tipizzazione e caratterizzazione di varietà precoci di patata ... - PbgLab
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LEPORE STUDIO DEI METABOLITI SECONDARI DI VARIETà PRECOCI DI SolANUm tUBeroSUm<br />
sono stati: acido ascorbico, tirosina, caffeoil spermina,<br />
triptofano, acido-3-O-caffeoil-5-O-feruloil-chinico,<br />
bis-<strong>di</strong>idrocaffeoil spermina, acido clorogenico<br />
e neoclorogenico, ammide dell’acido ferulico, bis e<br />
tris-<strong>di</strong>idro-caffeoil-spermi<strong>di</strong>na, rutina, apigenina, glicoalcaloi<strong>di</strong><br />
(α-solanina e α-chaconina), kaemferolo-<br />
3-O-rutinoside, quercetina <strong>di</strong>metil-etere. I metaboliti<br />
più abbondanti nei tuberi <strong>di</strong> <strong>patata</strong> precoce sono risultati<br />
l’acido clorogenico, e l’acido ascorbico (vitamina<br />
C) 6. Di quest’ultimo metabolita la <strong>patata</strong> precoce<br />
risulta più ricca rispetto alla <strong>patata</strong> comune (30 mg/<br />
kg vs. 15 mg/kg), mentre metaboliti come flavonoi<strong>di</strong>,<br />
derivati poliammi<strong>di</strong>ci e triptofano sono risultati presenti<br />
in bassissime quantità. L’analisi del contenuto in<br />
glicoalcaloi<strong>di</strong> dei tuberi <strong>di</strong> <strong>patata</strong> precoce stu<strong>di</strong>ati ha<br />
permesso <strong>di</strong> <strong>di</strong>mostrare che questi metaboliti sono<br />
presenti a concentrazioni molto più basse dei limiti<br />
critici. Correlando la provenienza geografica e il<br />
contenuto metabolico delle cultivar stu<strong>di</strong>ate, è stato<br />
possibile dedurre che all’interno della stessa cultivar<br />
stu<strong>di</strong>ate, coltivata in regioni <strong>di</strong>fferenti, le <strong>di</strong>fferenze<br />
nel tenore <strong>di</strong> metaboliti secondari sono significative.<br />
Materiali e meto<strong>di</strong><br />
materiale vegetale<br />
Sono stati analizzati tuberi <strong>di</strong> <strong>patata</strong> precoce delle<br />
cultivar Arinda, Sieglinde, Spunta prelevati da <strong>di</strong>fferenti<br />
zone <strong>di</strong> coltivazione nelle regioni Puglia e<br />
Sicilia (Tabella I).<br />
estrazione<br />
L’estrazione è stata effettuata secondo il metodo<br />
riportato da Shakya et al. (2006) 1-12. I tuberi sono<br />
stati lavati con acqua deionizzata senza asportarne<br />
la buccia, asciugati e tagliati longitu<strong>di</strong>nalmente in<br />
otto parti uguali scartando le due estremità. In seguito<br />
sono stati ridotti in cubetti e, per evitare reazioni<br />
<strong>di</strong> degradazione enzimatica, sono stati imme<strong>di</strong>atamente<br />
congelati in azoto liquido e liofilizzati.<br />
Solo dopo la completa <strong>di</strong>sidratazione, il campione<br />
è stato ridotto in polvere fine me<strong>di</strong>ante l’uso <strong>di</strong> un<br />
omogeneizzatore. I campioni polverizzati sono stati<br />
conservati a -20 °C, al buio, fino all’uso. Sono stati<br />
pesati 400 mg <strong>di</strong> liofilizzato e messi in eppendorf da<br />
2 ml con 0,9 ml <strong>di</strong> buffer <strong>di</strong> (50% v/v <strong>di</strong> MeOH, 50%<br />
v/v <strong>di</strong> H 2O, con 2,5% <strong>di</strong> acido metafosforico e 1 mM<br />
<strong>di</strong> EDTA). Le eppendorf contenenti il campione <strong>di</strong>sperso<br />
nel buffer <strong>di</strong> estrazione sono state agitate con<br />
vortex per 1 minuto circa, sottoposte a sonicazione<br />
per 15 minuti, a bassa temperatura e alla massima<br />
potenza <strong>di</strong>sponibile. Dopo la sonicazione, le eppendorf<br />
sono state nuovamente agitate con vortex per<br />
1 minuto circa, poi centrifugate per 7 minuti, a 4 ºC,<br />
a 13000 rpm.<br />
Il surnatante è stato prelevato e trasferito in altre<br />
eppendorf. Il pellet rimanente è stato riestratto con<br />
0,6 ml del buffer <strong>di</strong> estrazione, sonicato e centrifugato.<br />
Della soluzione dei due surnatanti sono stati<br />
prelevati 200 µl, congelati a -80 ºC per 15 minuti e<br />
seccati in Speed Vac (Eppendorf, Amburgo, Germania)<br />
a temperatura ambiente, per due ore.<br />
Tabella I. — Siti <strong>di</strong> campionamento delle <strong>di</strong>fferenti aree <strong>di</strong> coltivazione nelle regioni Puglia e Sicilia.<br />
Campione Sigla Siti <strong>di</strong> campionamento Data raccolta<br />
Arinda (Sicilia) 09-AR-S-A1-3 Torre Milocca (SR) 2009<br />
Arinda (Sicilia) 09-AR-S-E1-3 Carruba-Riposto (CT) 21/05/2009<br />
Arinda (Sicilia) 09-AR-S-G1-3 Giar<strong>di</strong>naccio-Montef. S. Giorgio (ME) 22/05/2009<br />
Sieglinde (Puglia) 09-SG-P-C1-3 Cisternella (LE) 25/05/2009<br />
Sieglinde (Puglia) 09-SG-P-D1-3 San Fer<strong>di</strong>nando (BAT) 26/05/2009<br />
Sieglinde (Puglia) 09-SG-P-C-COM Puglia 2009<br />
Sieglinde (Sicilia) 09-SG-S-F2-3 Scala- Torregrotta (ME) 22/05/2009<br />
Sieglinde (Sicilia) 09-SG-S-I-GIARRE Giarre (CT) 2009<br />
Sieglinde (Sicilia) 09-SG-S-L-ISPICA Ispica (RG) 2009<br />
Sieglinde (Sicilia) 09-SG-S-H-MARSALA Marsala (TP) 2009<br />
Spunta (Puglia) 09-SP-P-A1-3 Chianchi (LE) 25/05/2009<br />
Spunta (Puglia) 09-SP-P-I1-3 Mola <strong>di</strong> Bari-Cozze (BA) 2009<br />
Spunta (Puglia) 09-SP-S-B1-3 Cassibile (SR) 21/05/2009<br />
Spunta (Puglia) 09-SP-S-C1-3 Acireale-Scura (CT) 21/05/2009<br />
44 MINERVA BIOTECNOLOGICA Marzo 2012