Facchini.pdf - Liceo Norberto Rosa

Corso IFTS
Tecnico superiore in sicurezza e qualità nelle scienze della vita
Corsista:
Marco Ernesto Facchini
RELAZIONE ESPERIENZA STAGE
IMPRESA: Marco Antonetto Farmaceutici S.p.A.
via Arsenale, 29
10121 Torino
Il tirocinio formativo è stato svolto presso il laboratorio Controllo Qualità della
Marco Antonetto S.p.A.. Le attività eseguite dal personale possono essere
raggruppate in due categorie: analisi chimico-fisiche ed analisi
microbiologiche.Vengono effettuati controlli su materie prime, materiale di
confezionamento primario e secondario e prodotti finiti.
Le attività svolte durante lo stage hanno avuto come oggetto l'esecuzione di
controlli chimico fisici e microbiologici e la registrazione dei dati ottenuti sui
relativi quaderni e sui rendiconto di lavorazione (Batch Record).
Controlli chimico-fisici su integratori nutrizionali e prodotti medicinali
Attività svolte
Peso: si misura il peso della singola unità (ad esempio di una
compressa) nel caso di controlli in-process sul bulk, oppure dell'intero
contenuto in caso di prodotto finito (ad esempio nel caso del controllo di
flaconi)
Spessore delle compresse: effettuato mediante calibro digitale
Umidità in percentuale: il campione viene triturato finemente con
pestello e mortaio.Viene posto nel piattino all'interno della bilancia ad
infrarossi il quantitativo necessario. Si chiude la bilancia ed al termine del
periodo di tempo impostato, lo strumento fornisce come risultato
l'umidità del campione espressa in percentuale.
Friabilità: dopo essere state pesate, le compresse sono poste in un
cilindro che viene fatto ruotare per un tempo prefissato (5 minuti=100
giri esatti). Al termine del trattamento si pesa nuovamente il campione e
si calcola la differenza di peso in percentuale.
Durezza delle compresse: si misura mediante lo strumento Erweka.
Dopo aver inserito la compressa nell'apposito alloggiamento, si avvia lo
strumento che applica una determinata forza per rompere la compressa.

Quando la compressa si rompe lo strumento si ferma ed è possibile
leggere sulla scala graduata quale è stata la forza applicata (in kg) per
determinarne la rottura.
Tempo di disgregazione: viene utilizzato uno strumento, descritto in
tutte le farmacopee ufficiali, costituito da un cestello con gli
alloggiamenti per le compresse e un bagno d'acqua mantenuto alla
temperatura costante di 37 °C. Le compresse non masticabili vengono
inserite nel cestello che si muove ripetutamente in alto e in basso.
Quando le compresse sono completamente disciolte si registra il tempo
necessario per l'avvenuta disgregazione.
Prove di tenuta su bustine e su blisters: il campione viene immerso
in un becker contenente acqua e blu di metilene (ad una concentrazione
dello 0,1%) e successivamente introdotto in una campana in cui viene
praticata una depressione di 500 mm Hg. Dopo un minuto la campana
ritorna alla pressione atmosferica. Le bustine ed i blisters non devono
lasciar permeare la soluzione colorante al loro interno.
Percentuale di ossigeno residuo nelle buste di crusca: la crusca
contiene una piccola percentuale di lipidi che in presenza di ossigeno
tende ad irrancidire con l'andare del tempo. Confezionando la crusca in
buste contenenti azoto si può ovviare a questo inconveniente. Viene
utilizzato uno strumento con il quale viene misurata la percentuale di
ossigeno residuo tramite l'inserimento di un ago nella busta, l'aspirazione
del gas presente in essa ed il passaggio del gas attraverso una cella
contenente un sensore elettrochimico.
Microbiologia
Nel laboratorio di microbiologia si effettuano analisi su materie prime e prodotti
finiti per rilevare e quantificare la contaminazione microbica. In particolare le
analisi condotte sono: ricerca di Escherichia coli, batteri aerobi, Salmonella,
lieviti e muffe, Staphylococcus aureus, batteri Gram negativi bile tolleranti,
fermenti lattici (Lactobacilli e bifido batteri) e Saccharomyces cerevisiae.
In conformità alle linee guida vigenti, sono eseguiti test di fertilità e sterilità dei
terreni di coltura utilizzando ceppi batterici ATCC. Si tratta di test necessari per
assicurarsi che il terreno sia selettivo per la crescita di una determinata specie
batterica non permettendo la crescita di altre specie.
Tutti i terreni utilizzati sono stati anche testati per verificarne la performance in
presenza del prodotto analizzato: questo tipo di convalida del terreno è
necessario per verificare che un determinato prodotto finito non abbia
caratteristiche tali da “nascondere” una eventuale contaminazione microbica.
Attività svolte:
(Premessa: tutti i terreni utilizzati dalla Marco Antonetto S.p.A. sono acquistati
da ditte specializzate in forma di terreno disidratato)

Preparazione dei terreni di coltura (MacConkey, Sabouraud 4% dextrose
agar, XLD agar, Caso brodo, NaCl-peptone soluzione tamponata). Il
procedimento di preparazione di ogni terreno è indicato nella scheda di
preparazione; in generale ci sono due tipi di terreni: quelli agarizzati che
devono essere portati ad ebollizione per essere sciolti ed i brodi (di
arricchimento o di diluizione) che sono invece sciolti a temperatura
ambiente. La maggior parte dei terreni, una volta preparati devono
essere sterilizzati in autoclave. Su ogni flacone va posta un'etichetta in
cui deve essere indicato il numero di lotto del terreno, la tipologia di
terreno e la data di scadenza.
Prelievo di campioni di materie prime nel “Magazzino Materie Prime” per
analisi chimico-fisiche e microbiologiche.
Campionamento dell'aria nei locali del laboratorio di microbiologia
(ricerca di batteri aerobi, lieviti e muffe) utilizzando lo strumento Sas
(Surface Air System) . Si colloca la piastra con l'opportuno terreno di
coltura (TVC agar per batteri aerobi; Sabouraud 4% dextrose agar per
lieviti e muffe) all'estremità dello strumento e si richiude avvitando la
testata (coperchio con numero di fori e diametro ben specifici).Lo
strumento viene posizionato in corrispondenza dei filtri di mandata
dell'impianto di aerazione. Si da l'avvio e si attende che lo strumento
abbia aspirato il volume prefissato di aria (da un minimo di 100 litri ad
un massimo di 200 litri a seconda del locale da controllare). Eventuali
muffe o batteri andranno a depositarsi sul terreno della piastra. Si estrae
la piastra dallo strumento e si lascia incubare per permettere la crescita
microbica. Dopo il periodo di incubazione si procede alla conta delle
colonie di batteri aerobi e di lieviti e muffe e si risale alla concentrazione
di batteri o lieviti e muffe presenti nell'aria espressa in UFC/metro cubo.
Analisi per Escherichia coli : si parte da 10g di campione miscelati con
90 ml di NaCl-peptone soluzione tamponata ottenendo la soluzione
madre (diluizione del campione). Si prelevano 10 ml di soluzione madre
(equivalenti a 1 g di campione) a cui vanno aggiunti 90 ml di Caso
Brodo. Dopo un periodo di 18-24 ore a 30-35°C si ottiene la soluzione
che chiameremo S1. A questo punto 1 ml di S1 viene aggiunto a 100 ml
di Mac Conkey brodo. Dopo 24-48 ore a 42-44°C in incubazione
(selezione), si ottiene la soluzione S2. Infine 100 µl di S2 vengono
seminati su piastra contenente Mac Conkey agar. Dopo 24-48 ore si
procede alla conta delle colonie formate.
Analisi per TYMC (conta totale di lieviti e muffe): si preleva 1 ml si
soluzione madre e si semina in piastra con 18 ml di Sabouraud Dextrose
agar contenente cloramfenicolo (50 mg/l). Il cloramfenicolo è un
antibiotico che agisce sui batteri inibendo la sintesi proteica (si lega alla
subunità ribosomale 50s bloccando il meccanismo di traduzione).Si lascia
in incubazione a 20-25°C per permettere la crescita delle colonie di lieviti
e muffe. Dopo 5-7 giorni si passa alla conta delle colonie sviluppate.

Analisi per TAMC (conta totale dei microorganismi aerobi): la
prima fase consiste nello sciogliere 10 g di campione in 100 ml di
soluzione NaCl-peptone soluzione tamponata ottenendo come risultato la
soluzione madre. Da quest'ultima si preleva 1 ml e lo si piastra con Caso
agar. Dopo 5 giorni di incubazione a 30-35 °C si esegue l'osservazione
della piastra e la conta delle colonie.
Analisi per Salmonella: si miscelano 10 g di campione con 100 ml di
Caso brodo e si lascia incubare a 30-35°C per 18-24 ore ottenendo come
risultato la soluzione madre. Al secondo passaggio si aggiunge 0,1 ml di
soluzione madre a 10 ml di brodo Rappaport-Vassiliadis (selettivo per
Salmonella) e si procede all'incubazione per 18-24 ore a 30-35°C. La
terza fase prevede la semina di 100 µl della soluzione risultante su
piastra con XLD agar (selettivo per Salmonella). Dopo 24-48 si può
passare alla fase di osservazione e conta delle colonie.
Conta dei fermenti e del Saccharomyces cerevisiae
(determinazione delle UFC/g). E' un'analisi volta a quantificare i
fermenti e il lievito presenti nelle materie prime e nei prodotti finiti. Nella
seguente tabella sono riportate le operazioni necessarie considerando
come esempio un campione di materia prima.
SM= soluzione madre (10 g di campione in 100 ml di brodo NaCl peptone)
Specie Diluizioni Piastratura Incubazione
Lactobacillus
acidophilus
Bifidobacterium
longum
Lactobacillus
sporogenes
Saccharomyces
cerevisiae
9 diluizioni 1:10 della SM 1 ml della nona
diluizione con 18
ml MRS agar
9 o 10 diluizioni della SM 1 ml della nona o
decima diluizione
con 18 ml MRS
agar e 180 µl di
cisteina-HCl
8 diluizioni 1:10 della SM –
l'ultima deve subire shock
termico (30' a 80°C - acqua
fredda)
1 ml in 18 ml
Glucose Yeast
Extract agar
7 diluizioni 1:10 della SM 1 ml con 18 ml
Malt Extract agar
Anaerobiosi a 30-35°C per 72
ore
Anaerobiosi a 30-35°C per 72
ore
30-35°C per 72 ore
30-35°C per 48 ore
Compilazione dei quaderni per la registrazione di tutti i dati relativi ai
controlli effettuati (nome del prodotto, numero di lotto, ora alla quale è
stato effettuato il controllo, parametri da verificare con relativi risultati
ottenuti)
Compilazione dei rendiconto di lavorazione
L'esperienza di stage è stata particolarmente formativa ed ha arricchito il mio
bagaglio di conoscenze ed esperienze. Senza dubbio ha rappresentato una
parte del corso di estrema importanza, in cui le tematiche affrontate durante il
percorso formativo hanno trovato applicazione nel mondo dell'impresa. In

particolare si sono dimostrati utili gli argomenti trattati durante le unità
formative di sistemi di gestione per la qualità, sicurezza, applicazioni
biotecnologiche e laboratorio. Sotto la guida attenta e disponibile dei
supervisori ho avuto modo di acquisire più dimestichezza con le attività
pratiche di laboratorio e con la gestione della documentazione nel rispetto delle
procedure operative previste. I controlli in process nel laboratorio chimicofisico
e le analisi nel laboratorio microbiologico sono stati una significativa
occasione per mettere in pratica conoscenze scientifiche e tecniche. In questo
ambiente lavorativo ho inoltre avuto l'opportunità di sviluppare le capacità di
esecuzione dei compiti assegnati nei tempi previsti e di organizzazione del
lavoro in autonomia o in squadra, con spirito di collaborazione.