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la biochimica prima della «doppia elica» 57
formazione di un nuovo acido tricarbossilico, l’acido ossalomalico. La reazione avviene
anche in vitro in condizioni fisiologiche di temperatura e pH, ed è favorita dalla presenza
di metalli bivalenti come Ca 2+ eMg 2+ .Ilsale trisodico dell’acido ossalomalico così ottenuto
si dimostrò unpotente inibitore competitivo dell’aconitato-idratasi, l’enzima che
trasforma il citrato in isocitrato [118], ed inoltre agisce anche sulla isocitrato-(NADP + )deidrogenasi
in modo duplice. Saggiato sull’ossidazione dell’isocitrato la inibisce per
competizione con Ki dell’ordine 1 mM. Ma aggiunto all’enzima insieme ad NADPH e
cioè incondizioni di catalizzare la reazione inversa a quella ossidativa, anche l’ossalomalato
funziona da substrato e viene ridotto, dando origine ad un composto che perde la
sua proprietà inibente. Pertanto appare che il gruppo chetonico dell’acido ossalomalico
è responsabile dell’inibizione ossidativa perché silega al sito attivo dell’enzima, come se
fosse chetoglutarato, che èilsubstrato naturale della reazione inversa.
L’insieme di tali risultati permette di proporre l’acido ossalomalico come un nuovo
regolatore a livello molecolare della velocità diflusso del ciclo nei tessuti animali. Infatti
l’inibizione esercitata sull’aconitasi, che blocca il ciclo e produce accumulo di citrato,
può essere rimossa per l’intervento della isocitrato-deidrogenasi che in presenza di NADP
allo stato ridotto trasforma l’inibitore in un composto inattivo [118]. Se ciò non dovesse
avvenire si realizzerebbe la previsione del Collega Siliprandi secondo cui si tratta di un
inibitore «suicida».
Ricerche più recenti hanno messo in evidenza che l’ossalomalato agisce anche su alcune
culture cellulari inibendone la crescita probabilmente a causa del blocco del ciclo.
In tali condizioni, su varie cellule in cultura sono state trovate variazioni del metabolismo
lipidico e protidico che sono tuttora in corso di valutazione. Inoltre, sperimentando
su cellule 3T3-L1, una linea di fibroblasti di origine fetale che tendono a trasformarsi
in adipociti, si osservò, per aggiunta di ossalomalato alle culture un fenomeno inatteso
a livello cellulare e cioè stimolo della trasformazione dei fibroblasti in adipociti maturi.
Risultati che nel loro insieme suggeriscono una tematica di maggiore apertura che ci risulta
in corso di sperimentazione da parte di un giovane gruppo esperto in biotecnologie.
Analoga dedizione ai nuovi problemi derivati dal ciclo è stata già realizzata da numerosi
ricercatori anglosassoni che hanno continuato a dedicare la loro attività diricerca a vari
argomenti legati al ciclo non solo relativi al campo dell’enzimologia, ma proiettati verso
problemi di attualità «post doppia elica» quali la genetica molecolare, l’ingegneria proteica,
la regolazione dello sviluppo e l’evoluzione dell’organizzazione cellulare. I risultati
ottenuti sono raccolti in una piacevole edizione curata da J. Kay e P. D. N. Weitzman
[119] a ricordo di un Simposio tenutosi a Leichester, il cui titolo non poteva esser
scelto più pertinente: «Ha mezzo secolo e gira ancora». Una ben meritata conferma
della traccia lasciata dalle scoperte di Krebs nella comunità biochimica internazionale.
14. Considerazioni conclusive
Giunti alla fine del periodo prescelto, in attesa di esprimere un commento sugli
argomenti riportati nelle pagine precedenti, è sorto un dubbio che ha fermato la mia
attenzione proprio sull’evento finale, la scoperta della «doppia elica». Mi sono chie-