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Quando la compressa si rompe lo strumento si ferma ed è possibile leggere sulla scala graduata quale è stata la forza applicata (in kg) per determinarne la rottura. Tempo di disgregazione: viene utilizzato uno strumento, descritto in tutte le farmacopee ufficiali, costituito da un cestello con gli alloggiamenti per le compresse e un bagno d'acqua mantenuto alla temperatura costante di 37 °C. Le compresse non masticabili vengono inserite nel cestello che si muove ripetutamente in alto e in basso. Quando le compresse sono completamente disciolte si registra il tempo necessario per l'avvenuta disgregazione. Prove di tenuta su bustine e su blisters: il campione viene immerso in un becker contenente acqua e blu di metilene (ad una concentrazione dello 0,1%) e successivamente introdotto in una campana in cui viene praticata una depressione di 500 mm Hg. Dopo un minuto la campana ritorna alla pressione atmosferica. Le bustine ed i blisters non devono lasciar permeare la soluzione colorante al loro interno. Percentuale di ossigeno residuo nelle buste di crusca: la crusca contiene una piccola percentuale di lipidi che in presenza di ossigeno tende ad irrancidire con l'andare del tempo. Confezionando la crusca in buste contenenti azoto si può ovviare a questo inconveniente. Viene utilizzato uno strumento con il quale viene misurata la percentuale di ossigeno residuo tramite l'inserimento di un ago nella busta, l'aspirazione del gas presente in essa ed il passaggio del gas attraverso una cella contenente un sensore elettrochimico. Microbiologia Nel laboratorio di microbiologia si effettuano analisi su materie prime e prodotti finiti per rilevare e quantificare la contaminazione microbica. In particolare le analisi condotte sono: ricerca di Escherichia coli, batteri aerobi, Salmonella, lieviti e muffe, Staphylococcus aureus, batteri Gram negativi bile tolleranti, fermenti lattici (Lactobacilli e bifido batteri) e Saccharomyces cerevisiae. In conformità alle linee guida vigenti, sono eseguiti test di fertilità e sterilità dei terreni di coltura utilizzando ceppi batterici ATCC. Si tratta di test necessari per assicurarsi che il terreno sia selettivo per la crescita di una determinata specie batterica non permettendo la crescita di altre specie. Tutti i terreni utilizzati sono stati anche testati per verificarne la performance in presenza del prodotto analizzato: questo tipo di convalida del terreno è necessario per verificare che un determinato prodotto finito non abbia caratteristiche tali da “nascondere” una eventuale contaminazione microbica. Attività svolte: (Premessa: tutti i terreni utilizzati dalla Marco Antonetto S.p.A. sono acquistati da ditte specializzate in forma di terreno disidratato)
Preparazione dei terreni di coltura (MacConkey, Sabouraud 4% dextrose agar, XLD agar, Caso brodo, NaCl-peptone soluzione tamponata). Il procedimento di preparazione di ogni terreno è indicato nella scheda di preparazione; in generale ci sono due tipi di terreni: quelli agarizzati che devono essere portati ad ebollizione per essere sciolti ed i brodi (di arricchimento o di diluizione) che sono invece sciolti a temperatura ambiente. La maggior parte dei terreni, una volta preparati devono essere sterilizzati in autoclave. Su ogni flacone va posta un'etichetta in cui deve essere indicato il numero di lotto del terreno, la tipologia di terreno e la data di scadenza. Prelievo di campioni di materie prime nel “Magazzino Materie Prime” per analisi chimico-fisiche e microbiologiche. Campionamento dell'aria nei locali del laboratorio di microbiologia (ricerca di batteri aerobi, lieviti e muffe) utilizzando lo strumento Sas (Surface Air System) . Si colloca la piastra con l'opportuno terreno di coltura (TVC agar per batteri aerobi; Sabouraud 4% dextrose agar per lieviti e muffe) all'estremità dello strumento e si richiude avvitando la testata (coperchio con numero di fori e diametro ben specifici).Lo strumento viene posizionato in corrispondenza dei filtri di mandata dell'impianto di aerazione. Si da l'avvio e si attende che lo strumento abbia aspirato il volume prefissato di aria (da un minimo di 100 litri ad un massimo di 200 litri a seconda del locale da controllare). Eventuali muffe o batteri andranno a depositarsi sul terreno della piastra. Si estrae la piastra dallo strumento e si lascia incubare per permettere la crescita microbica. Dopo il periodo di incubazione si procede alla conta delle colonie di batteri aerobi e di lieviti e muffe e si risale alla concentrazione di batteri o lieviti e muffe presenti nell'aria espressa in UFC/metro cubo. Analisi per Escherichia coli : si parte da 10g di campione miscelati con 90 ml di NaCl-peptone soluzione tamponata ottenendo la soluzione madre (diluizione del campione). Si prelevano 10 ml di soluzione madre (equivalenti a 1 g di campione) a cui vanno aggiunti 90 ml di Caso Brodo. Dopo un periodo di 18-24 ore a 30-35°C si ottiene la soluzione che chiameremo S1. A questo punto 1 ml di S1 viene aggiunto a 100 ml di Mac Conkey brodo. Dopo 24-48 ore a 42-44°C in incubazione (selezione), si ottiene la soluzione S2. Infine 100 µl di S2 vengono seminati su piastra contenente Mac Conkey agar. Dopo 24-48 ore si procede alla conta delle colonie formate. Analisi per TYMC (conta totale di lieviti e muffe): si preleva 1 ml si soluzione madre e si semina in piastra con 18 ml di Sabouraud Dextrose agar contenente cloramfenicolo (50 mg/l). Il cloramfenicolo è un antibiotico che agisce sui batteri inibendo la sintesi proteica (si lega alla subunità ribosomale 50s bloccando il meccanismo di traduzione).Si lascia in incubazione a 20-25°C per permettere la crescita delle colonie di lieviti e muffe. Dopo 5-7 giorni si passa alla conta delle colonie sviluppate.
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