Sbobinature complete Anatomia Patologica - SunHope

Se abbiamo dei risultati dubbi, ricorriamo alla biologia molecolare cioè adottiamo una tecnica
di ibridazione in situ cioè andiamo a cercare direttamente il gene per vedere se è amplificato o
meno. Il problema è che a volte le cellule possono essere tetraploidi, aneuploidi cioè avere un
contenuto di DNA maggiore e quindi io posso trovare questa sequenza pluriespressa nella
cellula, però si tratta di una falsa iperesppressione legata all'aumento del contenuto di DNA.
Cosa facciamo? Qui vedete due colori e cioè il verde (isocianato di fluorescina) ed il rosso
(rodamina). Andiamo a cercare una sequenza del DNA sempre conservata, che non si altera
neppure nel cancro ad esempio qualcosa che ha a che fare con il tratto prossimale dei telomeri
o qualsiasi altra sequenza che non si altera nel cancro e che mi da un segnale verde.
Io mi devo trovare in una cellula due segnali verdi e due segnali rossi in condizioni normali; se
invece troverò due segnali verdi e 9 o 10 segnali rossi, allora diremo che l'amplificazione è
notevole. Per motivi economici dobbiamo riservare questa tecnica ai casi dubbi.
Cosa significa ibridazione in situ? Se vogliamo identificare un gene dobbiamo disporre di una
sequenza di DNA complementare alla sequenza cercata e leghiamo questa sequenza sonda ad
un tracciante fluorescinato.
Prima di tutto dobbiamo denaturare il DNA della cellula in modo da ottenere due monoidi (si
denatura col calore, con degli acidi ecc).
Una volta ottenuti i monoidi, la sequenza sonda ha una forte affinità per il suo omologo e
poiché c'è una sostanza fluorescinata che funge da sistema di rilevazione, noi troveremo quindi
la sequenza in questo modo.
E' definita ibridazione perchè avviene un ibrido tra la sequenza originale e la sequenza sonda.
Da alcuni anni si è scoperto che l'HER-1 ha un ruolo nella cancerogenesi del colon-retto ed ha
un significato prognostico notevole; c'è una minoranza di cancri del colon-retto che esprime
questa amplificazione e che quindi si avvale di questa terapia biologica.
Qual è il senso della terapia biologica? Bloccare in qualche modo questi recettori.
I recettori li possiamo bloccare con:
- inibitori delle tirosin-chinasi
- anticorpi rivolti contro questi recettori, in modo da bloccare i recettori. Abbiamo avuto
risultati nel colon-retto, invece lo stomaco è una new entry cioè è entrato nella realtà da un
anno, altri tumori stanno in fase di studio
Parliamo dei fattori di crescita.
A livello sperimentale si tolsero i fattori di crescita dal mezzo di coltura perchè senza questi
fattori il cancro si dovrebbe arrestare. Si scoprì che le cellule neoplastiche attraverso la
selezione clonale si producono loro i fattori di crescita in maniera autocrina o paracrina, per
esempio uno di questi fattori è il TGF perchè si riteneva che lo producessero solo le cellule
tumorali. Si scoprì poi che il TGF può essere prodotto anche dalle cellule dello stroma
connettivale che accompagna il cancro.
Altri fattori di crescita sono quelli legati al microambiente cioè quelli che incidono sui fibroblasti
e sul tessuto connettivale e qui abbiamo: l'IGF (insuline-like growth factor), l'EGF (epidermal
growth factor) e tutta una serie di recettori e fattori di crescita in grado di determinare delle
modificazioni dello stroma connettivale del cancro, tale da favorire lo sviluppo del cancro
stesso.
Per esempio il TGF ha due facce, a seconda delle condizioni in cui si trova, degli stimoli che ci
sono nell'ambiente può agire con un'attività di soppressione o con un'attività pro-oncogenica,
quindi favorendo l'angiogenesi e favorendo lo sviluppo e la proliferazione del tumore.
I rimodellatori della cromatina appartengono a diverse classi. Cosa vuol dire rimodellatore è
propriamente la disposizione del filamento rispetto al nucleosoma ed ha una funzione
importantissima perchè può essere accessibile o non accessibile ai fattori di trascrizione.
Queste proteine che si chiamano rimodellatori della cromatina, favoriscono l'accessibilità o
meno di questa sequenza genica.
I fattori di trascrizione già li conoscete (dita di zinco, elica giro elica)
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