Apri file allegato (risultatiricerca.pdf) - Cra
Apri file allegato (risultatiricerca.pdf) - Cra Apri file allegato (risultatiricerca.pdf) - Cra
Estrazione di DNA totale da lievito I ceppi sono stati inoculati in terreno liquido e fatti crescere fino ad una densità di 10 8 cellule/ml alla temperatura di 28°C sotto agitazione. Le cellule sono state raccolte mediante centrifugazione, lavate con TE (Tris EDTA), e trattate con tampone di estrazione (Triton X-100, SDS 1%, NaCl 100mM, TE pH 8). La sospensione è stata trattata con PCI (fenolo,/CHCl 3 /alcool isoamilico in rapporto 25:24:1 rispettivamente) e le cellule sono state sottoposte a rottura meccanica con palline di vetro su vortex per 4 minuti. Dopo aggiunta di 0,2 ml di TE e dopo centrifugazione è stata recuperata la fase acquosa ed il DNA è stato precipitato con l’aggiunta di tre volumi di etanolo 95°. Dopo centrifugazione e rimozione dell’etanolo il DNA veniva ridisciolto in TE+RNAasi per eliminare la contaminazione dovuta allo RNA. Amplificazione del DNA tramite PCR L’amplificazione è stata eseguita utilizzando il kit della TaKaRa SHUZO CO., LTD con le seguenti modalità: DNA 50ng MgCl 2 25mM Tampone PCRII 10X dNTP 50µM Oligo Forward 50pmole/l Oligo Reverse 50pmole/l Taq polimerasi 2,5U/l H 2 O dd Fino a volume di 50μl Le condizioni di tempo e temperatura delle reazioni erano le seguenti: DENATURAZIONE: 5 minuti 94°C 30 CICLI · Denaturazione 30 secondi a 94°C · Ibridazione 30 secondi a 58°C · Allungamento 45 secondi a 72°C TERMINE ALLUNGAMENTO: 4 minuti a 72°C I prodotti di amplificazione sono stati controllati su gel di agarosio alla concentrazione del 1,2% . Il DNA è stato messo in evidenza mediante l’aggiunta al gel di agarosio di bromuro di etidio alla concentrazione finale di 0,5mg/ml e mediante illuminazione con raggi UV. 4
SCHEMA DI AMPLIFICAZIONE DEI GENI AdH GENE Primers AdH1 AdH2 AdH3 AdH5 Diretto 5’ ATCCCAGAAACTCAAAAAGGTG 3’ Inverso 5’ AGTGTCAACAACGTATCTACCA 3’ Diretto 5’ CAAGTTGGAGCATAAGGATATC 3’ Inverso 5’ AGTGTCAACAACGTATCTACCA 3’ Diretto 5’ ACGTCAACATTGTTCACCAGG 3’ Inverso 5’ AGTATCGACGACGTATCTACCC 3’ Diretto 5’ TGGCCATTTCAATTGAAATTTCC 3’ Inverso 5’ AGTCTCAACAACATATCTACCA 3’ Taglia amplificato PCR Temperatura di ibridazione 1.033 bp 58°C 990 bp 58°C 1.100bp 58°C 876 bp 58°C Primers, dimensioni in paia di basi (bp) dei prodotti di PCR attesi e temperatura di ibridazione. 4
- Page 1 and 2: Progetto PRAL 2003/14 Impiego di li
- Page 3 and 4: SOMMARIO Il presente progetto è il
- Page 5 and 6: cRA-Unità di ricerca per le produz
- Page 7 and 8: di ossigeno iniziale , però, è pi
- Page 9 and 10: Foto 2 Foto 3
- Page 11 and 12: Foto 5 11
- Page 13 and 14: Risultati delle prove sperimentali
- Page 15 and 16: ANALISI DEI VINI PROVA MS (Tabella
- Page 17 and 18: ANALISI STATISTICA DEI COMPOSTI VOL
- Page 19 and 20: (Tabella 7) PROVA (MQ+MS) NO OSSIGE
- Page 21 and 22: (Tabella 9) PROVA (MQ+MS) CaPANTOTE
- Page 23 and 24: (Tabella 11) PROVA MQ OSSIGENO NO S
- Page 25 and 26: (Tabella 13) PROVA MQ CaPANTOTENATO
- Page 27 and 28: (Tabella 15) PROVA MS OSSIGENO NO S
- Page 29 and 30: (Tabella 17) PROVA MS CaPANTOTENATO
- Page 31 and 32: Figura n. 1 31
- Page 33 and 34: questo, importante e da tenere in c
- Page 35 and 36: Aspetti fermentativi: FERMENTAZIONI
- Page 37 and 38: Analisi chimico-fisiche sui vini (T
- Page 39 and 40: Analisi statistica dei composti vol
- Page 41 and 42: Risultati e discussione In tabella
- Page 43 and 44: nuovi approcci per la tipizzazione
- Page 45 and 46: MESSA A PUNTO DI UN NUOVO CRITERIO
- Page 47: Materiali e Metodi Ceppi, terreni e
- Page 51 and 52: Digestione di molecole di DNA con e
- Page 53 and 54: Digestione degli amplificati del si
- Page 55 and 56: FIGURE E TABELLE a) b) Figura 1. a)
- Page 57 and 58: Figura 2. Profilo di restrizione de
- Page 59 and 60: a) b) Figura 5. Profilo elettrofore
- Page 61 and 62: CONCLUSIONI Per una migliore identi
- Page 63: BIBLIOGRAFIA 1. Antunovics Z., Irin
SCHEMA DI AMPLIFICAZIONE DEI GENI AdH<br />
GENE Primers<br />
AdH1<br />
AdH2<br />
AdH3<br />
AdH5<br />
Diretto<br />
5’ ATCCCAGAAACTCAAAAAGGTG 3’<br />
Inverso<br />
5’ AGTGTCAACAACGTATCTACCA 3’<br />
Diretto<br />
5’ CAAGTTGGAGCATAAGGATATC 3’<br />
Inverso<br />
5’ AGTGTCAACAACGTATCTACCA 3’<br />
Diretto<br />
5’ ACGTCAACATTGTTCACCAGG 3’<br />
Inverso<br />
5’ AGTATCGACGACGTATCTACCC 3’<br />
Diretto<br />
5’ TGGCCATTTCAATTGAAATTTCC 3’<br />
Inverso<br />
5’ AGTCTCAACAACATATCTACCA 3’<br />
Taglia amplificato<br />
PCR<br />
Temperatura di<br />
ibridazione<br />
1.033 bp 58°C<br />
990 bp 58°C<br />
1.100bp 58°C<br />
876 bp 58°C<br />
Primers, dimensioni in paia di basi (bp) dei prodotti di PCR attesi e temperatura di ibridazione.<br />
4
Change language