Controllo della droga Affidabilità di utilizzo nella ... - Farmaciaunina2.it

Controllo della droga Affidabilità di utilizzo nella pratica terapeutica
interesse scientifico, economico e legislativo
comprende una serie di esami che servono a determinare l’identità e la
qualità del prodotto e certificare la sua risposta agli standard di legge.
DROGA
sicurezza efficacia
costante riproducibilità degli effetti farmacologici

Controllo della droga
Identità
idoneità all’uso
affidabilità
efficacia
Qualità
qualità sensoriale
complesso delle caratteristiche organolettiche
molteplicità di elementi che insieme concorrono alla soddisfazione delle
esigenze espresse ed inespresse del cliente.
sicurezza
garanziachelapiantautilizzatasiariconosciutacomesicuraechesiadella
specie/varietà contenente le sostanze funzionali necessarie.
salubrità
1. assenza di contaminazione microbica
2. assenza di contaminazione chimica
3. assenza di contaminazione da corpi estranei
qualità chimico-biologica
composizione quali-quantitativa del contenuto in sostanze funzionali

Siti di approvvigionamento di una DROGA
piante spontanee
piante coltivate
qualità variabile
La coltivazione di piante medicinali
quasi totalità delle specie in commercio
Elementi limitanti
• Elevato costo manodopera
• Difficoltà nel reperire il materiale vivaistico
ha permesso miglioramenti quantitativi e qualitativi
Quando è preferibile l’ottenimento delle droghe da specie spontanee?
1. I popolamenti naturali interessano aree non impervie e facilmente accessibili
2. Scarsa richiesta del mercato
3. Difficile coltivazione
4. Costi elevati

Droghe provenienti da piante spontanee o coltivate: vantaggi e svantaggi
Piante spontanee Piante coltivate
Disponibilità In diminuzione In aumento
Controllo di qualità Scarso Elevato
Identificazione botanica Non sempre attendibile Attendibile
Rifornimento Instabile Stabile
Resistenza ai parassiti Maggiore Minore
Miglioramento genetico Non possibile Possibile
Manipolazione agronomica Non possibile Possibile
Manipolazione post-raccolta Non accurata ed immediata Immediata
Raccolta Manuale Meccanica
adulterazione possibile impossibile

materiali da pianta medicinale
mancanza di omogeneità procedure per un corretto campionamento
Campionamento di materiali in bulk
Ispezionare il contenuto di ogni singolo imballaggio
Controllo delle condizioni fisiche di imballaggio
Lotto da 5 campioni Lotto da 6-50 campioni
1 unità 5 unità
verifica di eventuali difetti influenzanti
la qualità e la stabilità del contenuto
Lotto da n° > 50 campioni
10% del n° campioni

Ispezionare il contenuto di ogni contenitore
Controllo di:
verifica della conformità
con la specifica monografia FU
- Caratteristiche organolettiche (aspetto, colore, odore)
- Modo in cui il materiale si presenta (intero, tagliato, frantumato, compresso)
- Uniformità, presenza di corpi estranei o altri segni di deterioramento
- Presenza di insetti
- Presenza di parti provenienti da un contenitore di bassa qualità o rovinato
contenitore
parte superiore
parte mediana
parte inferiore
3 campioni di massa uniforme
mix
Campione unico
Granulometria
Identità e impurezze
Umidità relativa e ceneri
Titolo dei principi attivi
Campione medio
Campione finale
medesima procedura

Campione finale
Scopi:
categorizzazione
Esame macroscopico
Esame microscopico
1. Verificare eventuali sofisticazioni;
2. Accertare deterioramenti;
3. Controllare l’attività biologica.
Esame dei caratteri morfologici
Esame visivo
Esame dei caratteri organolettici
Standard di riferimento di campioni
autenticati con qualità conforme ai
requisiti di farmacopea

controllo morfologico
Spesso le droghe vegetali corrispondono morfologicamente alla descrizione
farmacognostica ma gli effetti farmacologici non sono sufficienti per una loro utilizzazione
in campo terapeutico.
Cause:
1. Raccolta della droga in periodo diverso dal tempo balsamico;
2. Presenza nella droga di parti della pianta con minor contenuto o prive di principi
attivi;
3. Invecchiamento eccessivo della droga;
4. Cattiva conservazione;
5. Presenza di chemotipi che vengono confusi con la specie officinale

controllo morfologico
Esame visivo
Uragoga ipecacuanha
• emetico
• espettorante
ricerca
radice
i caratteri botanici identificativi della pianta e in
particolare della droga
gli elementi di differenziazione rispetto ad altre
specie dello stesso genere
anelli meno
distanziati e
più marcati
≠
Uragoga granatensis

Morfologia allo stato secco delle droghe vegetali
Radice: parte sotterranea della pianta, serve per fissare la pianta al terreno.
assenza: gemme, foglie, nodi ed internodi
morfologia allo stato secco: forma cilindrica o conica, grinzose, senza nodi e senza
traccia di licheni in superficie
Rizomi: fusti sotterranei cilindrici, più o meno rigonfi, carnosi, recanti
piccole squame che danno impianto a foglie, radici e gemme.
morfologia allo stato secco: corpo cilindrico allungato che mostra
impronte e cicatrici di foglie, germogli e radici.
Tuberi: organi sotterranei (fusti, rizomi, radici, foglie)
morfologia allo stato secco: corpo sferoidale con diametro > di quello
del rizoma che mostra impronte di germogli e radici.

Bulbo: corpisferoidalisotterraneicostituitialcentrodaunbrevefusto
(stipite) il quale è ricoperto da numerose foglie (squame) più o meno
carnose.
Del bulbo come droga si possono utilizzare le squame isolate (nella
forma di lamelle) o tutto il bulbo con radici o residui di queste.
Corteccia: parte esterna del fusto, dei rami e delle radici.
morfologia allo stato secco: corpo rugoso, scabro e colorato in pezzi
piatti, cilindrici o cannellati.
Legno: parte del fusto compresa tra cambio e midollo.
morfologia allo stato secco: corpo duro con struttura stratificata.
Erbe: pianta erbacea intera
morfologia allo stato secco: presentano parti di caule, fiori, foglie

Foglia: appendici ed espansioni dei fusti con funzione respiratoria.
morfologia allo stato secco: le foglie secche si differenziano sulla base
di alcuni elementi diagnostici 1) forma del lembo (ovale, lanceolata
etc); 2) forma del margine del lembo (dentata, crenata, liscia); 3)
forma delle nervature (uninervia, parallelinervia); 4) presenza o meno
del picciolo (foglia sessile).
Fiore: organo deputato alla riproduzione. Può avere un peduncolo (o
picciolo) o esserne privo (fiore sessile). Può essere solitario (isolato) o
riunito in infiorescenza (racemo, pannocchia, corimbo).
morfologia allo stato secco: facile frantumazione.
Frutto: trasformazione dell’ovario dopo l’avvenuta fecondazione e
conseguente maturazione.
morfologia allo stato secco: si può utilizzare la buccia o epicarpo,
parte carnosa o mesocarpo, peduncolo o picciolo o il frutto nella sua
interezza.

Seme: ovulo trasformato dopo la fecondazione, costituito da un
guscio e da una mandorla.
morfologia allo stato secco: corpoduro,avoltecoriacee,diforma
diversa, colorati, con peluria (in alcuni casi).
Tallo: corpo non differenziato dei vegetali inferiori.
morfologia allo stato secco: espansioni filiformi o membranose
ramificate (alghe, licheni) o corpi spugnosi diversi per volume ed
aspetto (fungo)
Galla (o cecidio): formazione patologica che si forma quando un
parassita insedia su di un organo vegetale il quale, sotto stimolo del
parassita, si sviluppa in modo abnorme.
morfologia allo stato secco: corpi globosi, duri, pesanti, muniti di un
piccolo peduncolo basale, recanti o meno delle proiezioni
rotondeggianti in superficie.

uva ursina → trattamento omeopatico di cistiti ed infezioni alle vie urinarie
Arctostaphylos uva-ursi (L.) Sprengel
Buxus semperviris L.
Vaccinium uliginosum L.
droga vegetale = foglia coriacea (1-2 cm lunga, 0,5-1cm larga)
presenza di nervatura centrale e nervature secondarie ramificate
assenza di nervature secondarie ramificate
Foglia non coriacea
Vaccinium vitis ideae L.

anice stellato → stomachico, antispastico intestinale e carminativo
Illicium verum Hooker
droga vegetale = frutto con forma stellata (Ø 2-4 cm)
Frutti più piccoli e tossici
Illicium religiosum Sieb. Illicium parvifolium Merr.

Esame dei caratteri morfologici
aspetto
colore
1. Indicano se si tratta di
una droga organizzata o una droga non organizzata
(fiori, foglie, radici,
cortecce, semi, erba)
3. Evidenziano possibili alterazioni dovute a troppo lunga conservazione
(gomme, resine, latici, succhi)
2. Evidenziano possibili alterazioni dovute a non completo essiccamento
insetti e muffe
sbriciolamento di droghe fragili
ingiallimento del parenchima clorofilliano
scolorimento dei fiori

Esame dei caratteri organolettici
odore
sapore
utile nell’identificazione di piante contenenti oli essenziali
riconoscimento
indicazioni sullo stato di conservazione
dolce amaro astringente acre/irritante
Stevia rebaudiana
Glycyrrhiza glabra
Genziana Lutea
droghe tanniche droghe contenenti
saponine
Krameria trianda (ratania)
Valeriana officinalis
erba dei gatti
Panax ginseng

Esame microscopico
mette
in evidenza
PRESENZA
FORMA
DIMENSIONI
QUANTITÀ
di
cellula o inclusioni cellulari
epidermica
secretrice
fibrosa
sebacea
etc…
ossalato di calcio
amido
goccioline di olio

Esame microscopico
Trattamento preliminare
campione rappresentativo del materiale
ammorbidimento in atmosfera umida o per immersione in acqua
Piccole quantità
Grosse quantità Essiccatore con acqua
provetta
Corteccia, legno e altre parti compatte e dure
carta da filtro
cotone idrofilo inumidito con acqua
Immersione in acqua o in una miscela acqua/EtOH/glicerolo (1:1:1)
Over night

1.
2.
Preparazione del campione
Materiali in polvere
siringa con acqua
acqua, glicerolo/EtOH o cloralio idrato
polvere
vetrino copri-oggetto
Inumidire la punta di un ago con acqua e immergerla nella polvere
3. Trasferire una piccola quantità che aderisce alla punta dell’ago nella goccia posta sul vetrino
4. Se si formano bolle d’aria, far bollire su una piccola fiamma finché l’aria sia stata
completamente rimossa

1.
Preparazione del campione
Tessuti superficiali di foglie e fiori
Far bollire foglie sottili su di un vetrino in modo da ottenere frammenti trasparenti
2. Tagliare un pezzo di foglia in due porzioni
3. Rivoltare una porzione di foglia e aggiungere cloralio idrato
4. Osservare le due superfici al microscopio
Nel caso di foglie più spesse la chiarificazione dei frammenti si ottiene mediante ebollizione con cloralio idrato in
una provetta.
Nel caso di foglie carnose è necessario asportare la parte superiore ed inferiore dell’epidermide.
Petali e sepali fiorali possono essere trattati alla stregua di foglie sottili.

Preparazione del campione
Sezioni
1. Scegliere dei pezzi rappresentativi del materiale che deve essere esaminato
2. Tagliare i pezzi scelti in frammenti di adeguata lunghezza
3. Con una lametta, preparare delle sezioni oblique o ortogonali e sezioni radiali o tangenziali
inclusione in paraffina
sottili e uniformi
5-25 μm
4. Trasferire le sezioni in EtOH (150 g/L)
5. Preparare i vetrini
colorazione
per differenziare i diversi tessuti
cloruro di zinco iodato
legno
sughero

La presenza di certi contenuti cellulari, quali granuli di amido, granuli di aleurone, plastidi, grassi
ed oli, può rendere le sezioni non traslucide e oscurare certe caratteristiche
Impiego di solventi atti a chiarificare tali strutture
La sezione è così resa più trasparente e sono rilevabili i dettagli della sua struttura.
Cloralio idrato – dissolve i granuli di amido, igranuli di aleurone, iplastidi e gli oli volatili.
Dilata i tessuti collassati senza deteriorare la parete cellulare. Permette di evidenziare
l’ossalato di calcio e piccoli cristalli
Lattofenolo – rivela parassiti come bachi e nematodi. Evidenzia l’ossalato di calcio e i granuli
di amido. Dissolveilcarbonatodicalcio.

Esame microscopico riconoscimento delle droghe triturate o polverate
esecuzione di semplici reazioni per evidenziare specifiche strutture
granuli di amido in presenza di soluzione di iodio
cellulosa in presenza di soluzione iodurata di cloruro di zinco
pareti cellulari lignificate per imbibizione con fluoroglucina ed una goccia di HCl
mucillagini in presenza di tionina
mucillagini in presenza di inchiostro di china

Esame microscopico riconoscimento delle droghe triturate o polverate
osservazione di elementi distintivi della droga
-Forma delle cellule epidermiche e degli stomi;
-Presenza di peli protettori e/o ghiandolari;
-Ossalato di calcio;
-Tessuto lacunoso spugnoso
-Presenza di granuli di polline;
-Antere;
-Tessuti del calice, della corolla, dell’ovario
-Albume,
- Presenza di goccioline oleose;
- Presenza di cellule dell’endosperma
- Sughero,
- Fibre di amido;
- Ossalato di calcio
- Raggi midollari

L’osservazione microscopica consente di differenziare droghe appartenenti alla stessa
famiglia e contenenti gli stessi principi attivi.
Belladonna Giusquiamo Stramonio
peli unicellulari con
capocchia pluricellulare;
peli pluricellulari con
capocchia unicellulare;
sabbia cristallina di
ossalato di calcio
peli pluricellulari lunghi;
prismi di ossalato di calcio
peli
verrucosa;
a parete
druse
calcio
di ossalato di

sofisticata con
Bardana → depurativo epatico e cutaneo
Arctium lappa
Atropa belladonna
droga vegetale = radice
presenza di amido e cellule sabbiose;
assenza di ossalato di calcio
presenza di ossalato di calcio

L’identificazione delle caratteristiche morfologiche non è sufficiente per il controllo
farmacognostico di una droga in quanto non consente di riconoscere chemotipi diversi
di una stessa specie.
I chemotipi sono caratterizzati dall’avere identiche caratteristiche morfologiche ma
differente composizione chimica.
chemotipi
uguale fenotipo
diverso genotipo

Qualità di China, contenuto alcaloideo, impieghi industriali e caratteristiche morfologiche
Specie Alcaloidi (%) Settore
Industriale
C. ledgeriana 4-17 Farmaceutico
(chinina)
C. calisaya 0-6 Liquoristico
(aperitivi)
C. Officinalis 2-8 Liquoristico
(aperitivi)
C. succirubra 4-8 Farmaceutico
(preparazioni
eupeptiche # )
*diametro; **spessore
# eupeptico = sostanza che aumenta l'appetito e facilita la digestione
colore dimensioni Rughe
longitudinali
Giallo 20-40 mm*
2-6 mm**
Giallo 15-25 mm*
2-5 mm**
Grigio Fino a 12
mm*
1-1.5 mm**
Rosso 20-40 mm*
caratteri della corteccia
2-6 mm**
Fessure trasversali
++ +
++ +
- +++
++ +

Analisi chimico-fisiche
determinazione dell’umidità
determinazione delle ceneri
determinazione della viscosità
Analisi dei principi attivi

Analisi chimico-fisiche
determinazione dell’umidità
quantità di acqua residua dopo l’essiccamento
Èunindicedibuonaconservazionepoichél’acquapuòfavorirelereazionienzimatiche
che portano all’inattivazione dei principi attivi o favorire la proliferazione di microrganismi.
Farmacopea Europea – metodo della determinazione della perdita di acqua per essicamento
Quantità pesata di droga polverata
105 °C, 1h
PESO
Il procedimento è ripetuto finché non si
ottiene un peso costante.

Analisi chimico-fisiche
determinazione delle ceneri
importante per il riconoscimento di eventuali contaminazioni o sofisticazioni con materiale inorganico
Il residuo che rimane dopo che la droga è stata sottoposta a combustione, la cenere, è
determinato mediante tre metodi distinti:
1. Ceneri totali;
2. Ceneri insolubili negli acidi;
3. Ceneri solubili in acqua.
Ceneri totali (cenere fisiologica – dalla pianta - + cenere non fisiologica – residui di corpi estranei-)
Quantità pesata di droga polverata
muffola; T 800 -1000 °C
Peso
residuo di ossidi e
carbonati di Na, K,
Ca, Mg, etc…
Peso

Ceneri insolubili negli acidi
MaterialecherimanedopocheleceneritotalisonostatesottoposteaebollizioneconHCl
diluito e dopo che questo materiale è stato sottoposto a combustione.
Determinazione della quantità di silice presente nel campione (sabbia, terra silicea)
Ceneri solubili in acqua
Risultano dalla differenza tra il peso delle ceneri totali e il peso del materiale che rimane dopo
che le ceneri sono state trattate con acqua.

Analisi chimico-fisiche
viscosità
resistenza allo scorrimento presentata da una massa di fluido in moto
dipende da
forze di coesione delle molecole del fluido che impediscono il
libero scorrimento dei vari strati.
importante per le droghe non organizzate quali gomme e mucillagini* che in acqua formano
sospensioni colloidali
*Gomme = essudati viscosi che si formano nella pianta in risposta ad un trauma
Mucillagini = normali costituenti cellulari localizzati in cellule mucillaginose che si trovano
frequentemente nel tegumento del seme

Analisi chimico-fisiche
Analisi dei principi attivi
La determinazione dei principi attivi presenti nelle droghe vegetali è oggi compiuta
mediante metodi analitici strumentali altamente sensibili e specifici.
TECNICHE CROMATOGRAFICHE
TECNICHE SPETTROSCOPICHE

Saggi biologici
Test eseguiti, sia in vivo che in vitro, su un mezzo biologico
Saggi di controllo o di sicurezza
insieme dei saggi che escludono la nocività
per l’uomo di un prodotto
Saggi di riconoscimento delle droghe
in vivo (tessuto, organo, organismo vivente)
Saggi di attività
in vitro einvivo (per sostanze di cui non è
nota l’attività)
valutazione qualitativa
Dosaggi biologici
valutazione quantitativa
saggi utilizzati per la titolazione dei principi attivi
presenti in una droga o in una preparazione
farmaceutica mediante misura della sua attività
biologica.

Dosaggi biologici: quando?
1. Quando è ignota la struttura chimica della sostanza responsabile dell’attività della droga;
2. Quando il dosaggio chimico determinano un’alterazione del principio attivo;
3. Quando il dosaggio chimico falsa il valore reale dell’attività biologica;
4. Quando la sensibilità dei metodi chimici è inferiore a quella dei metodi biologici.
valutazione qualitativa
valutazione quantitativa
standard campione reattivo
campione
di riferimento
oggetto di
valutazione biologica
animale o sua parte

obiettivo
Saggio biologico
determinazione dell’attività, non della quantità, del pool di sostanze presenti nella droga
comparazione dell’attività della droga in esame con un farmaco di riferimento ad
attività nota e costante
estratto idroalcolico concentrato fino a secchezza
dissoluzione
H 2O
gomma arabica
somministrazione
per os
per via introperitoneale
per via intramuscolare
per via sottocutanea
in
(5 mL/Kg) ratti o topi
(campione omogeneo, scelto in modo
casuale ai fini della rappresentatività;
campione, numeroso ai fini
dell’attendibilità)

iniettata
Edema da carragenina – metodo per valutare l’attività antiinfiammatoria delle droghe vegetali
edema (mL)
DROGA
30’/60’
carragenina (1% in NaCl 0,9%)
aponeurosi plantare di una delle zampe inferiori del ratto
Valutazione del volume della zampa
mediante un misuratore differenziale di volume, il pletistometro
prima della iniezione, a 30’, 60’…4h
standard droga 1 droga 2
0 1 2 3 4
tempo (h)
Se la droga riduce l’edema in tutto il time course il
test è considerato positivo. Lo standard è
l’aspirina (300 mg/kg per os, riduzione del 40%).

Analisi tossicologiche
sono procedimenti atti a valutare la presenza di
1. pesticidi: sostanzevolteadistruggereorespingerelespecieanimaliovegetaliche
danneggiano o comunque interferiscono negativamente con la produzione, la
trasformazione e la conservazione di droghe vegetali.
Regolatori di crescita
Esfolianti
disseccanti
2. metalli pesanti (Pb, Cd, Cu, Hg, Mn): sostanze che interferiscono con le tappe
metaboliche che portano alla formazione dei principi attivi.
3. carica microbica
4. micotossine: metaboliti secondari prodotti da funghi filamentosi microscopici (muffe)
che possono esercitare un’azione tossica sull’uomo e sugli animali da allevamento.

analisi dell’identità della droga
CONTROLLO DI QUALITÀ DELLE DROGHE
analisi quali-quantitative dei principi attivi contaminazione
AUTENTICAZIONE DELLA DROGA
standard qualitativi sicurezza d’impiego
sofisticazione

solventi
selettivi
droga
estrazione
frazionamento
controllo
solventi
non selettivi
parassiti
fitopatologico
botanico
chimico
impurità
purificazione
principi attivi
qualità
quantità
pesticidi, metalli pesanti
impurezze
controllo
identificazione