VEQ in Diagnostica Microbiologica: Elicobacter pylori - V. Sambri
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VEQ in Diagnostica Microbiologica: Elicobacter pylori - V. Sambri
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Helicobacter <strong>pylori</strong><br />
Programma <strong>VEQ</strong>: perché, come e se…...
H.<strong>pylori</strong>: storia<br />
• Anni 30: batteri associati con danno alla mucosa<br />
gastrica<br />
• 1983: Marshall e Warren stabiliscono l<strong>in</strong>k fra<br />
H.<strong>pylori</strong> e patologia gastro<strong>in</strong>test<strong>in</strong>ale nell’ uomo<br />
• 2005: NOBEL PER LA MEDICINA A<br />
MARSHALL E WARREN<br />
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H.<strong>pylori</strong>:epidemiologia<br />
•Paesi <strong>in</strong> via di sviluppo: ~ 80% popolazione <strong>in</strong>fettata<br />
•Occidente: ~ 50% popolazione <strong>in</strong>fetta<br />
•Malattia solo nel 10 - 20 %<br />
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PU GCA<br />
H.<strong>pylori</strong>:patogenesi<br />
Gastrite Acuta<br />
Gastrite Cronica<br />
Atrofia<br />
Metaplasia<br />
Displasia<br />
CG<br />
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MALT<br />
Settimane<br />
Mesi<br />
Anni<br />
Decenni
H.<strong>pylori</strong>:epidemiologia<br />
Fattori di rischio pr<strong>in</strong>cipali<br />
•età<br />
•difficoltà socio economiche<br />
•comunità chiuse<br />
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• Modalità di trasmissione<br />
– SCONOSCIUTA<br />
• ORO-FECALE<br />
• ORO-ORALE<br />
• GASTRO-ORALE<br />
H.<strong>pylori</strong>:epidemiologia<br />
– Non conosciuti serbatoi naturali o animali reservoir<br />
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H.<strong>pylori</strong>: storia<br />
• Inizialmente assegnato al genere Campylobacter<br />
(C.<strong>pylori</strong>dis - C.<strong>pylori</strong>)<br />
• 1989: def<strong>in</strong>itivamente denom<strong>in</strong>ato Helicobacter<br />
<strong>pylori</strong><br />
• Attualmente molte specie nel genere Helicobacter<br />
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• Batterio Gram negativo<br />
• Spiralizzato (3µm x 0.5-1 µm )<br />
• 4-6 flagelli ad un polo cellulare<br />
• Forme coccoidi (reversibili?)<br />
H.<strong>pylori</strong>:morfologia<br />
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H.<strong>pylori</strong>:morfologia<br />
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H.<strong>pylori</strong>:patogenesi<br />
Vive <strong>in</strong> associazione con ospite e <strong>in</strong>fetta mucosa<br />
Deve essere capace di sfuggire agli effetti della risposta immune<br />
Differenti strategie (comb<strong>in</strong>ate?):<br />
•<strong>in</strong>tracellulare?<br />
•Immunomodulazione<br />
•variazione antigenica (localised sex)<br />
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H.<strong>pylori</strong>:patogenesi<br />
Caratteri istopatologici della patologia <strong>in</strong>dotta da H.<strong>pylori</strong><br />
•<strong>in</strong>filtrazione flogistica massiva della lam<strong>in</strong>a propria della mucosa gastrica<br />
•erosione dell’epitelio gastrico<br />
Due tipi: I e II<br />
Patologia più severa (topo) associata con Tipo I<br />
Cag patogenicity island (PAI): 40 kbp “alien DNA”<br />
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• H.<strong>pylori</strong> tipo I:<br />
• PAI cag contiene cagA<br />
• ag superficie cagA ~120 kDa<br />
• vacA e toss<strong>in</strong>a VacA (citotossica - vacuolizzante )<br />
– patologia più severa: PU, GCA, MALT, GC<br />
• H.<strong>pylori</strong> tipo II:<br />
H.<strong>pylori</strong>:patogenesi<br />
• non esprimono cagA<br />
• <strong>in</strong> genere non producono VacA (ma hanno vacA)<br />
– patologia più lieve: moderata gastrite (topo)<br />
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H.<strong>pylori</strong>:patogenesi<br />
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H.<strong>pylori</strong>:patogenesi<br />
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H.<strong>pylori</strong>:patogenesi<br />
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H.<strong>pylori</strong>:patogenesi<br />
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H.<strong>pylori</strong>:patogenesi<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
HpSA: ag fecale<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
ISTOLOGIA SU BIOPSIA GASTRICA<br />
Vantaggi: diagnosi suggestiva per presenza ed eradicazione<br />
Svantaggi: INVASIVA - lunga esecuzione - soggettiva<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
COLTURA SU BIOPSIA GASTRICA<br />
Vantaggi: diagnosi DEFINITIVA per presenza ed eradicazione -<br />
antibiogramma sull’isolato<br />
Svantaggi: INVASIVA - lunga esecuzione - lunga <strong>in</strong>cubazione<br />
microrganismo “fastidioso”<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
pH<br />
UREASE TEST SU BIOPSIA GASTRICA<br />
Vantaggi: RAPIDITA’ - basso costo -semplicità<br />
Svantaggi: INVASIVA - specificità? -sensibilità?<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
Diverse metodiche con differenti vantaggi e svantaggi:<br />
•EIA IgG - IgA<br />
•Immunoblott<strong>in</strong>g IgG - IgA<br />
•EIA o WB con antigeni H.<strong>pylori</strong> specifici nativi o ricomb<strong>in</strong>anti<br />
NON INVASIVA<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
Vantaggi e svantaggi:<br />
•automatizzabile<br />
•basso costo<br />
•ripetibile<br />
•specifictà ? (>50 % positivi <strong>in</strong> blood donors)<br />
•<strong>in</strong>sensibile alla terapia (paired samples > 6 mesi)<br />
•stato immune (IgA?)<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
Vantaggi e svantaggi:<br />
•specificità<br />
•significato dei s<strong>in</strong>goli antigeni<br />
•ripetibile<br />
•costo<br />
•<strong>in</strong>sensibile alla terapia<br />
•stato immune (IgA?)<br />
•esecuzione manuale (tempo - complessità)<br />
•<strong>in</strong>terpretazione (bande H.<strong>pylori</strong> specifiche)<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
Vantaggi e svantaggi:<br />
•specificità<br />
•sensibiltà<br />
•Tipo I<br />
•ripetibile<br />
•terapia (paired sera)<br />
•automatizzabile<br />
•costo<br />
•Tipo II ?<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
Vantaggi e svantaggi:<br />
•specificità<br />
•sensibiltà<br />
•Tipo I<br />
•ripetibile<br />
•rapidità<br />
•costo<br />
•Tipo II ?<br />
•terapia<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
HpSA: identificazione di antigeni H.<strong>pylori</strong> nelle feci<br />
•Vantaggi:<br />
•facilità del prelievo (non <strong>in</strong>vasivo)<br />
•semplicità esecuzione (EIA e IC)<br />
•rapidità esecuzione<br />
•sensibilità alla terapia<br />
•Svantaggi:<br />
•costo elevato<br />
•necessità di ripetere prelievo (serie)<br />
•specificità<br />
•sensibilità (IC)<br />
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H.<strong>pylori</strong>:diagnosi<br />
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H.<strong>pylori</strong>:terapia<br />
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Caratteristiche del materiale fornito<br />
• Tecniche impiegate per la valutazione dei<br />
campioni <strong>VEQ</strong>:<br />
– H.<strong>pylori</strong> H. <strong>pylori</strong> (ag ag. . Fecale)<br />
• EIA, immunocromatografia<br />
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Caratteristiche del materiale fornito<br />
• matrici fecali (pool) da pazienti cl<strong>in</strong>icamente sani (soggetti con breath test e<br />
EGD negativi)<br />
– addizionate (peso/peso) con sospensioni batteriche di diversi ceppi di H.<strong>pylori</strong><br />
cresciuti <strong>in</strong> vitro <strong>in</strong> terreno liquido e purificati (ceppi selvaggi da paziente e di<br />
collezione ATCC e CCUG): positivi.<br />
– non addizionate: negativi<br />
• matrici fecali (s<strong>in</strong>golo paziente) cl<strong>in</strong>icamente <strong>in</strong>fetti da Hp e con conferma<br />
breath test e EGD<br />
• solubilizzazione parziale con NaCl 0.9% e suddivisione <strong>in</strong> provetta del<br />
quantitativo richiesto<br />
• Conservazione a -80°C f<strong>in</strong>o alla spedizione (dry ice)<br />
• Nuova verifica del materiale (su controcampione) a spedizione avvenuta<br />
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Andamento temporale dei profili analitici<br />
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Profili per anno di esercizio<br />
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Metodiche usate per anno di esercizio<br />
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• Campioni <strong>in</strong>viati: 22<br />
– Hp positivi 12<br />
– Hp negativi 10<br />
• Risultati concordanti EIA: 92%<br />
• Risultati concordanti IC: 80%<br />
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Risultati
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