔라 항원은 

세포내 단백질 또는 이의 단편(예를 들면, 진화적으로 보존된 에피토프, 및/또는 HTL 또는 CTL 

에피토프)이다. 특정 구체예에서, 시겔라 항원은 침입 단백질 IpaB, IpaC, 또는 IpaD 단백질과 같은, 숙주 

세포 도입과 관련되어 있다 다른 구체예에서, 시겔라 항원은 IcsP 및/또는 SigA 폴리펩타이드를 포함하는 공 

통 항원이다. 

다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 마이코박테리움으로부터의 항원을 암호화한다. 마이코박테리움은 다수 

의 병원체 종(예를 들면, 엠. 투베르쿨로시스(M. tuberculosis), 엠, 레프라에(M. leprae), 엠. 레프로마토시 

스(M. lepromatosis) 등] 중 어느 것일 수 있고 이러한 종의 어떠한 공지되거나 후에 발견된 분리체일 수 있 

다. 특정 구체예에서, 마이코박테리움 항원은 통합 막 단백질 또는 말초 막 단백질, 또는 이의 단편(예를 들 

면, 진화적으로 보존된 에피토프, 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)와 같은 세포 막에 잔류하거나 이와 관련된 

단백질과 같은 표면 항원이다. 기타 구체예에서, 마이코박테리움 항원은 세포내 단백질 또는 이의 단편(예를 

들면, 진화적으로 보존된 에피토프 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)이다. 특정 구체예에서, 마이코박테리움 

항원은 Ag85A, Ag85B, Ag85C, ESAT-6, CFP-10, HspX, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 

다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 플라스모디움으로부터의 항원을 암호화한다. 플라스모디움은 다수의 병 

원성 종(예를 들면, 피. 팔시파룸(P. falciparum), 피. 비박스(P. vivax), 피. 오발레(P. ovale), 피. 말라리 

아에(P. malariae) 등] 중 어느 것일 수 있고 이러한 종의 어떠한 공지되거나 후에 발견된 분리체일 수 있다. 

특정 구체예에서, 플라스모디움 항원은 통합 막 단백질 또는 말초 막 단백질, 또는 이의 단편(예를 들면, 진 

화적으로 보존된 에피토프, 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)와 같은 세포 막에 잔류하거나 이와 관련된 단백 

질과 같은 표면 항원이다. 다른 구체예에서, 플라스모디움 항원은 세포내 단백질 또는 이의 단편(예를 들면, 

진화적으로 보존된 에피토프, 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)이다. 특정 구체예에서, 플라스모디움 항원은 

CS, CSP(절단되지 않음), MSP1, MSP2 (c-말단 p42), LSA1, EBA-175, AMA1, FMP1, Pfs48/45, 및 MSP3으로 이루 

어진 그룹 중에서 선택된다. 


특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 스트렙토코쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae)(예를 들면, 뉴모 

코쿠스)로부터의 항원을 암호화한다. 특정 구체예에서, 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 항원은 표면 항원, 예를 

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들면, 세포막에 잔류하거나 이와 관련된 단백질, 예를 들면, 통합 막 단백질 또는 말초 막 단백질, 또는 이의 

단편(예를 들면, 진화적으로 보존된 에피토프, 및/또는 HTL 또는 CTL 에피토프)이다. 기타 구체예에서, 스트 

렙토코쿠스 뉴모니아에 항원은 세포내 단백질 또는 이의 단편(예를 들면, 진화적으로 보존된 에피토프, 및/또 

는 HTL 또는 CTL 에피토프)이다. 특정 구체예에서, 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 항원은 뉴모코쿠스 표면 단백 

질(예를 들면, PspA, PspC), 뉴몰라이신(Ply), 뉴라미다제 효소(예를 들면, NanA, NanB), 오토라이신 

A(LytA), 뉴모코쿠스 히스티딘-트리아드 단백질, PiaA, PiuA, 프럭토즈-비스포스페이트 알돌라제(FBA), 부착 

A, 및 뉴몰리소이드로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 

또 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 표면 항원, 내부 단백질, 독소, 침입-관련 단백질, 프로테아제 또는 

다른 효소, 열 쇽 단백질(heat shock protein), 또는 어떠한 다른 감염성 병원체로부터의 다른 항원을 암호화 

한다. 예를 들면, 표면 항원은 보르데텔라 페르투시스(Bordetalla pertussis), 클라미디아 뉴모니아 

(Chlamydia pneumonia)(예를 들면, 막 단백질 D, 외부 막 단백질), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia 

trachomatis)(예를 들면, 막 단백질 D, 외부 막 단백질), 레지오넬라 뉴모필리아(Legionella pneumophilia), 

메티실린-내성, 다중-약물-내성 및 옥사실린-내성 균주(예를 들면, IsdA, IsdB, SdrD, SdrE)를 포함하는 스타 

필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스트렙토코쿠스 뉴모이아데(예를 들면, PsPA), 스트렙토코쿠 

스 아에루기노사(Streptococcus aeruginosa)(예를 들면, 플라젤라 Ag, 포린스), 스트렙토코쿠스 피오게네스 

(Streptococcus pyogenes)(예를 들면, M 단백질, 피브로넥틴-결합 단백질 Sfb1), 스트렙토코쿠스 아갈락티아 

에(Streptococcus agalactiae), 장출혈성 이. 콜라이(예를 들면, 인티민, FimH 아드헤신), 해모필리스 인플루 

엔자에(Haemophilis Influenzae)(예를 들면, Pili, P1, P2, P4, P6), 칸디다(Candida)(예를 들면, Als1p, 

Als3p), 콕시디오이데스 임미티스(Coccidioides immitis)(예를 들면, Ag2), 슈도모나스 아에루기노사 

(Pseudomonas aeruginosa)(예를 들면, 편모 항원, 포린스), 로우스 육종 바이러스(예를 들면, F 단백질, G 단 

백질), 인간 내인성 레트로바이러스 K(예를 들면, 흑색종 항원 HERV-K-MEL), 헤르페스 바이러스(예를 들면, 

당단백질 D2), 뎅기열 바이러스(예를 들면, DEN1, DEN2, DEN3, DEN4 외피 단백질, 4가 4x EDIII 도메인 단백 

질) 등을 암호화한다. 독소는 캄필로박터 제주니(Camphylobacter jejuni)의 불안정한 독소, 클로스트리디움 

디피실레(Clostridium difficile)의 독소 A 및 B, 스트렙토코쿠스 피오게네스로부터의 발열성 외독소 및 내 

독소, 비브리오 콜레라에(Vibrio cholerae)의 독소 B, 장출혈성 이. 콜라이의 시겔라 독소(예를 들면, Stx-1, 

Stx-2), 슈도모나스 아에루기노사로부터의 외독소 A 등으로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다. 프로테아 

제 또는 다른 효소는 클라미디아의 분비된 프로테아제 인자, 스트렙토코쿠스의 뉴몰라이신, 오토라이신 또는 

뉴라미니다제, 스트렙토코쿠스 피오게네스로부터의 시스테인 프로테아제 또는 C5a 펩티다제, 헬리코박터 필로 

리(Helicobacter pylori)로부터의 우레아제, 코키디오이데스 임미티스(Coccidioides immitis)의 우레아제, 히 

스토플라스마 캅슐라툼(Histoplasma capsulatum)의 His-62, H 항원, 및 hsp70 등으로 이루어진 그룹 중에서 

선택될 수 있다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 암 세포에 의해 생산된 단백질 모두 또는 일부를 암호화한다. 단백질, 

또는 이의 단편[예를 들면, 분해 생성물, 구조 도메인, 제2 구조의 단위(들), B-세포 에피토프, 세포독성 T 

림프구(CTL) 에피토프, 헬퍼 T 림프구(HTL) 에피토프 등]은 암 세포의 표면에 위치할 수 있다. 예를 들어, 

단백질 또는 이의 단편은 암 세포에 대해 고도로 항원성이고/이거나 마커(예를 들면, 암 세포-특이적인 마커 

또는 암 세포상에 매우 풍부한 항원)일 수 있다. 또한, 단백질 또는 이의 단편(예를 들면, 분해 생성물, 구 

조적 도메인, 제2 구조의 단위(들), HTL 또는 CTL 에피토프 등)은 암 세포에 대해 내부로 위치할 수 있다. 

예를 들어, 단백질 또는 이의 단편은 세포질성 단백질, 핵 단백질 등일 수 있다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 적어도 하나의 완전한 개방 판독 프레임(ORF)을 포함하며, 여기서, 적어 

도 하나의 완전한 ORF는 아데노바이러스 벡터에 의해 감염된 숙주 세포내에서 발현될 수 있는 명백한 폴리펩 

타이드를 암호화한다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 2개 의상의 완전한 ORF를 포함하고, 이들 각각은 

아데노바이러스 벡터에 의해 감염된 숙주 세포내에서 발현될 수 있는 명백한 폴리펩타이드를 암호화한다. 하 

나 이상의 명백한 폴리펩타이드는 상술한 바와 같은 완전한 길이의 단백질 또는 이의 단편이다. 유사하게, 

하나 이상의 명백한 폴리펩타이드는 위에 기술된 바와 같은 단백질 도메인, 구조적 모티프 또는 에피토프(예 

를 들면, B-세포, HTL 또는 CTL 에피토프)의 다합체일 수 있다. 예를 들면, 특정 구체예에서, 제1의 이종 서 

열은 완전한 길이의 단백질(예를 들면, 인플루엔자 HA)을 암호화하는 제1의 ORF 및 단백질 도메인, 구조적 모 

티프, 또는 에피토프(예를 들면, 표 4로부터 선택된 하나 이상의 인플루엔자 M2 서열의 다합체, 하나 이상의 

인플루엔자 B-세포 에피토프의 다합체, 표 1 또는 표 13 중에서 선택된 하나 이상의 인플루엔자 HTL 에피토프 

의 다합체, 또는 표 2 및 3, 및 5 내지 12 또는 표 14 등으로부터 선택된 하나 이상의 인플루엔자 CTL 에피토 

프의 다합체 등)를 암호화하는 제2의 ORF를 포함한다. 

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[0102] 

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[0104] 

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따라서, 일부 구체예에서, 제1의 이종 서열은 융합 단백질을 암호화한다. 융합 단백질은 동일한 감염성 병원 

체 또는 상이한 감염성 병원체로부터의 완전한 길이의 단백질 또는 항원성 단백질로부터의 하나 이상의 에피 

토프 또는 단편을 포함할 수 있다. 예를 들면, 하나의 구체예에서, 융합 단백질은 HPV의 E6 또는 E7 단백질 

에 융합된 본원에 기술된 바와 같은 HPV의 L1/L2 하이브리드 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 구체예에서, 융 

합 단백질은 E7 단백질에 융합된 HPV-16으로부터 기원한 L1/L2 하이브리드 폴리펩타이드(예를 들면, L1 루프 

내로 삽입된 HPV-16 L2 단편을 지닌 완전한 길이의 HPV-16 L1 단백질)을 포함한다. 다른 구체예에서, 융합 

단백질은 E6 단백질에 융합된 HPV-18로부터 기원한 L1/L2 하이브리드 폴리펩타이드(예를 들면, L1 루프내로 

삽입된 HPV-18 L2 단편을 지닌 완전한 길이의 HPV-18 L1 단백질)을 포함한다. 다른 구체예에서, 융합 단백질 

은 함께 융합된 인플루엔자 HA 및 NA 단백질로부터의 면역원성 단편(예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 인 

플루엔자 HA 또는 NA 단백질의 중화 에피토프)을 포함하다. 다른 구체예에서, 융합 단백질은 완전한 길이의 

인플루엔자 NA 단백질에 융합된 본원에 기술된 바와 같은 인플루엔자 HA 단백질의 하나 이상의 중화 에피토프 

를 포함한다. 여전히 다른 구체예에서, 융합 단백질은 본원에 기술된 바와 같은 각종 에피토프의 다합체일 

수 있다. 예를 들어, 융합 단백질은 HTL 에피토프의 다합체일 수 있으며, 여기서, 각각의 에피토프는 링커 

서열(참조: 대표적인 다합체에 대해 실시예 13)에 의해 연결된다. 일부 구체예에서, 제1의 이종 서열에 의해 

암호화된 융합 단백질은 감염성 병원체의 혈청형 또는 2개 이상의 종으로부터의 항원을 포함한다. 예를 

들어, 융합 단백질은 4개의 뎅기열 바이러스 혈청형 1 내지 4중 각각으로부터의 외피 단백질로부터의 EDIII 

도메인을 포함할 수 있다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 2개의 완전한 ORF를 포함하며, 여기서, 제1 및 제2 ORF는 평행하게[예를 

들면, 헤드 투 테일(heal to tail)] 배향된다. 특정의 관련 구체예에서, 제1의 이종 서열은 제1의 ORF의 정 

지 코돈에 대해 3' 및 제2의 ORF의 출발 코돈에 대해 5'에 위치한 내부 리보소옴 도입 서열(IRES)을 추가로 

포함함으로써, 제1 및 제2 ORF에 의해 암호화된 폴리펩타이드가 단일의 mRNA 전사체로부터 해독되도록 한다. 

당해 분야의 숙련가들은 포유동물(예를 들면, 인간) 세포내에서 기능하는 적합한 IRES 서열 및 이러한 서열이 

제2 ORF의 충분한 해독을 보증하도록 위치하여야 하는 방법을 용이하게 확인할 수 있다. 

특정의 관련 구체예에서, 제1의 이종 서열은 2개의 완전한 ORF를 포함하며, 여기서, 제1 및 제2 ORF는 평행하 

게(예를 들면, 헤드 투 테일)로 배향되고, 제1의 ORF의 정지 코돈에 대해 3' 및 제2의 ORF의 출발 코돈에 대 

해 5'에 위치한 스플라이스 수용체를 추가로 포함함으로써 제1 및 제2 ORF에 의해 암호화된 폴리펩타이드가 

단일의 mRNA 전사체로부터 또는 2개의 별개의 mRNA 전사체로서 해독되도록 한다. 당해 분야의 숙련가들은 스 

플라이싱 성분을 확인하여 이들을 정확한 양식으로 혼입시킬 수 있다. 스플라이싱 수용체는 바람직한 결과에 

따라 콘센수스 서열(예: SV40 스플라이스 부위) 또는 비-콘센수스 서열(예: Ad5 ADP 스플라이스 부위)일 수 

있다. 예를 들면, 아데노바이러스 주요 레이트 전사 단위, 이례적인 폴리피리미딘 트랙을 갖는 3' 스플라이 

스 부위가 바이러스 감염에 바람직한 레이트(late)이다[참조: 예를 들면, Muhlemann et al. (1995), J. 

Virology 69(11):7324]. 

특정의 관련 구체예에서, 제1의 이종 서열은 2개의 완전한 ORF를 포함하고, 여기서 제1 및 제2의 ORF는 평행 

하게(예를 들면, 헤드 투 테일) 배향되며, 제1의 ORF(제거된 정지 코돈)의 3' 말단과 제2 ORF의 출발 코돈에 

대해 프레임내 5'사이에 프레임내 위치하는 2A 스키핑 성분(skipping element)(리보소옴내 자가 프로세싱)을 

포함함으로써, 제1 및 제2의 ORF가 A2 성분의 위치에서 펩타이드 결합을 "스킵(skip)"하는 단일 펩타이드로서 

단일의 mRNA 전사체로부터 해독되도록 함으로써 2개의 폴리펩타이드를 생성한다. 당해 분야의 숙련가들은 수 

족구병 바이러스(FMDV) 및 피코르나바이러스로부터 기원한 것과 같은 2A 스키핑 성분을 확인하여 이들을 조직 

화함으로써 2개의 ORF가 단일의 연속 펩타이드를 형성하도록 할 수 있다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 2개의 완전한 ORF를 포함하며, 여기서, 제1 및 제2의 ORF는 말단-대-말 

단으로 배향된다. 예를 들어, 제1의 ORF의 3' 말단은 제2의 ORF의 3' 말단에 인접할 수 있다. 또한, 제1의 

ORF의 5' 말단은 제2의 ORF의 5' 말단에 인접할 수 있다. 

일반적으로, 제1의 이종 서열은 전사 인핸서(enhancer) 및/또는 프로모터 및 폴리 아데닐화 서열을 최소한으 

로 함유하는 전사 단위의 일부이다. 특정 구체예에서, 전사 단위는 하나 이상의 인트론(intron), 하나 이상 

의 스플라이스 인핸서, 리더 서열, 콘센수스 코작 서열, RNA 안정성 및/또는 프로세싱을 증가시키는 하나 이 

상의 성분, 또는 이들의 특정 조합을 추가로 포함한다. 


특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열의 조절하에 및/또는 이에 

작동적으로 연결된다. 이와 관련하여 본원에 사용된 것으로서, "의 조절하에" 및 "에 작동적으로 연결된"은, 

이종 서열내에 함유된 ORF의 전사 및/또는 해독이 조절 서열에 의해 영향받음을 의미한다. 따라서, 예를 들 

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어, ORF의 전사 또는 해독은 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열의 결과로서 증가될 수 있다. 특정 

구체예에서, "에 작동적으로 연결된"은, 대조군 서열 및 이종 서열이 서로에 대해 근접하게 존재함을 나타낸 

다. 예를 들어, 특정 구체예에서, 이종 서열에 작동적으로 연결된 아데노바이러스 대조군 서열은 이종 서열 

의 한쪽 말단으로부터 약 100 bps, 약 100 내지 약 200 bps, 약 200 내지 약 300 bps, 약 300 내지 약 400 

bps, 또는 약 400 내지 약 500 bps 이내에 위치한다. 

본원에 사용된 것으로서, "아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열"은 아데노바이러스로부터 기원한 전 

사 및/또는 해독 조절내 포함된 핵산 서열이다. 이러한 서열은 아데노바이러스 프로모터[예를 들면, 주요 레 

이트 프로모터(MLP) 또는 주요 레이트 전사 단위(MLTU)내 프로모터], 아데노바이러스 전사 인핸서, 아데노바 

이러스 스플라이스 수용체 부위(예를 들면, Ad4 E3 24.8k ORF의 MLP-기원한 전사에 대한 천연의 스플라이스 

수용체 부위 또는 Ad5 ADP 스플라이스 수용체 서열), 아데노바이러스 스플라이스 인핸서, 아데노바이러스 리 

더 서열(예를 들면, 3부 리더(TPL) 서열), RNA 안정성 및/또는 프로세싱(예를 들면, 시스-작용성 RNA 엑스포 

트 성분)을 증가시키는 아데노바이러스 성분 및 아데노바이러스 폴리 A 시그날 서열(예를 들면, Ad5 E3A 폴리 

아데닐화 시그날 서열)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열은 

어떠한 아데노바이러스 균주로부터도 기원할 수 있다. 따라서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터(예를 들면, 

Ad4 벡터)는 상이한 아데노바이러스 균주(즉, 비-Ad4 균주)로부터 기원한 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 

조절 서열을 포함할 수 있다. 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열은 야생형 서열(즉, 천연적으로 

존재하는 아데노바이러스에서 발견된 서열) 또는 이의 변이체 서열을 가질 수 있다. 아데노바이러스 전사 및 

/또는 해독 조절 서열은 당해 분야에 기술되어 있다. 예를 들어, 아데노바이러스 TPL 서열은 미국 특허원 

2006/0115456에 기술되어 있으며; 인핸서는 Massie et al. (1995), Biotechnology 13(6):602에 기술되어 

있고; 폴리아데닐화 서열은 Bhat and Wold (1986), J. Virology 57(3):1155에 논의되어 있다. 추가의 아데노 

바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열은 당해 분야의 숙련가에 의해 확인될 수 있다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 MLP하(즉, ~의 조절하에) 있다. 본원에 사용된 것으로 

서, "주요 레이트 프로모터(MLP)"는 주요 레이트 전사 단위(MLTU) 프로모터와 상호교환적으로 사용된다. 다 

른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 MLP 및 아데노바이러스 TPL 하에 있다. 다른 구체예에서, 

제1의 이종 서열은 아데노바이러스 MLP 하에 있으며 아데노바이러스 스플라이스 수용체 서열에 작동적으로 연 

결되어 있다. 여전히 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은아데노바이러스 MLP 및 아데노바이러스 TLP하에 있 

고 아데노바이러스 스플라이스 수용체 서열에 작동적으로 연결되어 있다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스 

스플라이스 수용체 서열은 비-콘센수스 서열이다. 이론에 제한할 의도없이, 비-콘센수스 스플라이스 수용체 

는, 이들이 아데노바이러스 MLP와 함께 사용되는 경우, 콘센수스 스플라이스 수용체보다 우수하게 수행하는 

것으로 여겨진다. 앞서의 구체예 중 어느 것에서도, 제1의 이종 서열은 또한 아데노바이러스 폴리 A 시그날 

서열에 작동적으로 연결될 수 있다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 내인성 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열하에(즉, ~의 조절 

하에) 있다. 본원에 사용된 것으로서, "내인성" 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열은 아데노바이 

러스 벡터에 대해 천연적인 전사 및/또는 해독 조절에 포함되며 재조합체 기술을 이용하여 새로운 위치로 도 

입되거나 이동하지 않는다. 예를 들어, Ad4 아데노바이러스 벡터내에 존재하는 어떠한 Ad4 전사 및/또는 해 

독 조절 서열도 Ad4 아데노바이러스 벡터에 대해 내인성이며 단, 서열의 위치는 재조합체 기술에 의해 변형되 

지 않는다. 


특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 외인성 전사 및/또는 해독 조절 서열을 포함한다. 본원에 사용된 것으 

로서, "외인성" 전사 및/또는 해독 조절 서열은 비-아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열 또는 이의 

야생형 내용물에서 제거되어 이종 서열내에 새로운 내용물로 대체된 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 

서열을 말한다. 외인성 전사 및/또는 해독 조절 서열의 예는 포유동물 세포(예를 들면, 구성적 프로모터, 예 

를 들면, CMV 프로모터, 로우스 육종 바이러스(RSV) LTR 프로모터, SV40 프로모터, 디하이드로폴레이트 리덕 

타제(DHFR) 프로모터, β-액틴 프로모터, 포스포글리세롤 키나제(PGK) 프로모터, EF1α 프로모터(제조원: 

Invitrogen) 등), 포유동물 세포내에서 기능성인 인핸서 서열(예를 들면, CMV 또는 RSV 인핸서 서열), 스플라 

이싱 시그날, 스플라이스 인핸서, 리더 서열, 코작 서열, RNA 안정성 및/또는 프로세싱을 증가시키는 서열(예 

를 들면, 시스-작용성 RNA 엑스포트 성분, 우드척 간염 바이러스 해독후 조절 성분(Woodchuck Hepatitis 

Virus posttranslation regulatory element: WPRE)), 폴리 A 시그날 서열(예를 들면, 소 성장 호르몬(BGH) 또 

는 SV40 폴리 A 시그날 서열) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 각종의 적합한 전사 및/또는 해독 조절 

서열은 당해 분야에 기술되어 있다. 적합한 CMV 프로모터는 예를 들면, 미국 특허원 2006/0115456에 기술되 

어 있다. WPRE 성분은 예를 들면, Donello et al. (1998), J. Virology 72(6):5085에 기술되어 있다. WPRE 

- 38 -

[0111] 


[0113] 

[0114] 

[0115] 

[0116] 

성분은 ORF 전령내에, 전형적으로 유전자의 3' 말단 및 5' 폴리아데닐화 서열 사이에 위치하여야 한다. 이론 

에 제한할 의도없이, WPRE는 핵으로부터 mRNA 전좌의 효율을 증가시키고, RNA 해독 및 안정성을 증가시킴으로 

써 기능하는 것으로 여겨진다. 코작 서열은 또한 예를 들면, Kozak, Nucleic Acid Res 15(20), 8125-48 

(1987)에 기술되어 있다. 

적합한 전사 및/또는 해독 조절 서열은, 아데노바이러스 또는 다른 것들이던간에, 천연적으로 존재하는 서열 

뿐만 아니라 이러한 서열의 변형된 형태도 포함한다. 이러한 변형된 형태는 해독 및/또는 전사 조절 서열과 

관련된 바람직한 활성을 향상시키거나, 내인성 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열과 관련된 바람직 

하지 않은 활성을 감소시키거나 제거하도록 설계된다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 다중 전사 또는 해독 조절 서열을 포함한다. 예를 들면, 제1의 이종 서 

열은 충분한 전사 또는 해독 조절 서열을 포함함으로써 아데노바이러스 벡터에 의한 적절한 세포(예를 들면, 

인간 세포)의 감염시 제1의 이종 서열내 ORF의 발현을 보증할 수 있다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 

프로모터(예를 들면, CMV 프로모터) 및 아데노바이러스 TPL 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 

서열은 프로모터(예를 들면, CMV 프로모터), 아데노바이러스 TPL, 및 아데노바이러스 폴리 A 시그날 서열(예 

를 들면, Ad5 E3A 폴리 A 시그날 서열)을 포함한다. 앞서의 구체예 중 어느 것과 관련하여, 제1의 이종 서열 

은 코작 서열을 추가로 포함할 수 있다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 2개 이상의 ORF중 각각에 대한 하나 이상의 전사 또는 해독 조절 서열을 

포함한다. 예를 들면, 제1의 이종 서열은 충분한 전사 또는 해독 조절 서열을 포함함으로써 2개 이상의 ORF 

각각의 발현을 보증할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 2개의 ORF 중 각각에 대한 프 

로모터 및 폴리 A 시그날 서열을 포함한다. 제1의 이종 서열은 또한 ORF 중 각각에 대한 아데노바이러스 TPL 

및/또는 코작 서열을 추가로 포함할 수 있다. 달리는, 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 충분한 전사 또 

는 해독 조절 서열을 포함함으로써 하나의 ORF(예를 들면, 프로모터 및/또는 인핸서 및 폴리 A 시그날 서열) 

의 발현을 보증하면서 내인성 아데노바이러스 전사 또는 해독 조절 서열의 조절하에 있거나 이에 작동적으로 

연결된 제2 ORF를 포함할 수 있다. 

특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 적어도 하나의 ORF의 발현 및/또는 해독을 증가시키거나 최대화하도록 

최적화된다. 예를 들면, 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열내 ORF는 코돈 최적화되어 있다(예를 들면, 인간 

세포와 같은 포유동물 세포내 발현에 대해). 하나의 구체예에서, 제1의 이종 서열은 코돈 최적화되어 

있으며, CMV 프로모터와 같은 비-아데노바이러스 프로모터의 조절하에 있다. 다른 구체예에서, -ORF에 작동 

적으로 연결된 코작 서열은 예를 들면, 콘센수스 코작 서열을 생성하도록 최적화된 제1의 이종 서열이다. 여 

전히 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 엑손성 스플라이스 사일런서 또는 인슐레이터(insulator) 서열(예 

를 들면, 프로모터 및/또는 인핸서의 광범위한 효과를 차단하고 크로마틴을 조직화하도록 기능하는 서열)과 

같은 강력한 억제성 서열을 제거하도록 최적화된다. 코돈 최적화 및 다른 유형의 서열 최적화는 당해 분야에 

서 통상적이며, 숙련가들은 이러한 최적화를 수행하는 방법을 용이하게 이해할 것이다. 

제1의 이종 서열이 MLP 프로모터의 조절하에 있는 일부 구체예에서, 제1의 이종 서열은 코돈 최적화되지 않는 

데-즉, 제1의 이종 서열은 감염성 병원체로부터의 천연 서열이다. 예를 들면, 하나의 구체예에서, 아데노바 

이러스 벡터는 아데노바이러스 MLP 프로모터의 조절하에서 비-코돈 최적화된 제1의 이종 서열을 포함하며, 여 

기서, 아데노바이러스 벡터는 복제 수행성이며 부분적인 E3 결실을 갖는다. 다른 구체예에서, 아데노바이러 

스 벡터는 Ad4로부터 기원한다. 

제1의 이종 서열은 E1, E2, E3, E4, L3, 및 L5 영역 또는 E4-ITR 경계부를 포함하는, 아데노바이러스 벡터내 

의 각종의 상이한 위치내로 삽입될 수 있다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 E1, E2B, E3, L3, 또는 

L5 영역, 또는 E4-ITR 경계부내로 삽입된다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 E3 영역, L3 영역, 또는 

E4-ITR 경계부내로 삽입된다. 여전히 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 E3 영역내로 삽입된다. 특정 구 

체예에서, 적합한 E3 영역 삽입 부위는 E3B 폴리A 시그날 서열의 하부에 위치한다. 특정 구체예에서, 적합한 

L3 영역 삽입 부위는 L3 23k 프로테아제 유전자(예를 들면, Ad5 벡터의 프로테아제 유전자, 또는 다른 아데 

노바이러스 벡터내 동등한 서열)의 하부에 위치한다. 아데노바이러스 영역 또는 경계부내 정밀한 삽입 부위 

는, 제1의 이종 서열이 하나 이상의 내인성 아데노바이러스 전사 및/또는 해독 조절 서열의 조절하에, 또는 

이에 작동적으로 부착되어 있다. 달리는, 또는 추가로, 정밀한 삽입 부위는 수득되는 재조합 아데노바이러스 

벡터가 포유동물(예를 들면, 인간) 세포내에서 복제하는 능력에 대한 어떠한 충격도 최소화하도록 선택될 수 

있다. 

- 39 - 


[0117] 

[0118] 


[0120] 



본 발명의 아데노바이러스 벡터는 아데노바이러스 게놈내 결실을 포함할 수 있다. 이러한 결실은 예를 들면, 

이종 서열(예를 들면, 제1의 이종 서열)의 삽입을 위한 공간을 제공할 수 있고 수득되는 재조합 아데노바이러 

스 벡터가 포유동물(예를 들면, 인간) 세포내에서 복제하는 능력에 있어 삽입의 어떠한 영향도 최소화하도록 

도울 수 있다. 아데노바이러스 벡터는 E1, E2, E3, E4, L3, 및 L5 영역 또는 E4-ITR 경계부를 포함하는 각종 

의 상이한 위치내에서 결실될 수 있다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 E1, E2B, E3, L3, 또는 L5 

영역, 또는 E4-ITR 경계부내에서 결실된다. 다른 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 E3 영역, L3 영역, 또 

는 E4-ITR 경계부내에서 결실된다. 여전히 다른 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 E3 영역내에서 

결실된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 앞서의 결실들 중 어느 것내로 또는 근접하여 삽입된다. 예 

를 들어, 제1의 이종 서열은 E3 부분 결실내로 또는 E3 완전 결실에 근접하게 삽입될 수 있다. 

특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터내 결실은 하나 이상의 개방 판독 프레임을 결실한다. 예를 들면, 1, 

2, 3개 이상의 개방 판독 프레임이 결실될 수 있다. 개방 판독 프레임은 공지되어 있거나 공지되지 않은 기 

능을 가진다. 특정 구체예에서, 결실은 E3 영역내에 있고 E3 영역내 1, 2, 3개 이상의 ORF(예를 들면, 공지 

되지 않은 기능을 가진 E3 ORF)를 포함한다. E3 영역내 결실은 부분 결실일 수 있다. 또한, E3 영역내 결실 

은 완전 결실일 수 있다. 도 2는 Ad4의 E3 영역내 예시적인 부분 및 완전 결실을 아타낸다. 예시적인 Ad4 

부분 E3 결실은 24.8k, 6.3k, 및 29.7k ORF를 제거하며, 이들 모두는 공지된 기능을 갖지 않은 반면, Ad4 완 

전 E3 결실은 23.3k, 19k, 24.8k, 6.3k, 29.7k, 10.4k, 14.5k, 및 14.7k ORF를 제거한다. 하나의 대안적인 

부분 E3 결실은 24.8k, 6.3k, 29.7k, 10.4k, 14.5k, 및 14.7k ORF를 제거한다. 

따라서, 특정 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 하나 이상의(예를 들면, 모든) E3 24.8k, 6.3k, 

및 29.7k ORF의 결실을 포함하는 Ad4 벡터이다. 관련된 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 진뱅크(GenBank) 

서열 AY594254의 약 28,446 내지 약 30,226번 뉴클레오타이드에 상응하는 결실을 포함하는 Ad4 벡터이다. 

다른 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 E3 영역내 결실을 포함하지만 23.3k, 19k, 24.8k, 6.3k, 

29.7k, 10.4k, 14.5k, 및 14.7k(예를 들면, 23.3k 및 19k ORF는 보유될 수 있거나, 10.4k, 14.5k, 및 14.7k 

ORF가 보유될 수 있거나, 또는 23.3k, 19k, 10.4k, 14.5k, 및 14.7k ORF가 보유될 수 있다)로 이루어진 그룹 

중에서 선택된 하나 이상의 E3 ORF를 보유하는 Ad4 벡터이다. 관련 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 진뱅 

크 서열 AY594254의 약 28,446 내지 약 31,282번, 또는 약 17,356 내지 약 30,226번 뉴클레오타이드에 상응하 

는 결실을 포함하는 Ad4 벡터이다. 여전히 다른 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 23.3k, 19k, 

24.8k, 6.3k, 29.7k, 10.4k, 14.5k, 및 14.7k로 이루어진 그룹내 E3 ORF중 어느 것도 보유하지 않는 Ad4 벡터 

이다. 특정의 관련된 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 진뱅크 서열 AY594254의 약 27,356 내지 약 31,282 

번 뉴클레오타이드에 상응하는 결실을 포함하는 Ad4 벡터이다. 

특정 구체예에서, ORF는, ORF를 포함하는 핵산 서열의 일부가 아데노바이러스 벡터내 존재하여 잔류하는 경우 

에서도(즉, ORF가 단지 부분적으로 결실되는 경우에도) 결실되는 것으로 여겨진다. 특정 구체예에서, 부분 

결실된 ORF로부터의 발현은 ORF의 서열을 추가 조작함으로써 제거할 수 있다. 예를 들면, 특정 구체예에서, 

ORF의 개시 코돈은 제거될 수 있다. 특정 구체예에서, Ad4 E3 영역의 부분 또는 완전 결실은 E3 23.3k ORF의 

부분 결실을 초래한다. 특정 구체예에서, 부분 결실된 E3 23.3k ORF를 갖는 Ad4 벡터는 또한 E3 23.3k ORF의 

출발 코돈을 제거하는 돌연변이(예를 들면, 진뱅크 서열 AY594254의 위치 27279번에 존재하는 ATG 코돈내 돌 

연변이)를 추가로 포함한다. 

또 다른 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 Ad5 게놈의 ADP 영역에 상응하는 E3 영역(예를 들면, 

Ad5 E3 pg19k ORF와 Ad5 E3 RID-알파 ORF 사이의 영역)내 부분 결실을 포함할 수 있다. 예를 들면, 도 2에 

나타낸 Ad4의 부분 E3 결실은 Ad5의 E3 영역으로부터의 ADP 영역의 결실에 상응한다. 유사하게, Ad7 E3 

18.3k ORF와 Ad7 E3 10.3k ORF 사이의 영역(즉, Ad7 E3 20.1k, 20.6k, 및 7.7k ORF를 포함하는 영역)은 Ad5 

E3 영역으로부터의 ADP 영역에 상응한다. 당해 분야의 숙련가들은, Ad4 또는 Ad7 이외의 혈청형으로부터 아 

데노바이러스 벡터내 어느 영역이 Ad5의 ADP 영역에 상응하는지를 용이하게 측정할 수 있다. 


제1의 이종 서열은 아데노바이러스 벡터(예를 들면, 위에서 기술된 바와 같은 결실)내 결실내로 삽입될 수 있 

다. 또한, 제1의 이종 서열은 결실(예를 들면, 위에서 기술한 바와 같은 결실)에 근접한 위치내에서 아데노 

바이러스 벡터내로 삽입될 수 있다. 예를 들면, 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 부분적인 E3 결실(예를 

들면, Ad4 벡터내 부분적인 E3 결실)내로 삽입된다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 완전한 E3 결실(예 

를 들면, Ad4 벡터내 완전한 E3 결실)내로 삽입된다. 여전히 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 부분적이 

거나 완전한 E3 결실 에 근접한 영역(예를 들면, L5 섬유 유전자 또는 U 엑손과 같은 E3B 폴리 A 시그날 서열 

과 하부 서열 사이)내로 삽입된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 부분적인 E3 결실내로 

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삽입됨으로써, 이는 내인성 프로모터(예를 들면, LTP)의 조절하에 있다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열 

은 외인성 프로모터 및, 임의로 다른 전사 또는 해독 조절 서열을 포함하며 부분적이거나 완전한 E3 결실내로 

삽입된다. 특정 구체예에서, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 단백질을 암호화하는 ORF내로 통합되지 않는 

다. 이와 관련하여 본원에 사용된 것으로서, 용어 "통합된"은, 이종 서열이 아데노바이러스 ORF내로 삽입됨 

으로써 수득되는 서열이 키메라 단백질을 암호화함을 의미하며, 여기서, 키메라 단백질의 일부는 아데노바이 

러스 ORF에 의해 암호화되고 키메라 단백질의 일부는 이종 서열에 의해 암호화된다. 

일부 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 아데노바이러스 프로모터 (예를 들면, 주요 레이트 프로 

모터)의 조절하에 제1의 이종 서열을 포함하며, 여기서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자, 바실러스, HIV, HPV, 

토가바이러스(예를 들면, 뎅기열 바이러스), 시겔라, 마이코박테리움, 스트렙토코커스 또는 플라스모디움으로 

부터의 항원을 암호화한다. 하나의 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자로부터의 H1 HA, H3 HA, H5 

HA, 또는 B HA 항원을 암호화한다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 바실러스 안트라키스로부터의 보호 

성 항원 또는 변형된 보호성 항원을 암호화한다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 HIV로부터의 외피 단 

백질(예를 들면, gp160, gp140, gp120), 변형된 외피 단백질, 또는 gag 단백질를 암호화한다. 여전히 다른 

구체예에서, 제1의 이종 서열은 HPV16 및 HPV18을 포함하는 HPV로부터의 L1 단백질, L2 단백질, E6 단백질, 

E7 단백질 또는 이의 융합체를 암호화한다. 여전히 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 플라스모디움으로부 

터의 CSP, Pfs48/45, MSP1, MSP (C-말단, p42), 또는 LSA1을 암호화한다. 일부 구체예에서, 제1의 이종 서열 

은 마이코박테리움으로부터의 Ag85, ESAT, HspX, 또는 이의 조합물을 암호화한다. 다른 구체예에서, 제1의 

이종 서열은 시겔라로부터의 PSSP, r56Karp 단백질, 또는 침입 단백질(예를 들면, IpaB, IpaC, 또는 IpaD 단 

백질)을 암호화한다. 여전히 추가의 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 아데노바이러스 3부 리더 서열을 추 

가로 포함할 수 있다. 예를 들면, 제1의 이종 서열은 아데노바이러스 MLP 및 3부 리더의 조절하에 있을 수 

있으며, 여기서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자, 바실러스, HIV, HPV, 토가바이러스(예를 들면, 뎅기열 바이 

러스), 시겔라, 마이코박테리움, 스트렙토코커스 또는 플라스모디움으로부터의 항원을 암호화한다. 

다른 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 비-아데노바이러스 프로모터(예를 들면, CMV 프로모터, 

RSV LTR 프로모터, SV40 프로모터, DHFR 프로모터, β-액틴 프로모터, PGK 프로모터, EF1α 프로모터)의 조절 

하에 제1의 이종 서열을 포함하며, 여기서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자, 바실러스, HIV, HPV, 토가바이러 

스(예를 들면, 뎅기열 바이러스), 시겔라, 마이코박테리움, 스트렙토코커스 또는 플라스모디움으로부터의 항 

원을 암호화한다. 예를 들면, 하나의 구체예에서, 제1의 이종 서열은 CMV 프로모터의 조절하에 있고 인플루 

엔자, 바실러스 또는 HIV로부터의 항원을 암호화한다. 하나의 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자, 

바실러스 또는 HIV로부터의 코돈-최적화된 서열이다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자, 바실 

러스 또는 HIV로부터의 천연 서열이다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자로부터의 H1 HA, H3 

HA, H5 HA, B HA, NP, 또는 M1 항원을 암호화한다. 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열은 바실러스 안트라시 

스로부터의 보호성 항원 또는 변형된 보호성 항원을 암호화한다. 여전히 다른 구체예에서, 제1의 이종 서열 

은 HIV로부터의 외피 단백질(예를 들면, gp160, gp140, gp120), 변형된 외피 단백질, 또는 gag 단백질을 암호 

화한다. 일부 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 아데노바이러스 3부 리더 서열을 추가로 포함할 수 있다. 

예를 들면, 제1의 이종 서열은 CMV 프로모터 및 아데노바이러스 3부 리더 서열의 조절하에 있을 수 있고, 여 

기서, 제1의 이종 서열은 인플루엔자, 바실러스, HIV, HPV, 토가바이러스(예를 들면, 뎅기열 바이러스), 시겔 

라, 마이코박테리움, 스트펩토코커스 또는 플라스모디움으로부터의 항원을 암호화한다. 

특정 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 제2의 이종 서열을 포함한다. 따라서, 특정 구체예에서, 

본 발명의 아데노바이러스 벡터는 제1의 이종 서열 및 제2의 이종 서열 둘다를 포함한다. 또한, 본 발명의 

아데노바이러스 벡터는 제1의 이종 서열대신 제2의 이종 서열을 포함할 수 있다. 


제2의 이종 서열은 제1의 이종 서열에 대해 상기 기술된 바와 같은 구조를 가질 수 있으며 위에서 기술된 어 

떠한 방식으로도 아데노바이러스 게놈내로 삽입될 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 제2의 이종 서열은 완 

전한 길이의 항원 또는 이의 단편(예를 들면, 도메인, 제2 구조의 단위(들), 보존된 에피토프, B-세포, HTL, 

또는 CTL 에피토프, 또는 이의 조합물)을 암호화할 수 있다. 일부 구체예에서, 제2의 이종 서열은 사이토킨 

또는 성장 인자와 같은 치료학적 단백질 또는 면역 시스템을 자극하는 다른 단백질을 암호화한다. 예를 들 

면, 하나의 구체예에서, 제2의 이종 서열은 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF)와 같은 백혈구를 자극 

시키는 단백질을 암호화한다. 일부 구체예에서, 제1의 이종 서열은 감염성 병원체로부터의 항원을 암호화하 

고 제2의 이종 서열은 치료학적 단백질을 암호화한다. 하나의 특수 구체예에서, 제1의 이종 서열은 인플루엔 

자 항원(예를 들면, H1 HA, H3 HA, H5 HA, 또는 B HA 항원)을 암호화하고 제2의 이종 서열은 백혈구를 자극시 

키는 단백질(예를 들면, GM-CSF)를 암호화한다. 특정 구체예에서, 제2의 이종 서열은 제1의 이종 서열과 동 

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[0130] 

일한 아데노바이러스 벡터의 영역내로 삽입된다(예를 들면, 제1의 및 제2의 이종 서열이 서로 근접하게 위치 

하도록 함). 다른 구체예에서, 제1 및 제2의 이종 서열은 아데노바이러스 벡터의 상이한 영역내에 삽입된다. 

제2의 이종 서열은 또한 아데노바이러스 ORF내로 통합될 수 있다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스 ORF는 

아데노바이러스 구조 단백질(예를 들면, 헥손 단백질 또는 섬유 단백질과 같은 캡시드 단백질)을 암호화한다. 

따라서, 특정 구체예에서, 제2의 이종 서열은 아데노바이러스 헥손 ORF내로 통합되며, 여기서, 헥손 ORF 및 

이종 서열의 수득되는 융합은 키메라 헥손 단백질을 암호화한다. 다른 구체예에서, 제2의 이종 서열은 아데 

노바이러스 섬유 ORF내로 통합되고, 여기서, 섬유 ORF와 이종 서열의 수득되는 융합은 키메라 섬유 단백질을 

암호화한다. 일반적으로, 본 발명의 키메라 헥손 또는 섬유 단백질은 헥손 또는 섬유 기능(예를 들면, 헥손 

캡소머(hexon capsomere) 또는 섬유를 형성하고 캡시드 형성에 기여함)을 보유하는 한편 수득되는 아데노바이 

러스의 표면의 새로운 항원을 나타낼 것이다. 본 발명의 재조합 아데노바이러스의 표면의 새로운 항원의 표 

시는, 이것이 아데노바이러스계 백신의 효능을 감소시킬 수 있는, 일반적인 집단에서 기존의 아데노바이러스 

명역성을 갖는 문제를 피하는데 도움이 되므로 유리하다. 또한, 재조합 아데노바이러스의 표면의 감염성 병 

원체로부터 항원의 표시는 백신을 제공받은 피검체의 면역 시스템에 대한 매우 다양한 감염성 병원체 항원을 

표시함으로써 본 발명의 아데노바이러스계 백신에 의해 자극된 면역 반응을 확장시킬 수 있다. 

일부 구체예에서, 제2의 이종 서열은 상이한 아데노바이러스 혈청형으로부터의 섬유 단백질을 암호화하며 제2 

의 이종 서열은 아데노바이러스의 천연의 섬유 단백질을 암호화하는 서열을 대체한다. 따라서, 수득되는 재 

조합 아데노바이러스는 다른 아데노바이러스 혈청형으로부터 섬유를 발현한다. 예를 들면, 하나의 구체예에 

서, Ad5 아데노바이러스는 Ad4, Ad7, Ad2 등의 아데노바이러스로부터 섬유 단백질을 발현한다. 


따라서, 특정 구체예에서, 제2의 이종 서열은 아데노바이러스 구조 단백질(예를 들면, 헥손 또는 단백질과 같 

은 캡시드 단백질)의 ORF내로 통합외고, 여기서, 제2의 이종 서열은 감염성 병원체로부터의 항원을 암호화한 

다. 감염성 병원체 및 이의 항원은 위에서 기술한 바과 같을 수 있다. 특정 구체예에서, 항원은 M2(예를 들 

면, M2의 외부 도메인, 단편, 또는 에피토프)와 같은 인플루엔자 표면 단백질로부터 기원한다. 특정 구체예 

에서, M2 항원은 표 4에 나열된 M2 펩타이드 서열(예를 들면, 서열 번호 312, 318, 321, 또는 327)의 세트로 

부터 선택된다. 특정 구체예에서, 제2의 이종 서열은 표 4에 나열된 M2 펩타이드 서열 중 하나 이상을 암호 

화한다. 예를 들면, 제2의 이종 서열은 H1, H2, 및/또는 H3 인플루엔자 균주로부터의 적어도 2개의 M2 서열 

(예를 들면, 서열 번호 312 내지 317로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 2개의 서열), H5 인플루엔자 균 

주(예를 들면, 서열 번호 318 내지 320로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 2개의 서열), H7 인플루엔자 

균주(예를 들면, 서열 번호 321 내지 326로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 2개의 서열), 또는 H9 인플 

루엔자 균주(예를 들면, 서열 번호 327 내지 335로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 2개의 서열)을 암호 

화할 수 있다. 또한, 제2의 이종 서열은 다수의 상이한 인플루엔자 혈청형(예를 들면, 서열 번호 312 내지 

317로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 서열과 함께 서열 번호 318 내지 320로 이루어진 그룹 중 

에서 선택된 적어도 하나의 서열, 서열 번호 321 내지 326로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 서 

열, 서열 번호 327 내지 335로 이루어진 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 서열, 또는 이의 특정 조합)으로 

부터의 M2 서열을 암호화할 수 있다. 다른 구체예에서, 제2의 이종 서열은 인플루엔자 매트릭스 서열(예를 

들면, GAAAGILGFVFTLNAA - 서열 번호 336) 또는 인플루엔자 NP 서열(예를 들면, LELRSRYWAIRTRSGGNTNQQRAS - 

서열 번호 337) 중 하나 이상의 카피를 암호화할 수 있다. 여전히 다른 구체예에서, 인플루엔자 항원은 HTL 

또는 CTL 에피토프이다. 예를 들면, 제2의 이종 서열은 표 1 또는 13 중에서 선택된 하나 이상의 HTL 에피토 

프 또는 표 2 및 3 및 5 내지 12 또는 표 14 중에서 선택된 하나 이상의 CTL 에피토프를 암호화할 수 있다. 

다른 구체예에서, 제2의 이종 서열은 기존의 면역성(예를 들면, 인간 집단내)이 유의적이지 않은 아데노바이 

러스 혈청형으로부터의 아데노바이러스 헥손 단백질의 하나 이상의 부위를 암호화한다. 예를 들면, 인간 집 

단내에 아데노바이러스 혈청형 Ad35에 대해 최소의 기존 면역성이 존재한다[참조: 예를 들면, Vogels et al. 

(2003), J. Virology 77(15):8263]. 최소의 기존 면역성이 존재하는 다른 아데노바이러스 혈청형은 예를 들 

면, Ad11, Ad34, Ad43, Ad48, Ad50, Ad26, Ad28, Ad45, 및 Ad49를 포함한다. 약간 더 높지만 여전히 낮은 수 

준의 기존 면역성을 갖는 아데노바이러스 혈청형은 예를 들면, Ad22, Ad24, Ad36, Ad37, Ad38, Ad46, Ad47, 

및 Ad10을 포함한다. 따라서, 본 발명의 아데노바이러스계 백신은 예를 들면, Ad4 혈청형으로부터 기원할 수 

있으며, Ad35 헥손 단백질로부터 하나 이상의 단편을 암호화하는 제2의 이종 서열을 포함함으로써, 재조합 아 

데노바이러스가 Ad4 및 Ad35 서열에 대해 키메라인 헥손 단백질을 암호화한다. 달리는, 본 발명의 아데노바 

이러스계 백신은 예를 들면, Ad25 혈청형으로부터 기원할 수 있으며, Ad68 헥손 단백질로부터의 하나 이상의 

단편을 암호화하는 제2의 이종 서열을 포함함으로써, 재조합 아데노바이러스는 Ad25 및 Ad68 서열에 대해 키 

메라인 헥손 단백질을 암호화한다. 물론, 기존의 면역성에 대한 관심은 - 표적 집단내 기존의 면역성과 관련 

- 42 -

[0131] 

[0132] 

[0133] 

[0134] 

[0135] 

[0136] 

되지 않은 특수 아데노바이러스 혈청형이 표적 집단에 의존할 것인지에 상관없이 질병에 대한 표적 집단에 의 

존한다. 당해 분야의 숙련가들은, 당해 논쟁을 용이하게 평가하여 상응하는 제2의 이종 서열에 대한 적절한 

헥손 서열을 선택할 수 있다. 이종 서열의, 헥손과 같은 아데노바이러스 구조 단백질내로의 통합은 예를 들 

면, 미국 특허 제6,127,525호에 기술되어 있다. 

특정 구체예에서, 제2의 이종 서열은 초가변 영역(HVR)을 암호화하는 헥손 ORF의 부위내로 통합된다. 예를 

들면, 제2의 이종 서열은 삽입체로서 통합될 수 있거나, 통합됨으로써 이는 헥손 HVR을 암호화하는 ORF의 모 

두 또는 일부를 대체한다. 어떠한 헥손 HVR도 이러한 방식으로 변경되거나 대체될 수 있다. 특정 구체예에 

서, 제2의 이종 서열은 헥손 HVR5 암호화 영역내로 통합(및 임의로, 대체)된다. 다른 구체예에서, 제2의 이 

종 서열은 헥손 HVR1, HVR2, 또는 HVR4 암호화 영역내로 통합(및 임의로, 대체)된다. 변경시키기 위한 HVR의 

선택은 상이한 HVR의 상대적인 다양성에 기초할 수 있다. 예를 들면, Ad5의 HVR5는 Ad5 헥손 HVR에 대해 최 

대 다양성을 갖는다. 여전히 다른 구체예에서, 하나 이상의 헥손 HVR은 삽입 또는 치환을 가질 수 있다. 따 

라서, 특정 구체예에서, 제2의 이종 서열은 헥손 암호화 영역의 키메라 단편을 암호화하며, 여기서, HVR 암호 

화 영역 중 적어도 2개는 삽입체를 갖거나 또는 대체된다. 위에서 논의된 바와 같이, 제2의 이종 서열은 감 

염성 병원체 및/또는 다른 아데노바이러스 혈청형으로부터의 항원을 암호화할 수 있다. 따라서, 하나 이상의 

헥손 HVR은 감염성 병원체로부터의 항원의 삽입을 함유하거나 다른 아데노바이러스 혈청형으로부터 HVR 또는 

이러한 항원으로 대체될 수 있다. 특정 구체예에서, 하나 이상의 헥손 HVR은 다른 아데노바이러스 혈청형(예 

를 들면, 표적 집단내 기존의 면역성이 최소인 혈청형)으로부터의 HVR에 의해 대체될 수 있다. 본 발명의 아 

데노바이러스 벡터에서 사용될 수 있는 키메라 헥손 작제물의 개략도는 도 13에 나타낸다. 

당해 분야의 숙련가는 헥손 HVR의 경계부를 용이하게 확인할 수 있다. 헥손 HVR은 예를 들면, Ad5 헥손에 대 

해 확인되어 왔다(참조: 예를 들면, 미국 특허 6,127,525). 따라서, 다른 혈청형으로부터의 헥손 단백질과 

Ad5 헥손의 정렬을 사용하여 이러한 다른 혈청형에서 헥손 HVR을 확인할 수 있다. 달리는, 다양한 세트의 아 

데노바이러스 혈청형으로부터 헥손 단백질의 정렬을 사용하여 HVR 경계부를 확인할 수 있다. Ad4의 경우, 예 

를 들면, HVR 경계부는 진뱅크 서열 AY594254의 L5 헥손 서열의 아미노산 잔기 136-172(HVR1), 192- 

208(HVR2), 227-235(HVR3), 268-278(HVR4), 300-305(HVR5), 329-334(HVR6), 및 442-480(HVR7-9)에 상응한다. 

단일 헥손 HVR내로 삽입될 수 있는 서열의 양은 특수한 HVR(예를 들면, HVR1, HVR2 등) 및 HVR의 길이에 의존 

한다. 일반적으로, 삽입은 HVR 폴리펩타이드 서열의 길이에 상응하는 폴리펩타이드 서열(HVR 서열이 대체되 

는 경우) 및 추가의 0 내지 75개, 1 내지 70개, 2 내지 65개, 3 내지 60개, 4 내지 55개, 또는 5 내지 50개 

아미노산을 암호화할 수 있다. 예를 들어, Ad5에 대한 헥손 HVR 삽입체는 문헌[참조: Matthews et al. 

(2008), Virology Journal 5:98]에 기술되어 있다. 

감염성 병원체로부터의 항원을 암호화하는 서열을 헥손 HVR로 대체함으로써 헥손 서열 및 항원 서열이 서로 

근접하도록 할 수 있다. 이와 관련하여 본원에 사용된 것으로서, 용어 "근접한"은 엑손 암호화 서열 및 항원 

암호화 서열 사이의 프레임내 융합체를 말하며, 여기서, 헥손 및 항원 서열을 연결하는 링커 서열은 없다. 

또한, 링커 서열을 사용하여 헥손 및 항원 서열을 연결시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 링커 서열은 트리-펩 

타이드 "LGS"를 암호화하는 서열이다. 링커 서열은 예를 들면, 도 12에 나타낸 바와 같이, 항원 서열의 개시 

및 말기에 포함될 수 있다. 이론에 얽메이려는 의도 없이, LGS 링커 서열은 구조적 가요성을 제공하며, 수득 

되는 헥손 융합 단백질의 안정성을 개선시키고/시키거나 헥손 단백질 서열과 이종 서열에 의해 암호화된 단백 

질 서열 사이의 연결부의 면역원성을 감소시킨다. 다른 구체예에서, 링커 서열은 펩타이드 서열 "GAAA"(서열 

번호 352) 또는 "NAA"를 암호화한다. 이러한 링커 서열은 예를 들면, N-말단 끝의 GAAA 서열 및 이종 서열에 

의해 암호화된 단백질의 C-말단 끝의 "NAA" 서열과 함께 사용될 수 있다. 다른 적절한 링커 서열은 당해 분 

야의 숙련가에 의해 확인될 수 있다. 

특정 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 제3의 이종 서열을 포함한다. 따라서, 특정 구체예에서, 

본 발명의 아데노바이러스 벡터는 제1, 제2 및 제3의 이종 서열을 포함한다. 또한, 본 발명의 아데노바이러 

스 벡터는 제2 및 제3의 이종 서열을 포함할 수 있다. 제3의 이종 서열은 제1의 이종 서열 또는 제2의 이종 

서열에 대해 상기 기술한 바와 같은 구조를 가질 수 있고, 위에서 기술한 특정 방식으로 아데노바이러스 게놈 

내로 삽입될 수 있다. 


본 발명의 아데노바이러스 벡터는 현재 공지되어 있거나 후에 발견된 특정의 아데노바이러스 혈청형 또는 분 

리체로부터 기원할 수 있다. 예를 들면, 특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 Ad4 혈청형으로부터 기원 

한다. 다른 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 Ad7 혈청형으로부터 기원한다. 여전히 다른 구체예에서, 아 

데노바이러스 벡터는 Ad2, Ad3, Ad4, Ad5, Ad6, Ad7, Ad11, Ad20, Ad21, Ad22, Ad23, Ad24, Ad25, Ad26, 

- 43 -

[0137] 

[0138] 

[0139] 

[0140] 

Ad28, Ad34, Ad35, Ad40, Ad41, Ad48, Ad49, 또는 Ad50 혈청형으로부터 기원한다. 특정 구체예에서, 아데노 

바이러스 벡터는 침팬지 아데노바이러스로부터 기원한다. 예를 들면, 일부 구체예에서, 아데노바이러스 벡터 

는 Ad C1, Ad C3, Ad C6, Ad C7, 또는 Ad68로부터 기원한다. 

본 발명의 아데노바이러스 벡터는, 당해 벡터가 기원하는 야생형 아데노바이러스의 상응하는 크기(즉, 게놈 

크기)로부터 크기에 있어 다양할 수 있다. 그러나, 일반적으로, 크기에 있어서 유의적인 편차는 결함성 아데 

노바이러스 복제와 관련되어 있다. 예를 들면, 아데노바이러스 게놈의 거대 부위의 결실은 적절한 바이러스 

복제 및 기능에 필수적인 게놈 영역의 제거를 초래할 수 있다. 또한, 거대 삽입체의 첨가는 아데노바이러스 

캡시드내에 효율적으로 패키지되기에 너무 커서, 적절한 바이러스 복제 및 기능을 파괴하는 게놈을 생성할 수 

있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는, 벡터가 기원하는 야생형 아데노바이러스 

게놈의 길이의 약 95% 내지 약 110%, 약 97% 내지 약 105%, 약 99% 내지 약 103%, 약 99.5% 내지 약 102%, 또 

는 약 100% 내지 약 101%의 길이를 갖는다. 다른 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 약 34,000 

bp 내지 약 38,000 bp, 약 34,500 bp 내지 약 37,500 bp, 약 35,000 bp 내지 약 37,000 bp, 약 35,500 bp 내 

지 약 36,500 bp, 약 35,750 bp 내지 약 36,250 bp, 또는 약 36,000 bp를 갖는다. 

도입된 특이적인 변경(예를 들면, 이종 서열의 수 및 유형, 결실의 수 및 유형 등)과 상관없이, 본 발명의 아 

데노바이러스 벡터는 통상적으로 복제 수행성이다. 용어 "복제 수행성"은 피검체내에서 아데노바이러스 벡터 

의 복제하는 능력을 말한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 복제 수행성 아데노바이러스 벡터는 인간 피검체내 

에서 복제할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명의 복제 수행성 아데노바이러스 벡터는 포유동물 피검체(예 

를 들면, 돼지, 소, 말, 양, 염소 등과 같은 농장 동물; 사자, 호랑이, 코끼리, 코뿔소, 하마, 기린, 얼룩말, 

원숭이, 유인원 등과 같은 동물원 동물; 또는 개, 고양이, 토끼, 기니아 피크, 햄스터, 저빌, 토끼, 마우스 

등과 같은 애완동물)내에서 복제할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 복제 수행성 아데노바이러스 벡터 

의 시험관내 파열 크기(burst size)(예를 들면, 세포 배양물내에서 측정한 것으로서)는 적어도 1000, 2000, 

3000, 4000, 5000, 7500, 10k, 15k, 20k, 25k, 30k, 35k, 40k, 45k, 50k, 75k, 100k, 150k, 200k, 300k, 400k 

이상이다. 다른 구체예에서, 본 발명의 복제 수행성 아데노바이러스 벡터의 생체내 파열 크기(예를 들면, 피 

검체내)는 적어도 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 7500, 10k, 15k, 20k, 25k, 30k, 35k, 40k, 45k, 50k, 75k, 

100k, 150k, 200k, 300k, 400k 이상이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 복제 수행성 아데노바이러스 벡터는 

피검체내에서 면역 반응(예를 들면, 체액성 면역 반응, 세포 면역 반응 또는 둘다)을 자극할 수 있다. 특정 

구체예에서, 면역 반응은 아데노바이러스 벡터내로 삽입되거나 통합된 이종 서열에 의해 암호화된 에피토프에 

대해 측정가능한 반응(예를 들면, 측정가능한 체액성 또는 세포 면역 반응, 또는 이의 조합)을 포함한다. 본 

발명의 복제 수행성 아데노바이러스 벡터는 표적 피검체내에서 기존 면역성과 관련된 문제를 극복하는데 특히 

유용하다. 예를 들면, 특정 구체예에서, 이종 항원에 대해 효과적인 면역 반응은 동일한 항원을 발현하는 복 

제 비수행성 아데노바이러스 벡터의 투여량과 비교한 것으로서 본원에 기술된 바와 같은 이종 항원을 발현하 

는 복제 수행성 아데노바이러스 벡터의 보다 적은 투여량을 사용하여 아데노바이러스에 대해 기존 면역성을 

가진 피검체내에서 유도될 수 있다. 따라서, 일부 구체예에서, 본 발명의 복제 수행성 아데노바이러스 벡터 

의 유효 투여량은 복제 비수행성 아데노바이러스 벡터의 유효 투여량보다 2배, 3배, 4배, 5배 또는 10배 더 

적다. 

재조합 아데노바이러스 벡터를 작제하고, 유전적으로 조작하고 증식시키기 위한 기술은 하기 실시예에 기재되 

어 있다. 또한, 예를 들면, WO 2008/010864, 미국 특허원 제2006/0115456호, 및 미국 특허 제6,127,525호를 

참조하며, 이들의 내용은 참조함으로써 본원에 통합된다. 


다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 하나 이상의 아데노바이러스 벡터를 포함하는 백신을 제공한다. 본원에 

사용된 것으로서, 용어 "백신"은 본 발명의 아데노바이러스 벡터 백신 및 담체를 포함하는 조성물을 말한다. 

특정 구체예에서, 아데노바이러스 벡터는 바이러스이다. 다른 구체예에서, 아데노바이러스 백신은 게놈 단독 

이며 아데노바이러스 캡시드를 포함하지 않는다. 특정 구체예에서, 담체는 보조제이다. 이러한 보조제의 예 

는 인산칼슘, 인산알루미늄, 수산화칼슘 및 수산화알루미늄과 같은 염; 조류 글루칸(예를 들면, 베타 글루 

칸), 키토산 또는 결정화된 니눌린과 같은 천연 중합체; 폴리-락타이드, 폴리-글리콜라이드, 폴리 락타이드- 

코-글리콜라이드 또는 메틸아크릴레이트 중합체와 같은 합성 중합체; 플루로닉스(Pluronics), L121, 122 또는 

123, 트윈 80, 또는 NP-40과 같은 미셀-형성 양이온성 또는 비-이온성 블록 공중합체 또는 표면활성제; 리포 

좀, 프로테오리포좀, ISCOM 및 코클레이트 구조물과 같은 지방산, 지질 또는 지질 및 단백질계 소낭; 및 합성 

또는 천연 오일 및 수용액으로 구성된 표면활성제 안정화된 유제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 특정 

구체예에서, 본 발명의 백신은, 피검체에게 투여시, 피검체에서 면역 반응(예를 들면, 체액성 면역 반응, 세 

포 면역 반응 또는 둘다)을 자극할 수 있다. 특정 구체예에서, 면역 반응은 백신의 아데노바이러스 벡터내로 

- 44 -

[0141] 

[0142] 

[0143] 

[0144] 

[0145] 

[0146] 

삽입되거나 통합된 이종 서열에 의해 암호화된 에피토프에 대해 측정가능한 반응(예를 들면, 측정가능한 체액 

성 또는 세포 면역 반응, 또는 이의 조합)을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 백신은 감염성 병원체 

또는 암에 대해 보호를 제공할 수 있다. 예를 들면, 특정 구체예에서, 백신은 하나 이상의 항원(예를 들면, 

이종 서열에 의해 암호화된)에 대해 면역 반응을 자극함으로써, 후에 이러한 항원에 직면하는 경우, 백신을 

제공받은 피검체는, 백신을 앞서 투여받지 않은 경우 보다 더 강력한 면역 반응을 갖는다. 일부 구체예에서, 

본 발명의 백신은 감염성 병원체 또는 암에 대해 아데노바이러스에 대한 기존의 면역성을 가진 피검체에서 보 

호를 제공할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명의 백신은 병원체 감염 또는 암의 적어도 하나의 증상을 감 

소시키고/시키거나 병원체 감염 또는 암을 완화시킬 수 있다. 예를 들면, 하나의 구체예에서, 본 발명의 백 

신은 이종 서열에 의해 암호화된 하나 이상의 항원에 대해 치료학적 면역 반응을 유도함으로써 병원체 감염 

또는 암의 증상 및/또는 합병증이 이러한 감염 또는 암으로 고생하는 피검체에서 완화되거나, 감소되거나 증 

진될 것이다. 

백신에 사용된 아데노바이러스 벡터를 제조하여 당해 분야에 잘 공지된 기술에 따라 포유동물에게 투여하기 

위해 제형화할 수 있다. 경구 투여용 제형은 본 발명의 재조합 아데노바이러스 백터의 예정된 양을 함유하는 

캅셀제 또는 정제; 물, 염수, 오렌지 쥬스 등과 같은 소화가능한 희석제속에 용해된 약제의 유효량과 같은 액 

체 용액 등; 적절한 액체 속의 현탁제; 및 적합한 유제로 이루어질 수 있다. 

본 발명의 아데노바이러스 벡터는 예를 들면, 앞서 기술된 바와 같이 경구 투여용의 장 피복 캅셀제로 제형화 

되어, 상부 호흡관을 통과하여 위내에서 바이러스 복제를 허용한다(참조: 예를 들면, Tacket et al., 백신 

10:673-676, 1992; Horwitz, in Fields et al., eds., Fields Virology, third edition, vol. 2, pp. 2149- 

2171, 1996; Takafuji et al., J. Infec. Dis. 140:48-53, 1979; and Top et al., J. Infec. Dis. 124:155- 

160, 1971). 또한, 아데노바이러스 벡터는 멸균 염수와 같은 통상의 용액 속에 제형화시키고, 하나 이상의 

약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 혼입시킬 수 있다. 약제학적 조성물은 또한 다른 활성제를 포함 

할 수 있다. 

특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약제학적으로 허용되는 담체 속에 아데노바이러스 벡터(예를 들면, 바이 

러스)를 포함하는 완충된 용액을 포함한다. 완충된 염수, 물 등과 같은 다양한 담체를 사용할 수 있다. 이 

러한 용액은 일반적으로 멸균성이며 바람직하지 않은 물질을 포함하지 않는다. 이들 조성물은 통상의, 잘 공 

지된 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있거나, 멸균 여과될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 강직 조절 

제 등과 같은 적절한 생리학적 조건에 대해 요구되는 약제학적으로 허용되는 보조 물질, 예를 들면, 아세트산 

나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 락트산나트륨 등을 함유할 수 있다. 

약제학적으로 허용되는 담체는 예를 들면, 조성물을 안정화시키거나 바이러스 및/또는 약제학적 조성물의 흡 

수를 증가시키거나 감소시키도록 작용하는 생리학적으로 허용되는 화합물을 함유할 수 있다. 생리학적으로 

허용되는 화합물은 예를 들면, 글루코즈, 슈크로즈 또는 덱스트란과 같은 탄수화물, 아스코르브산 또는 글루 

타티온과 같은 항산화제, 킬레이팅제, 저분자량 단백질, 특정의 공-투여된 제제의 청소율(clearance) 또는 가 

수분해를 감소시키는 조성물, 또는 부형제, 또는 다른 안정화제 및/또는 완충제를 포함할 수 있다. 세제를 

또한 사용하여 조성물을 안정화시키고 흡수를 증가시키거나 감소시킬 수 있다. 당해 분야의 숙련가는, 생리 

학적으로 허용되는 화합물을 포함하는, 약제학적으로 허용되는 담체의 선택이 예를 들면, 아데노바이러스 제 

제의 투여 경로 및 특정의 공-투여된 제제의 특수한 물리-화학적 특성에 의존함을 인식할 것이다. 

아데노바이러스 벡터는 또한 지질 제형으로, 보다 특히 리포좀과 착체화되거나 지질/핵산 복합체에 착화되거 

나 리포좀내에 캅셀화된 액체 제형으로 투여될 수 있다. 본 발명의 벡터는 단독으로 또는 다른 적합한 담체 

와 함께, 또한 흡입을 통해 투여될 에어로졸 제형으로 제조될 수 있다. 백신은 또한 비강 통로를 통해 투여 

하기 위해 제형화할 수 있다. 비강 투여용으로 적합한 제형은, 담체가 고체인 경우, 입자 크기가 예를 들면, 

코흡입, 즉, 분말의 용기로부터 비강 통로를 통한 신속한 흡입에 의한 방식으로 투여되는 약 10 내지 약 500 

마이크론의 범위를 가진 조악한 분말을 포함한다. 담체가 예를 들면, 비강 스프레이, 비강 점적과 같은 투여 

용 액체, 또는 분무기에 의한 에어로졸 투여용 액체인 적합한 제형은 활성 성분의 수성 또는 유성 액제를 포 

함한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 아데노바이러스 벡터는 예를 들면, 직장 또는 질 투여용 좌제로 제형화 

될 수 있다. 

백신은, 단일 투여량 속에 약 10 3 

내지 약 10 6 

, 약 10 6 

약 10 11 

, 약 10 11 

내지 약 10 13 

내지 약 10 7 

, 약 10 7 

내지 약 10 12 

, 약 10 12 

(예를 들면, 약 10 3 

내지 약 10 8 

, 약 10 8 

내지 약 10 4 

, 약 10 4 

내지 약 10 9 

, 약 10 9 


내지 약 10 5 

, 약 10 5 

내지 약 10 10 

, 약 10 10 

내지 

내지 약 10 13 

)의 재조합 아데노바이러스를 포함하는 단위 용량을 가질 

- 45 -

[0147] 

[0148] 

[0149] 

[0150] 

[0151] 

수 있다. 당해 용량은 투여 경로에 따라 변할 수 있다. 예를 들어, 설하 또는 비강내 투여용으로 제형화된 

백신은 경구 투여용으로 제형화된 백신보다 단일 투여량당 아데노바이러스의 보다 적은 용량을 함유할 수 있 

다. 당해 분야의 숙련가는 감염 또는 암의 유형, 및 과도한 실험없이 사용될 투여 경로에 따라 특수 환자에 

적합한 용량을 결정할 수 있다. 

다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 백신을 피검체에게 투여함을 포함하여, 피검체에서 본원에 기술된 어떠 

한 감염성 병원체에 대한 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 발명은 충분한 양 

의 본 발명의 백신을 감염성 병원체에 의해 감염될 위험이 있는 피검체에게 투여함을 포함하여, 감염성 병원 

체에 대해 피검체를 백신화하는 방법을 제공한다. 다른 구체예에서, 피검체는 감염성 병원체에 의해 유도된 

감염을 갖는다. 따라서, 예를 들면, 하나의 구체예에서, 본 발명은 감염성 병원체에 의해 유도된 감염을 경 

험하는 피검체에서 치료학적 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 감염의 하나 이상의 

증상 또는 합병증은 백신의 투여 후 피검체에서 감소되거나 완화된다. 본 발명의 백신은 인간 또는 가축 피 

검체를 백신화하는데 사용될 수 있다. 

본 발명의 백신은 단독으로 투여할 수 있거나, 다른 면역학적, 항원성, 백신, 또는 치료학적 조성물과 함께 

공투여될 수 있거나 연속 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 면역 반응을 강화하거나 확장시키는 다른 제제, 

예를 들면, IL-2, 또는 규정된 시간 간격으로 투여될 수 있거나 연속투여될 수 있는 다른 사이토킨을 포함할 

수 있다[참조: 예를 들면, Smith et al., N Engl J Med 1997 Apr. 24; 336(17):1260-1; 및 Smith, Cancer J 

Sci Am. 1997 December; 3 Suppl 1:S137-40]. 백신 또는 벡터는 또한 다른 백신 또는 벡터와 함께 투여될 수 

있다. 예를 들면, 본 발명의 아데노바이러스는 상이한 혈청형의 아데노바이러스의 투여 전 또는 후에 투여될 

수 있다. 아데노바이러스 제제는 또한 예를 들면, 추가의 백신 제제를 사용하여 백신 치료법에서 초회항원자 

극(priming)하기 위해 사용될 수 있다. 

아데노바이러스 제형은 전신계적으로, 부위로 또는 국소적으로 전달될 수 있다. 부위 투여는 복강내, 

경막내, 경막하, 또는 특수 기관 등 내로의 투여를 말한다. 국소 투여는 종양 덩어리내로의 종양내 주사, 

피하 주사, 근육내 주사 등과 같은 한정되거나, 제한된, 해부학적 공간내로의 조성물의 투여를 말한다. 당해 

분야의 숙련가는, 국소 투여 또는 부위 투여가 또한 바이러스 제제의 순환계내로의 도입을 초래할 수 있음을 

인식한다. 대표적인 전달 경로는 비경구 투여, 예를 들면, 피내, 근육내 또는 피하내 투여를 포함한다. 다 

른 경로는 경구 점막(예를 들면, 편도)내로의 투여를 포함하는 경구 투여, 비강내, 설하, 방광내(예를 들면, 

방광 내부), 직장 및 질내 투여를 포함한다. 아데노바이러스의 전달을 위해, 투여는 흔히 흡입을 통해 수행 

할 수 있다. 에어로졸 제형은 예를 들면, 디클로로메탄, 질소 등과 같은 가압된, 약제학적으로 허용되는 추 

진제일 수 있다. 이들은 또한 분무기(nebulizer) 또는 비말화기(atomizer)와 같은 비-가압 제제용 약제로서 

제형화될 수 있다. 대표적으로, 이러한 투여는 위에서 기술한 바와 같은 수성의 약리학적으로 허용되는 완충 

제이다. 폐로의 전달은 또한 예를 들면, 기관지경을 사용하여 달성할 수 있다. 

본 발명의 백신은 의도된 용도, 예를 들면, 예방학적 백신 또는 치료학적 요법, 및 투여 경로에 따라 각종 단 

위 용량형으로 투여될 수 있다. 치료학적 용도와 관련하여, 각각의 환자의 일반적인 의학 상태 및 특수 상태 

또는 질병은 투여 요법에 영향을 줄 것이다. 약제학적으로 허용되는 부형제중 아데노바이러스의 농도는 예를 

들면, 투여량당 약 10 3 

당 약 10 6 

10 9 

내지 약 10 13 

개 바이러스 입자, 투여량당 약 10 4 

내지 약 10 10 

개 바이러스 입자, 투여량당 약 10 7 

내지 약 10 11 

개 바이러스 입자, 투여량 

내지 약 10 9 

개 바이러스 입자, 또는 투여량당 약 

내지 약 10 11 

개 바이러스 입자일 수 있다. 다른 구체예에서, 약제학적으로 허용되는 부형제중 아데노바이 

러스의 농도는 예를 들면, 투여량당 약 10 3 

염성 단위일 수 있다 

내지 약 10 9 

, 약 10 4 

내지 약 10 8 

, 또는 약 10 5 

내지 약 10 7 

개 감 

본 발명의 복제-수행성 아데노바이러스 벡터는 대표적으로 생체내 투여된 복제-결핍성 아데노바이러스 재조합 

체에 의해 암호화된 삽입유전자의 동등한 발현 수준을 달성하는데 요구될 수 있는 것보다 훨씬 적은 투여량으 

로 투여된다. 복제 수행성 아데노바이러스 벡터는 용량 범위에서 투여될 수 있다(참조: 예를 들면, 미국 특 

허 4,920,209; Smith et al., J. Infec. Dis. 122:239-248, 1970; Top et al., J. Infect. Dis. 124:155-160, 

1971; Takafuji et al., J. Infec. Dis. 140:48-53, 1979; Tacket et al., Vaccine 10:673-676, 1992). 예를 

들면, 10 4 

내지 10 9 

50% 조직 배양 감염성 투여량(또는 플라크 형성 단위)가 투여될 수 있다. 대표적으로, 복 

제-수행성 아데노바이러스에 대한 경구 용량은 약 10 7 

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50% 조직 배양 감염성 투여량 또는 10 7 


플라크 형성 단

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위이다. 일부 구체예에서, 복제-수행성 아데노바이러스에 대한 경구 용량은 약 10 11 

플라크(plaque) 형성 단 

위이다. 아데노바이러스 재조합체의 대표적인 비강 투여는 흔히 약 10 3 

내지 약 10 5 

플라크 형성 단위이다. 

바이러스의 정확한 농도, 제형의 양, 및 투여 횟수는 또한 생체내 수준, 예를 들면, 초기 투여 후 반응계내 

삽입유전자 발현 및 벡터 보유의 수준에 따라 조절될 수 있다. 

바이러스의 양 및 농도 및 제공된 투여량의 제형, 또는 "치료학적 유효" 투여량은 임상의에 의해 결정될 수 

있다. 백신의 치료학적 유효 투여량은 바이러스 벡터내에 포함된 이종 핵산에 의해 암호화된 단백질(들)에 

대한 면역 반응을 자극할 아데노바이러스의 양이다. 용량 스케쥴, 즉, 투여량 요법은 각종 인자, 예를 들면, 

환자 건강의 일반적인 상태, 물리적 상태, 연령 등에 의존할 것이다. 당해 분야의 상태는 임상의에게 각각의 

개별 환자에 대한 용량 요법을 결정하도록 한다. 아데노바이러스는 인간 백신용으로 수년 동안 안전하게 사 

용되어 왔다(참조: 예를 들면, Franklin et al., supra; Jag-Ahmade et al., J. Virol., 57:267, 1986; 

Ballay et al., EMBO J. 4:3861, 1985; PCT publication WO 94/17832). 이들 예시적인 실시예를 또한 안내서 

로 사용하여 본 발명의 방법을 실시할 경우 용량 요법을 측정할 수 있다. 

아데노바이러스 제형의 단일 또는 다수 투여는 예방학적 또는 치료학적 백신으로 투여될 수 있다. 하나의 구 

체예에서, 다수의 투여량(예를 들면, 2회 이상, 3회 이상, 4회 이상 또는 5회 이상의 투여량)을 피검체에게 

투여하여 예방학적 또는 치료학적 면역 반응을 유도하거나 부스트(boost)시킬 수 있다. 2회 이상의 투여량은 

주기적인 간격, 예를 들면, 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월, 3개월, 또는 6개월 간격으로 분리될 수 있다. 

또 다른 양태에서, 본 발명은 또한 본 발명의 벡터, 벡터 시스템 또는 백신을 함유하는 키트(kit)를 

제공한다. 키트는 예를 들면, 또한 본 발명의 아데노바이러스를 성장시키기 위한 세포를 함유한다. 당해 키 

트는 또한 키트를 사용하여 아데노바이러스를 생성하고, 백신에 대한 방법을 교시하는 지시물을 포함할 수 있 

으며, 투여 용량, 투여 경로 및 투여 방법의 지침 등에 대한 지시를 포함할 수 있다. 

다음 실시예는 본 발명의 각종 측면을 설명한다. 당해 실시예는 물론, 본 발명의 특정 구체예만을 단순히 설 

명하는 것으로 이해되어야 하며, 당해 설명의 말미에 첨부된 특허청구의 범위에 정의된 본 발명의 영역에 대 

한 제한을 구성하는 것으로 고려되어서는 안된다. 

실시예 

실시예 1: 재조합 아데노바이러스 벡터의 작제 

이. 콜라이내 동종 재조합을 사용하여 재조합 아데노바이러스 벡터를 신속하게 및 확실하게 생산하였다. 예 

로서, 야생형 Ad4 바이러스 DNA를 밀리터리 Ad4 정제(military Ad4 tablet)(로트 번호 4958221로부터, 

제조사: Wyeth Labs, 미국 정부 허가번호 3)로부터 분리하여 동종 재조합에 의해 이. 코라이내에서 복제할 수 

있는 세균 플라스미드내로 클로닝하였다. 수득되는 벡터를 pPV-Ad4vax로 지정하였다. 

pPV-Ad4vax 벡터에 대한 출발 작제물을 야생형 Ad4의 좌측 아암(arm)의 합성적 유전자 합성 및 세균 플라스미 

드내로 합성 단편의 삽입에 의해 생성하였다. 수득되는 플라스미드를 pPV-Ad4 Left Arm TM으로 지정하였다. 

Ad4 합성 유전자 단편의 3' 말단에 가해진 XbaI/EcoRI 폴리링커를 제공하여 Ad4 우측 아암 단편의 후속적인 

삽입을 허용하였다(참조: 도 1). Ad4의 우측 아암 단편을 밀리터리 Ad4 정제로부터 분리된 Ad4 게놈성 DNA로 

부터 고 정확도 PCR로 생성한 후 XbaI/EcoRI 폴리링커 부위내로 클로닝하였다. pPV-Ad4 RHT & LFT Arm TM으 

로 지정된 수득되는 플라스미드는 유일한 XbaI, ClaI, 및 SpeI 제한 부위에 의해 분리된 Ad4의 좌측 아암 및 

우측 아암 단편을 포함한다(참조: 도 1). XbaI 및 SpeI을 사용한 선형화 및 탈포스포릴화에 이어서, 선형화 

된 pPV-Ad4 RHT & LFT arm TM 벡터를 야생형 Ad4 게놈성 DNA와 함께 BJ1583 재조합-수행성 세균내로 공-형질 

감염시켰다. 클론을 제한 효소 분해에 의해 스크리닝한 후 TOP10 세포내로 재형질전환시켰다. pPV-Ad4pax의 

최종 확인을 서열분석으로 수행하였다. 


Ad4 게놈의 이종 서열 및 변형물을 pPV-Ad4pax 벡터내로 셔틀 플라스미드(shuttle plasmid)를 사용하여 도입 

시켰다. 셔틀 플라스미드를 가공하여 충분한 야생형 Ad4 DNA에 의해 플랭킹된 이종 서열을 함유하도록 가공 

하여 셔틀 벡터와 pPV-Ad4vax 사이에 동종 재조합을 허용하였다. 이종 서열은 녹색 형광성 단백질(GFP) 및 

인플루엔자 헤마글루티닌(HA)을 암호화하는 유전자를 포함하였다. 별개의 완전한 길이의 HA 유전자를 HA 

Bbn(진뱅크 서열 EU199366 - "Influenza A형 바이러스(A/Brisbane/10/2007(H3N2)) segment 4 

hemagglutinin(HA) gene, complete cds.)", HA VT/1203(진뱅크 서열 EF541403 - A/Vietnam/1203/2004(H5N1)), 

및 HA VT/1194(진뱅크 서열 EF541402 - A/Vietnam/1194/2004(H5N1))로부터 인공적으로 합성하였다. 셔틀 플 

라스미드와 pPV-Ad4pax 사이의 동종 재조합은 바람직한 변형을 함유하는 재조합 아데노바이러스 벡터를 생성 

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[0167] 

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하였다. 재조합 아데노바이러스 벡터의 확인은 다중 효소 제한 분석 및 DNA 서열분석에 의해 확인하였다. 

실시예 2: 아데노바이러스 MLTU의 조절하에서 이종 서열을 발현하는 재조합 아데노바이러스 벡터 

이종 서열을 수용하고 아데노바이러스 주요 레이트 전사 단위(MLTU)를 통한 이들의 발현을 뒷받침하기 

위하여, Ad4 게놈의 E3 영역내 부분 결실을 생성하였다. 부분 결실은 1780개 염기쌍으로 이루어지며 진뱅크 

서열 AY594254의 뉴클레오타이드 위치 28446-30226에 위치하였다. 부분 결실을 설계하여 E3 영역의 공지된 

기능을 보존하는 한편 알려지지 않은 기능의 3개의 개방 판독 프레임 단편(E3 24.8k, E3 6.3k, 및 E3 29.7k) 

을 제거하였다(참조: 도 2). 비록 Ad4가 ADP-유사 유전자를 암호화하지 않는다고 해도, 결실된 영역은 Ad5의 

ADP 영역과 유사하다 

각종 이종 서열(예를 들면, HA Bbn, HA VT/1194, 또는 GFP)의 발현물을 내인성 아데노바이러스 MLTU에 이종 

서열을 부분 E3 결실내로 클로닝함으로써 연결시켜 이종 서열이 MLP-기원한 발현에 대한 천연의 E3 24.8k 스 

플라이스 수용체에 작동적으로 연결되도록 하였다. 천연의 E3 24.8k 스플라이스 수용체는 컨센서스에 근접하 

므로, 서열은 변형을 요구하지 않았다. 해독의 가장 강력한 개시를 촉진하기 위하여, 이종 서열의 ATG 출발 

코돈의 바로 앞의 서열을 콘센수스 코작 서열에 대해 최적화하였다. 수득되는 재조합체 바이러스 벡터에서, 

일부 조기 저-수준 발현은 바이러스 복제의 조기 단계(early stage)에서 내인성 E3 프로모터를 통해 발생할 

수 있으나, 발현은 MLP가 감염된 세포내에서 DNA의 복제의 개시시 활성화되는 경우 크게 부스트된다. 조기 

및 레이트 E3 유전자 생성물 사이의 경계부를 보다 잘 정의하기 위하여, Ad5 E3A 폴리 A 시그날 서열의 29bps 

를 포함하는 DNA의 작은 조각을 이종 서열의 하부로 도입하였다. Ad5 E3A 폴리 A 시그날 서열과 잠정적으로 

유사한 서열은 Ad4내 하부에서 추가로 발견될 수 있으며 조기 단계에서 전사를 조절하고 이종 서열의 발현을 

최대화하는데 도움이 될 수 있다. 

이종 서열의 MTLU-기원한 발현을 특징으로 하는 상이한 재조합 아데노바이러스 벡터는 표 15에 나열되어 

있다. Ad4-HA-Bbn 벡터의 경우, 게놈 크기는 하기 나타낸 바와 같이, 야생형 Ad4 밀리터리 균주보다 22 염기 

쌍 더 작다: 

a) E3 영역내 -1780 bp 부분 결실(AY594254의 nt 28446-30226); 

b) 콘센수스 코작 서열의 +10 bp 5' 첨가; 

c) +1701 bp 완전한 길이의 HA 유전자(A/Brisbane/10/2007(H3N2)) 

d) +18 bp의 나머지 폴리링커 

e) +29 bp의 Ad5 E3A 폴리 A 시그날 서열 

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[0173] 

[0174] 

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[0176] 

[표 15] 

실시예 3: 외인성 프로모터의 조절하에서 이종 서열을 발현하는 재조합 아데노바이러스 벡터 

재조합 아데노바이러스 벡터의 다른 세트를 생성하였으며, 여기서, 목적한 이종 서열은 CMV 프로모터, Ad4 3 

부 리더 서열, 폴리링커, 및 소 성장 호르몬(BGH) 폴리 A 시그날 서열로 이루어진 발현 카세트의 폴리링커 내 

로 통합시켰다. 수득되는 발현 카세트를 부분 또는 완전한 E3 결실을 함유하는 Ad4 벡터내로 통합하였다. 

부분 E3 결실은 실시예 2에 기술된 바와 같다. 3926 염기쌍으로 이루어진 완전한 E3 결실은 진뱅크 서열 

AY594254의 27,356 내지 31,282번 뉴클레오타이드 위치에 위치하며 또한 23.3k ORF의 ATG 출발 코돈내 돌연변 

이를 포함하였으며, 이는, 단지 부분적으로 결실되었다(참조: 도 2). E3 결실의 유형과 상관없이, 발현 카세 

트를 E3 폴리 A 시그날 서열과 L5 섬유 유전자 사이의 Ad4 벡터내로 삽입하였다(참조: 도 2). 

이종 서열의 CMV-기원한 발현을 특징으로 하는 상이한 재조합 아데노바이러스 벡터는 표 15에 나열되어 있다. 

"Opt"는 항원 서열의 코돈 최적화를 말한다. 

실시예 4: 재조합 아데노바이러스의 생산 


재조합 아데노바이러스는 A549(MCB) 세포를 재조합 아데노바이러스 게놈에 상응하는 선형 DNA 단편으로 형질 

감염시켜 생성하였다. 선형 DNA 단편을 절단하여 모든 외부 세균 플라스미드 서열을 제거하였다. 세포 변성 

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[0184] 

효과가 A549 세포에서 관측되면(전형적으로 7 내지 10일 후), 바이러스를 수거하고 고 수율을 위해 일련 계대 

배양하였다. 바이러스의 확인이 정확한지를 보증하기 위해, 바이러스 DNA를 변형된 Hirt 프로토콜을 사용하 

여 분리하고 PCR, 제한 분해 및, 이종 삽입물 및 플랭킹 영역의 서열분석에 의해 분석하였다. 서열은, 이종 

삽입물 및 플랭킹 영역이 뉴클레오타이드 수준에서 정확하였음을 확인하였다. 

실시예 5: 재조합 아데노바이러스로부터 이종 서열의 발현 

재조합 아데노바이러스로 감염시킨 A549 세포를 이종 서열의 발현에 대해 분석하였다. 도 4는 4개의 상이한 

재조합체 Ad4H5HA 아데노바이러스로부터의 HA: 내인성 MLP 프로모터(PVXV0103)의 조절하에 

A/Vietnam/1194/2004로부터 H5HA; CMV 프로모터(PVXV0113)의 조절하에 A/Vietnam/1194/2004로부터 H5HA; CMV 

프로모터의 조절하에 A/Vietnam/1203/2004로부터 H5HA, E3의 완전한 결실(PVXV0114); 및 CMV 프로모터의 조절 

하에 A/Vietnam/1203/2004로부터 H5HA, 부분 E3 결실(PVXV0124). 도 5는 아데노바이러스 벡터 PXVX0101의 내 

인성 MLP로부터 및 아데노바이러스 벡터 PXVX0111내 CMV 프로모터로부터 HA의 발현을 나타낸다. 실시간 PCR 

분석은, 아데노바이러스 벡터 PXVX0101로부터의 H3 HA의 발현 수준이 근접한 아데노바이러스 단백질 섬유와 

유사하였음을 확인하였다(참조: 도 6). 이들 작제물로 형질감염시킨 후 2일째에, HA 항원은 도 7의 FACS 결 

과에서 나타난 바와 같이, A549 세포의 표면에 제공된다. 이들 결과와 일치하게, PVXV0101로 감염된 A549 세 

포는 적혈구 세포와 함께 응집함을 나타내었다(참조: 도 9a 및 9b). 1-단계 성장 검정(도 8a)의 사용시, 

PXVX0101 및 PXVX0111는 A549, HepG2, 및 HuTu80 세포에서 근접한-야생형 성장을 나타내었다(도 8b). 

실시예 6: Ad4 헥손의 HVR내에서 인플루엔자로부터 항원의 통합 

도 10은 헥손 변형된 벡터를 생성하기 위한 한가지 방법을 도시한다. 당해 방법은 사일런트 돌연변이를 Ad4 

헥손 서열내로 도입함으로써 HVR 영역 1 내지 6을 함유하는 DNA 단편이 1회 단계로 대체될 수 있도록 하는 것 

에 의존한다. 당해 방법은 XbaI 및 XhoI 클로닝 부위 둘다를 Ad4 헥손 암호화 영역내로 혼입시킨다. 

이후에, 각각의 XbaI/XhoI 단편은 합성 유전자 합성에 의해 생성한다. 도 11은 HVR 영역과 관련하여 제한 부 

위의 위치를 나타낸다. 또한, XhoI 부위 및 내인성 BstXI 부위를 사용하여, 필요할 경우 HVR7 또는 HVR7-9를 

대체할 수 있다. 일련의 에피토프를 상이한 인플루엔자 바이러스의 M2e 서열 주변에 설계하였다(참조: 도 

12). 서열은 인플루엔자의 H5, H7, 및 H9 균주로부터 M2 단백질에 대한 콘센수스를 제공한다. 인간 M2E는 

H1 및 H3 M2e에 대한 콘센수스 서열을 나타낸다. 스페이서 서열을 포함시켜 최적의 면역반응성 방식으로 통 

합된 서열을 위치시킨다. 서열은 에피토프들 사이의 경계부에 대해 생성되는 항체를 방지하도록 설계한다. 

도 13은 생성될 수 있는 일련의 17개의 헥손 변형을 기술한다. 

실시예 7: 마우스에서 HA-특이적인 항체를 유도하는 A549 세포로부터의 Ad4-H5-Vtn 정제된 바이러스 

마우스에서 정제된 Ad4-H5-Vtn PXVX0103 및 PXVX0116 바이러스의 면역원성을 표 16에 나타낸 바와 같이 시험 

하였다. 대조군은 wt Ad4 바이러스(음성 대조군) 및 H5 HA 단백질(양성 대조군)이었다. 

A549 세포를 Ad4-H5-Vtn PXVX0103(MLTU 프로모터) 및 PXVX0116(CMV 프로모터) 바이러스로 감염시켰다. 바이 

러스를 후속적으로 분리하고 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 면역원성 연구에서 각각의 그룹에 대 

해, 6 내지 8주령의 6마리의 C57Bl/6 x Balb/c F1 암컷 마우스를 사용하였다. 마우스를 0일째(프라임)에 1 

회 이후, 14일째에 다시 1 x 10 10 

, 1 x 10 9 

, 1 x 10 8 

vp/마우스의 투여량 적정 및 근육내(i.m.) 투여 경로를 

사용하여 면역화시켰다. 10일 및 27일 후에, 0.2 mL의 혈액을 안와 출혈로 수집하고 혈청 항체 역가를 HA 종 

점 ELISA 및 헤마글루틴화 억제(HAI)로 측정하였다. 

요약하면, ELISA 검정을 위해, 고-결합 96-웰 ELISA 플레이트를 1.5㎍/ml (5x10 9 

입자/ml) 아데노바이러스 또 

는 5㎍/ml 정제된 HA 단백질(제조원: Immune Technologies)로 피복시키고 4℃에서 밤새 항온처리하였다. 이 

후에, ELISA 플레이트를 세척하고 PBS + 3% BSA로 2시간 동안 차단하였다. 일련의 혈청 희석물을 플레이트에 

가하고 2시간 동안 항온처리하였다. 완전히 세척한 후, 항원-특이적인 혈청 항체를 HRP-커플링된 제2 항체를 

사용하여 검출하였다. 플레이트를 HRP 기질 시약으로 현상하고, 산으로 중지시키고, 흡광도를 PolarStar 플 

레이트 판독기 상에서 450nm에서 측정하였다. 종점 ELISA 역가를 평균 배경을 초과하는 판독되는 3개의 표준 

편차를 제공하는 최대 희석의 역수로 나타낸다. HAI 역가의 경우, 혈청의 일련의 희석을 허용하여 인플루엔 

자 바이러스 또는 HA 단백질의 고정된 투여량(4HAU)과 반응시킨 후, 닭 RBC를 첨가하였다. 중화 항체의 존재 

하에서, RBC를 응집시키는 바이러스의 능력은 억제된다. 항체 HAI 역가는 응집을 억제할 수 있는 혈청의 최 

종 희석의 역수이다. 

- 50 - 


[0185] 

[0186] 

[0187] 

[0188] 

[0189] 




[표 16] 

도 14a, b 및 c에 나타낸 바와 같이, 고 투여량(1x10 10 

된 마우스는 ELISA에 의해 측정된 경우 1회 및 2회 면역화 후 각각, 약 2.5 x 10 4 

이적인 항체 역가를 생산하였다. 약 2.5 x 10 3 

각각 1회 및 2회 면역화 후 보다 낮은 투여량의 바이러스(1 x 10 8 

바이러스 투여량(1 x 10 8 

vp)에서, 8 x 10 3 

vp)의 정제된 Ad4-H5-Vtn(PXVX0103) 바이러스로 면역화 

및 7 x 10 4 

의 강력한 HA-특 

및 2 x 10 4 

의 보다 낮으나 유의적인 HA-특이적인 반응이 또한 

vp)를 사용하여 유도되었다. 사용된 최저 

항체 종점 역가의 유의적인 반응이 2회 면역화 후 관측되었다. H5 

삽입유전자가 CMV(PXVX0116)에 의해 기원한 경우, 대략 3-배 더 높은 항체 반응이 유도되었다. 예측된 바와 

같이, HA 삽입유전자를 함유하지 않는 야생형 Ad4 정제된 바이러스(1 x 10 10 

vp)로 면역화된 마우스는 검출가 

능한 HA-특이적인 항체 반응을 유도하지 않았다. 2회 면역화 후, H5 단백질은 대략 7 x 10 4 

의 HA 항체 종점 

반응을 유도하였다. HAI 역가와 관련하여, 1 x 10 10 

vp의 정제된 Ad4-H5-Vtn(PXVX0103) 바이러스는 각각 1회 

및 2회 면역화 후 1:20 및 1:40의 유의적인 HAI 항체 역가를 생산하였다. 제2 면역화에 이어서, 1 x 10 9 

의 보다 적은 투여량에서 Ad4-H5-Vtn (PXVX0103)는 1:20의 유의적인 HAI 반응을 유도하였다. HA-특이적인 반 

응은 야생형 Ad4 바이러스에 대해 검출되지 않았다. 다시, Ad4-H5-Vtn (PXVX0116)은 대략 4-배 더 높은 HAI 

역가를 유도하였다. 정제된 H5 단백질은 제2 면역화 후 1;40의 유의적인 반응을 유도하였다. 이들 결과는 

감염된 세포를 사용한 연구와 일치하며, 여기서, 이는, 정제된 H5 단백질의 2회 면역화가 측정가능한 HAI 항 

체 역가를 유도하는데 필요하였음을 입증하였다. 

정제된 Ad4-H5-Vtn 바이러스를 사용한 이러한 면역원성 연구는, 마우스에서 바이러스 복제의 결실에도 불구하 

고, 바이러스가 생체내에서 세포로 들어가며 삽입유전자가 충분히 발현되어 H5-특이적인 항체 반응을 유도하 

였음을 나타낸다. 

실시예 8: 마우스에서 아데노바이러스 혈청형 4 인플루엔자 H5 헤마글루티닌백신의 평가 

아데노바이러스 혈청형 4 H5HA 백신의 설계 

실시예 7에 기술된 Ad4-H5-Vtn (PXVX0103) 재조합 아데노바이러스를 쥐 모델에서 백신으로서의 안정성, 면역 

원성 및 효능에 대해 평가하였다. 도 15에 도시된 바와 같이, Ad4H5HA 백신을 결실된 Ad4 바이러스 E3 

24.8K, 6.8K 및 29.7K 유전자를 사용하여 작제함으로써 A/VietNam/1194/2004 H5N1 인플루엔자 바이러스로부터 

HA 유전자를 수용하였다. E3 24.8K 유전자의 스플라이스 수용체 부위는 HA 삽입유전자의 발현을 구동시키기 

위해 보유하였다. HA 천연 암호화 서열을 제거된 다염기성 절단 부위와 함께 사용하였다. Ad5로부터 

기원한, E3A 폴리아데닐화 시그날 서열을 HA 암호화 서열의 하부에 위치시켰다. DNA의 직접적인 서열분석은, 

HA 삽입유전자 및 플랭킹 벡터 서열의 통합성을 확인하였다. 정확한 재조합체를 확인하여 이를 분리하면, 적 

절한 제한 효소로 분해아여 외인성 세균 플라스미드 서열을 제거하지만 HA 삽입유전자를 암호화하는 완전한 

재조합체 Ad4 게놈성 DNA를 보유시킨다. 


특성화를 위해 바이러스를 생산하기 위해서, 당해 선형 Ad4H5HA DNA 서열의, 포유동물 A549 세포(ATCC, 버지 

- 51 - 

vp






니아주 마나사스 소재)내로의 형질감염을 수행하였다. 형질감염 전일에, 3 x 10 5 

A549 세포를 DMEM (제조원: 

Hyclone, Logan, UT/10% 태아 소 혈청(FBS)(제조원: Hyclone) 중 6-웰 플레이트(제조원: BD Biosciences, 캘 

리포니아주 산 조세 소재)의 각각의 웰내로 플레이팅하고 플레이트를 5% CO2의 습윤화된 대기 중 37℃에서 항 

온처리하였다. 다음날에, 세포는 50 내지 90% 합치성이었으며 웰당 2 ㎍의 선형화된 Ad4H5HA DNA로 Fugene 

HD 형질감염 시약을 사용하여 8μL/웰로 제조업자의 지시(제조원: Roche, 인디아나주 인디아나폴리스 소재)에 

따라 후속적으로 형질감염시켰다. 세포변성 효과(CPE)가 일반적으로 형질감염 후 7 내지 10일째에 관측되면, 

바이러스를 6개의 웰 중 적어도 3개로부터, 감염된 세포를 16cm 세포 스크레이퍼(scrapers)(제조원: VWR, 펜 

실바니아주 웨스트 체스터 소재)로 제거(dislodging)한 후, 3 주기의 동결-해동 세포 파열(액체 질소 및 37℃ 

수 욕)에 의해 수거하였다. 분해물을 4℃에서 1,800g에서 10분 동안 원심분리하여 투명하게 하고 대략 6mL의 

상층액을 2단계 바이러스 확장 과정을 위해 수집하였다. 3mL의 상층액을 사용하여 15 mL 최종 용적의 

DMEM/10% FCS이 들어있는 75cm 2 

플라스크(제조원: BD Biosciences) 속 현탁액 중 1.5 x 10 6 

A549 세포를 형질 

감염시켰다. CPE의 관측 후 3 내지 7일째에, 세포를 16cm 세포 스크레이퍼를 사용하여 제거하고 동결-해동 

및 투명화 과정에 적용시켜 바이러스 상층액을 수득하였다. 

Ad4H5HA 재조합체 바이러스로부터의 HA 발현을 평가하기 위하여, HA 단백질 발현을 시험관내에서 유동 세포분 

석법으로 평가하였다. A549 세포를 투여량 적정의 Ad4H5HA 바이러스 입자(vp)로 감염시키고 주요 H5-특이적 

인 및 제2 PE 표지된 항체를 사용하여 48시간 후 분석하였다. 도 16a에 나타낸 바와 같이, Ad4H5HA 백신으로 

감염시킨 A549 세포는 HA 단백질을 투여량-의존적 방식으로 발현하였다. 사용된 최대 백신 투여량에 상응하 

는 검출된 HA 단백질의 평균 형광성 강도(MFI)는 대략 2.0의 MFI가 검출되는 경우 음성 대조군으로 사용된 

Ad4wt-감염된 세포와 비교하여 대략 34.0 DLDJtEK이었다. 

시험관내 HA 단백질의 Ad4H5HA 재조합체 바이러스 유도를 확인하고 A549 세포내에서 15회 일련 계대배양 후 

안정한 발현을 보증하기 위하여, 웨스턴 블롯 분석을 사용하였다. Ad4H5HA 재조합체 바이러스-감염된 A549 

세포를 수거하고 전체 세포 추출물을 제조하였다. 변화하는 양의 감염된 세포 추출물을 SDS-PAGE 겔로 분리 

하고 니트로셀룰로즈로 이전하였다. H5HA-특이적인 항혈청을 사용하여 HA 단백질을 검출한 한편, 항-β-액틴 

항체를 단백질 로딩 대조군으로서 사용하였다. 도 16b에 나타낸 바와 같이, Ad4H5HA 재조합체 바이러스-감염 

된 세포 분해물로부터 기원한 HA 단백질(2.5 및 5%)이 정제된 재조합체(r)H5 단백질 양성 대조군(100 및 

200ng)에 대해 적절한 크기, 80 kDa에서 검출되었다. HA-특이적인 단백질은 감염되지 않은 A549 세포(2.5 및 

5%), 음성 대조군으로부터의 단백질을 사용하여 검출되지 않았다. 절단된 HA0에 상응하는 HA1 및 HA2 단편의 

약간의 밴드가 또한 Ad4H5HA-감염된 A549 세포 분해물에서 관측되었다. 웨스턴 분석은 또한, Ad4H5HA 재조합 

체 바이러스가 심지어 A549 세포내에서 15회 계대배양 후에도 H5HA를 안정하게 발현하였음을 확인하였다. 이 

러한 결과와 일치하게, PVXV0103로 감염된 A549 세포는 적혈구 세포와 응집하는 것으로 나타났다(참조: 도 

17). 

백신으로서 Ad4H5HA 재조합 아데노바이러스의 효능 

재조합체 바이러스의 안정성을 지적하기 위해, Ad4wt 바이러스에 대한 Ad4H5HA 바이러스의 성장을 몇가지 인 

간 세포주; A549, H1299, HepG2, HuTu 80 및 MRC-5에서 비교하였다. 비록 Ad5 바이러스가 광범위한 검정 방 

법으로 평가될 수 있지만, Ad4는 유사한 방식으로 거동하지 않으며 시험관내에서 세포를 용이하게 분해하지 

않는다. 따라서, 전통적인 1-단계 성장 검정을 사용하여 성장 역학을 평가하였다(참조: 도 8a). Ad4H5HA 바 

이러스의 성장은 Ad4wt 바이러스와 비교하여 유사하거나 약화되어 있다(참조: 도 18). 상세하게는, 감염 후 

48 및 72시간 시점을 평가하는 경우, 세포 분해 후 측정된 감염성 입자는 시험한 5개 세포주 중 4개에서 

Ad4wt 바이러스 대 Ad4H5HA 바이러스에 대해 1.1 내지 2.3-배 더 높았다(참조: 도 18). 15번째 세포주, 

H1299의 경우, Ad4H5HA에 대해 상대적인 Ad4wt에 대해 측정된 감염성 입자는 각각 48 및 72시간 시점에 대해 

7 내지 6.5 배 더 높았다. Ad4wt 바이러스보다 더 높은 Ad4H5HA 벡터의 성장의 경우는 없었다. 

면역원성 및 효능 평가 공정의 초기 상은 Ad4wt 바이러스에 대한 기존의 면역성을 확립하여 백신 효능에 대한 

효과를 평가하는 것이었다. 따라서, 마우스를 1 x 10 9 


vp의 Ad4wt 바이러스를 사용하여 비강내(i.n.) 면역화 

시키고 1개월 후 Ad4-특이적인 중화 항체 역가 및 세포 면역성을 측정하였다. 10마리의 면역화된 마우스로부 

터의 면역 혈청을 수집하며 측정된 Ad4-특이적인 중화 항체 역가는 각각 866 및 569의 산술 평균 및 기하 평 

균을 갖는 133 내지 3140의 범위이었다(참조: 도 19a). 유의적인 Ad4-특이적인 세포 면역성이 또한 유도되었 

다. 2마리의 마우스로부터의 정제되지 않은 비장 세포를 혼주시키고 ELISPOT 검정에서 사용하였다. 열-불활 

- 52 -



[0200] 

[0201] 

성화된 Ad4wt 바이러스와 항온처리시, 1 x 10 6 

개의 비장 세포당 140 IFN-γ 스폿(spot) 형성 세포(SFC)가 

Ad4wt 면역화된 마우스 대 면역화되지 않은 마우스로부터의 비장 세포를 사용한 18 IFN-γ SFC로부터 검출되 

었다(도 19b). 이들 마우스 및, 기존의 Ad4wt 면역성이 없는 나이브(naive) 마우스를 Ad4H5HA 백신 면역화에 

후속적으로 사용하였다. 

유의적인 헤마글루티닌화 억제(HAI) 항체 역가를 Ad4H5HA 백신의 단일 면역화 후 6주째에 측정하였다. 도 

20a에 나타낸 바와 같이, 투여량 반응이 관측되었다; 10 9 

백신의 최저 투여량, 10 6 

에 의해, 20의 HAI 항체 역가가 10 9 

vp (40 HAI), 10 8 

vp (20 HAI), 및 10 7 

vp (10 HAI). 

vp는 면역원성이 아니었다. 백신 효능에 있어 Ad4wt 기존 면역성의 효과가 존재함 

vp 투여량으로 측정되었으나 보다 적은 투여량은 면역원성이 아니었다. 

H5N1 리어설턴트 바이러스 챌린지 후, HA1 반응은 통상적으로 1회 희석에 의해 더 높았는데, 예를 들면, 10 9 

vp 백신 투여량에서 40 내지 80 및 20 내지 40이었다. 다시, 백신의 최저 투여량, 10 6 

었다. 비교인자 음성 및 양성 대조군의 경우, 마우스를 1 x 10 10 

vp는 면역원성이 아니 

vp의 Ad4wt 바이러스 및 15 mg의 재조합체 

H5HA 단백질 각각으로 면역화시켰다. 예측한 바와 같이, Ad4wt 바이러스는 검출가능한 HAI 항체 역가 반응을 

유도하지 않았다. 재조합체 단백질은 각각 10 및 20 HAI 항체 역가의 인플루엔자 챌린지 전 및 후 HAI 항체 

역가 반응을 유도하였다. 

H5HA-특이적인 세포 면역성의 백신 유도는 A/Vietnam/1194/2004 HA 단백질, 도 20b로부터 기원한 4개의 15-머 

펩타이드의 혼주물에 대해 특이적인 것으로 평가되었다. 혼주물내 펩타이드는: HA.156, seq KSSFFRNVVWLIKKN 

(서열 번호 2); HA.241 seq RMEFFWTILKPNDAI (서열 번호 5); HA.325 seq NRLVLATGLRNSPQR (서열 번호 8); 및 

HA.529 seq IYQILSIYSTVASSLALAI (서열 번호 338)로 이루어졌다. IFN-γ 반응은, 마우스를 10 7 

, 10 8 

및 10 9 

vp의 투여량의 Ad4H5HA 백신으로 면역화하는 경우 80 SFC보다 큰 것으로 측정되었다. 기존의 Ad4wt 면역성은 

또한 단지 10 9 

vp 투여량의 Ad4H5HA 백신이 대략 100 IFN-γ SFC를 유도하는 면역원성이었다는 점에서 세포 

면역성의 백신 유도에 영향을 미쳤다. 세포 반응은 H5N1 리어설턴트 바이러스 챌린지 후 5일째에 증강되었 

다. 기존의 Ad4wt 면역성의 존재 또는 부재하에서, 10 7 

, 10 8 

600 IFN-γ SFC를 유도하였다. 기존의 Ad4wt 면역성 및 10 7 

및 10 9 

및 10 8 

vp 투여량의 Ad4H5HA 백신은 300 내지 

vp의 백신 투여량의 경우에, 50 SFC 미만 

의 최소 IFN-γ 반응이 500 SFC 보다 크게 부스팅되었으며, 이는 심지어 더 적은 백신 투여량도 세포 반응을 

개시하였음을 제안한다는 점을 주목해야 한다. 모든 경우에, 10 6 

vp 투여량은 면역원성이 아니었다는 점을 

주목해야 한다. 비교인자 대조군으로서, 15㎍의 재조합체 H5HA 단백질로 면역화된 마우스는 H5N1 리어설턴트 

바이러스 챌린지 전 및 후에 80 및 680 IFN-γ SFC를 유도하였다. 바이러스 챌린지 후 5일째에 유의적인 HA- 

특이적인 세포 반응은 Ad4wt 바이러스만으로 면역화한 후 H5N1 리어설턴트 바이러스로 후속적으로 챌린지한 

마우스에서 검출되지 않았다. 

체중 감소, 생존 및 폐 인플루엔자 바이러스 역가의 감소는 치사 H5N1 리어설턴트 바이러스 챌린지 후 백신 

투여량 의존적이었다. 동물의 체중은 H5N1 리어설턴트 챌린지후 14일 동안 측정하였다(참조: 도 21a). 동물 

이 열(row)에서 2일 동안 이의 원래 체중의 20% 이상을 상실한 것으로 기록된 경우, 이들을 안락사시켰다. 

전형적으로, 동물을 챌린지 후 6 내지 12일째에 안락사하는 것이 필수적이었다. Ad4wt 바이러스를 전-처리하 

지 않은 동물에서 10 7 

, 10 8 

경우에, 단지 10 9 

을 Ad4wt, 10 8 

및 10 9 

vp 백신 투여량에서 체중 감소는 거의 관찰되지 않았다. Ad4wt 예비처리의 

vp의 높은 백신 투여량은 특정의 체중 감소를 예방하였다. 보다 심각한 체중 감소는, 동물 

vp 백신 투여량(6% 중량 감소의 최대 평균) 및 10 7 

균)으로 예비-처리한 경우 더 낮은 백신 투여량에서 기록되었다. 10 6 

vp 백신 투여량(17% 체중 감소의 최대 평 

vp의 백신 투여량을 제공받은 동물은 

심각한 체중 감소를 방지하지 않았다. 재조합체 H5HA 단백질로 면역화시킨 마우스는 체중 감소가 없는 반면, 

Ad4wt 면역화된 마우스는 질병에 굴복하였다. 

치사 H5N1 리어설턴트 바이러스 챌린지 후 마우스의 생존률은 도 21b에 나타낸다. 10 8 

및 10 9 

vp의 백신을 제 

공받은 마우스의 그룹은 완전히 보호되었고, 10마리의 마우스 중 10마리가 생존하였다. 벡터에 대해 기존 면 

역성을 확립하기 위한 Ad4wt를 사용한 마우스의 전-처리는 당해 투여량에서 동물 생존에 영향을 미치지 않았 

다. 그러나, 10 7 

및 10 6 


vp의 낮은 백신 투여량에서, 백신은 효과적이지 않았다. Ad4wt 바이러스에 대한 기 

- 53 -

[0202] 

[0203] 

[0204] 

[0205] 

[0206] 

[0207] 

[0208] 

[0209] 

[0210] 

[0211] 

존 면역성은, 10마리의 마우스 중 단지 3마리만이, 마우스를 Ad4wt 바이러스로 전처리하지 않은 경우 생존한 

10마리의 동물 중 10마리에 대해 Ad4wt-특이적인 면역성의 존재하에서 생존하였다는 점에서 10 7 

량에 영향을 미쳤다. 10 6 

vp 백신 투여 

vp의 최저 백신 투여량은 보호성이 아니었다. Ad4wt 바이러스를 사용한 면역화는 

동물을 보호하지 않았으며, 10마리중 0마리가 생존하였다. 재조합체 H5HA 단백질을 사용한 마우스의 면역화 

는 마우스를 완전히 보호하였으며, 10마리중 10마리가 생존하였다. 

마지막으로, 효능의 척도로서, 각각의 그룹을 대표하는 2마리의 마우스로부터의 폐를 H5N1 리어설턴트 바이러 

스 챌린지 후 5일째에 수득하여 인플루엔자 바이러스 역가를 평가하였다(도 21c). 인플루엔자 바이러스 역가 

의 85% 이상의 감소가 10 7 

, 10 8 

및 10 9 

vp의 높은 Ad4H5HA 백신 투여량에서 관측되었다. 10 7 

vp의 백신 투여 

량에서 예외가 있으며, 여기서, Ad4wt로 예비-처리한 동물 그룹은 대략 40%의 인플루엔자 바이러스 역가의 감 

소를 초래하였으므로, 백신 효능에 있어서 기존 Ad4wt 면역성의 효과를 나타낸다. 인플루엔자 바이러스 역가 

의 감소는, 10 6 

vp 또는 Ad4wt 10 10 

vp 음성 대조군의 백신 투여량을 사용한 면역화의 경우 관측되었다. 재조 

합체 H5HA 단백질로 면역화시킨 마우스는 또한 폐내에서 챌린지 바이러스의 85% 초과의 감소를 나타내었다. 

요약하면, H5HA-특이적인 체액 및 세포 면역성의 Ad4H5HA 백신 유도는 일반적으로 백신의 효능을 예측하였다. 

Ad4wt 벡터에 대한 기존의 면역성은 면역원성 및 효능 둘다에 효과를 가지지 않았으나 당해 효과는 보다 적은 

백신 투여량에서 더 현저했으며, 이는, Ad 벡터에 대한 기존의 면역성이 보다 높은 백신 투여량을 사용함으로 

써 극복될 수 있음을 제안한다. 

실시예 9: 다중 경로로 전달된 경우 포유동물에서 H5 HA 삽입유전자에 대한 면역 반응을 유도하는 Ad4-H5- 

Vtn(PXVX0103) 

각종 투여 경로로 전달된 경우 면역 반응을 유도하는데 있어서 재조합체 Ad4-H5 아데노바이러스의 효능을 평 

가하기 위해, 토끼를 4회의 상이한 투여 경로 중 하나에 의해 Ad4-H5-Vtn(PXVX0103) 바이러스 입자를 포함하 

는 상이한 제형으로 면역화시켰다. Ad4-H5-Vtn 바이러스 백신을 MRC-5 세포내에서 증폭시키고 동물 연구에서 

사용하기 위해, 음이온 교환 크로마토그래피 및 한외 여과로 정제하였다. 다량의 약물 물질(BDS) 및 장 피복 

된 캅셀제를 PaxVax에서, Niro(덴마크 코펜하겐 소재)에서 분무 건조된 분말 생산을 위해 사용된 추가의 BDS 

와 함께 생산하였다. 각종 제형의 성분들은 하기 기술한다: 

액체형의 BDS: 5x10 10 

분무 건조된 분말: 5x10 10 

Ad4-H5-Vtn 바이러스 입자, 슈크로즈, 염화마그네슘 육수화물, 인산칼륨, 글리세린 

마그네슘 육수화물, 인산칼륨, 글리세린, 트윈 80 

장 피복된, 분무 건조된 분말: 5x10 10 

Ad4-H5-Vtn 바이러스 입자, 말토덱스트린, 베타 사이클로덱스트린, 슈크로즈, 염화 

Ad4-H5-Vtn 바이러스 입자, 유드라짓(Eudragit) L30D55, 말토덱스트린, 

베타 사이클로덱스트린, 슈크로즈, 염화마그네슘 육수화물, 인산칼륨, 글리세린, 트윈 80 

장 피복된 캅셀제: 1x10 10 

Ad4-H5-Vtn 바이러스 입자(캅셀제당), 아크릴EZE 화이트, HPMC 캅셀제, 말토덱스트 

린, 베타 사이클로덱스트린, 슈크로즈, 염화마그네슘 육수화물, 인산칼륨, 글리세린, 트윈 80 

성체 뉴질랜드 백색 수컷 토끼를 5x10 10 

vp를 사용하여 위에서 기술된 상이한 Ad4-H5-Vtn 백신 제형 중 하나; 

다량 약물 물질(BDS), 장 피복된(E.C.) 및 비-장 피복된(비-E.C.) 분말 및 장 피복된 캅셀제(1x10 10 

vp/캅셀제 

의 5개 캅셀제)를 사용하여 면역화(그룹당 3마리)시켰다. 동물을 30일 간격으로 2회 면역화하였다. 다중 투 

여 경로를 나타낸 바와 같이 사용하였다; 근육내(I.M.), 비강내(I.N.), 설하(S.L.) 또는 위관영양법(O.G.). 

토끼를 ELISA 면역 검정을 위해 제2 면역화 후 2주째에 방혈시켰다. I.N. 전달된 BDS에 대해 나타낸 데이타 

는 단지 1회의 면역화 후 2주째에 취한 면역 혈청으로부터 기원한 것이 예외이다. 


ELISA 플레이트를 2㎍/mL의 정제된 rHA 단백질(eEnzyme)로 피복하고 밤새 4℃에서 항온처리한 후 세척하고 

PBS와 10% 염소 혈청으로 2시간 동안 차단하였다. 3-배 연속적인 희석 계열을 각각의 혼주된 혈청으로부터 

생성시키고 2시간 항온처리하기 전에 플레이트에 가하였다. 완전히 세척한 후, 항원-특이적인 혈청 항체를 

HRP-커플링된 제2의 항체를 사용하여 검출하였다. 플레이트를 HRP 기질 시약으로 현상시키고, 산으로 중지시 

키고, 흡광도를 450 nm에서 측정하였다. 종점 역가는 평균 배경을 초과하는 3개의 판독 표준 편차를 제공하 

는 최대 희석의 역수로 나타낸다. 결과는, Ad4-H5-Vtn 백신이 다양한 경로로 전달되는 경우 토끼에서 면역원 

- 54 -


[0213] 

[0214] 

[0215] 

[0216] 

성이었음을 나타낸다(참조: 도 22). 

다른 일련의 실험에서, 설하, 질내, 및 직장 투여 경로로 전달된 경우 면역 반응을 유도하는데 있어서 재조합 

체 Ad4-H5 아데노바이러스의 효능을 시험하였다. 마우스를 설하, 질내 또는 직장 투여에 의해 Ad4-H5- 

Vtn(PXVX0103) 바이러스 입자로 면역화시켰다. 설하 투여를 위해, 마취시킨 마우스를 0일째(개시)에 면역화 

하고 43일째에(부스트) 혀 밑에 놓은 7μL의 다량의 약물 물질(BDS) 제형 완충제 및 전형적으로 1분 회수 시 

간 정치하도록 하는 용적 중 1x10 10 

Ad4-H5-Vtn 바이러스 입자로 부스팅하였다. 질내 투여를 위해, 면역화전 

5일째에, 2.5mg의 데포-프로베라(Depo-Provera)를 얇은 질벽에 피하 투여하였다. 마취된 마우스를 질내로 0 

일째(개시)에 면역화하고 14일째(부스트)에 우선 Q-팁(Q-tip)을 사용하여 점액을 우선 정화한 후 20μL 용적 

의 BDS 제형 완충제 중 1x10 10 

vp의 Ad4-H5-Vtn을 질에 투여함으로써 부스팅하였다. 마우스를 마취하에 10분 

동안 위쪽을 향하도록 유지시켰다. 직장 투여를 위해, 마취된 마우스를 0일째(개시)에 직장으로 면역화시키 

고 14일(부스트)째에 20μL의 BDS 제형 완충액 중 1x10 10 

vp의 Ad4-H5-Vtn을 직장내로 투여함으로써 부스팅하 

였다. 마우스를 마취하에 10분 동안 위쪽을 향하도록 유지시켰다. 모든 마우스를 이소플루란을 사용하여 마 

취시키고 면역화하기 전날 밤에 사료를 제거하여 절식시켰다. 

마우스를 제2 면역화(예를 들면, 부스트 면역화) 후 2 내지 4주째에 방혈시키고 ELISA를 위에서 기술한 바와 

같이 재조합체 H5(A/VN/1203/04)를 사용하여 수행하였다. 결과는, Ad4-H5-Vtn 인플루엔자 백신(PXVX0103)이 

설하, 질내 및 직장 투여 경로로 전달된 경우 마우스에서 유의적인 H5HA-특이적인 항체 반응을 

유도한다(참조: 도 23). 

실시예 10: Ad4-H5-Vtn 백신에 대한 제1상 임상 안정성 연구 

제1상 이중 맹검, 위약-조절된, 점증하는 투여량 연구(ascending dose study)를 개시하였다. 4회의 용량 집 

단, 10 7 

, 10 8 

, 10 9 

, 및 10 10 

바이러스 입자(vp)가 후속적으로 기록되었다. 각각의 집단은 대략 24개 백신과 8 

개의 위약 수용체, 및 모든 이들의 우리 접촉(HHC)으로 이루어진다. 각각의 용량 집단에서, 백신 투여자 또 

는 위약 수용자에게 3회의 백신화를 56일 간격(0일, 56일 및 112일째)으로 제공한다. 면역 기능의 측정은 

HAI 및 미세중화에 의한 H5 HA에 대한 항체; Ad4 중화 항체; 비강, 직장 및 경부 분비물 중 HA 및 Ad4에 대한 

IgG 및 IgA의 평가; 및 HA 및 Ad4에 대한 CMI 반응을 포함한다. Ad4-H5-Vtn 백신 바이러스의 복제 및 분비는 

PCR 및 직장과 인후 면봉 및 혈액으로부터의 배양물로 평가한다. 면역학적 및 바이러스학적 매개변수는 기준 

선 Ad4 중화 항체 역가에 의해 단계적으로 분석한다. 현재, 132개의 백신/위약 수용체 및 67개의 HHC가 포함 

되었다. 집단 1 내지 3에게 모든 3개의 투여량을 제공하고, 집단 4에는 이의 처음 투여량을 제공하였다. 현 

재, 집단 4에는 투여량 2를 제공하고 집단 5(10 11 

vp)는 등록중이다. 

주요 안정성 매개변수는 반응유전성(reactogenicity), 심각하거나 중증의 부작용, 및 임상 안정성 실험 비정 

상이다. 이들은 각각의 5개 DMC 관찰 전에 형식적으로 평가되었고, 진행 기준으로 "실시간" 평가한다. 많아 

도 최근의 DMC 고찰에서, 집단 1, 2 및 3으로부터 모든 3회의 투여량 투여에 이어, 집단 4로부터 최초 투여량 

후 안정성 데이타를 고찰하였다. 안전성 문제 또는 투여량 제한 독성은 확인되지 않았다. 중요한 실험실적 

비정상 또는 심각하거나 중증인 부작용 경우는 발생하지 않았다. 반응유전성은 일반적으로 약 내지 중간으로 

남았다. PCR에 의해 모니터링된, 백신 바이러스의 발산(shedding)은 백신화 후 7일 및/또는 14일째에 직장 

면봉에서 검출되었다. 백신 바이러스의 전신계적 또는 호흡성 확산의 증거는 존재하지 않는다. 백신 수여자 

로부터 PCR 양성 인후 면봉의 단일 예를 제외하고는(이의 직장 면봉 및 혈액은 PCR에 의해 음성이었다), 모든 

인후 면봉 및 혈액 표본은 Ad4-H5-Vtn 바이러스에 대해 음성이었다. 이들 백신은 전체적으로 무증상성으로 

남아있다. 이들 데이타를 기준으로, DMC는 집단 4에게 투여량 2의 투여 및 집단 5의 등록을 승인하였다. 연 

구 동안 상이한 시점에서 집단들 각각에 대한 기준선 Ad4 항체는 표 17에 나타낸다. 

- 55 - 


[0217] 

[0218] 


[0220] 

[0221] 

[0222] 

[0223] 

[0224] 

[표 17] 

실시예 11: 탄저병 항원을 발현하는 재조합 아데노바이러스의 작제 및 평가 

바실러스 안트라키스로부터의 보호성 항원(PA)을 발현하는 E3 영역의 완전한 또는 부분 결실을 갖는 재조합체 

Ad4 바이러스를 실시에 1 내지 3에 기술한 방법과 유사한 방법으로 생성시켰다. PA 삽입유전자의 변형은 인 

간 세포내에서 최적화된 발현에 대한 코돈 변형, 세포 표면 발현을 위한 글리코실포스파티딜이노시톨(GPI) 앵 

커의 첨가, 및 테르모라이신 분해 부위를 제거하기 위한 2개의 페닐알라닌 결실을 포함하였다. 삽입유전자 

발현은 인간 CMV 또는 천연의 MLTU 프로모터에 의해 구동되었다. 이종 서열의 MTLU-구동되거나 CMV-구동된 

발현을 특징으로 하는 상이한 재조합 아데노바이러스 벡터는 표 18에 나열한다. 

[표 18] 

2.5x10 7 

재조합체 Ad4-PA 아데노바이러스로 감염시킨 A549 세포(5x10 5 

)를 보호성 항원의 발현에 대해 분석하였 

다. 세포를 37℃에서 48시간 동안 항온처리한 후 수거하였다. 각각의 시료로부터 전체 세포 분해물(도 24, 

좌측 패널) 또는 세포 배양 상층액(도 24, 우측 패널)을 웨스턴 블롯에 이어 SDS-PAGE 겔 상에서 분리함으로 

써 분석하였다. 니트로셀룰로즈 막을 항-PA 마우스 모노클로날 항체로 프로브화하였다. 재조합체 단백질 발 

현의 확인은 양성 대조군과 평행하게 로딩된 시판되는 재조합체 PA를 참조하여 수행하였다. Ad4 WT로 감염된 

A549 및 A549는 음성 대조군을 나타내며, 이는, rPA에 대한 특이성을 입증한다. 단백질 수준은 총 단백질 수 

준으로 나눈 상대량으로 나타낸다(참조: 도 24). 


이들 작제물로 감염시킨지 1일 후에, PA 항원은 도 25에 나타낸 FACS 분석에 의해 나타난 바와 같이 A549 세 

포의 표면에 존재하였다. 세포당 발현 수준의 지표인 형광성 강도의 척도를 나타내는, 평균 형광성 강도 

(MFI)는 그룹 각각에 대해 나타낸다. 1-단계 성장 검정을 사용하여 A549(폐 암종) 및 MRC-5(배아 폐 섬유모 

세포, 이배체) 세포에서 PXVX0212 및 PXVX0214 재조합 아데노바이러스의 성장 동력학을 평가하였다(참조: 도 

8a). rAd4 수준의 시간 경과는 A549 또는 MRC-5 세포의 rAd4-PA 바이러스 감염 후 TCID50로 측정하였다. 세 

포 파열 크기는 참조로서 최소 감염성 수준(A549의 경우 1시간 및 MRC-5의 경우 24시간)을 사용하고 감염에 

있어서의 차이에 대해 교정함으로써 계산하였다. 파열 크기는, PXVX0212 및 PXVX0214 둘다가 Ad4 Wt와 비교 

- 56 -

[0225] 

[0226] 

[0227] 

[0228] 

[0229] 

[0230] 

[0231] 

하여 감소된 성장률을 나타내고 또한 세포당 보다 낮은 수율을 생성하는지를 확인한다(참조; 도 26). 

실시예 12: 탄저병 챌린지에 대한 보호성 백신으로서 Ad4-PA 재조합 아데노바이러스의 효능 

B. 안트라시스로부터의 보호성 항원(PA)을 발현하는 재조합 아데노바이러스가 탄저병 챌린지에 대해 보호성 

면역 반응을 유도할 수 있는지를 측정하기 위하여, 마우스를 실시예 11에 기술된 재조합 아데노바이러스 벡터 

들 중 하나로 감염된 세포로부터의 전체 세포 분해물로 면역화시켰다. 상세하게는, 마우스(6마리/그룹)를 

Ad4 야생형(Ad4 WT), Ad4-PA(PXVX0212), 또는 Ad4-PA-GPI(PXVX0214)의 5 x 10 8 

10 6 

바이러스 입자로 감염된 5 x 

A549 세포와 동등한 전체 세포 분해물의 복강내 주사(IP)로 면역화시켰다. 양성 대조군으로서, 10㎍ 재 

조합체 보호 항원(rPA)을 피하(S.C.) 투여하였다. 면역화한지 5주 후, 마우스를 치사 독소(120㎍ PA와 60㎍ 

치사 인자(LF)의 조합물)로 정맥내 챌린지하고 매일 모니터링하였다. 실험의 결과는 도 27에 나타낸다. 

Ad4-PA-GPI 세포 분해물은 치사 독소 챌린지에 대해 마우스를 완전히 보호하였다. 

항체 반응을 IP 면역화 후 21일째에 수득한 혈청으로부터 면역화된 마우스에서 측정하였다. 항체 반응을 

ELISA(도 28, 좌측 패널) 및 시험관내 대식구계 독소 중화 검정(도 28, 우측 패널) 둘다로 분석하였다. EC50 

은 6마리 동물/그룹으로부터 계산하였다. PA-특이적인 IgG 반응은 재조합 아데노바이러스로 감염된 A549 세 

포로부터의 전체 세포 분해물을 사용한 면역화 후 3주째에 검출가능하였다. 

다른 일련의 실험에서, 보호성 면역 반응을 유도하는데 있어서 정제된 재조합 아데노바이러스의 효능을 시험 

하였다. 마우스(n=25/그룹)을 도 29에서의 개략도에 나타낸 바와 같이 0일째에 5개의 상이한 항원(Ad4 야생 

형, Ad4-CMV-PA (PXVX0212), Ad4-CMV-PA-GPI (PXVX0214), rPA, 및 rPA + 명반) 중 하나로 면역화시켰다. 

rAd4 바이러스를 동물당 50 내지 62.5 μL PBS 중 1 x 10 10 

바이러스 입자(vp)로서 비강내(I.N.) 투여하였다. 

100μL의 PBS의 최종 용적중 피하주사된 양성 대조군은 10㎍의 재조합체 보호성 항원(rPA) 단독 또는 1mg의 

수산화알루미늄 겔(Rehydragel HPA)에 흡착된 10㎍의 rPA를 함유하였다. 세포 매개된 면역 반응(IFN-γ 

ELISPOT 및 IL-4 ELISPOT)를 2마리 마우스/그룹으로부터 혼주된 비장세포내 면역화 후 27일째에 측정하였다. 

독소 챌린지 #1(면역화 후 20일째, n=10/그룹)에 생존한 마우스를 54일째에 세포 면역 반응에 대해 분석하였 

다. 동일한 9마리 동물/그룹(5마리)를 ELISA 및 독소 중화 검정 둘다에 대해 면역화 후 14 및 40일 후에 방 

혈시켰다. 방혈된 9마리의 마우스로부터의 7마리의 마우스를 포함하는, 그룹당 총 10마리의 마우스는 또한 

면역화 후 46일 후에 치사 독소 챌린지(120㎍ PA 및 60㎍ 치사 인사의 배합물)하였다. 생존을 챌린지 후 30 

일 동안 모니터링하였다. 

항체 반응을 정제된 Ad4-PA 및 Ad4-PA-GPI 바이러스를 사용한 비강내 면역화 후 14 및 40일째에 혈청 속에서 

측정하였다(참조: 도 29). 항-PA IgG 반응을 ELISA로 분석한 한편(도 30, 좌측 패널), 독소 중화 항체(TNA) 

는 시험관내 쥐 대식구계 독소 중화 검정(도 30, 우측 패널)로 측정하였다. EC50은 시료의 일련 희석물로부터 

의 데이타에 대해 고정된 S자형 투여량-반응 곡선을 사용하여 계산하였다. 단지 최소의 항-PA IgG 반응 및 

검출가능하지 않은 TNA 반응이 면역화한지 14일 후에 관측되었다(도 30). 면역화 후 40일 후에, 유의적인 항 

-PA IgG 및 TNA 반응이 명반을 사용한 rPA 또는 rPA와 비교하여 Ad4-PA (PXVX0212) 및 Ad4-PA-GPI (PXVX0214) 

둘다를 사용하는 경우 관찰되었다(도 30). 재조합체 PA 아데노바이러스 (Ad4-PA 및 Ad4-PA-GPI 바이러스)는 

비교가능한 면역 반응을 유도하였다. 

마우스를 0일째에 도 29에 나타낸 바와 같이 5개의 상이한 면역원((n=10/그룹) 중 하나로 면역화시키고 면역 

화 후 20일 및 46일째에 치사 독소(100μL PBS의 총 용적 중 60㎍ PA 및 30㎍ LF)로 챌린지하였다. 생존을 

30일 동안 모니터링하였다. 결과는 도 31에 나타낸다. 면역화 후 20일째에 챌린지한 후, 80% 생존이 rPA-명 

반을 사용하여 면역화된 마우스에서 관측된 반면, Ad4-PA 및 Ad4-PA-GPI 면역화된 그룹은 각각 50% 및 20% 생 

존하였다(도 31, 좌측 패널). Ad4 야생형 면역화된 그룹 중 1마리 마우스가 생존하였고 rPA 면역화된 그룹에 

서는 전혀 생존하지 않았다. 면역화 후 챌린지 46일 후, 100% 생존이 rPA + 명반 및 Ad4-PA 면역화된 그룹에 

서 관측된 반면, 90% 및 30% 생존이 Ad4-PA-GPI 및 rPA 면역화된 그룹 각각에서 관측되었다(도 31, 우측 

패널). Ad4 야생형 처리된 그룹에서 생존은 관측되지 않았다. 당해 결과는, 치사 독소 챌린지에서, 2개의 

Ad4-PA 벡터 바이러스가 면역화 후 20일째에 부분적인 보호를 제공하며 면역화 후 46일째에 완전한 보호를 제 

공함을 나타낸다. Ad4-PA 또는 Ad4-PA-GPI 재조합 아데노바이러스에 의해 제공된 보호에 있어 통계적인 차이 

는 없었다. 


세포 매개된 면역 반응(IFN-γ ELISPOT 및 IL-4 ELISPOT)을 도 29에 나타낸 바와 같이 5개의 상이한 항원 중 

하나로 면역화된 마우스(2마리 마우스/그룹)로부터 혼주된 비장세포내에서 면역화 후 27일째에 측정하였다. 

- 57 -

[0232] 

[0233] 

[0234] 

[0235] 

[0236] 

독소 챌린지 #1에서 생존한 마우스(면역화 후 20일째, n=10/그룹)을 54일째(챌린지 후 34일째)에 세포 면역 

반응에 대해 검정하였다. 재조합체 Ad4-PA 및 Ad4-PA-GPI 아데노바이러스 둘다는 IFN-γ 및 IL-4 반응, 반응 

들에 의해 나타낸 PA에 대한 Th1 및 Th2 반응을 유도하였다(도 32). 

요약하면, 당해 실시예에 기술된 실험의 결과는, 보호성 항원을 발현하는 재조합 아데노바이러스가 마우스에 

서 체액성 및 세포-매개된 면역성 둘다를 유도하며 치사 탄저병 챌린지에 대해 보호를 제공함을 입증한다. 

실시예 13: 재조합 아데노바이러스로부터 다중 HTL 에피토프 폴리펩타이드의 발현 

각각 GPGPG 스페이서 서열(서열 번호 353)에 의해 분리된 24개 인플루엔자 헬퍼 T 림프구(HTL) 에피토프를 함 

유한 합성 인플루엔자 항원 서열을 설계하였다(참조: 도 33a). CMV 프로모터 (PXVX0109)의 조절하에서 당해 

HTL24 폴리펩타이드를 발현하는 E3 영역이 완전히 결실된 재조합체 Ad4 바이러스를 실시예 3에 기술된 방법과 

유사한 방법으로 생성시켰다. A549 세포를 형질감염 후 PXVX0109로 감염시켜서 2개의 동일한 플라스미드 클 

론(15-4 및 19-1)으로부터 바이러스를 생성시켰다. 감염된 세포를 >90% 세포변성 효과(CPE)에서 수거하고 세 

포 분해물을 프로테아제 억제제를 함유하는 100μL의 RIPA 완충제 당 1 x 10 6 

세포에서 제조하였다. 양성 대 

조군으로서, A549 세포를 A/Uruguay/716/2007 (A/Brisbane/10/2007-유사) 인플루엔자(NYMC X-175C 

리어설턴트, NIBSC)으로 감염시켰다. SDS-PAGE 겔에서 분리하고 후속적으로 블롯팅 막에 이전한 후, 단백질 

을 항-HA 태그 모노클로날 항체 및 HRP 염소-항 마우스 IgG 제2 항체로 검출하였다. 로딩 대조군의 경우, 평 

행한 막을 항-베타-액틴 토끼 폴리클로날 항체 및 HRP 염소 항-토끼 IgG 제2 항체로 프로빙하였다. 단백질 

밴드를 화학발광성(제조원: Supersignal West Femto, Thermoscientific)으로 가시화하였다. 도 33b에서 웨스 

턴 블롯 분석의 결과에 의해 나타난 바와 같이, 재조합체 Ad4 아데노바이러스는 고 수준의 HTL24 폴리펩타이 

드를 발현하였다. 

본원에 논의되고 인용된 모든 공보, 특허 및 특허원은, 이의 전문이 참조함으로써 본원에 통합된다. 기재된 

발명은, 이들이 변할 수 있는 것으로 기술된 특수 방법, 프로토콜 및 물질에 한정되지 않는 것으로 이해된다. 

또한, 본원에 사용된 용어는 단지 특수 구체예를 기술할 목적으로 주어지며 첨부된 특허청구범위만으로 한정 

될 본 발명의 영역을 한정하는 것으로 의도되지 않는다. 기재된 발명은, 이들이 변할 수 있는 기술된 특수 

방법, 프로토콜 및 물질로 한정되지 않는 것으로 이해된다. 또한, 본원에 사용된 용어는 특수 구체예만을 기 

술할 목적으로 주어지며 첨부된 특허청구의 범위만으로 한정될 본 발명의 영역을 한정하는 것으로 의도되지 

않는다. 

당해 분야의 숙련가들은 본원에 기술된 본 발명의 구체적인 구체예에 대한 통상의 실험, 많은 등가물을 사용 

하는 것을 인지하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물들은 다음 특허청구의 범위에 포함되는 것으로 

의도된다. 

- 58 - 


도면 

도면1 

- 59 - 


도면2 

- 60 - 


도면3 

- 61 - 


도면4 

- 62 - 


도면5 

- 63 - 


도면6 

도면7 

- 64 - 


도면8a 

- 65 - 


도면8b 

- 66 - 


도면9a 

- 67 - 


도면9b 

- 68 - 


도면10 

- 69 - 


도면11 

- 70 - 


도면12 

- 71 - 


도면13 

- 72 - 


도면14 

- 73 - 


도면15 

- 74 - 


도면16 

- 75 - 


도면17 

- 76 - 


도면18 

- 77 - 


도면19 

도면20 

- 78 - 


도면21 

- 79 - 


도면22 

- 80 - 


도면23 

- 81 - 


도면24 

- 82 - 


도면25 

- 83 - 


도면26 

- 84 - 


도면27 

- 85 - 


도면28 

- 86 - 


도면29 

- 87 - 


도면30 

- 88 - 


도면31 

- 89 - 


도면32 

- 90 - 


도면33a 

- 91 - 


도면33b 

서 열 목 록 

PaxVax, Inc. 

ADENOVIRAL-BASED VECTORS 

PAXV-004/01WO 

US 61/230,617 

2009-07-31 

353 

SEQUENCE LISTING 

- 92 - 


KopatentIn 1.71 

1 

17 

PRT 

Influenza Virus 

1 

Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser 

1 5 10 15 

Asp 

2 

15 

PRT 


2 

Lys Ser Ser Phe Phe Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn 

1 5 10 15 

3 

16 

PRT 


3 

Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Thr Tyr Pro Thr Ile Lys Arg 

1 5 10 15 

4 

16 

PRT 


4 

Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg Leu 

1 5 10 15 

5 

15 

PRT 


5 

Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile 

1 5 10 15 

6 

15 

PRT 


6 

Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn Phe Glu Ser Asn 

1 5 10 15 

7 

16 

PRT 


7 

Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu 

1 5 10 15 

8 

15 

PRT 


8 

Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser Pro Gln Arg 

1 5 10 15 

9 

17 

PRT 


9 

Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp 

1 5 10 15 

Ser 

10 

- 94 - 


17 

PRT 


10 

Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly Ile Tyr Gln Ile Leu Ser 

1 5 10 15 

Ile 

11 

16 

PRT 


11 

Ile Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 

1 5 10 15 

12 

16 

PRT 



Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ile 

1 5 10 15 

13 

15 

PRT 


13 

Lys Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu Thr Val Pro Ser Glu 

1 5 10 15 

14 

15 

PRT 


14 

- 95 - 


Tyr Arg Lys Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His Gly Ala Lys Glu 

1 5 10 15 

15 

15 

PRT 


15 

Met Gly Thr Val Thr Thr Glu Val Ala Leu Gly Leu Val Cys Ala 

1 5 10 15 

16 

15 

PRT 


16 

Asn Pro Leu Ile Arg His Glu Asn Arg Met Val Leu Ala Ser Thr 

1 5 10 15 

17 

15 

PRT 


17 

Ala Met Glu Val Ala Ser Gln Ala Arg Gln Met Val Gln Ala Met 

1 5 10 15 

18 

15 

PRT 


18 

Asp Pro Leu Val Val Ala Ala Ser Ile Ile Gly Ile Leu His Leu 

1 5 10 15 


17 

PRT 


- 96 - 



Ser Leu Met Leu Gln Ile Gly Asn Met Ile Ser Ile Trp Val Ser His 

1 5 10 15 

Ser 

20 


PRT 


20 

Ile Gly Arg Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Glu Leu Lys Leu Ser Asp 

1 5 10 15 

Tyr Glu Gly 

21 

15 

PRT 


21 

Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu Arg Met Val Leu Ser Ala Phe Asp 

1 5 10 15 

22 

15 

PRT 


22 

Val Gly Thr Met Val Met Glu Leu Ile Arg Met Ile Lys Arg Gly 

1 5 10 15 

23 

15 

PRT 


23 

Asp Leu Ile Phe Leu Ala Arg Ser Ala Leu Ile Leu Arg Gly Ser 

- 97 - 


1 5 10 15 

24 

15 

PRT 


24 

Arg Ser Ala Leu Ile Leu Arg Gly Ser Val Ala His Lys Ser Cys 

1 5 10 15 

25 

15 

PRT 


25 

Lys Ser Gln Leu Val Trp Met Ala Cys His Ser Ala Ala Phe Glu 

1 5 10 15 

26 

15 

PRT 


26 

Ala Gly Gln Ile Ser Val Gln Pro Thr Phe Ser Val Gln Arg Asn 

1 5 10 15 

27 

15 

PRT 


27 

Ser Leu Cys Ile Arg Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asp Ile 

1 5 10 15 

28 


PRT 


28 

Glu Gly Ala Ile Val Gly Glu Ile Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly 

- 98 - 


1 5 10 15 

His Thr Asp 

29 

15 

PRT 


29 

Val Gly Glu Ile Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Asp 

1 5 10 15 

30 

15 

PRT 


30 

Ser Leu Lys Leu Tyr Arg Asp Ser Leu Gly Glu Ala Val Met Arg 

1 5 10 15 

31 

15 

PRT 


31 

Ile Arg Trp Leu Ile Glu Glu Val Arg His Arg Leu Arg Ile Thr 

1 5 10 15 

32 

15 

PRT 


32 

Phe Glu Gln Ile Thr Phe Met Gln Ala Leu Gln Leu Leu Leu Glu 

1 5 10 15 

33 

15 

PRT 

- 99 - 



33 

Ile Thr Phe Met Gln Ala Leu Gln Leu Leu Leu Glu Val Glu Gln 

1 5 10 15 

34 

15 

PRT 


34 

Arg Arg Glu Val His Ile Tyr Tyr Leu Glu Lys Ala Asn Lys Ile 

1 5 10 15 

35 

15 

PRT 


35 

Leu Phe Thr Ile Arg Gln Glu Met Ala Ser Arg Gly Leu Trp Asp 

1 5 10 15 

36 

15 

PRT 


36 

Glu Pro Phe Leu Lys Thr Thr Pro Arg Pro Leu Arg Leu Pro Asp 

1 5 10 15 

37 

16 

PRT 


37 

Arg Ser Lys Phe Leu Leu Met Asp Ala Leu Lys Leu Ser Ile Glu Asp 

1 5 10 15 

38 

15 

- 100 - 


PRT 


38 

Val Ala Pro Ile Glu His Ile Ala Ser Met Arg Arg Asn Tyr Phe 

1 5 10 15 

39 

15 

PRT 


39 

Glu Tyr Ile Met Lys Gly Val Tyr Ile Asn Thr Ala Leu Leu Asn 

1 5 10 15 

40 

15 

PRT 


40 

Arg Pro Met Phe Leu Tyr Val Arg Thr Asn Gly Thr Ser Lys Ile 

1 5 10 15 

41 

16 

PRT 


41 

Pro Thr Leu Leu Phe Leu Lys Val Pro Ala Gln Asn Ala Ile Ser Thr 

1 5 10 15 

42 

15 

PRT 


42 

Ser Tyr Leu Ile Arg Ala Leu Thr Leu Asn Thr Met Thr Lys Asp 

1 5 10 15 

43 

- 101 - 


15 

PRT 


43 

Phe Leu Ala Met Ile Thr Tyr Ile Thr Arg Asn Gln Pro Glu Trp 

1 5 10 15 

44 

16 

PRT 


44 

Gln Pro Glu Trp Phe Arg Asn Val Leu Ser Ile Ala Pro Ile Met Phe 

1 5 10 15 

45 

16 

PRT 


45 

Phe Arg Asn Val Leu Ser Ile Ala Pro Ile Met Phe Ser Asn Lys Met 

1 5 10 15 

46 

15 

PRT 


46 

Ile Ala Pro Ile Met Phe Ser Asn Lys Met Ala Arg Leu Gly Lys 

1 5 10 15 

47 

16 

PRT 


47 

Lys Gly Tyr Met Phe Glu Ser Lys Ser Met Lys Leu Arg Thr Gln Ile 

1 5 10 15 

- 102 - 


48 

15 

PRT 


48 

Ile Arg Pro Leu Leu Val Glu Gly Thr Ala Ser Leu Ser Pro Gly 

1 5 10 15 

49 

15 

PRT 


49 

Met Met Gly Met Phe Asn Met Leu Ser Thr Val Leu Gly Val Ser 

1 5 10 15 

50 

15 

PRT 


50 

Asp Phe Ala Leu Ile Val Asn Ala Pro Asn His Glu Gly Ile Gln 

1 5 10 15 

51 

15 

PRT 


51 

Tyr Gly Phe Val Ala Asn Phe Ser Met Glu Leu Pro Ser Phe Gly 

1 5 10 15 

52 

16 

PRT 


52 

Gly Val Thr Val Ile Lys Asn Asn Met Ile Asn Asn Asp Leu Gly Pro 

1 5 10 15 

- 103 - 


53 

15 

PRT 


53 

Pro Asn Leu Tyr Asn Ile Arg Asn Leu His Ile Pro Glu Val Cys 

1 5 10 15 

54 

15 

PRT 


54 

Ile Ser Ser Met Val Glu Ala Met Val Ser Arg Ala Arg Ile Asp 

1 5 10 15 

55 

15 

PRT 


55 

Lys Trp Met Met Ala Met Lys Tyr Pro Ile Thr Ala Asp Lys Arg 

1 5 10 15 

56 

15 

PRT 


56 

Gly Ala Arg Ile Leu Thr Ser Glu Ser Gln Leu Thr Ile Thr Lys 

1 5 10 15 

57 

15 

PRT 


57 

Lys Ala Ala Met Gly Leu Arg Ile Ser Ser Ser Phe Ser Phe Gly 

- 104 - 


1 5 10 15 

58 

15 

PRT 


58 

Ile Lys Ala Val Arg Gly Asp Leu Asn Phe Val Asn Arg Ala Asn 

1 5 10 15 

59 

15 

PRT 


59 

Leu Arg His Phe Gln Lys Asp Ala Lys Val Leu Phe Gln Asn Trp 

1 5 10 15 

60 

15 

PRT 


60 

Gln Trp Ile Ile Arg Asn Trp Glu Thr Val Lys Ile Gln Trp Ser 

1 5 10 15 

61 

15 

PRT 


61 

Arg Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Val Asn Val Arg Gly Ser Gly 

1 5 10 15 

62 

9 

PRT 


62 

- 105 - 


Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr 

1 5 

63 

9 

PRT 


63 

Gly Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr 

1 5 

64 

10 

PRT 


64 

Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile 

1 5 10 

65 

9 

PRT 


65 

Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala 

1 5 

66 

10 

PRT 


66 

Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys 

1 5 10 

67 

9 

PRT 


- 106 - 


67 

Leu Pro Phe His Asn Val His Pro Leu 

1 5 

68 

9 

PRT 


68 

Asn Met Asp Arg Ala Val Lys Leu Tyr 

1 5 

69 

9 

PRT 


69 

Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Tyr Val 

1 5 

70 

9 

PRT 


70 

Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu 

1 5 

71 

10 

PRT 


71 

Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu Thr Val 

1 5 10 

72 

9 

PRT 


- 107 - 


72 

Arg Met Gly Thr Val Thr Thr Glu Val 

1 5 

73 

9 

PRT 


73 

Ala Leu Met Glu Trp Leu Lys Thr Arg 

1 5 

74 

10 

PRT 


74 

Ala Ser Cys Met Gly Leu Ile Tyr Asn Arg 

1 5 10 

75 

9 

PRT 


75 

Glu Trp Leu Lys Thr Arg Pro Ile Leu 

1 5 

76 

10 

PRT 


76 

Thr Glu Val Glu Thr Tyr Val Leu Ser Ile 

1 5 10 

77 

10 

PRT 


- 108 - 


77 

His Glu Asn Arg Met Val Leu Ala Ser Thr 

1 5 10 

78 

10 

PRT 


78 

Ser Glu Gln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val 

1 5 10 

79 

10 

PRT 


79 

Met Glu Val Ala Ser Gln Ala Arg Gln Met 

1 5 10 

80 

9 

PRT 


80 

Ser Ile Ile Gly Ile Leu His Leu Ile 

1 5 

81 

9 

PRT 


81 

Arg Leu Phe Phe Lys Cys Ile Tyr Arg 

1 5 

82 

10 

PRT 

- 109 - 



82 

Arg Leu Phe Phe Lys Cys Ile Tyr Arg Arg 

1 5 10 

83 

9 

PRT 


83 

Leu Phe Phe Lys Cys Ile Tyr Arg Arg 

1 5 

84 

9 

PRT 


84 

Leu Trp Ile Leu Asp Arg Leu Phe Phe 

1 5 

85 

9 

PRT 


85 

Ile Tyr Arg Arg Phe Lys Tyr Gly Leu 

1 5 

86 

9 

PRT 


86 

Gly Thr Val Lys Asp Arg Ser Pro Tyr 

1 5 

87 

9 

PRT 

- 110 - 



87 

Val Ser Phe Asp Gln Asn Leu Asp Tyr 

1 5 

88 

10 

PRT 


88 

Ile Val Ala Ile Thr Asp Trp Ser Gly Tyr 

1 5 10 

89 

9 

PRT 


89 

Lys Ser Cys Ile Asn Arg Cys Phe Tyr 

1 5 

90 

9 

PRT 


90 

Ala Leu Ser Thr Leu Cys Leu Leu Ile 

1 5 

91 

9 

PRT 


91 

His Leu Glu Cys Arg Thr Phe Phe Leu 

1 5 

92 

9 

- 111 - 


PRT 


92 

Cys Ile Asn Gly Ser Cys Phe Thr Val 

1 5 

93 

9 

PRT 


93 

Ile Thr Gly Phe Ala Pro Phe Ser Lys 

1 5 

94 

9 

PRT 


94 

Ile Thr Gly Trp Ala Ile Phe Ser Lys 

1 5 

95 

10 

PRT 


95 

Ala Ser Tyr Lys Ile Phe Lys Ile Glu Lys 

1 5 10 

96 

10 

PRT 


96 

Val Val Phe Cys Gly Thr Ser Gly Thr Tyr 

1 5 10 

97 

9 

- 112 - 


PRT 


97 

Val Phe Val Ile Arg Glu Pro Phe Ile 

1 5 

98 

9 

PRT 


98 

Phe Phe Leu Thr Gln Gly Ala Leu Leu 

1 5 

99 

10 

PRT 


99 

Trp Trp Thr Ser Asn Ser Ile Ile Val Phe 

1 5 10 

100 

10 

PRT 


100 

Ser Trp Pro Asp Gly Ala Asn Ile Pro Phe 

1 5 10 

101 

10 

PRT 


101 

Ser Trp Pro Asp Gly Ala Asn Ile Asn Phe 

1 5 10 

102 

- 113 - 


9 

PRT 


102 

Ala Pro Phe Ser Lys Asp Asn Ser Ile 

1 5 

103 

9 

PRT 


103 

Ala Pro Ser Pro Tyr Asn Ser Arg Phe 

1 5 

104 

10 

PRT 


104 

Ser Pro Tyr Asn Ser Arg Phe Glu Ser Val 

1 5 10 

 

105 

10 

PRT 


105 

Arg Pro Trp Val Ser Phe Asn Gln Asn Leu 

1 5 10 

106 

9 

PRT 


106 

Arg Pro Cys Phe Trp Val Glu Leu Ile 

1 5 

107 

- 114 - 


9 

PRT 


107 

Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Asp Tyr 

1 5 

108 

9 

PRT 


108 

Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Arg Tyr 

1 5 

109 

9 

PRT 


109 

Phe Glu Met Ile Trp Asp Pro Asn Gly 

1 5 

110 

9 

PRT 


110 

Ala Ser Gln Gly Thr Lys Arg Ser Tyr 

1 5 

111 

9 

PRT 


111 

Cys Thr Glu Leu Lys Leu Ser Asp Tyr 

1 5 

- 115 - 


112 

9 

PRT 



His Ser Asn Leu Asn Asp Ala Thr Tyr 

1 5 

113 

9 

PRT 


113 

Lys Ser Cys Leu Pro Ala Cys Val Tyr 

1 5 

114 

9 

PRT 


114 

Cys Leu Pro Ala Cys Val Tyr Gly Leu 

1 5 

115 

9 

PRT 


115 

Leu Gln Asn Ser Gln Val Phe Ser Leu 

1 5 

116 

9 

PRT 


116 

Phe Gln Gly Arg Gly Val Phe Glu Leu 

1 5 

- 116 - 


117 

9 

PRT 


117 

Ile Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu Arg 

1 5 

118 

9 

PRT 


118 

Met Val Leu Ser Ala Phe Asp Glu Arg 

1 5 


10 

PRT 



Ser Leu Met Gln Gly Ser Thr Leu Pro Arg 

1 5 10 

120 

9 

PRT 



Met Gln Gly Ser Thr Leu Pro Arg Arg 

1 5 


9 

PRT 



Gly Thr Met Val Met Glu Leu Ile Arg 

1 5 

- 117 - 



10 

PRT 



Met Val Met Glu Leu Ile Arg Met Ile Lys 

1 5 10 


10 

PRT 



Ala Val Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Glu Arg 

1 5 10 


10 

PRT 



Ser Val Gln Pro Thr Phe Ser Val Gln Arg 

1 5 10 


9 

PRT 



Val Gln Pro Thr Phe Ser Val Gln Arg 

1 5 


10 

PRT 



Ser Val Gln Arg Asn Leu Pro Phe Glu Arg 

- 118 - 


1 5 10 


9 

PRT 



Gly Val Phe Glu Leu Ser Asp Glu Lys 

1 5 


9 

PRT 



Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Glu Leu 

1 5 


9 

PRT 



His Met Met Ile Trp His Ser Asn Leu 

1 5 

130 

9 

PRT 


130 

Ile Phe Leu Ala Arg Ser Ala Leu Ile 

1 5 

131 

9 

PRT 


131 

Trp Met Ala Cys His Ser Ala Ala Phe 

- 119 - 


1 5 

132 

10 

PRT 


132 

Leu Pro Arg Arg Ser Gly Ala Ala Gly Ala 

1 5 10 

133 

10 

PRT 


133 

Leu Pro Ala Cys Val Tyr Gly Leu Ala Val 

1 5 10 

134 

9 

PRT 


134 

Leu Pro Phe Glu Arg Ala Thr Ile Met 

1 5 

135 

9 

PRT 


135 

Gly Glu Arg Gln Asn Ala Thr Glu Ile 

1 5 

136 

9 

PRT 


136 

- 120 - 


Arg Glu Ser Arg Asn Pro Gly Asn Ala 

1 5 

137 

9 

PRT 


137 

Phe Glu Asp Leu Arg Val Ser Ser Phe 

1 5 

138 

9 

PRT 


138 

Phe Glu Arg Ala Thr Ile Met Ala Ala 

1 5 

139 

10 

PRT 


139 

Phe Glu Arg Ala Thr Ile Met Ala Ala Phe 

1 5 10 

140 

10 

PRT 


140 

Thr Ile Ala Ser Val Pro Ala Pro Arg Tyr 

1 5 10 

141 

10 

PRT 


141 



Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp His Val 

1 5 10 

142 

9 

PRT 


142 

Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp His Val 

1 5 

143 

9 

PRT 


143 

Phe Leu Trp His Val Arg Lys Gln Val 

1 5 

144 

9 

PRT 


144 

Ile Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val 

1 5 

145 

9 

PRT 


145 

Lys Gln Ile Val Glu Arg Ile Leu Lys 

1 5 

146 

 

10 

PRT 




146 

Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile Ile Leu Lys 

1 5 10 

147 

10 

PRT 


147 

Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met 

1 5 10 

148 

9 

PRT 


148 

Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr Ile Ala 

1 5 

149 

10 

PRT 


149 

Leu Glu Glu Met Ser Arg Asp Trp Leu Met 

1 5 10 

150 

10 

PRT 


150 

Leu Glu Thr Leu Ile Leu Leu Arg Ala Phe 

1 5 10 

151 

9 

PRT 




151 

Gly Glu Ile Ser Pro Leu Pro Ser Leu 

1 5 

152 

9 

PRT 


152 

Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp 

1 5 

153 

10 

PRT 


153 

Ile Thr Gln Phe Glu Ser Leu Lys Leu Tyr 

1 5 10 

154 

9 

PRT 


154 

Phe Met Gln Ala Leu Gln Leu Leu Leu 

1 5 

155 

10 

PRT 


155 

Met Gln Ala Leu Gln Leu Leu Leu Glu Val 

1 5 10 

156 

9 

PRT 




156 

Met Ile Thr Gln Phe Glu Ser Leu Lys 

1 5 

157 

10 

PRT 


157 

Thr Gln Phe Glu Ser Leu Lys Leu Tyr Arg 

1 5 10 

158 

9 

PRT 


158 

Lys Phe Glu Glu Ile Arg Trp Leu Ile 

1 5 

159 

9 

PRT 


159 

Phe Met Gln Ala Leu Gln Leu Leu Phe 

1 5 

160 

9 

PRT 


160 

Glu Glu Val Arg His Arg Leu Lys Ile 

1 5 

161 

9 

PRT 




161 

Phe Glu Gln Ile Thr Phe Met Gln Ala 

1 5 

162 

9 

PRT 


162 

Leu Glu Val Glu Gln Glu Ile Arg Thr 

1 5 

163 

10 

PRT 


163 

Gln Glu Ile Arg Thr Phe Ser Phe Gln Leu 

1 5 10 

164 

10 

PRT 


164 

Cys Thr His Leu Glu Val Cys Phe Met Tyr 

1 5 10 

165 

9 

PRT 


165 

Val Thr Arg Arg Glu Val His Ile Tyr 

1 5 

166 

9 

PRT 




166 

Ser Ser Leu Glu Asn Phe Arg Ala Tyr 

1 5 

167 

10 

PRT 


167 

Tyr Val Asp Gly Phe Glu Pro Asn Gly Tyr 

1 5 10 

168 

9 

PRT 


168 

His Ile Ala Ser Met Arg Arg Asn Tyr 

1 5 

169 

9 

PRT 


169 

Val Ser His Cys Arg Ala Thr Glu Tyr 

1 5 

170 

9 

PRT 


170 

Phe Met Tyr Ser Asp Phe His Phe Ile 

1 5 

171 

9 



PRT 


171 

Ala Leu Leu Lys His Arg Phe Glu Ile 

1 5 

172 

9 

PRT 


172 

Met Ala Trp Thr Val Val Asn Ser Ile 

1 5 

173 

 

10 

PRT 


173 

Leu Leu Met Asp Ala Leu Lys Leu Ser Ile 

1 5 10 

174 

9 

PRT 


174 

Leu Leu Ala Trp Lys Gln Val Leu Ala 

1 5 

175 

9 

PRT 


175 

Tyr Ile Asn Thr Ala Leu Leu Asn Ala 

1 5 

176 

10 



PRT 


176 

Ser Ile Cys Asn Thr Thr Gly Val Glu Lys 

1 5 10 

177 

10 

PRT 


177 

Lys Phe Leu Pro Asp Leu Tyr Asp Tyr Lys 

1 5 10 

178 

10 

PRT 


178 

His Ile Tyr Tyr Leu Glu Lys Ala Asn Lys 

1 5 10 

179 

9 

PRT 


179 

Lys Phe Leu Leu Met Asp Ala Leu Lys 

1 5 

180 

10 

PRT 


180 

Arg Thr Phe Phe Gly Trp Lys Glu Pro Tyr 

1 5 10 

181 



10 

PRT 


181 

Lys Ile Pro Lys Thr Lys Asn Met Lys Lys 

1 5 10 

182 

9 

PRT 


182 

Phe Gln Leu Ile Pro Met Ile Ser Lys 

1 5 

183 

10 

PRT 


183 

Lys Thr Asn Leu Tyr Gly Phe Ile Ile Lys 

1 5 10 

184 

10 

PRT 


184 

Asn Leu Tyr Gly Phe Ile Ile Lys Gly Arg 

1 5 10 

185 

9 

PRT 


185 

Ser Val Lys Glu Lys Asp Met Thr Lys 

1 5 

186 

- 130 - 


9 

PRT 


186 

Met Thr Lys Glu Phe Phe Glu Asn Lys 

1 5 

187 

9 

PRT 


187 

Lys Val Cys Arg Thr Leu Leu Ala Lys 

1 5 

188 

10 

PRT 


188 

Lys Leu Leu Leu Ile Val Gln Ala Leu Arg 

1 5 10 

189 

9 

PRT 


189 

Lys Phe Ala Ala Ile Cys Thr His Leu 

1 5 


9 

PRT 



Cys Phe Met Tyr Ser Asp Phe His Phe 

1 5 

- 131 - 



9 

PRT 



Tyr Tyr Leu Glu Lys Ala Asn Lys Ile 

1 5 


9 

PRT 



Glu Tyr Ile Met Lys Gly Val Tyr Ile 

1 5 


 

9 

PRT 



Phe Phe Glu Asn Lys Ser Glu Thr Trp 

1 5 


10 

PRT 



Leu Tyr Ala Ser Pro Gln Leu Glu Gly Phe 

1 5 10 


9 

PRT 



Ala Pro Ile Glu His Ile Ala Ser Met 

1 5 

- 132 - 



9 

PRT 



Ser Pro Gln Leu Glu Gly Phe Ser Ala 

1 5 


9 

PRT 



Ser Glu Lys Thr His Ile His Ile Phe 

1 5 


9 

PRT 



Gly Glu Glu Thr Ile Glu Glu Arg Phe 

1 5 


10 

PRT 



Pro Glu Leu Arg Ser Leu Ser Ser Trp Ile 

1 5 10 

200 

10 

PRT 


200 

Ser Glu Phe Asn Lys Ala Cys Glu Leu Thr 

- 133 - 


1 5 10 

201 

10 

PRT 


201 

Met Glu Phe Ser Leu Thr Asp Pro Arg Leu 

1 5 10 

202 

9 

PRT 


202 

Trp Glu Lys Tyr Cys Val Leu Glu Ile 

1 5 

203 

9 

PRT 


203 

Ala Glu Ser Arg Lys Leu Leu Leu Ile 

1 5 

204 

10 

PRT 


204 

Ala Glu Ser Arg Lys Leu Leu Leu Ile Val 

1 5 10 

205 

9 

PRT 


205 

Tyr Glu Ala Ile Glu Glu Cys Leu Ile 

- 134 - 


1 5 

206 

9 

PRT 


206 

Tyr Ser His Gly Thr Gly Thr Gly Tyr 

1 5 

207 

9 

PRT 


207 

Gly Met Gln Ile Arg Gly Phe Val Tyr 

1 5 

208 

9 

PRT 


208 

Arg Met Phe Leu Ala Met Ile Thr Tyr 

1 5 

209 

9 

PRT 


209 

Lys Met Ala Arg Leu Gly Lys Gly Tyr 

1 5 

210 

 

9 

PRT 


210 

- 135 - 


Met Leu Ala Asn Ile Asp Leu Lys Tyr 

1 5 

211 

9 

PRT 


211 

Met Leu Ala Ser Ile Asp Leu Lys Tyr 

1 5 


9 

PRT 



Thr Phe Glu Phe Thr Ser Phe Phe Tyr 

1 5 

213 

10 

PRT 


213 

Leu Val Ser Asp Gly Gly Pro Asn Leu Tyr 

1 5 10 

214 

9 

PRT 


214 

Ala Gln Thr Asp Cys Val Leu Glu Ala 

1 5 

215 

9 

PRT 


215 

- 136 - 


Cys Val Leu Glu Ala Met Ala Phe Leu 

1 5 

216 

9 

PRT 


216 

Arg Leu Ile Asp Phe Leu Lys Asp Val 

1 5 

217 

9 

PRT 


217 

Gln Ile Arg Gly Phe Val Tyr Phe Val 

1 5 

218 

9 

PRT 


218 

Phe Val Tyr Phe Val Glu Thr Leu Ala 

1 5 


10 

PRT 



Arg Met Phe Leu Ala Met Ile Thr Tyr Ile 

1 5 10 

220 

9 

PRT 


- 137 - 


220 

Leu Leu Ile Asp Gly Thr Ala Ser Leu 

1 5 

221 

9 

PRT 


221 

Asn Met Leu Ser Thr Val Leu Gly Val 

1 5 

222 

9 

PRT 


222 

Phe Val Ala Asn Phe Ser Met Glu Leu 

1 5 

223 

9 

PRT 


223 

Ala Gln Met Ala Leu Gln Leu Phe Ile 

1 5 

224 

10 

PRT 


224 

Arg Leu Cys Asn Pro Leu Asn Pro Phe Val 

1 5 10 

225 

9 

PRT 


- 138 - 


225 

Gln Thr Tyr Asp Trp Thr Leu Asn Arg 

1 5 

226 

10 

PRT 


226 

Ala Leu Ala Asn Thr Ile Glu Val Phe Arg 

1 5 10 

227 

9 

PRT 


227 

Met Val Thr Gln Arg Thr Ile Gly Lys 

1 5 

228 

10 

PRT 


228 

Met Val Thr Gln Arg Thr Ile Gly Lys Lys 

1 5 10 

229 

9 

PRT 


229 

Ala Leu Thr Leu Asn Thr Met Thr Lys 

1 5 

230 

9 

PRT 


- 139 - 


230 

Thr Leu Ala Arg Ser Ile Cys Glu Lys 

1 5 

231 

10 

PRT 


231 

Ser Ile Ala Pro Ile Met Phe Ser Asn Lys 

1 5 10 

232 

10 

PRT 


232 

Ile Gln Ala Gly Val Asp Arg Phe Tyr Arg 

1 5 10 

233 

9 

PRT 


233 

Lys Leu Val Gly Ile Asn Met Ser Lys 

1 5 

234 

10 

PRT 


234 

Lys Leu Val Gly Ile Asn Met Ser Lys Lys 

1 5 10 

235 

10 

PRT 

- 140 - 



235 

Gly Thr Phe Glu Phe Thr Ser Phe Phe Tyr 

1 5 10 

236 

10 

PRT 


236 

Thr Phe Glu Phe Thr Ser Phe Phe Tyr Arg 

1 5 10 

237 

10 

 

PRT 


237 

Ala Gln Met Ala Leu Gln Leu Phe Ile Lys 

1 5 10 

238 

9 

PRT 


238 

Leu Gln Leu Phe Ile Lys Asp Tyr Arg 

1 5 

239 

9 

PRT 


239 

Ala Thr Thr His Ser Trp Ile Pro Lys 

1 5 

240 

10 

PRT 

- 141 - 



240 

Ala Thr Thr His Ser Trp Ile Pro Lys Arg 

1 5 10 

241 

10 

PRT 


241 

Tyr Gln Lys Cys Cys Thr Leu Phe Glu Lys 

1 5 10 

242 

10 

PRT 


242 

Tyr Gln Lys Cys Cys Asn Leu Phe Glu Lys 

1 5 10 

243 

9 

PRT 


243 

Lys Phe Phe Pro Ser Ser Ser Tyr Arg 

1 5 

244 

9 

PRT 


244 

Ser Tyr Leu Ile Arg Ala Leu Thr Leu 

1 5 

245 

9 

- 142 - 


PRT 


245 

Met Phe Leu Ala Met Ile Thr Tyr Ile 

1 5 

246 

9 

PRT 


246 

Arg Tyr Thr Lys Thr Thr Tyr Trp Trp 

1 5 

247 

9 

PRT 


247 

Ser Tyr Ile Asn Arg Thr Gly Thr Phe 

1 5 

248 

10 

PRT 


248 

Phe Tyr Arg Tyr Gly Phe Val Ala Asn Phe 

1 5 10 

249 

9 

PRT 


249 

Leu Tyr Asn Ile Arg Asn Leu His Ile 

1 5 

250 

9 

- 143 - 


PRT 


250 

Met Tyr Gln Lys Cys Cys Asn Leu Phe 

1 5 

251 

9 

PRT 


251 

Met Tyr Gln Lys Cys Cys Thr Leu Phe 

1 5 

252 

9 

PRT 


252 

Asn Pro Arg Met Phe Leu Ala Met Ile 

1 5 

253 

9 

PRT 


253 

Gln Pro Glu Trp Phe Arg Asn Val Leu 

1 5 

254 

 

9 

PRT 


254 

Ala Pro Ile Met Phe Ser Asn Lys Met 

1 5 

255 

- 144 - 


9 

PRT 


255 

Ile Pro Ala Glu Met Leu Ala Ser Ile 

1 5 

256 

9 

PRT 


256 

Ser Pro Gly Met Met Met Gly Met Phe 

1 5 

257 

9 

PRT 


257 

Gly Pro Ala Thr Ala Gln Met Ala Leu 

1 5 

258 

10 

PRT 


258 

Met Pro Ala His Gly Pro Ala Lys Ser Met 

1 5 10 

259 

9 

PRT 


259 

Ile Pro Lys Arg Asn Arg Ser Ile Leu 

1 5 

260 

- 145 - 


10 

PRT 


260 

Phe Pro Ser Ser Ser Tyr Arg Arg Pro Val 

1 5 10 

261 

9 

PRT 


261 

Arg Pro Val Gly Ile Ser Ser Met Val 

1 5 

262 

9 

PRT 


262 

Cys Glu Lys Leu Glu Gln Ser Gly Leu 

1 5 

263 

9 

PRT 


263 

Ile Glu Lys Ile Arg Pro Leu Leu Ile 

1 5 

264 

9 

PRT 


264 

Ile Glu Ser Val Asn Asn Ala Val Val 

1 5 

- 146 - 


265 

9 

PRT 


265 

Ser Thr Val His Tyr Pro Lys Val Tyr 

1 5 

266 

9 

PRT 


266 

Lys Ile Ser Pro Leu Met Val Ala Tyr 

1 5 

267 

10 

PRT 


267 

Arg Val Ser Lys Met Gly Val Asp Glu Tyr 

1 5 10 

268 

9 

PRT 


268 

Gly Thr Glu Lys Leu Thr Ile Thr Tyr 

1 5 

269 

10 

PRT 


269 

Gln Trp Ser Gln Glu Pro Thr Met Leu Tyr 

1 5 10 

- 147 - 


270 

9 

PRT 


270 

Trp Ser Gln Asp Pro Thr Met Leu Tyr 

1 5 

271 

9 

PRT 


271 

Leu Gln Asp Cys Lys Ile Ala Pro Leu 

1 5 

272 

9 

PRT 


272 

Phe Gln Asn Trp Gly Ile Glu His Ile 

1 5 

273 

9 

PRT 


273 

Phe Gln Asn Trp Gly Ile Glu Pro Ile 

1 5 

274 

9 

PRT 


274 

Arg Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Val 

1 5 

- 148 - 


275 

10 

PRT 


275 

Thr Thr Val Asp His Met Ala Ile Ile Lys 

1 5 10 

276 

9 

PRT 


276 

Thr Val Asp His Met Ala Ile Ile Lys 

1 5 

277 

9 

PRT 


277 

Arg Ile Met Glu Met Ile Pro Glu Arg 

1 5 

278 

9 

PRT 


278 

Thr Thr Ser Thr Val His Tyr Pro Lys 

1 5 

279 

10 

PRT 


279 

Ser Thr Val His Tyr Pro Lys Val Tyr Lys 

- 149 - 


1 5 10 

280 

9 

PRT 


280 

Thr Val His Tyr Pro Lys Val Tyr Lys 

1 5 

281 

9 

PRT 


281 

Lys Val Tyr Lys Thr Tyr Phe Glu Lys 

1 5 

282 

9 

PRT 


282 

Gly Thr Phe Gly Pro Val His Phe Arg 

1 5 

283 

10 

PRT 


283 

Ser Phe Ser Phe Gly Gly Phe Thr Phe Lys 

1 5 10 

284 

9 

PRT 


284 

Phe Ser Phe Gly Gly Phe Thr Phe Lys 

- 150 - 


1 5 

285 

10 

PRT 


285 

Phe Ser Phe Gly Gly Phe Thr Phe Lys Arg 

1 5 10 

286 

9 

PRT 


286 

Ser Phe Gly Gly Phe Thr Phe Lys Arg 

1 5 

287 

10 

PRT 


287 

Val Leu Thr Gly Asn Leu Gln Thr Leu Lys 

1 5 10 

288 

9 

PRT 


288 

His Gln Leu Leu Arg His Phe Gln Lys 

1 5 

289 

9 

PRT 


289 

- 151 - 


Val Val Ser Ile Asp Arg Phe Leu Arg 

1 5 

290 

10 

PRT 


290 

Ser Gln Asp Pro Thr Met Leu Tyr Asn Lys 

1 5 10 

291 

10 

PRT 


291 

Gly Thr Phe Asp Thr Val Gln Ile Ile Lys 

1 5 10 

292 

10 

PRT 


292 

Leu Leu Pro Phe Ala Ala Ala Pro Pro Lys 

1 5 10 

293 

10 

PRT 


293 

Val Leu Arg Gly Phe Leu Ile Leu Gly Lys 

1 5 10 

294 

10 

PRT 


294 

- 152 - 


Ser Ile Asn Glu Leu Ser Asn Leu Ala Lys 

1 5 10 

295 

9 

PRT 


295 

Trp Met Met Ala Met Lys Tyr Pro Ile 

1 5 

296 

10 

PRT 


296 

His Tyr Pro Lys Val Tyr Lys Thr Tyr Phe 

1 5 10 

297 

10 

PRT 


297 

Leu Tyr Asn Lys Met Glu Phe Glu Pro Phe 

1 5 10 

298 

10 

PRT 

< 

213> Influenza Virus 

298 

Gln Tyr Ser Gly Phe Val Arg Thr Leu Phe 

1 5 10 

299 

9 

PRT 


- 153 - 


299 

Asn Pro Ala Leu Arg Met Lys Trp Met 

1 5 

300 

9 

PRT 


300 

Tyr Pro Lys Val Tyr Lys Thr Tyr Phe 

1 5 

301 

9 

PRT 


301 

Gly Pro Val His Phe Arg Asn Gln Val 

1 5 

302 

10 

PRT 


302 

Phe Pro Asn Glu Val Gly Ala Arg Ile Leu 

1 5 10 

303 

9 

PRT 


303 

Ser Pro Leu Met Val Ala Tyr Met Leu 

1 5 

304 

10 

PRT 


- 154 - 


304 

Ala Pro Pro Lys Gln Ser Arg Met Gln Phe 

1 5 10 

305 

10 

PRT 


305 

Ala Pro Pro Glu Gln Ser Arg Met Gln Phe 

1 5 10 

306 

9 

PRT 


306 

Gly Pro Ala Leu Ser Ile Asn Glu Leu 

1 5 

307 

10 

PRT 


307 

Arg Glu Leu Val Arg Lys Thr Arg Phe Leu 

1 5 10 

308 

9 

PRT 


308 

Met Glu Phe Glu Pro Phe Gln Ser Leu 

1 5 

309 

10 

PRT 

- 155 - 



309 

Lys Glu Asp Lys Arg Tyr Gly Pro Ala Leu 

1 5 10 

310 

9 

PRT 


310 

Cys Glu Leu Thr Asp Ser Ser Trp Ile 

1 5 

311 

10 

PRT 


311 

Tyr Glu Arg Met Cys Asn Ile Leu Lys Gly 

1 5 10 


23 

PRT 



Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu Trp Gly Cys 

1 5 10 15 

Arg Cys Asn Asp Ser Ser Asp 

313 

23 

PRT 

20 


313 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Glu Trp Gly Cys 

1 5 10 15 

- 156 - 



314 

23 

PRT 

20 


314 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu Trp Gly Cys 

1 5 10 15 

Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp 

315 

23 

PRT 

20 


315 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Lys Asn Glu Trp Glu Cys 

1 5 10 15 


316 

23 

PRT 

20 


316 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Ser Glu Trp Gly Cys 

1 5 10 15 


317 

23 

PRT 

20 


317 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Gly Trp Glu Cys 

- 157 - 


1 5 10 15 

Arg Cys Ser Gly Ser Ser Asp 

318 

23 

PRT 

20 


318 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Glu Trp Glu Cys 

1 5 10 15 

Arg Cys Ser Asp Ser Ser Asp 


23 

PRT 

20 



Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Lys Asn Glu Trp Glu Cys 

1 5 10 15 

Lys Cys Ser Asp Ser Ser Asp 

320 

23 

PRT 

20 


320 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Leu Thr Arg Asn Gly Trp Gly Cys 

1 5 10 15 


321 

23 

PRT 

20 


- 158 - 


321 


1 5 10 15 


322 

23 

PRT 

20 


322 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Gly Trp Val Cys 

1 5 10 15 


323 

23 

PRT 

20 


323 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Lys Gly Trp Glu Cys 

1 5 10 15 

Asn Cys Ser Asp Ser Ser Asp 

324 

23 

PRT 

20 


324 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Lys Ser Glu Trp Glu Cys 

1 5 10 15 


325 

23 

20 

- 159 - 


PRT 


325 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Gly Trp Glu Cys 

1 5 10 15 


326 

23 

PRT 

20 


326 


1 5 10 15 

Lys Cys Asn Asp Ser Ser Asp 

327 

23 

PRT 

20 


327 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Leu Thr Arg Asn Gly Trp Glu Cys 

1 5 10 15 


328 

23 

PRT 

20 


328 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Gly Trp Gly Cys 

1 5 10 15 


20 

- 160 - 


329 

23 

PRT 


329 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Leu Thr Arg Asn Gly Trp Gly Cys 

1 5 10 15 


330 

23 

PRT 

20 


330 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asp Gly Trp Glu Cys 

1 5 10 15 

Lys Cys Asn Asp Ser Asn Asp 

331 

23 

PRT 

20 


331 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Gly Trp Gly Cys 

1 5 10 15 


332 

23 

PRT 

20 


332 

Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr His Thr Arg Asn Gly Trp Gly Cys 

1 5 10 15 

- 161 - 



333 

23 

PRT 

20 


333 


1 5 10 15 


334 

23 

PRT 

20 


334 


1 5 10 15 

Lys Cys Arg Asp Ser Ser Asp 

335 

23 

PRT 

20 


335 


1 5 10 15 

Asn Cys Ser Asp Ser Ser Asp 

336 

16 

PRT 

20 


336 

- 162 - 


Gly Ala Ala Ala Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu Asn Ala Ala 

1 5 10 15 

337 

24 

PRT 


337 

Leu Glu Leu Arg Ser Arg Tyr Trp Ala Ile Arg Thr Arg Ser Gly Gly 

1 5 10 15 

Asn Thr Asn Gln Gln Arg Ala Ser 

338 


PRT 

20 


338 

Ile Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala 

1 5 10 15 

Leu Ala Ile 

339 

29 

PRT 


339 

Leu Gly Ser Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Glu 

1 5 10 15 

Trp Glu Cys Arg Cys Ser Asp Ser Ser Asp Leu Gly Ser 

340 

87 

DNA 


340 

20 25 

- 163 - 


ctgggcagca gcctgctgac cgaggtggag acccccaccc gcaacgagtg ggagtgccgc 60 

tgcagcgaca gcagcgacct gggcagc 87 

341 

87 

DNA 


341 

ctgggcagca gtcttctaac cgaggtcgaa acgcctacca gaaacgaatg ggagtgcaga 60 

tgcagcgatt caagtgatct gggcagc 87 

342 

29 

PRT 


342 

Leu Gly Ser Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Thr Arg Asn Gly 

1 5 10 15 

Trp Glu Cys Lys Cys Ser Asp Ser Ser Asp Leu Gly Ser 

343 

87 

DNA 


343 

20 25 

ctgggcagca gcctgctgac cgaggtggag acccccaccc gcaacggctg ggagtgcaag 60 

tgcagcgaca gcagcgacct gggcagc 87 

344 

29 

PRT 


344 

Leu Gly Ser Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Leu Thr Arg Asn Gly 

1 5 10 15 

Trp Glu Cys Arg Cys Ser Gly Ser Ser Asp Leu Gly Ser 

20 25 

- 164 - 


345 

87 

DNA 


345 

ctgggcagca gcctgctgac cgaggtggag accctgaccc gcaacggctg ggagtgccgc 60 

tgcagcggca gcagcgacct gggcagc 87 

346 

29 

PRT 

Homo sapiens 

346 

Leu Gly Ser Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu 

1 5 10 15 

Trp Gly Cys Arg Cys Asn Asp Ser Ser Asp Leu Gly Ser 

347 

87 

DNA 

Homo sapiens 

347 

20 25 

ctgggcagca gcctgctgac cgaggtggag acccccatcc gcaacgagtg gggctgccgc 60 

tgcaacgaca gcagcgacct gggcagc 87 

348 

30 

PRT 


348 

Leu Gly Ser Leu Glu Leu Arg Ser Arg Tyr Trp Ala Ile Arg Thr Arg 

1 5 10 15 

Ser Gly Gly Asn Thr Asn Gln Gln Arg Ala Ser Leu Gly Ser 

349 

90 

20 25 30 

- 165 - 


DNA 


349 

ctgggcagcc ttgaactgag aagcagatat tgggctataa gaaccagaag cggaggaaac 60 

accaaccagc agagggcatc tctgggcagc 90 

350 

22 

PRT 


350 

Leu Gly Ser Gly Ala Ala Ala Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu 

1 5 10 15 

Asn Ala Ala Leu Gly Ser 

351 

66 

DNA 

20 


351 

ctgggcagcg gcgccgccgc cgggattttg ggatttgtat tcacgctcaa cgccgccctg 60 

ggcagc 66 

352 

4 

PRT 

Artificial Sequence 

Peptide linker sequence 

352 

Gly Ala Ala Ala 

1 

353 

5 

PRT 

Artificial Sequence 

Peptide spacer sequence 

- 166 - 


353 

Gly Pro Gly Pro Gly 

1 5 

- 167 -

(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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