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CIRILLO PROGETTAZIONE E SINTESI DI DNA RICOMBINANTE Bibliografia 1. Regulation (EC)N. 1829/2003 of the European Parliament and of the Council of 22 September 2003 on genetically modified food and feed. In: Commun. OJE, editor; 2003. p. 1-23. 2. Higuchi R, Fockler C, Dollinger G, Watson R. Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions. R Biotechnology 1993;11:1026-30. 3. von Gotz F. See what you eat - broad GMO screening with microarrays. Anal Bioanal Chem 2010;396:1961-7. 4. Kuribara H, Shindo Y, Matsuoka T, Takubo K, Futo S, Aoki N et al. Novel molecules for quantitation of genetically modified maize and soybean. J AOAC Int 2002;85:1077-89. 5. Taverniers I, Windels P, Vaïtilingom M, Milcamps A, Van Bockstaele E, Van den Eede G et al. Event-specific plasmid standards and real-time pcr methods for transgenic Bt11, Bt176, and GA21 maize and transgenic GT73 canola. J Agricult Food Chemistry 2005;53:3041-52. 6. Shindo Y, Kuribara H, Matsuoka T, Futo S, Sawada C, Shono J et al. Validation of real-time pcr analyses for line-specific quantitation of genetically modified maize and soybean usingnew reference molecules. J AOAC Int 2002;85:1119-26. 7. Hernandez M, Pla M, Esteve T, Prat S, Puigdomenech P, Ferrando A. A specific real-time quantitative PCR detection system for event MON810 in maize YeldGard based on the 3’-transgene integration sequence. Transgenic Research 2003;12:179-89. 8. Terry CF, Shanahan DJ, Ballam LD, Harris N, McDowell DG, Parkes HC. Real-time detection of genetically modified soya using Lightcycler and ABI 7700 platforms with TaqMan, Scorpion, and SYBR Green I chemistries. J AOAC Int 2002;85:938-44. 9. Di Bernardo G, Del Gaudio S, Galderisi U, Cascino A, Cipollaro M. Comparative evaluation of different DNA extraction procedures from food samples. Biotechnol Prog 2007;23:297-301. 10. Peano C, Samson MC, Calmieri L, Gulli M, Marmiroli N. Qualitative and quantitative evaluation of the genomic DNA extracted from GMO and non-GMO foodstuffs with four different extraction methods. J Agric Food Chem 2004;52:6962-8. 11. Del Gaudio S, Cirillo A, Di Bernardo G, Galderisi U, Cipollaro M. A preamplification approach to GMO detection in processed foods. Anal Bioanal Chem 2010;396:2135-42. 12. ISO 21570: Foodstuffs-Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products-Quantitative nucleic acid based methods. In: Organization IS, editor. Geneva, Switzerland, 2005. 13. ISO 21571: Foodstuffs-Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products-Nucleic acid extraction. In: Organization IS, editor; 2005. 14. Arumuganathan K, Earle ED. Nuclear DNA content of some important plant species. Plant Mol Biol Reporter 1991;9:208-18. 15. Zel J, Mazzara M, Savini C, Cordeil S, Camloh M, Stebih D et al. Method validation and quality management in the flexible scope of accreditation: an example of laboratories testing for genetically modified organisms. Food analytical methods 2008;1:61-72. 16. Cankar K, Stebih D, Dreo T, Zel J, Gruden K. Critical points of DNA quantification by real-time PCR--effects of DNA extraction method and sample matrix on quantification of genetically modified organisms. BMC Biotechnol 2006;6:37. Ringraziamenti. — Questo lavoro è dedicato alla memoria del Prof. Antonino Cascino. Finanziamenti. — Questo progetto è stato finanziato dal Ministero delle Politiche Agricole e Forestali (MIPAF) Progetto Speciale MI- PAF: “Tipicizzazione e caratterizzazione di varietà precoci di patata con l’impiego di tecniche molecolari e spettroscopiche” (2008-2011) a M.C. 34 MINERVA BIOTECNOLOGICA Marzo 2012
La tipizzazione in campo alimentare è uno degli aspetti di maggior rilievo nell’ambito della prevenzione delle frodi, della sicurezza e della valorizzazione degli alimenti. Tra i prodotti dell’agricoltura italiana, la patata riveste un ruolo molto importante, soprattutto per quel che riguarda la produzione extra-stagionale o “precoce” (ciclo invernale-primaverile), molto apprezzata dai consumatori nazionali e nord-europei. Tale produzione, tuttavia, è talvolta contaminata da materiale proveniente dal nord Africa o da Cipro, da zone quindi che non sono quelle tipiche della produzione di patata extrastagionale (Campania, Sicilia, Puglia) e che non sono sottoposte ad appropriati controlli di qualità e sicurezza. Pertanto, il presente lavoro si propone di individuare marcatori proteici per alcune varietà di patata precoce (Solanum tuberosum L.) coltivate nel Sud Italia mediante l’impiego di metodologie proteomiche. La proteomica, infatti, può aumentare la possibilità di descrivere le proprietà nutrizionali, biologiche, conformazionali e di interazioni funzionali delle proteine alimentari ampliando la possibilità di “definizione di qualità” di prodotti destinati all’alimentazione. I proteomi ottenuti per ciascuna varietà hanno messo in evidenza una grande abbondanza di patatine, gruppo di glicoproteine aventi funzione di conservazione e difesa. Sono state rilevate differenze significative tra diverse cv e nell’ambito della stessa cv proveniente da diverse regioni non in termini di numero, ma di intensità di spot, quindi di espres- Autore di contatto: M. A. Rao, Dipartimento di Scienze del Suolo, della Pianta dell’Ambiente e delle Produzioni Animali, Università degli Studi di Napoli Federico II, Portici, Napoli, Italia. E-mail mariarao@unina.it MINERVA BIOTEC 2012;24(Suppl. 1 al N. 1):35-42 La proteomica quale strumento di tipizzazione di cultivar precoci di patata R. SCELZA, F. RUSSO, L. GIANFREDA, M. A. RAO Dipartimento di Scienze del Suolo, della Pianta, dell’Ambiente e delle Produzioni Animali Università degli Studi di Napoli Federico II, Portici Napoli, Italia sione di proteine. Analisi di spettrometria di massa saranno necessarie per identificare le proteine individuate. Parole-chiave:
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