pag. 143-184 - Siapec

RIUNIONE PRIMAVERILE SIAPEC-IAP 

Napoli, 27-30 MAGGIO 2004

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Riunione Primaverile SIAPEC – Divisione Italiana IAP 

Napoli, 27-29 Maggio 2004 

COORDINATORI DEL COMITATO SCIENTIFICO E ORGANIZZATORE 

Gaetano De Rosa (Napoli) 

Oscar Nappi (Napoli) 

COMITATO SCIENTIFICO 

Bruno Agostini ( Napoli) 

Pasquale Angrisani (Salerno) 

Gerardo Botti (Napoli) 

Angelo Paolo Dei Tos (Treviso) 

Luigi Di Bonito (Trieste) 

Roberto Fiocca (Genova) 

Pietro Gallo (Roma) 

Giovannino Massarelli (Sassari) 

Vito Ninfo (Padova) 

GuidoPettinato (Napoli) 

Luigi Ruco (Roma) 

Fabio Maria Vecchio (Roma) 

COMITATO ORGANIZZATORE 

Arturo di Blasi (Benevento) 

Vittoria Donofrio (Napoli) 

Umberto Ferbo (Avellino) 

Giacinto Forte (Napoli) 

Francesco Maria Maiello (Napoli) 

Pietro Micheli (Napoli) 

Ferdinando Quarto (Castellammare di Stabia) 

Renato Rossi (Caserta) 

Raffaele Rossiello (Napoli)

Corsi Brevi 

INDICE PER ARGOMENTI 

I Linfomi Extranodali. Profili diagnostici. “Peculiarità di sede”. Mimics pag. 147 

Nuovi orizzonti della Citologia: dalla “Citodiagnostica” alla “Citodiagnostica biotecnologica” ” 158 

L’Apoptosi. Dai meccanismi molecolari agli aspetti applicativi ” 163 

Comunicazioni libere 

1. Citodiagnostica, Ematopatologia, Patologia mammaria, Biologia molecolare ” 167 

2. Patologia polmonare. Patologia varia ” 173 

3. Procedure tecniche, Patologia gastroenterologica, Dermatopatologia ” 179 

Indice analitico per Autori ” 185

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PATHOLOGICA 2004;96:147-157 

Linfomi della tiroide 

F. Menestrina 

Anatomia Patologica, Università di Verona 

Anche se i dati a nostra disposizione sono di relativo significato 

epidemiologico, in quanto fanno riferimento a segnalazioni 

casistiche raccolte da singole istituzioni e non a studi epidemiologici 

effettuati su base geografica, i linfomi della tiroide sono 

neoplasie rare e sono nella stragrande maggioranza dei casi 

forme primitive; la diffusione alla tiroide di linfomi insorti in 

altre sedi è infatti un fenomeno di rara osservazione. I linfomi 

primitivi costituiscono all’incirca il 5% delle neoplasie 

tiroidee, nell’ambito dei linfomi extranodali rappresentano il 

7% e il 9% dei linfomi extranodali della regione testa-collo. La 

maggior parte dei linfomi appartengono alla linea B e cadono 

principalmente in due categorie: a) linfoma diffuso a grandi 

cellule (DLBCL); b) linfoma della zona marginale (MZL). 

Il DLBCL è l’entità relativamente più frequente e per il fatto 

che può essere associato, almeno focalmente, ad aree tipo 

MZL, è verosimile che talora rappresenti l’evoluzione verso 

l’alta malignità di un precedente MZL. In circa la metà dei casi 

tuttavia il linfoma non mostra una componente a piccole cellule 

ed è verosimile che insorga primitivamente come tale. Dal 

punto di vista morfologico non presenta aspetti diversi dai DL- 

BCL ad insorgenza linfonodale e il principale problema diagnostico 

è rappresentato dalla diagnosi differenziale con le neoplasie 

non linfoidi della tiroide. In quest’ultimo ambito le 

indagini immunoistochimiche rappresentano uno strumento 

essenziale per raggiungere una precisa definizione diagnostica. 

Il MZL è una forma di identificazione relativamente recente 

che condivide le stesse caratteristiche generali comuni ai 

MZL ad insorgenza nelle altre sedi extranodali. La fisiologica 

mancanza di tessuto linfoide associato alle mucose 

(MALT) nella tiroide è sopperita dalla presenza di un MALT 

acquisito nel contesto di una tiroidite autoimmune, linfocitaria 

o di Hashimoto. Le indagini immunoistochimiche possono 

essere particolarmente utili nella sua definizione: con 

l’uso combinato di citocheratine e di CD20 l’identificazione 

delle lesioni linfo-epiteliali è notevolmente facilitata. La differenziazione 

plasmacellulare può essere particolarmente 

marcata tanto da mascherare la componente linfocitaria e da 

indurre alla diagnosi, verosimilmente non adeguata, di plasmocitoma 

extrascheletrico. 

Dal punto di vista clinico sono per lo più in stadio I o II e presentano 

una discreta risposta alla terapia. Questa può essere 

rappresentata dalla chirurgia da sola, soprattutto nelle forme 

di MZL, o in associazione alla radio e alla chemioterapia. 

Anche altre forme di linfomi non-Hodgkin B possono localizzarsi 

alla tiroide, ma sono di riscontro notevolmente più 

raro. Di rilevanza quasi aneddotica sono le segnalazioni di 

linfomi ad immunofenotipo T. 

CORSO BREVE 

I Linfomi Extranodali. Profili diagnostici. 

”Peculiarità di sede”. Mimics 

MODERATORE: F. FACCHETTI, BRESCIA 

I linfomi del tratto gastrointestinale 

G. Pettinato 

Dipartimento di Scienze Biomorfologiche e Funzionali, Sezione 

di Anatomia Patologica e Citopatologia, Università 

“Federico II” di Napoli 

I linfomi extranodali appaiono essere di grande interesse dal 

momento che essi sono frequenti e vengono diagnosticati sia 

dal patologo generale che dall’ematopatologo. Molte delle più 

recenti classificazioni dei linfomi interessano proprio i linfomi 

extranodali riconoscendo importanti entità con diverse implicazioni 

cliniche e biologiche. La monografia che descrive la 

nuova classificazione WHO dei tumori dei tessuti linfoidi ed 

ematopoietici rappresenta una insostituibile fonte di informazioni. 

In questa classificazione più di dieci categorie di linfomi 

sono rappresentate da linfomi extranodali. 

Il tratto gastrointestinale (TGI) rappresenta la sede più frequente 

dei linfomi extranodali (4-18% nei paesi occidentali, più 

del 25% nei paesi del medio oriente); nello stomaco sono valutati 

come il 10% di tutte le lesioni maligne, nel piccolo intestino 

come il 30-50%, e nel grosso intestino come lo 0,2-0,5%). 

Verranno discussi tre casi paradigmatici di linfomi del TGI: 

1. Linfoma extranodale gastrico a cellule B della zona marginale 

del tessuto linfoide associato alla mucosa (MALT); 2. 

Linfoma mantellare intestinale (poliposi linfomatosa); 3. 

Linfoma a cellule T associato ad enteropatia (EATL). 

Linfoma gastrico della zona marginale tipo MALT 

Definizione 

Questo è un linfoma a cellule B di basso grado definito dalla 

sua ricapitolazione del tessuto linfoide intestinale esemplificato 

nelle placche di Peyer. Questo include follicoli/centri 

germinativi con il loro mantello, zone più periferiche marginali, 

plasmacellule e cellule B intraepiteliali. 

La grande maggioranza dei linfomi gastrici MALT è associata 

con infezione da Helicobacter pilori. 

– H. pylori origina l’accumulo di MALT (gastrite con follicoli). 

– H. pylori è trovato in associazione con i linfomi, sebbene i 

microrganismi siano più numerosi nella gastrite. 

– Le cellule T presenti rispondono al H. pylori e stimolano le 

cellule B che formano autoanticorpi. 

I linfomi gastrici MALT dovrebbero essere identificati per 

scopi clinici. 

– Molti linfomi gastrici MALT rispondono a terapia antibiotica 

eradicante l’H. Pylori (tempo medio per la remissione 

5 mesi, 3-18 mesi). 

– Trasformazione in linfoma a grandi cellule può verificarsi e 

questa è una ragione per il fallimento del trattamento antibiotico 

(insieme a disseminazione, casi H. pylori negativi, e 

alcune anormalità genotipiche/cariotipiche-vedi sotto). 

– I linfomi gastrici MALT sono indolenti e spesso le morti 

che si verificano avvengono per carcinomi piuttosto che 

per linfoma.

148 

Istopatologia del linfoma gastrico MALT 

– Infiltrato diffuso nella lamina propria con centri germinativi 

con o senza colonizzazione follicolare. 

– Infiltrazione e distruzione dell’epitelio criptico, cosiddetta 

lesione linfo-epiteliale (LEL). 

– Cellule della zona marginale/monocitoidi/simil-centrocitiche. 

– Piccoli linfociti B, plasmacellule (reattive o neoplastiche), 

sparsi immunoblasti. 

Lo studio immunofenotipico è critico nella valutazione degli 

infiltrati linfoidi gastrici per: 

– Stabilire la diagnosi di linfoma. 

– Stabilire l’origine B-cellulare (escludere un inusuale linfoma 

a cellule T). 

– Escludere linfomi a cellule B non-MALT che possono avere 

origine nel TGI. 

Immunofenotipo 

– CD 20+ CD79a+ CD22+ CD5- CD10- bcl-6- cyclin D1- 

IgM+ IgA-/+ IgD-. 

Alterazioni genetiche ed eventi molecolari di interesse pratico 

e biologico nel linfoma gastrico MALT – una corrente 

area di ricerca 

– La più comune anomalia cromosomica numerica è la trisomia 

3 (fino al 60%) ma questo aspetto non è specifico. 

– t(11;18)(q21;q21) coinvolgente i geni API2 (apoptosis 

inhibitor-2) e MALT1 (human paracaspase). 

– t(1;14)(p22;q32) coinvolgente i geni BCL10 e IgH. 

– Mutazioni del gene BCL10 e anormalità nella sua espressione. 

– t(14;18)(q32;q21) con riarrangiamento MALT1-IgH recentemente 

descritto in un subset di linfomi MALT (polmone, 

altri). 

– t(11;18)(q21;q21) presente in circa il 30% dei casi di linfoma 

gastrico MALT. Dimostrabile con la citogenetica classica, 

FISH & RT-PCR. 

– Quando presente, è di solito la sola anormalità citogenetica. 

– L’effetto biologico è correlato ad una diminuita apoptosi e 

all’attivazione di NF-kB, un fattore di trascrizione pleiotropico 

per molecole di sopravvivenza cellulare. 

– Il prodotto di fusione ma non API2 o MALT1 da soli attivano 

NF-kB. 

– Nei linfomi gastrici MALT la traslocazione è associata ad 

assenza di risposta agli antibiotici e a malattia disseminata. 

– È associata ad espressione nucleare anormale di BCL10. 

Linfoma a cellule del mantello (poliposi linfomatosa 

multipla) 

– Non tutti i linfomi del TGI sono di tipo MALT. 

– Linfomi “nodali” possono interessare sedi extranodali. 

– Le implicazioni clinico-terapeutiche di una diagnosi di 

linfoma a cellule mantellari vs. un MALT linfoma sono importanti. 

– La poliposi linfomatosa multipla è una entità clinico-patologica 

di solito associata con linfoma a cellule mantellari 

ma talvolta con linfoma follicolare, MALT e rari linfomi a 

cellule T. 

Istologia del linfoma a cellule mantellari del TGI 

– Infiltrazione monotona diffusa o vagamente nodulare di 

piccoli linfociti atipici con variabile irregolarità nucleare 

spesso attorno a centri germinativi “nudi”. 

– In alcuni casi colonizzazione dei centri germinativi con risultante 

aspetto di crescita follicolare. 

– In contrasto con altri linfomi a piccole cellule B, cellule neoplastiche 

trasformate (blasti) in genere non sono presenti. 


– Può essere presente infiltrazione dell’epitelio (LEL) mimando 

un linfoma MALT. 

Immunofenotipo 

– CD20+ CD 79a+ Cyclin D1+ IgD+ CD23- CD10- BCL6- 

Ciclina D1 

– L’overespressione di ciclina D1 nel linfoma mantellare è 

dovuta alla traslocazione t(11;14)(q13;q32) che coinvolge 

il gene ciclina D1 (BCL1, CCND1, PRAD1) e il gene IgH. 

– Con una buona immunofenotipizzazione con colorazione 

per ciclina D1, studi genotipici e di citogenetica convenzionale 

non sono richiesti (questi sono negativi in almeno 

il 25% dei casi). 

– La FISH è un metodo molto sensibile per documentare la 

traslocazione t(11;14). 

– Attenzione! L’espressione di ciclina D1 non è specifica per 

linfoma a cellule mantellari (una minoranza di mielomi 

con t(11;14), una variabile proporzione di HCL (no traslocazione), 

rari casi di B-CLL e linfoma marginale splenico). 

Poliposi linfomatosa multipla (classicamente rappresenta 

un linfoma a cellule mantellari) 

– Polipi multipli di grandezza variabile attraverso il TGI 

(stomaco al retto). 

– Grandi masse specialmente nell’area ileocecale. 

– Adulti-anziani, predominanza maschile. 

– Frequente ampia disseminazione. 

– Decorso aggressivo come altri linfomi a cellule mantellari; 

possono rispondere a chemioterapia di combinazione (riportata 

una sopravvivenza a 5 anni del 59%). 

Linfoma a cellule T associato a enteropatia (EATL) 

Definizione 

– Specifico sottotipo di linfoma intestinale a cellule T che 

occorre in associazione con la malattia celiaca (MC). 

Aspetti clinici 

– La più alta prevalenza di EATL si verifica in quelle aree 

con la più alta incidenza di MC. 

– L’età media alla diagnosi è 60 anni e c’è una moderata prevalenza 

maschile. 

– Molti pazienti hanno una corta storia di MC dell’adulto 

complicata da dolore addominale e perdita di peso; una 

proporzione minore ha una storia di MC fin dall’infanzia 

(malattia celiaca criptogenica o refrattaria). 

– La presentazione come una emergenza acuta con perforazione, 

ostruzione o emorragia, è comune; la prognosi è 

scarsa. 

Aspetti patologici 

– EATL è frequente nel digiuno, ma può aver origine in qualsiasi 

tratto intestinale; molti casi sono caratterizzati da ulcerazioni 

“infiammatorie” mucose multiple. 

– Le cellule neoplastiche sono in genere medio-grandi, con 

nuclei rotondi o angolari e nucleoli prominenti; una moderata 

quantità di citoplasma è di solito presente; occasionalmente 

il pleomorfismo cellulare è marcato e il tumore può 

mimare un ALCL o un HL; l’ulcerazione è comune e frequentemente 

si osserva una significativa componente di 

eosinofili, istiociti e altre cellule infiammatorie. 

– La mucosa non interessata caratteristicamente mostra atrofia 

villosa e linfocitosi intraepiteliale che è talvolta marcata. 

Immunofenotipo e genotipo 

– Le cellule neoplastiche mostrano positività citoplasmatica 

per CD3, e sebbene siano positive per TIA-1 (antigene granulare 

citotossico), sono negative per CD8 e CD4; i casi 

con grandi cellule anaplastiche sono caratteristicamente 

positivi per CD30.

CORSO BREVE: LINFOMI EXTRANODALI 

– Un subset di casi a cellule medio-piccole può mostrare una 

florida infiltrazione intraepiteliale di cellule positive per 

CD8 e CD56. 

– Studi genotipici hanno confermato il riarrangiamento monoclonale 

del gene TCR. 

– Una popolazione monoclonale di cellule T può essere dimostrata 

sia nel linfoma franco che nella mucosa apparentemente 

non interessata (low-grade intra-epithelial T-cell 

lymphoma). 

– Frequentemente associata con MC e EATL è la presenza di 

digiunite ulcerativa dove è stata dimostrata una popolazione 

abnorme di cellule T con perdita di CD8 e CD3 di superficie. 

– Una forma di sprue refrattaria, una atrofia villosa non responsiva 

alla dieta gluten-free, mostra anch’essa una popolazione 

abnorme di cellule T intraepiteliali. 

Conclusioni e aspetti pratici 

– Il linfoma MALT è frequentemente associato con l’infezione 

da Helicobacter pilori. 

– Il trattamento anti-Helicobacter ha basse probabilità di 

successo nei linfomi che comportano la traslocazione 

t(11;18). 

– La progressione verso un linfoma diffuso a grandi cellule 

B non è descritta in presenza della traslocazione t(11;18). 

– Il linfoma intestinale a celluleT associato ad enteropatia 

(EATL) è parte di uno spettro che include la digiunite ulcerativa 

e la sprue refrattaria. 

– Le anormalità fenotipiche in EATL possono essere riconosciute 

mediante l’immunoistochimica. 

Bibliografia 

Isaacson PG. Gastrointestinal lymphomas of T- and B-cell types. Mod 

Pathol 1999;12:151-8. 

Du M-Q, Isaacson PG. Gastric MALT lymphoma: from aetiology to 

treatment. Lancet Oncol 2002;3:97-104. 

Kinney MC, Swerdlow SH. Diagnosing extranodal lymphomas in the 

new millennium. 2003 Syllabus Short Course # 54. Washington D.C.: 

United States and Canadian Academy of Pathology 2003. 

Rooney N, Dogan A. Gastrointestinal lymphoma. Current Diagnostic 

Pathology 2004;10:69-78. 

Linfomi delle ghiandole salivari 

V. Stracca Pansa 

U.O. di Anatomia Patologica, Ospedale Civile, Venezia 

Linfoma non Hodgkin delle ghiandole salivari 

• Rappresenta il 5% dei casi dei linfomi extranodali e il 10% 

delle neoplasie delle ghiandole salivari minori. 

• Quasi sempre a fenotipo B. 

• L’istotipo più frequente è il linfoma tipo MALT, seguito dal 

linfoma follicolare e dal linfoma a grandi cellule diffuse. 

• Più raramente sono stati segnalati il linfoma a T cellule periferiche, 

T/NK e linfoma di Burkitt. 

• Pazienti senza malattie autoimmuni possono sviluppare 

tutti i tipi istologici dei linfomi non Hodgkin. 

• Di questi, il linfoma follicolare è il più comune, probabilmente 

originario dai linfonodi intra- o perighiandolari. 

• Non sono state dimostrate differenze significative nella traslocazione 

t (14;18) rispetto ai linfomi follicolari di altre 

sedi. 

Linfoma follicolare della ghiandola salivare (Kojima, 2001) 

• Su 20 casi di linfoma primitivo delle ghiandole salivari, sono 

stati identificati 6 casi di linfoma follicolare. 

149 

• I pazienti, 4 donne e 2 uomini, avevano un’età media di 50 

anni. 

• In 4 casi il linfoma apparteneva alla ghiandola parotide e in 

2 casi alla ghiandola sottomandibolare. 

• Il grading dei linfomi follicolari era in 4 casi di grado 2 e 

in 2 casi di grado 3. 

• Istologicamente è stato evidenziato infiltrato linfocitico 

periduttale, sialoadenite mioepiteliale (2 casi). 

• Immunofenotipo: CD10+, CD79a+, Bcl6+, CD3-, CD5-, 

CD21-, CD23-, Ciclina D1-. 

• La proteina Bcl2 era espressa in 3 casi e p53 in 4 casi. 

• Genotipo: in due casi era evidente clonalità (PCR positiva 

per riarrangiamento clonale del gene IgH delle immunoglobuline). 

• La traslocazione Bcl2/IgH è stata evidenziata in un solo caso. 

• La prognosi è stata favorevole per tutti i casi. 

• I linfomi follicolari originati nelle ghiandole salivari hanno 

alcune delle caratteristiche dei linfomi MALT (prognosi indolente, 

presenza di sialoadenite mioepiteliale e rarità nel 

riarrangiamento del gene Bcl2). 

Linfoma primitivo a T cellule della ghiandola salivare (Hew 

et al., 2002) 

• Estremamente raro. 

• Immunoistochimica e riarrangiamento genico del TCR in 

PCR è indispensabile per confermare la natura feno- e genotipica 

della neoplasia. 

• Sono stati riportati finora 14 casi di linfoma primitivo a 

cellule T (la maggior parte in Oriente) e con prognosi estremamente 

variabile. 

• I linfomi con fenotipo T/NK sono associati a infezione da 

EBV. 

• Gli aspetti morfologici del linfoma a T cellule possono essere 

confusi con quelli del linfoma a B cellule extranodale 

marginale. 

Infiltrati linfoidi B delle ghiandole salivari 

• Benigni. 

• MESA/LESA, policlonale. 

• Borderline. 

• MESA/LESA, monoclonale. 

• MESA/LESA, con aloni di cellule B monocitoidi/centrocitosimili. 

• Linfoma a basso grado. 

• Tipo MALT. 

• Linfoma ad alto grado. 

• A grandi cellule B. 

LESA/MESA 

• La sialoadenite linfoepiteliale (LESA) può essere associata 

con la sindrome di Sjogren o con altre malattie del tessuto 

connettivo, in particolare l’artrite reumatoide; può talora 

manifestarsi in pazienti senza altre malattie associate. 

• 1952: Godwin: lesioni patologiche identificate come malattia 

di Mikulicz sono rappresentate nelle ghiandole salivari 

da iperplasia linfoide e alterazioni epiteliali: conia il 

termine “lesione linfoepiteliale benigna”. 

• 1953: Morgan e Castlemann: le lesioni linfoepiteliali sono 

costituite da cellule epiteliali e mioepiteliali proliferanti introducendo 

il termine MESA (sialoadenite mioepiteliale). 

• Attualmente si ritiene che le cellule non linfoidi coinvolte 

nelle lesioni siano cellule epiteliali basali, non mioepiteliali. 

Lo sviluppo delle lesioni duttali originano dall’iperplasia 

dei dotti striati con differenziazione aberrante in epite-

150 

lio multistratificato e reticolato, con profonde alterazioni 

del pattern delle citocheratine. 

• Il termine LESA/MESA viene usato per descrivere una patologia 

caratterizzata da strutture istologiche costituite da 

cellule B della zona marginale o monocitoidi che circondano 

e infiltrano l’epitelio nel tessuto linfoide associato alla 

mucosa (MALT). 

Struttura delle lesioni linfoepiteliali (isole epi-mioepiteliali) 

(Metwaly et al., 2003) 

• Cellule epiteliali di tipo duttale, cheratina positive (CD31- 

CD34+). 

• Cellule endoteliali vascolari (formanti “sheets” o strutture 

tubulari). 

• Linfociti CD20+, linfociti CD3+, macrofagi CD68+. 

• Le strutture ialine della matrice extracellulare risultano 

dalla angiogenesi da parte delle cellule endoteliali con la 

cooperazione delle cellule infiammatorie. 

• La vascolarizzazione intra- lesione linfoepiteliale supporta 

la rigenerazione e la proliferazione delle cellule epiteliali 

salivari. 

Sindrome di Sjogren (SS) 

• È una malattia cronica autoimmune caratterizzata da sintomi 

classici di secchezza degli occhi e della bocca. 

• Cheratocongiuntivite secca. 

• Xerostomia. 

• Infiltrati linfoidi nelle ghiandole salivari minori del labbro 

inferiore. 

• Ingrandimento delle parotide, bilaterale. 

• S.S. secondaria: associazione con malattie autoimmuni sistemiche 

(LES, sclerodermia, artrite reumatoide). 

• Colpisce soprattutto donne nella IV e V decade. 

• La biopsia del labbro inferiore mostra una o più foci di 50 

o più linfociti in 4 mm quadrati nelle ghiandole salivari accessorie. 

• I pazienti con S.S. hanno un’incidenza di linfomi maligni, 

usualmente un linfoma MALT, 44 volte superiore rispetto 

alla popolazione normale. 

• Dei pazienti con sindrome di Sjogren circa il 6% sviluppa 

linfomi nelle ghiandole salivari o lacrimali, o talora in altre 

sedi extranodali. 

• Nell’80% dei casi il linfoma si sviluppa nella parotide. 

• Tutti i pazienti affetti da S.S. hanno alterazioni istologiche 

caratterizzate da lesioni linfoepiteliali. 

La biopsia delle ghiandole salivari minori nella diagnosi della 

sindrome di Sjogren (Mahlstedt et al., 2002) 

• Le biopsie delle ghiandole salivari minori labiali sono state 

ottenute da 32 pazienti (22 con sindrome di Sjogren primitiva, 

e 10 secondaria). 

• L’osservazione istopatologica ha evidenziato ghiandole salivari 

minori normali nel 37,5% dei casi e scialoadenite 

cronica nel 59,4% dei casi. Solo uno aveva modificazioni 

caratteristiche di MESA. 

• La biopsia delle ghiandole salivari minori è un metodo non 

idoneo per la evidenziazione di MESA nella diagnosi della 

sindrome di Sjogren. 

Diagnosi differenziale LESA/MESA vs linfoma tipo MALT 

• Il punto più critico è la distinzione tra lesioni benigne tipo 

LESA/MESA e il linfoma a basso grado tipo MALT. 

• Gli aspetti istopatologici del LESA/MESA includono due 

pattern differenti. 

– pattern A: infiltrato linfoide benigno. 


– pattern B: lesioni linfoproliferative. 

Pattern A: infiltrato linfoide benigno 

• L’architettura lobulare della ghiandola è preservata. 

• Le lesioni linfoepiteliali sono frequenti. 

• L’infiltrato linfoide monocitoide/centrocitosimile è limitato 

alle lesioni linfoepiteliali. 

• Sono comuni follicoli reattivi senza espansione della zona 

marginale o del mantello e un discreto numero di plasmacellule 

policlonali. 

Pattern B: lesioni linfoproliferative 

• Processo diffuso o multifocale. 

• È preservata l’architettura della maggior parte degli acini. 

• Sono presenti aggregati di cellule centrocitosimili nell’infiltrato 

linfoide diffuso. 

• Possono essere presenti aree di restrizione delle catene leggere 

delle immunoglobuline. 

MLDUS (monoclonal lymphoproliferative disease of undetermined 

significance) 

• Limitate in estensione. 

• Composti da piccoli linfociti. 

• Riarrangiamento delle immunoglobuline. 

• L’evidenza di cloni di cellule B in casi di LESA/MESA 

non correla con l’evidenza morfologico-clinica di linfoma 

MALT. 

• Stretto follow-up con ri-biopsia in caso di lesione ricorrente 

o persistente. 

Criteri nella diagnostica differenziale MESA/LESA vs linfoma 

MALT (Quintana et al., 1997) 

• Nei linfomi MALT è comune l’invasione dei tessuti molli 

e perineurale. 

• Il coinvolgimento dei linfonodi è prerogativa del linfoma 

MALT. 

• Il fenotipo CD43+ si osserva più frequentemente nel linfoma 

MALT, ma può essere presente in tutte le altre categorie, 

eccetto il MALT di alto grado. 

• Clonalità delle cellule B: nel 40% delle LESA/MESA, 

60% del LESA/MESA con alone, 80% nei linfomi MALT, 

60% nel linfoma MALT con plasmacellule monoclonali, e 

in tutti i linfomi MALT ad alto grado. 

• Vengono evidenziati due tipi di lesione borderline all’interno 

dello spettro della proliferazione linfoide associata a 

MESA/LESA. 

• con cellule clonali B senza aspetti istologici di neoplasia. 

• con cellule B monocitoidi con alone non confluenti. 

• È ancora da definire l’approccio terapeutico ottimale per le 

lesioni borderline e a basso grado. 

Linfoma in sindrome di Sjogren (Parke, et al.) 

• I linfomi maligni insorgono in meno del 10% dei pazienti 

con sindrome di Sjogren. 

• Sono usualmente di basso grado. 

• La trasformazione in linfoma è più frequente nella sindrome 

di Sjogren primitiva. 

• Sono particolarmente a rischio i pazienti con persistente ingrandimento 

della ghiandola salivare, linfoadenopatia e 

malattia extra-ghiandolare. 

• Pazienti con linfoma o sindrome di Sjogren secondaria, 

hanno una prognosi peggiore rispetto a pazienti con linfoma 

e sindrome di Sjogren primitiva. 

Sviluppo del linfoma MALT nella sindrome di Sjogren 

• Il follow-up molecolare di lesioni linfoproliferative a B 

cellule nella sindrome di Sjogren, dallo stadio non maligno


al linfoma manifesto, indica un ruolo importante nell’accumulo 

di mutazioni somatiche. 

Linfoma MALT 

• Ha un discreto rischio di trasformazione in alto grado. 

• Non vi sono attualmente criteri istologici o immunologici 

per predire con attendibilità l’evoluzione e la prognosi. 

• Comportamento clinico indolente. 

• Normalmente rimane localizzato alla ghiandola salivare. 

• Infiltrato linfoide denso diffusamente interessante la ghiandola 

salivare. 

• Le cellule linfoidi esprimono immunoglobuline di superficie 

monotipiche. 

• Può esserci una componente ad alto grado. 

• Follicoli linfoidi reattivi e lesioni linfoepiteliali diffuse. 

• A differenza della LESA/MESA le cellule centrocitosimili 

formano estesi aloni attorno ai nidi di cellule epiteliali e fra 

le lesioni linfoepiteliali. 

Profilo immunofenotipico dei linfomi MALT e delle 

LESA/MESA 

• CD20+ CD43+/- Bcl2+/-. 

• CD43: la coespressione CD43 sulle cellule B monocitoidi 

non correla con istotipo, clonalità, o presenza di linfoma. 

• L’emergenza di una popolazione monoclonale in un quadro 

di LESA/MESA con cellule monocitoidi preannuncia la 

trasformazione in un linfoma maligno, sebbene sono probabilmente 

richieste alterazioni genetiche successive per la 

progressione e la disseminazione. 

Biologia Molecolare nei linfomi MALT e nelle lesioni 

LESA/MESA 

• L’espressione di cloni di cellule linfoidi B è un evento precoce. 

• Clonalità è stata dimostrata in più del 50% dei casi LE- 

SA/MESA. 

• I cloni persistenti possono dar luogo a linfomi maligni, ma 

la frequenza di questa trasformazione è sconosciuta. 

• È stato proposto il termine di malattia linfoproliferativa 

monoclonale di significato indeterminato (MLDUS). 

Traslocazioni cromosomiche specifiche del linfoma MALT 

• T (11,18) (q21; q21) è una traslocazione cromosomica specifica 

associata al linfoma MALT. 

• È presente con alta frequenza nei linfomi MALT del polmone 

(38%) e stomaco (24%). 

• Solo raramente (1%) è stato evidenziato nei linfomi 

MALT delle ghiandole salivari. 

• È assente nei linfomi MALT localizzati alla tiroide, cute, 

fegato e in altre sedi più rare. 

• IRTA 1 (immunoglobulin superfamily receptor traslocation-associated 

1) è un recettore di superficie delle cellule 

B espresso selettivamente da una popolazione di cellule B 

della zona marginale dei follicoli e nei linfomi MALT-associati. 

• IRTA 1 ha un ruolo nella funzione immunitaria delle cellule 

B negli epiteli. 

Anomalie citogenetiche nella sindrome di Sjogren e nei linfomi 

MALT (Ihrler et al., 2000) 

• Nessun caso di MESA/LESA mostra anomalie citogenetiche. 

• La maggior parte dei linfomi alto grado, e una bassa percentuale 

(circa il 10%) dei linfomi a basso grado, mostra 

complesse alterazioni cromosomiche e non- diploidia del 

DNA nella citometria a flusso. 

151 

• Circa la metà dei linfomi a basso grado mostra una o due 

aberrazioni cromosomiche numeriche evidenziate con ibridazione 

in situ. 

Sequenze HHV8 in linfoma MALT associato alla sindrome di 

Sjogren (Klussmann et al., 2003) 

• In un caso di linfoma MALT della parotide associato a sindrome 

di Sjogren, è stata evidenziata la sequenza HHV8 

con PCR, Elisa, IFA. 

• In immunoistochimica la colorazione era positiva nelle cellule 

aciniche e negativa nelle cellule linfomatose. 

Presentazioni del linfoma MALT in altre condizioni 

• Nelle infezioni da HIV è stata descritta una condizione infiammatoria 

cronica con modificazioni cistiche bilaterali 

delle ghiandole parotidi associate a linfoma MALT. 

Linfoma MALT in sialoadenite cronica sclerosante (Kuttnertumor) 

(Ochoa et al., 2002) 

• La sialoadenite sclerosante cronica è una lesione infiammatoria 

cronica fibrotica della ghiandola sottomandibolare 

derivata da una sialolitiasi e non associata a una malattia 

autoimmune sistemica. 

• Viene presentato un caso di linfoma MALT associato a tale 

condizione, non accompagnato né a sindrome di Sjogren, 

né a LESA. 

• Processi infiammatori cronici diversi dalla sindrome di 

Sjogren, possono fornire un substrato allo sviluppo del 

linfoma MALT delle ghiandole salivari. 

Linfomi degli annessi oculari 

G. De Rosa, R. Franco 

Università “Federico II” e Istituto dei Tumori “G. Pascale”, 

Napoli 

Il significato clinico ed istopatologico degli infiltrati linfoidi 

dell’orbita è stato tradizionalmente assai controverso. 

Si stima, infatti, che in passato l’indice di accuratezza della 

diagnosi istopatologica in funzione della capacità di predire 

il decorso clinico era tra i 30-50% 1 . Da una parte la lunga 

sopravvivenza libera da malattia di pazienti, cui veniva formulata 

diagnosi di linfoma e, dall’altra, lo sviluppo di 

malattia sistemica in pazienti, cui venivano diagnosticati infiltrati 

linfoidi benigni non hanno consentito di individuare 

elementi clinici e patologici che potessero in modo inequivocabile 

definire chiari criteri diagnostici. L’errore diagnostico 

e l’inaccuratezza prognostica sono stati determinati da 

diversi problemi. In primo luogo, le lesioni linfoproliferative 

degli annessi oculari classificate secondo i criteri standard 

come linfomi hanno un decorso comunque piuttosto 

indolente, come già descritto per altri linfomi extranodali, 

con elevata percentuale di guarigione a fronte di minimi interventi 

terapeutici. In secondo luogo, la maggior parte 

degli infiltrati linfoidi degli annessi oculari sono costituiti 

da piccole cellule, talora di complessa interpretazione 

istopatologica, connessa con la definizione di malignità di 

queste neoplasie, spesso risolvibili solo con complessi studi 

di clonalità. Infine, la mancanza di estese casistiche, vista 

la relativa rarità di tale entità nosologica, non ha permesso 

una chiara distinzione delle lesioni maligne rispetto a quelle 

benigne 2 3 . 

Lo storico lavoro di Knowles, risalente a circa 20 anni fa, 

definì come fondamentali gli studi immunofenotipici e di

152 

clonalità per caratterizzare gli infiltrati linfoidi degli annessi 

oculari e distinguere le proliferazioni benigne dai linfomi 4 . 

Sempre Knowles, in una casistica di 108 casi di linfomi degli 

annessi oculari, osservò che spesso il quadro morfologico ed 

immunofenotipico aveva un valore predittivo inferiore 

rispetto ad alcuni aspetti clinici, quale la sede di insorgenza e 

l’estensione della malattia alla diagnosi, così come avviene 

in altri linfomi extranodali 5 . 

I linfomi degli annessi oculari, che mostrano aspetti di 

sovrapposizione con le cosiddette iperplasie linfoidi, raggruppano 

storicamente i linfomi dell’orbita, delle ghiandole 

lacrimali, della congiuntiva e delle palpebre 5 . Essi rappresentano 

il 90% di tutti gli infiltrati linfoidi degli annessi oculari. 

La maggior parte dei linfomi degli annessi oculari, con proporzioni 

variabili nelle diverse casistiche dal 50%-80%, derivano 

dal tessuto MALT (mucosa associated lymphoid tissue), 

acquisito a seguito di stimoli infettivi o autoimmunitari 

6 . Una minor quota (10-20%) è rappresentata dai linfomi 

follicolari, linfomi a grandi cellule B, linfomi a piccoli 

linfociti e linfomi mantellari. Rari i linfomi a cellule T e 

T/NK primitivi dell’orbita 6 . 

I linfomi MALT degli annessi oculari mostrano caratteristiche 

morfologiche ed immunofenotipiche sovrapponibili a 

quelle degli altri distretti. Sono caratterizzati da centri germinativi 

residui “colonizzati” e da una popolazione neoplastica 

diffusa di cellule monocitoidi, centrocyte-like e plasmocitoidi 

in differenti proporzioni. Possono esservi associate grandi 

cellule singole o raggruppate in clusters, senza, però, comportare 

un andamento particolarmente più aggressivo. Possono 

essere presenti complessi linfoepiteliali. In una serie di 

casi di linfomi B degli annessi cutanei da noi studiati, 39 erano 

rappresentati da linfomi MALT, di cui 10 con esperienza 

di recidiva, 1 di progressione sistemica e 2 di non remissione. 

Il linfoma MALT in genere è un tumore con bassa frazione di 

crescita, ma con alterazioni molecolari che coinvolgono 

pathway anti-apoptotici. L’evento critico sembrerebbe, come 

in tutti i linfomi indolenti, l’attività di NF-kB, un promotore 

genico di proteine con funzione anti-apoptotica. Tale evento 

parrebbe determinato nei linfomi MALT da una serie di alterazioni 

solo in parte note. Di queste la più frequente è la 

t(11;18), traslocazione responsabile della fusione del gene 

API2, potente inibitore delle caspasi, con MLT1. Il prodotto 

di fusione è responsabile di una chimera proteica in grado di 

favorire la traslocazione di NF-kB nel nucleo e quindi l’attivazione 

di proteine anti-apoptotiche. L’altra alterazione nota, 

ma meno frequente, è la t(1;14) (circa il 7% dei casi), responsabile 

del controllo del gene delle immunoglobuline sull’espressione 

bcl10, una proteina in grado di potenziare l’attività 

di MLT1, e quindi di NF-kB. Quindi due differenti 

traslocazioni sono state descritte come responsabili dell’attivazione 

di un pathway antiapototico NF-kB mediato e di 

un’unica entità clinico-patologica. Infine recentemente una 

specifica traslocazione (14;18)(q32;q21), coinvolgente il 

gene MLT1 è stata descritta, proponendo un’ulteriore via di 

attivazione cronica di MLT1 nella patogenesi di questo tipo 

di linfomi 7 . 

Il profilo di alterazioni geniche dei linfomi dell’orbita è stato 

poco studiato. Esiste sicuramente un dato interessante che 

è la relativa maggiore frequenza della t(14;18) nei linfomi 

MALT degli annessi oculari, descritta recentemente in 3/8 

casi ed una minor frequenza della t(11,18) in 3/23 casi. 

L’assenza di mutazioni di bcl10 è stata descritta recentemente 

in 11 di linfomi dell’orbita 8-12 . Lo studio multiparametrico 

della serie da noi raccolta, che ha riguardato le proteine fon- 


damentali coinvolte nella regolazione de ciclo cellulare, dell’apotosi 

e della differenziazione cellulare, ha mostrato una 

localizzazione nucleare di bcl10 in una buona frazione dei 

linfomi MALT e una relazione statisticamente significativa 

della positività immunoistochimica citoplasmatica e nucleare 

di bcl10 con la recidive, suggerendo un ruolo importante di 

questa proteina e nel processo di linfomagenesi e nel rischio 

di ricaduta. 

La specificità, o homing, e l’etiopatogenesi rappresentano sicuramente 

gli aspetti più interessanti affrontati nello studio 

dei linfomi di questo distretto. La specificità, o homing, è una 

caratteristica tipica della maggior parte dei linfomi extranodali 

e fa sì che tali neoplasie difficilmente diventino malattie 

sistemica, tendendo piuttosto a ricadere nella sede dove 

sono insorte. L’espressione dell’integrina α4α7 è stata identificata 

come principale recettore responsabile della ricircolazione 

delle cellule tumorali dei linfomi MALT 7-12 . 

Per quanto riguarda l’etiologia, la recente descrizione dell’uso 

di determinate sottofamiglie VH delle catene pesanti 

(D63, D54 e DP47) sembra suggerire un etiopatogenesi autoimmune, 

differente da quello descritto per altre sedi extranodali 

13 . Inoltre la presenza di ongoing mutation supporterebbe 

ulteriormente questa ipotesi 14-16 . 

L’identificazione dell’agente patogeno e delle molecole responsabili 

della organo-specificità rappresentano gli steps 

fondamentali per lo studio delle neoplasie di questo distretto 

al fine di modulare la strategia terapeutica, come per altri linfomi 

extranodali. 

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15 Uno T, et al. Radiotherapy for extranodal marginal – zone B-cell 

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16 Tranfa F, et al. Primary orbital lymphoma. Orbit 2001;20:119-24. 

I linfomi polmonari 

L. Ruco 

II Facoltà di Medicina e Chirurgia, Ospedale “Sant’Andrea”, 

Università di Roma “La Sapienza” 

I linfomi primitivi del polmone, definiti come quei linfomi 

che interessano selettivamente il polmone, sono neoplasie rare, 

rappresentando circa lo 0,3% di tutte le neoplasie polmonari, 

e sono linfomi rari, costituendo meno del 10% di tutti i 

linfomi extranodali. In realtà in sede polmonare si possono 

osservare localizzazioni di lesioni linfoproliferative sia benigne 

che maligne le più comuni delle quali sono elencate nella 

Tabella I, tuttavia, il linfoma a cellule B della zona marginale 

ad origine dal MALT è certamente il linfoma più comune 

costituendo circa l’80% di tutti i linfomi primitivi del polmone 

1 2 . 

Il linfoma a cellule B della zona marginale ad origine dal 

MALT insorge in pazienti di età compresa tra la seconda e 

l’ottava decade con un’età media di circa 60 anni, ed ha 

uguale incidenza nei due sessi. In circa il 10% dei pazienti lo 

sviluppo del linfoma è preceduto da malattie che causano una 

iperplasia del tessuto linfoide associato alla mucosa bronchiale 

(BALT). I pazienti sono generalmente asintomatici e la 

presenza della neoplasia viene spesso scoperta in esami radiologici 

di routine. I risultati degli esami di laboratorio sono 

non specifici, ma possono aiutare ad indirizzare la diagnosi. 

La velocità di eritrosedimentazione è elevata in molti pazienti; 

un picco monoclonale di IgM, o meno frequentemente di 

IgG o IgA, è presente in circa il 30% dei casi; compromissione 

da linfoma del midollo osseo è presente in circa il 15% 

dei casi. L’esame radiologico del torace dimostra la presenza 

di un nodulo unico o multipli, in sede periferica o ilare. Una 

linfoadenopatia ilare è presente in circa il 25% dei pazienti. 

La caratteristica clinica saliente di questa neoplasia è la sua 

tendenza a rimanere localizzata per lunghi periodi di tempo. 

È stato descritto che l’intervallo di tempo che può intercorrere 

tra la prima dimostrazione di una alterazione radiologica e 

Tab. I. Lesioni linfoproliferative benigne e maligne a localizzazione polmonare. 

Lesioni linfoidi non neoplastiche Linfomi 

153 

la diagnosi istologica di linfoma può essere compreso tra 1,5 

e 21 anni con una media di 5,3 anni. Le procedure diagnostiche 

più appropriate sono una resezione cuneiforme in toracoscopia 

video-assistita, o in alternativa una segmentectomia o 

una lobectomia. Nell’80% dei pazienti la malattia è diagnosticata 

al I stadio 1 3 . 

L’aspetto istologico del linfoma può variare sensibilmente da 

caso a caso, o anche in aree diverse dello stesso caso. In genere 

è prevalentemente composto da cellule B marginali con 

morfologia centrocito-simile; tuttavia, una quota variabile di 

cellule B monocitoidi, piccoli linfociti B ben differenziati, 

plasmacellule ed immunoblasti è presente in tutti i casi. Alcuni 

autori suggeriscono di definire “atipiche” le forme di 

linfoma caratterizzate da una particolare ricchezza di plasmacellule 

o immunoblasti. Un’altra peculiarità del linfoma 

può essere la presenza di numerosi centri germinativi di 

aspetto reattivo con una zona mantellare poco rappresentata. 

La maggior parte di essi è effettivamente reattiva essendo le 

cellule B politipiche per catene leggere; tuttavia con il progredire 

della malattia i centri germinativi vengono progressivamente 

colonizzati dalla popolazione neoplastica diventando 

monotipici. Le cellule B marginali sono positive per 

CD20 e CD79a, e sono generalmente negative per CD5, 

CD10, CD23, CD43, e ciclina D1. Una restrizione per le catene 

leggere κ e λ è dimostrabile nel 50-70% dei casi in paraffina. 

In circa la metà dei casi negativi è possibile dimostrare 

la presenza di riarrangiamenti clonali del gene delle catene 

pesanti utilizzando la PCR. La maggior parte dei linfomi 

producono immunoglobuline di tipo IgM. 

I linfomi del MALT del polmone hanno caratteristiche 

morfologiche ed immunofenotipiche simili a quelle dei linfomi 

del MALT originanti in altri organi. Come in qualsiasi altra 

neoplasia il loro sviluppo è determinato da una serie di alterazioni 

genomiche che consentono lo stabilirsi di una popolazione 

neoplastica capace di crescita autonoma. 

La traslocazione t(11; 18)(q21; q21) è stata identificata nel 

20-60% dei linfomi del MALT esaminati 4 5 . È stato dimostrato 

che la traslocazione provoca la fusione del gene API2 

sul cromosoma 11q21 e del gene MALT1 sul 18q21. Il prodotto 

di fusione API2-MALT1 è stato evidenziato esclusivamente 

nei linfomi del MALT con incidenza variabile a seconda 

delle sede anatomica. Il gene API2 fa parte della famiglia 

di geni IAP (Inhibitor of apoptosis), ed ha un ruolo importante 

nella soppressione dell’apoptosi. MALT1 codifica 

per una nuova proteina caspasi-simile definita paracaspasi. 

Risultati sperimentali suggeriscono che i trascritti del prodotto 

di fusione API2-MALT1 possono esercitare un effetto 

Linfonodo intraparenchimale Linfoma a cellule B della zona marginale ad origine dal MALT 

Bronchiolite follicolare o iperplasia diffusa del MALT Granulomatosi linfomatoide 

Polmonite linfocitaria interstiziale Linfoma diffuso a grandi cellule B 

Iperplasia linfoide nodulare Linfoma linfoplasmaocitoide 

Malattia di Castleman Plasmocitoma 

Linfoma T periferico 

Linfoma a grandi cellule anaplastico 

Linfoma intravascolare 

Linfoma delle cavità sierose 

Linfoma di Hodgkin

154 

inibitorio sull’apoptosi favorendo così la sopravvivenza delle 

cellule linfomatose. 

La traslocazione t(1; 14)(p22; q32) è presente in circa il 5% 

dei linfomi del MALT e causa una disregolazione della trascrizione 

del gene BCL10 dovuta alla giustapposizione della 

regione enhancer IgH. Come conseguenza di ciò la proteina 

BCL10 trasloca nel nucleo dove attiva il fattore di trascrizione 

nucleare NF-kB che favorisce la trascrizione di numerosi 

geni legati alla sopravvivenza cellulare. È stato recentemente 

dimostrato che anche il prodotto di fusione API2-MALT1 è 

un potente attivatore di NF-kB, e che anche in questi casi è 

presente una debole espressione della proteina BCL10 nel nucleo 

dimostrabile con l’immunoistochimica anche su sezioni 

in paraffina. Come conseguenza di questi studi è oggi disponibile 

un nuovo strumento diagnostico nei linfomi del 

MALT. Infatti, la dimostrazione immunoistochimica della 

proteina BCL10 nel nucleo, mai presente nei linfociti normali, 

è indicativa dell’esistenza delle traslocazioni t(11; 18) o 

t(1; 14) tipicamente associate ai linfomi del MALT. Inoltre, 

in alcuni studi si è osservato che i linfomi del MALT gastrici 

traslocati sono quelli che non rispondono alla terapia eradicante 

per H. pylori. Ciò ha suggerito che l’alterazione genetica 

API2-MALT1 possa avere un significato patogenetico 

indipendente. 

In due studi recenti effettuati su 51 e 47 casi di linfoma del 

MALT del polmone il trascritto API2-MALT1 è stato identificato 

rispettivamente in 21 e 18 casi e la proteina BCL10 

nucleare nella totalità dei casi con traslocazione 6 7 . È interessante 

notare che quando si è ricercata la presenza del trascritto 

di fusione API2-MALT1 in linfomi del MALT originati 

in diversi organi, si è osservato che i linfomi gastrici e 

polmonari presentavano una incidenza simile di traslocazioni 

pari al 20-40% dei casi, mentre i linfomi del MALT 

della cute, della tiroide e delle ghiandole salivari non presentavano 

quasi mai la traslocazione. Ciò ha portato ad ipotizzare 

l’esistenza di due tipi di patologia pre-maligna che 

precedona attraverso un meccanismo patogenetico attualmente 

sconosciuto. In conclusione, queste recenti acquisizioni 

ci dimostrano ancora una volta come la comprensione 

dei meccanismi molecolari coinvolti nella patogenesi si traduca 

spesso nella disponibilità di nuovi utilissimi strumenti 

per la diagnosi istologica e nell’identificazione delle possibili 

cause predisponenti allo sviluppo della malattia. 

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Mycosis Fungoides (MF) 

M. Santucci 

Department of Human Pathology and Oncology. University 

of Florence Medical School, Florence 

The histopathologic diagnosis of MF is well known as one of 

the most difficult challenges in all histopathology, and this is 

especially true of early patch stage lesions. This is in part due 

to the relatively poor quality of cellular morphology and nuclear 

detail of lymphoid cells in cutaneous specimens. On the 

other hand, the difficulties in the histopathologic diagnosis of 

MF are due to the absence of reliable histologic criteria, at 

least for the identification of early lesions. In fact, MF may 

resemble a wide variety of inflammatory disorders and virtually 

any histologic criterion for MF may be seen episodically 

in other conditions, most of which are inflammatory. Although 

T-cell receptor gene rearrangement studies play an increasingly 

important role in diagnostic pathology, limitations 

exist concerning MF because many inflammatory disorders 

simulating MF (such as pityriasis lichenoides, pigmented 

purpuric eruptions, pseudolymphomas, etc.) have at times 

shown T-cell clonality with false positive results up to 20%. 

By contrast, in early stages of MF monoclonal T-cell populations 

cannot be demonstrated in approximately 50% of the 

cases. Similarly, early lesions of MF do not show the immunophenotypic 

aberrances seen in the advanced stages of 

the disease and, therefore, are indistinguishable from benign 

inflammatory cutaneous conditions by immunohistochemical 

criteria. Therefore, the diagnosis of MF today remains within 

the realm of clinical-histologic-immunophenotypic-molecular 

correlation and, of these parameters, histologic analysis 

arguably remains paramount. 

Three recent studies have assessed the sensitivity and specificity 

of various histologic criteria and have provided useful 

information regarding their relative value in the diagnosis of 

MF. The three studies in question are referred to as the Stanford 

study 1 , the EORTC study 2 , and the ISCL study 3 . I was 

privileged to have been a part of two of these studies, namely 

the EORTC and the ISCL study. Each of these studies involved 

blinded review of biopsies from early MF patients admixed 

with biopsies from control patients with inflammatory 

conditions mimicking MF. 

The first group of criteria investigated concerns the intraepidermal 

pattern of growth. The presence of lymphocytes within 

the epidermis that are larger than those within the dermis 

has been evaluated by the Stanford and ISCL studies. This 

criterion was present in 17-20% of MF and was rare to absent 

(0-3%) in controls. It is not a sensitive criterion, but it is important 

because it is relatively specific for MF, a disorder 

with few specific features. It is also an interesting criterion 

which reminds us that, at least initially, the neoplastic cells of 

MF tend to home to the epidermis. So-called Pautrier’s microabscesses, 

i.e. collections of lymphocytes within the epidermis, 

have been evaluated by all the three studies. How often 

one observes Pautrier’s microabscesses depends on how 

one defines them. In fact, their observed frequency ranged 

from 4% in the EORTC study, that used the most strict definition, 

to 37% in the Stanford study, that defined them as 

“four cell clusters”, a result similar to the frequency of “tiny 

collections” in the EORTC study (42%). Interestingly, in the 

ISCL study, despite a similar definition of Pautrier’s microabscesses, 

their observed frequency was 17% only. Pautrier’s 

microabscesses are rare in controls (0-to-8%), with a 

specificity ranging among 92-to-100%. Therefore, Pautrier’s


microabscesses represent an important criterion, specific despite 

not sensitive, for MF. Disproportionate intraepidermal 

lymphocytes, i.e. a number of intraepidermal lymphocytes 

too high in relation to the relative paucity of spongiosis observed 

in the specimen, have been evaluated by the Stanford 

and ISCL studies. Neither of the two studies attempted to 

quantify them but relied on the subjective impression of the 

reviewing pathologists. This criterion was found to be present 

in 6-to-28% of controls and 37-to-58% of MF. Basilar 

lymphocytes, i.e. lymphocytes aligned within the basal layer 

of the epidermis, are known euphemistically as “toy soldiers” 

or “string of pearls”. Their sensitivity and specificity depend 

on definition (observed in 0-23% of controls and 17-67% of 

MF). Pagetoid pattern, namely individual lymphocytes are 

more prominent than those in nests and arrayed in a fashion 

that simulates Paget’s disease of the breast, has been evaluated 

by the EORTC and ISCL studies. This is an important criterion 

specific for MF, in fact it was never observed in controls, 

unfortunately it is not sensitive (observed in 0-to-33% 

of MF). 

The second group of criteria concerns the morphology of tumor 

cells. Cerebriform nuclei can be defined as nuclei with 

deep indentations resembling the sulci on the surface of the 

brain that, in histologic sections, have a roundish-to-oval 

shape with a quite smooth contour. This criterion, addressed 

by the Stanford and ISCL studies, was present in 12-32% of 

controls and 53-67% of MF. Conversely in the EORTC study, 

two types of cerebriform lymphocytes were identified: medium-small 

(so-called common type) cerebriform cells with a 

nuclear diameter of 5-7 µm, and medium-large cerebriform 

cells with a nuclear diameter of 7-9 µm. The criterion of 

medium-large cerebriform cells combines aspects of nuclear 

shape (cerebriform) and nuclear size (approximately the 

same diameter as that of the nuclei of basal keratinocytes). 

This is the most important criterion to identify early stage 

MF lesions in the EORTC study. In fact, it is quite specific, 

having been observed in 8% of controls, and sensitive, having 

been seen in all MF cases. 

Moreover, several additional ancillary features (presence of 

haloed lymphocytes or of thickened and wiry collagen bundles, 

extent of the infiltrate, epidermal response, mixed infiltrate) 

were investigated in the three studies. The large majority 

of these criteria has not been found to be a useful discriminator 

between MF and controls. 

In conclusion, and according to my personal experience, the 

most important features useful in achieving a reliable distinction 

between early MF and controls are: (i) presence of 

medium-large cerebriform lymphocytes in the epidermis (either 

singly or in collections) and in small collections in the 

dermis; (ii) presence of linearly arranged single basal lymphocytes; 

(iii) pagetoid spread; (iv) presence within the epidermis 

of lymphocytes larger than those within the dermis; 

and, finally, (v) absence of both papillary dermal fibrosis and 

dermal blast-like lymphocytes, these two features being observed 

more frequently in inflammatory conditions mimicking 

MF. 

References 

1 Smoller BR, Bishop K, Glusac E, Kim YH, Hendrickson M. Reassessment 

of histologic parameters in the diagnosis of mycosis fungoides. 

Am J Surg Pathol 1995;19:1423-30. 

2 Santucci M, Biggeri A, Feller AC, Massi D, Burg G. Efficacy of histologic 

criteria for diagnosing early mycosis fungoides: an EORTC 

cutaneous lymphoma study group investigation. Am J Surg Pathol 

2000;24:40-50. 

3 Burg G, et al. Manuscript in preparation. 

155 

Primary bone lymphoma: a clinico-pathologic 

survey 

S.A. Pileri, E. Sabattini, R. Orduz, C. Agostinelli, L. 

Bodega, F. Bacci, D. Malvi, V. Stefoni, G. Carrillo1 , M. 

Paulli2 , P.L. Zinzani 

Cattedra di Anatomia Patologica e Gruppo Linfomi, Istituto 

di Ematologia ed Oncologia Medica “L. e A. Seràgnoli”, 

Università di Bologna; 1 UOC di Anatomia Patologica, 

Azienda Ospedaliera “A. Cardarelli”, Napoli; 2 Istituto di 

Anatomia Patologica, Università di Pavia 

Background and Objectives. Primary bone lymphoma 

(PBL) is a rare condition, which has been the object of a few 

studies based on large series and updated diagnostic and therapeutic 

criteria. The aim of the present study was to review 

all the examples of PBL collected at the Bologna Lymphoma 

Registry in the period May 1998-April 2004 and to assess the 

efficacy of various treatments in those with non-Hodgkin’s 

lymphoma (PBNHL) and a minimal 36 month follow-up period. 

Design and Methods. One-hundred sixty cases were retrieved 

that had all been diagnosed according to the criteria 

of the REAL/WHO Classification and extensively studied by 

immunohistochemistry. Information was obtained regarding 

disease presentation and clinical course in 52 previously untreated 

patients with PBNHL. 

Results. The retrieved cases represented about 1% of all 

nodal and extranodal lymphomas diagnosed in the same period. 

Ninety-nine corresponded to diffuse large B-cell lymphoma 

(DLBCL), more often displaying large multilobated 

nuclei and/or sclerosis with compartmentalisation. Ten had 

immunoblastic or anaplastic morphology, while only two fulfilled 

the criteria of T-cell rich B-cell lymphoma. Twentynine 

tumours were solitary plasmacytomas, twelve of which 

provided with plasmablastic features. There were also 7 follicular 

lymphomas, 6 T-cell/null anaplastic large cell lymphomas 

(ALCL) (4 ALK-positive), 5 peripheral T-cell lymphomas 

unspecified (PTCL), 4 Burkitt’s lymphomas, 2 mantle 

cell lymphomas, 2 B-lymphoblastic lymphomas, and 1 

lymphoplasmacytic lymphoma. Notably, four examples of 

primary Hodgkin’s lymphoma of bone (HL) were found. 

Regarding the 52 examples of PBNHL with follow-up available, 

complete response (CR) was observed in 35/41 (85%) 

patients treated with chemotherapy with/without radiation 

therapy and in 7/11 (64%) patients who received radiation 

therapy alone. Relapses were found in only 2/35 (6%) patients 

after chemotherapy (with/without radiation therapy), as 

compared with 4/7 (57%) patients after radiation therapy 

alone (p = 0.004); the relapse-free survival curves of these 

two subsets were significantly different. At both univariate 

and multivariate analysis only type of front-line therapeutic 

approach (chemotherapy with/without radiation therapy vs. 

radiation therapy alone) turned out to have a significant prognostic 

influence. 

Interpretation and Conclusions. Our data indicate that in 

PBL is indeed a rare event. It mostly corresponds to DLBCL, 

although other histological types can be encountered that 

might represent a diagnostic challenge for the pathologist 

(e.g. PTCL, ALCL and HL). The use of chemotherapy or 

combined-modality therapy seems to provide more durable 

CRs than radiation therapy alone.

156 

Linfoma primititivo del sistema nervoso 

centrale 

L.M. Larocca 

Istituto di Anatomia Patologica, Università Cattolica del Sacro 

Cuore, Roma 

Si definisce Linfoma Primitivo del Sistema Nervoso Centrale 

(LPSNC) una proliferazione linfomatosa ad esclusiva localizzazione 

nel SNC o nel midollo spinale, in assenza di linfoma 

sistemico. Definito in tal modo il LPSNC è da sempre 

considerato una forma rara, rappresentando meno dell’1% di 

tutti i linfomi non-Hodgkin e meno del 5% di tutte le neoplasie 

del SNC. Tuttavia a partire dal 1970 si è osservato uno 

stabile e costante incremento nella incidenza di questa forma 

di linfoma, in parte dovuta alla comparsa negli anni ’80 della 

Sindrome da Immunodeficienza Acquisita (AIDS), in 

parte indipendente dall’AIDS e non spiegabile con il miglioramento 

delle tecniche diagnostiche. Oggi il LPSNC rappresenta 

circa il 3-5% di tutti i linfomi non-Hodgkin ed è uno 

dei tumori più frequenti del SNC in età adulta 1 . Il LPSNC 

solitamente si manifesta con una singola lesione con effetto 

massa intraparenchimale. Lesioni multifocali o diffuse 

periventricolari sono ugualmente possibili, sebbene più frequenti 

nel LPSNC AIDS-relati. Quale che sia la modalità di 

esordio, il LPSNC tende a rimanere confinato nel SNC anche 

nelle fasi terminali della malattia. Il principale problema 

clinico-terapeutico del LPSNC è la tendenza di questi linfomi 

a presentare recidiva precoce dopo la iniziale terapia, con 

malattia che tende ad interessare l’intero SNC 2 . Da qui la 

prognosi altamente infausta con una sopravvivenza media 

negli immunocompetenti di meno di 18 mesi. Recenti regimi 

combinati con dosi elevate di metotraxate più radioterapia, 

sembrano avere una migliore risposta in termini di overall 

survival, ma a costo di grave neurotossicità 3 . Oltre il 90% 

dei LPSNC sono linfomi a grandi cellule B, con una 

sostanziale differenza tra le forme AIDS-relate e le altre: la 

presenza costante di virus di Epstein-Barr (EBV) nei LPSNC 

AIDS-relati. Visto il carattere quasi anedottico di forme non 

B o di forme B indolenti, il presente lavoro avrà come oggetto 

esclusivamente le forme diffuse a grandi cellule B. Il SNC 

è completamente sprovvisto di tessuto linfatico organizzato e 

non contiene elementi linfoidi in condizioni normali. Il primo 

quesito che nasce è perché si sviluppi una proliferazione 

neoplastica B linfocitaria in un tessuto assolutamente 

sprovvisto di B linfociti. Per risolvere questo quesito basilare 

per prima cosa ci siamo chiesti che tipo di linfocita B era alla 

base della proliferazione linfomatosa. Con approccio sia 

fenotipico che molecolare abbiamo per primi dimostrato che 

i LPSNC sono di derivazione da linfociti B del centro germinativo 

e questo sia nelle forme AIDS-relate che negli immunocompetenti. 

In più abbiamo dimostrato che caratteristiche 

fenotipiche post-centro germinativo, esclusive di gran 

parte di LPSNC AIDS-relati, erano da ascrivere alla azione 

trasformante dell’EBV. Più precisamente la espressione della 

late membrane protein 1 (LMP-1) dell’EBV, determina la 

inibizione della espressione di BCL-6 e la contemporanea 

up-regolazione di geni del differenziamento post-centro germinativo, 

quali IRF4/MUM-1 e Sindecano 1 4-6 . Queste nostre 

osservazioni sono state confermate in lavori che hanno 

mostrato come i LPSNC AIDS-relati mostrano mutazioni somatiche 

a carico dei geni delle Immunoglobuline (Ig), quello 

che oggi viene ritenuto il più preciso indicatore di passaggio 

attraverso il centro germinativo 7 . Ancor più recentemente 

noi nei LPSNC AIDS-relati 8 e Montesinos-Rongen et 


al. nei LPSNC dell’immunocompetente 9 , abbiamo mostrato 

che i LPSNC presentano ipermutazioni somatiche abberranti 

a carico di proto-oncogeni e geni soppressori di tumori, ad 

ulteriore definitiva conferma della derivazione da linfociti B 

del centro germinativo. A questo punto la domanda è: il 

fenotipo e genotipo da linfocita B del centro germinativo 

viene acquisito nel SNC a seguito di stimoli infiammatori 

cronici o al contrario il LPSNC è la conseguenza di una 

specifica e selettiva migrazione nel SNC di linfociti B del 

centro germinativo? Per rispondere a questa domanda 

bisogna separare i LPSNC AIDS-relati dalle forme degli immunocompetenti. 

Infatti i primi presentano la caratteristica di 

essere costantemente infetti da EBV. Questa caratteristica 

conferisce un ruolo patogenetico fondamentale all’EBV, confermato 

da uno studio molto recente che ha mostrato come 

sia possibile ottenere la remissione dal LPSNC, esclusivamente 

eradicando la infezione da EBV intracranica 10 . Una 

osservazione simile viene riportata dal mio gruppo nella 

sezione delle comunicazioni. Noi abbiamo condotto uno studio 

genotipico dettagliato della infezione da EBV in una 

ampia casistica di LPSNC AIDS-relati, concludendo che 

l’infezione delle cellule linfomatose ha le medesime caratteristiche 

delle infezioni che si hanno nella popolazione AIDS 

generale non affetta da LPSNC 11 . Quindi non si osservano 

varianti particolarmente oncogene ed il quadro complessivo 

che si può avanzare è il seguente: la infezione da HIV determina 

da un lato una stimolazione immune cronica in assenza 

di efficace controllo T-linfocitario, dall’altro infetta cellula 

astrocitarie e microgliali cerebrali, realizzando un importante 

sito di accumulo di virus. Nelle fasi avanzate di malattia, le 

uniche che si osserva la insorgenza di LPSNC, la completa 

disgregazione del sistema immune determina la presenza in 

circolo di cellule del centro germinativo EBV-infette che 

vengono richiamate a livello cerebrale dalla produzione di 

chemochine di richiamo quali SDF-1 e BCA-1 da parte degli 

astrociti infetti, che anche inducono espressione di chemochine 

di aggancio sulle cellule endoteliali del microcircolo 

cerebrale. Si ottiene così un iniziale accumulo di linfociti B 

centro germinativi EBV-infetti in un microambiente sede di 

stimolo immune cronico. Questa ipotesi patogenetica è supportata 

da numerose osservazioni prime fra tutte in ordine di 

importanza la quasi scomparsa dei LPSNC AIDS-relati con 

le terapie ad alte dosi che hanno annullato la infezione da 

HIV cerebrale, ma non hanno modificato la incidenza ed il 

livello di infezione da EBV, e la già citata possibilità di eradicare 

un LPSNC AIDS-relato, agendo prevalentemente 

tramite l’eradicazione della infezione da EBV intracerebrale. 

Traslare queste considerazioni ai LPSNC degli immunocompetenti 

è solo in parte possibile. Infatti, molto recentemente 

è stato dimostrato che anche in questo tipo di LPSNC si osserva 

la espressione di chemochine capaci di attrarre selettivamente 

B-linfociti, quale la BCA-1, nelle sedi di sviluppo 

del linfoma. Se a questo si associa la espressione sul linfocita 

B di CXCR5 che è il recettore che lega BCA-1, si ottiene 

anche per questa forma di LPSNC la dimostrazione di un 

homing selettivo delle cellule B-linfomatose nel SNC 12 . Rimangono 

tuttavia da chiarire le cause a monte rispetto questo 

evento terminale, cioè quali sono i meccanismi che hanno 

condotto alla realizzazione di tale concerto di eventi. Un dato 

merita di essere ricordato: i molteplici lavori che hanno 

studiato in dettaglio il riarrangiamento dei geni delle Ig nei 

LPSNC degli immunocompetenti, sono concordi nel trovare 

un uso altamente preferenziale del segmento V4-34 della regione 

variabile del gene delle Ig 13 . Queste osservazioni spingono 

ad ipotizzare che sia chiamata in causa una stimo-


lazione cronica da parte di un antigene od auto-antigene comune, 

non ancora individuato. 

Bibliografia 

1 Olson J E, Janney CA, Rao RD, et al. The continuing increase in the 

incidence of primary central nervous system non-Hodgkin lymphoma. 

Cancer 2002;95:1504-10. 

2 Rai R, Rosenblum MK, DeAngelis LM. Primary CNS lymphoma: a 

whole-brain disease? Neurology 2002;59:1557-2. 

3 Fine HA. Primary central nervous system lymphoma: time to ask the 

question. J Clin Oncol 2002;24:4615-7. 

4 Larocca LM, Capello D, Rinelli A, et al. The molecular and phenotypic 

profile of primary central nervous system lymphoma identifies distinct 

categories of the disease and is consistent with histogenetic derivation 

from germinal center related B cells. Blood 1998;92:1011-9. 

5 Carbone A, Gloghini A, Larocca LM, et al. Expression profile of 

MUM1/IRF4, BCL-6, and CD138/syndecan-1 defines novel histogenetic 

subsets of human immunodeficiency virus-related lymphomas. 

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6 Gloghini A, Gaidano G, Larocca LM, et al. Expression of cyclin-dependent 

kinase inhibitor p27(Kip1) in AIDS-related diffuse large-cell 

lymphomas is associated with Epstein-Barr virus encoded latent 

membrane protein 1. Am J Pathol 2002;161:163-71. 

7 Julien S, Radosavljevic M, Labouret N, et al. AIDS primary central 

nervous system lymphoma: molecular analysis of the expressed VH 

genes and possible implications for lymphomagenesis. J Immunol 

1999;162:1551-8. 

8 Gaidano G, Pasqualucci L, Capello D, et al. Aberrant somatic hypermutation 

in multiple subtypes of AIDS-associated non-Hodgkin 

lymphoma. Blood 2003;102:1833-41. 

9 Montesinos-Rongen M, Van Roost D, Schaller C, et al. Primary diffuse 

large B-cell lymphoma of the central nervous system are targeted 

by aberrant somatic hypermutation. Blood 2004;103:1869-75. 

10 Roychowdhury S, Peng R, Baiocchi RA, et al. Experimental treatment 

of Epstein-Barr virus associated primary central nervous system 

lymphoma. Cancer Res 2003;63:965-71. 

11 Fassone L, Cingolani A, Martini M, et al. Characterizationof Epstein- 

Barr virus genotype in AIDS-related non-Hodgkin’s lymphoma. AIDS 

Res Human Retroviruses 2002;18:19-26. 

12 Smith JR, Braziel RM, Paoletti S, et al. Expression of B-cell-attracting 

chemokine 1 (CXCL13) by malignant lymphocytes and vascular 

endothelium in primary central nervous system lymphoma. Blood 

2003;101:815-21. 

157 

13 Montesinos-Rongen M, Kuppers R, Schluter D, et al. Primary central 

nervous system lymphomas are derived from germinal-center B cell 

and show preferential usage of the V4-34 gene segment. Am J Pathol 

1999;155:2077-86. 

Intervento preordinato: 

Rabbit monoclonal antibodies (RabMAbs) 

M.C. Giangarè 

Lab Vision, Fremont, CA USA 

La recente messa a punto di una particolare tecnologia capace 

di generare anticorpi monoclonali da coniglio 

(RabMAbs) costituisce una importante novità nel campo della 

immunofenotipizzazione. Questa nuova classe di reattivi 

deriva dalla fusione di linfociti B di coniglio con una linea 

cellulare neoplastica di plasmacitoma di coniglio (240E), che 

dà luogo alla nascita di un ibrido stabile coniglio-coniglio. 

Lav Vision Corporation è la prima azienda produttrice certificata 

IVD, che ha introdotto sul mercato gli anticorpi monoclonali 

da coniglio clone SP. La disponibilità di tali 

RabMAbs consente di avvalersi di anticorpi dotati di caratteristiche 

peculiari: infatti essi fanno proprie sia le caratteristiche 

degli anticorpi monoclonali da topo (uniformità, specificità 

e disponibilità illimitata nel tempo) sia quelle degli anticorpi 

policlonali (elevata affinità). I RabMAbs, come ad esempio 

l’anticorpo RabMAB anti-ciclina D1, clone SP4, o 

l’anticorpo RabMAb anti-Estrogeno clone SP1, se paragonati 

ai comuni monoclonali da topo si caratterizzano per maggior 

affinità, maggior sensibilità ed inoltre consentono di essere 

impiegati a più elevate diluizioni d’uso. Inoltre, risultano essere 

particolarmente indicati per uso in metodiche di doppia 

colorazione ed anche per immunocolorazioni su tessuto di 

topo. Gli anticorpi Lab Vision monoclonali da coniglio 

(RabMAbs), clone SP, rappresentano una nuova classe di 

reattivi di elevata qualità per applicazioni sia in patologia diagnostica 

che in ricerca.

PATHOLOGICA 2004;96:158-162 

Autoscreen: stato dell’arte e prospettive 

future di un progetto europeo 

L. Di Bonito, D. Bonifacio, I. Colautti, S. Dudine, F. Zanconati 

U.C.O. di Anatomia patologica, Istopatologia e Citodiagnostica, 

Università di Trieste 

L’AUTOSCREEN fa parte di una serie di progetti finanziati 

dalla Comunità Europea presentati dall’European Take-up of 

Essential Information Society Technologies nell’area delle 

applicazioni medicali (EUTIST-M). 

Nello specifico, il progetto consiste nella validazione clinica di 

un sistema automatizzato di screening del cervico-carcinoma 

(NanoScan) su strisci convenzionali o su preparati in fase liquida, 

con l’obiettivo di poter dotare i servizi sanitari, pubblici e 

privati, in ambito europeo di un Sistema competitivo per qualità 

ed efficienza con analoghe strumentazioni di produzione 

statunitense già presenti sul mercato, ma decisamente costosi. 

L’esigenza di una lettura computer-assistita dei Pap test è nata 

in tempi relativamente recenti, a fronte della complessità 

del lavoro dei citolettori, della responsabilità che essi devono 

assumersi, e dei dati non sempre confortanti sulla qualità 

delle prestazioni (falsi negativi e falsi positivi). Per sua natura 

lo screening cervicale si basa sull’individuazione di cellule 

atipiche (a volte quantitativamente scarse) nel contesto di elementi 

normali presenti in numero considerevolmente elevato 

(300.000-400.000 cellule). Si può facilmente comprendere 

la fatica della lettura al microscopio, anche in considerazione 

del fatto che la quota di strisci negativi per lesioni intraepiteliali 

o per malignità rappresenta oltre il 90% di tutti i 

Pap test di un laboratorio. 

I sistemi automatizzati di screening, concepiti inizialmente 

come strumenti per il controllo della qualità, sono stati utilizzati 

anche per lo screening primario, con la possibilità di 

evitare la lettura manuale di una determinata quota di Pap 

test. Infatti tali strumenti non forniscono una “diagnosi”, ma 

si limitano a classificare i preparati in “non da rivedere” e “da 

rivedere”, sulla base di software dedicati, in grado di analizzare 

e rielaborare in breve tempo una serie di parametri morfometrici 

rilevati da un microscopio e da una telecamera. 

Per i casi “non da rivedere”, che idealmente corrispondono 

alla negatività, è prevista la possibilità di omettere lo screen- 

CORSO BREVE 

Nuovi orizzonti della Citologia: dalla “Citodiagnostica” 

alla “Citodiagnostica biotecnologica” 

Tab. I. Performance del CCS System. 

MODERATORE: L. PALOMBINI, NAPOLI 

ing manuale, consentendo al citolettore una maggiore attenzione 

ai preparati classificati come “da rivedere”, cioè quelli 

in cui sono presenti anomalie morfometriche riconducibili ad 

una probabile presenza di lesione squamosa o ghiandolare. È 

evidente che un sistema efficiente dovrebbe garantire 

l’assenza di qualsiasi tipo di anomalia cellulare nella quota di 

casi “non da rivedere”, anche se rari casi di ASCUS o di lesione 

di basso grado potrebbero essere tollerati. 

Diversi studi che hanno sperimentato sistemi già in commercio 

hanno evidenziato come un cut off del 25% di casi “non 

da rivedere” possa essere accettabile. 

Tra gli obiettivi del progetto AUTOSCREEN rientra anche la 

possibilità di aumentare fino al 60% la quota di Pap test per 

la quale lo screening manuale sia evitabile. Il prototipo del 

sistema è stato realizzato in Danimarca mentre lo studio di 

validazione ha visto il coinvolgimento di diverse qualificate 

strutture europee, tra cui l’EPCC dell’Università di Edimburgo, 

che ha assunto il coordinamento del progetto; il trial clinico 

è stato affidato a tre Centri universitari con lunga esperienza 

di citologia cervico-vaginale, l’Università di Odense 

(Danimarca), l’Imperial College School of Medicine di Londra 

(UK) e l’Università di Trieste (Italia). In ciascuna sede è 

stato installato un prototipo del NanoScan, costituito da computer, 

microscopio con telecamera, monitor e stampante, in 

grado di scansionare fino a 400 strisci alla volta, suddivisi in 

4 supporti rotanti. 

Il protocollo per la valutazione clinica del NanoScan è stato 

conforme alle linee guida sugli strumenti per lo screening 

primario proposto dall’International Academy of Cytology 

nel 1997. Secondo tali linee guida “i dispositivi di screening 

automatizzato non devono in alcun modo scendere al di sotto 

di determinati standard di prestazione e non devono esporre 

le pazienti a nuovi rischi o aumentare il livello di rischio 

esistente”. 

Il sistema (CCS System) processa le informazioni diagnostiche 

in due distinti step. Nel primo, il software di analisi 

d’immagine ricava dalle immagini digitali a colori, catturate 

dalla telecamera connessa al microscopio, una serie di 448 

parametri descrittivi. Nel secondo step, tali parametri vengono 

riversati in un modello di calcolo matematico, il cui 

risultato, in termini di predittività diagnostica, costituisce la 

base della segregazione dei preparati in due gruppi: “non ulteriore 

revisione” (NFR) e “ulteriore revisione” (FR). 

Predittività 

Diagnosi originarie FR NFR Totale 

Positivi/Inadeguati 435 (99,1) 4 (0,9) 439 

Negativi 138 (71,9) 54 (28,1) 192 

Totale 573 58 631

CORSO BREVE: CITOLOGIA 

Tab. II. Distribuzione dei casi NFR per categorie diagnostiche. 

Diagnosi NFR (Totale) % sul Totale 95%-CI (%) 

Inadeguati 1 (49) 2,0 0,05-10,9 

Negativi 54 (192) 28,1 21,9-35,1 

Atipici 2 (100) 2,0 0,2-7,0 

LSIL 1 (98) 1,0 0,03-5,6 

HSIL 0 (192) 0,0 0,0-1,9 

Totale 58 (631) 9,2 7,1-11,7 

Tab. III. Distribuzione dei casi FR per categorie diagnostiche. 

Diagnosi FR (Totale) % sul Totale 95%-CI (%) 

Inadeguati 48 (49) 98,0 89,2-99,95 

Negativi 138 (192) 71,9 65,0-78,1 

Atipici 98 (100) 98,0 93,0-99,8 

LSIL 97 (98) 99,0 94,5-99,97 

HSIL 192 (192) 100,0 98,1-1,0 

Totale 573 (631) 90,8 88,3-93,0 

Quest’ultima categoria include i casi potenzialmente positivi 

e gli inadeguati. 

Per la prima parte dello studio, definita External Validation 

Study (EVS), sono stati sottoposti a scansione in ciascuna 

sede di sperimentazione 650 Pap test opportunamente selezionati 

e rappresentativi di tutte le categorie diagnostiche 

citologiche. La riproducibilità diagnostica è stata valutata 

mediante la comparazione dei dati forniti dal sistema con le 

diagnosi manuali originarie dei singoli laboratori. 

Per la parte di nostra competenza la sensibilità e la specificità 

sono risultate rispettivamente del 99,1% e del 28,1%, con un 

tasso di “falsi negativi” dello 0,9%. Va tuttavia ricordato che 

tra questi ultimi era compreso anche 1 caso Inadeguato. 

I risultati dell’EVS, relativi a 631 casi, sono riassunti nelle 

Tabelle I e II. 

La seconda parte dello studio, definita Clinical Trial, prevedeva 

la scansione di 7.000 Pap test non selezionati in ciascun Centro 

e già screenati, per un totale di almeno 20.000 casi. 

L’elaborazione dei risultati dei primi 2.000 casi di ciascun 

Centro è tuttora in corso (6.000 casi sono stati ritenuti sufficienti 

per un’analisi statistica attendibile). 

L’esperienza a cui abbiamo partecipato ha dimostrato le 

grandi potenzialità della ricerca europea sia in campo tecnologico 

sia scientifico. 

Certamente saranno necessari gli adeguamenti del software 

gestionale e delle componenti meccaniche che una fase sperimentale 

ha il dovere di evidenziare, tuttavia la possibilità per 

i laboratori europei, di cui è noto l’ottimo livello della routine 

e del background culturale, di utilizzare una tecnologia 

progettata su misura sui nostri standard costituisce senza 

dubbio un’allettante prospettiva futura. 

Citologia in strato sottile: potenzialità e limiti 

A. Bondi 

Anatomia, Istologia Patologica, Citodiagnostica e Citogenetica, 

Azienda USL di Cesena 

L’allestimento di preparati per diagnostica citologica da liq- 

159 

uidi biologici è una pratica messa a punto molti anni fa, ed in 

genere prevede un preliminare arricchimento del campione 

tramite centrifugazione o filtrazione e poi il deposito delle 

cellule sul vetrino e quindi la fissazione e la colorazione. 

Gli studi sulla preparazione di campioni “in monostrato” o 

almeno “in strato sottile” finalizzati alla semplificazione dei 

preparati citologici per messa a punto di sistemi di lettura 

computer assistita, hanno permesso di approfondire e migliorare 

notevolmente le classiche tecniche di separazione delle 

cellule da un liquido e l’allestimento di buoni campioni per 

citodiagnostica. 

Le tecniche descritte comprendono metodiche di filtrazione, 

citocentrifugazione modificata, separazione in gradiente di 

densità. 

Fra le tecniche di filtrazione la più diffusa (ThinPrep da Cytyc 

Corp.) contempla un cilindro con una membrana di policarbonato 

su un versante, che tramite uno strumento semi-automatico 

viene immersa dall’alto nel contenitore con la 

sospensione cellulare. Mentre all’interno del cilindro viene 

attivata una depressione per aspirate il liquido, il cilindro 

ruota velocemente lungo il suo asse longitudinale realizzando 

una efficace disaggregazione dei gruppi cellulari ed una 

reale randomizzazione del campione. Un presso-sensore interno 

al cilindro determina l’arresto dell’aspirazione quando 

la gran parte dei fori della membrana sono occlusi (stop 

flow). A questo punto la membrana viene pressata contro un 

vetrino porta oggetti per il trasferimento del materiale cellulare. 

Altra tecnica di filtrazione prevede l’impiego di una siringa 

chiusa da un filtro rotondo (CytoShuttle da CellPath): le operazioni 

sono del tutto manuali e la realizzazione di preparati 

cellulari monostrato è meno standardizzata ma comunque efficace. 

Di nuova presentazione uno strumento di filtrazione che utilizza 

il principio delle rampe composte da un imbuto chiuso 

al collo da un filtro di policarbonato di forma rettangolare 

(CellSlide da Menarini Diagnostics). La randomizzazione è 

manuale o fatta su vortex, lo stop flow viene realizzato in 

funzione del tempo ed il trasferimento del filtro sul vetrino è 

semi-automatico. I preparati sono di buona qualità.

160 

Con la tecnica della citocentrifugazione si ottengono 

preparati con una base più ampia delle originali citocentrifughe 

degli anni ’80, ma è necessario controllare densità 

e volume della sospensione cellulare, perché se la quantità 

degli elementi corpuscolari è troppo alta si formano ammassi 

illeggibili (impossibilità del controllo dello stop 

flow). In commercio è disponibile un kit (CytoScreen da 

Seroa) composto da una citocentrifuga corredata da un nefelometro 

col quale si controlla ed eventualmente si aggiusta 

la densità della sospensione e si determina il tempo di 

citocentrifugazione. 

La separazione su gradiente di densità è disponibile in commercio 

(PrepStain ex AutoCyte da Tripath): dopo aver centrifugato 

la sospensione cellulare in una soluzione densa, con 

un sottile capillare si aspira lo strato corpuscolato che viene 

depositato in un pozzetto fissato sopra un vetrino portaoggetto. 

La randomizzazione è data dal processo di centrifugazione, 

la quantità di cellule depositate viene regolata 

dal volume di aspirazione del capillare. Dopo sedimentazione, 

nello stesso pozzetto si effettua la colorazione che 

risulta così ben standardizzata. 

Biopsia aspirativa per ago sottile 

e fenotipizzazione citofluorimetrica 

nella diagnosi e nella classificazione 

dei linfomi non Hodgkin 

P. Zeppa, G. Troncone, F. Fulciniti, A. Vetrani, L. Palombini 

Dipartimento di Anatomia Patologica e Citopatologia, Facoltà 

di Medicina e Chirurgia, Università “Federico II” di 

Napoli 

Introduzione. La tipizzazione citofluorimetrica (FC) delle 

popolazioni linfocitarie può essere utilizzato su campioni di 

biopsia aspirativa per ago sottile (FNAB) nello studio delle 

malattie linfoproliferative. In questo studio è stata effettuata 

una revisione critica di 307 casi di processi linfoproliferativi 

linfonodali ed extra linfonodali diagnosticati mediante 

FNAB e FC. 

Metodi. La serie studiata è stata raccolta in periodo di quattro 

anni e comprende 307 processi linfoproliferativi linfonodali 

ed extra linfonodali di cui 185 palpabili e 122 non palpabili 

eseguiti con controllo strumentale. FC è stata eseguita 

utilizzando i seguenti anticorpi fluoresceinati: CD3, 

CD4/CD8, CD5, CD19, FMC7/CD23/CD19, 

CD2/CD3/CD7, CD38/CD56/CD19, bcl-2, CD13/HLA-DR. 

La serie comprende 15 inadeguati, 10 sospetti, 135 iperplasie 

reattive (BHR), 70 linfomi non-Hodgkin primitivi (NHL) 

and 77 recidive di NHL (rNHL). Le diagnosi citologiche e 

citofluorimetriche sono state controllate mediante follow-up 

clinico nelle iperplasie reattive e nelle recidive di NHL e/o istologico 

nei NHL primitivi. Sono stati calcolati la sensibilità, 

specificità, valore predittivo di positività (PPV) e valore 

predittivo di negatività (NPV) delle diagnosi citologiche e 

citofluorimetriche di iperplasia reattiva, NHL e rNHL e nell’identificazione 

dei sottotipi specifici tra i NHL a piccole e 

medie cellule. 

Risultati. Le diagnosi combinate citologiche e citofluorimetriche 

hanno dato i seguenti risultati: sensibilità 93%, specificità 

100%, valore predittivo di positività (PPV) 95%, valore 

predittivo di negatività (NPV) 63%. Sottotipi specifici sono 

stati identificati in 70/115 casi (61%) dei linfomi a piccole e 


medie cellule con una sensibilità del 63%, specificità 88%, 

PPV 95% e NPV 37%. 

Conclusioni. La tipizzazione citofluorimetrica, utilizzata in 

combinazione alla biopsia aspirativa per ago sottile aumenta 

la precisione della diagnostica citologica nei processi linfoproliferativi 

linfonodali ed extralinfonodali e permette una 

corretta classificazione dei NHL a piccole cellule in più della 

metà dei casi evitando biopsie chirurgiche invasive in 

molti pazienti. 

Possibilità di estrazione del DNA 

da vetrini citologici di archivio 

A Caleo, G Troncone, L Palombini 

Dipartimento di scienze Biomorfologiche e Funzionali, Sezione 

di Citopatologia, Università “Federico II” di Napoli 

L’uso di tecniche di biologia molecolare in citopatologia è 

diventato negli ultimi anni una pratica accettata e riproducibile 

per determinate applicazioni. In seguito alla progressiva 

conoscenza dei meccanismi molecolari coinvolti 

nel cancro e in altre patologie, alcune metodiche molecolari, 

oltre che essere utilizzate nel campo della ricerca e 

degli studi sperimentali, hanno assunto un ruolo di utilità 

clinica nella routine citopatologica. La metodica molecolare 

maggiormente ottimizzata su campioni citologici è la 

reazione di polimerasi a catena (PCR). La PCR è un metodo 

altamente sensibile che permette il recupero di grosse 

quantità di DNA da piccole quantità di materiale di partenza, 

e quindi facilmente adattabile a campioni relativamente 

piccoli come quelli ottenuti dall’aspirazione per ago sottile 

(FNA). 

Il DNA può essere estratto da diversi tipi di preparazioni citologiche: 

campioni citologici in sospensione freschi o fissati, 

vetrini di archivio, preparazioni cell block. Per l’estrazione 

da campioni in sospensione, parte del materiale cellulare ottenuto 

da un ago-aspirato può essere raccolto in pochi ml di 

un liquido tampone cellulare (PBS, soluzione salina) oppure 

in un liquido fissativo (etanolo e metanolo sono ritenuti i fissativi 

migliori) 1 2 . L’estrazione da vetrino prevede l’asportazione 

delle cellule mediante grattamento con una spatola 

sterile e la raccolta in tubi per PCR 3 . Sia nel caso di cellule 

in sospensione che di cellule asportate da vetrino si può 

procedere all’estrazione del DNA con metodica standard 

(fenolo-cloroformio) o con kit specifici per l’estrazione di 

DNA genomico. 

Le differenti preparazioni a confronto mostrano risultati 

sovrapponibili 4 . I campioni di archivio, indipendentemente 

dal tipo di colorazione effettuata e dal fissativo usato, forniscono 

una quantità di DNA sovrapponibile a quella ottenuta 

da campioni freschi. L’unica eccezione è rappresentata 

dalle preparazioni cell block in cui l’estrazione di una minore 

quantità di DNA è probabilmente condizionata dalla pregressa 

fissazione in formalina. La quantità di DNA estratto correla 

principalmente con la cellularità di partenza 4 . Per l’estrazione 

da cellule in sospensione una quantità adeguata di 

cellule è quella ottenuta da 2-5 aspirazioni con un ago 23 o 

25 G 2 . Per l’estrazione da campioni di archivio, un singolo 

vetrino anche scarsamente cellulato è sufficiente 4 . La misurazione 

del DNA allo spettrofotometro in genere fornisce 

valori non dosabili ma questo non sembra condizionare la 

buona riuscita di una PCR. Una piccola quantità di DNA di 

partenza può essere infatti compensata dalla modifica di al-

CORSO BREVE: CITOLOGIA 

cuni parametri tecnici nella metodica (primers altamente 

specifici, metodica seminested, numero di cicli di PCR). La 

qualità del DNA può essere valutata attraverso l’amplificazione 

di geni costitutivi (β-globina, β-actina). Pur non essendo 

un fattore particolarmente critico per la riuscita di una 

PCR, la qualità del DNA condiziona il tipo di applicazione 

che può essere eseguita. 

Le applicazioni più frequenti della PCR in citologia 

riguardano lo studio di clonalità nelle malignità ematologiche, 

la rilevazione di mutazioni puntiformi, la rilevazione 

di microrganismi (HPV su strisci cervicali, Mycobacterium 

tubercolosis su aspirato linfonodale), la rilevazione di traslocazioni 

(t 14;18 nel linfoma follicolare, t 11;14 nel linfoma 

mantellare, ret/PTC nel carcinoma papillifero della tiroide). 

Lo studio di clonalità nelle malignità ematologiche è rappresentato 

essenzialmente dalla valutazione del riarrangiamento 

delle catene pesanti delle immunoglobuline nei linfomi B 

cellulari 1 5 . Il razionale di questa applicazione consiste nel 

fatto che le proliferazioni clonali possono essere considerate 

markers di malignità. Nel caso delle proliferazioni linfoidi, i 

linfociti neoplastici sono monoclonali mentre le popolazioni 

B-cellulari normali e reattive sono policlonali. L’amplificazione 

mediante PCR rileva il riarrangiamento somatico a 

cui vanno incontro i geni delle immunoglobuline durante la 

loro maturazione. Tali riarrangiamenti sono unici per ciascuna 

cellula e quindi non rilevabili in una popolazione policlonale. 

Poiché uno studio di clonalità richiede piccole quantità 

di DNA, anche piccole quantità di tessuto linfoide possono 

essere sufficienti. Il DNA amplificato appare in un gel 

di elettroforesi sottoforma di una banda dominante in caso di 

linfomi B-cellulari e sottoforma di multiple bande nelle 

popolazioni linfoidi normali e reattive. Nella valutazione di 

uno studio di clonalità va considerata la possibilità di risultati 

falsi positivi e falsi negativi 5 . Ad esempio campioni contenenti 

un numero assai ridotto di linfociti possono dar luogo 

alla rilevazione di bande pseudo-clonali, così come una banda 

pseudoclonale può essere la conseguenza di un erroneo 

appaiamento dei primers. D’altra parte campioni contenenti 

un discreto numero di cellule non neoplastiche possono 

generare un background policlonale che può mascherare la 

banda dominante. In questi casi, la selezione accurata delle 

sole cellule neoplastiche tramite microdissezione può assicurare 

una maggiore specificità dello studio di clonalità. Infine 

va considerata la possibilità di risultati falsi negativi dovuti al 

mancato appaiamento dei primers in seguito a modificazioni 

geniche nelle sequenze target (ad esempio l’ipermutazione 

somatica nei geni VH delle immunoglobuline o la traslocazione 

di bcl2 nei linfomi follicolari). Da qui la necessità 

dell’individuazione accurata della banda prominente e la evidenza 

della riproducibilità della stessa per prevenire una falsa 

diagnosi di monoclonalità. I dati di PCR dovrebbero comunque 

essere sempre analizzati alla luce dei dati clinici e 

morfologici. La sensibilità riportata in letteratura dello studio 

di clonalità tramite PCR su materiale citologico varia tra il 50 

e l’80% (pressoché sovrapponibile a quella relativa a campioni 

istologici) 5 . Tale variabilità è strettamente dipendente dal 

tipo di linfoma B esaminato (nei linfomi follicolari e a grandi 

cellule la sensibilità è più bassa per la presenza di un maggior 

numero di alterazioni genetiche). 

La rilevazione di mutazioni puntiformi è un utile test diagnostico 

ancora oggi prevalentemente utilizzato a scopi di 

ricerca 1 . La conoscenza di una specifica mutazione puntiforme 

in un gene e la conseguente sintesi di specifici 

primers, permette l’amplificazione della sequenza target e 

quindi la identificazione della mutazione tramite sequenzia- 

161 

mento (strand specific PCR amplification). In un recente studio 

abbiamo dimostrato come le mutazioni dell’oncogene 

BRAF possono essere facilmente rilevate in DNA genomico 

estratto da vetrini di archivio di lesioni tiroidee permettendo 

una utile analisi retrospettiva 6 . 

In conclusione, la PCR è una metodica molecolare facilmente 

applicabile a campioni citologici anche di archivio, fornendo 

un utile ausilio diagnostico in quei casi che non possono essere 

conclusivi sulla base dei soli dati cito-morfologici. 

Bibliografia 

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Nuove prospettive nella diagnostica 

del nodulo tiroideo 

G. Troncone, G. Salvatore1 , A. Caleo, I. Migliaccio, M. 

Santoro1 , L. Palombini 

Dipartimenti di Scienze biomorfologiche e funzionali, 1 di 

Biologia e Patologia cellulare e molecolare, Università “Federico 

II” di Napoli 

La biopsia per ago sottile (FNB) permette la diagnosi di neoplasia 

tiroidea nella maggior parte dei casi; raramente, il 6% 

dei nostri casi, la diagnosi è dubbia 1 . Poiché l’esame intraoperatorio 

è anch’esso spesso inconclusivo, si esegue una 

lobectomia diagnostica 2 . Questa rischia di essere “troppo”, 

se il processo non è neoplastico, o “troppo poco” se si tratta 

di una neoplasia maligna che necessita di tiroidectomia totale. 

Sono così necessari markers di neoplasia sensibili e 

specifici. Tuttavia, a dispetto dei numerosi test proposti, 

questo problema è complesso e di difficile soluzione. 

Poiché il carcinoma tiroideo raccoglie entità diverse, ciascuna 

con una propria base molecolare, è improbabile l’esistenza 

di un unico marker di malignità; d’altronde, al di là del 

dilemma classico inerente la distinzione tra adenoma e carcinoma 

follicolare che per definizione è solo possibile sul campione 

operatorio, una citologia dubbia può sottendere numerose 

entità 3 . Infatti, l’iperplasia adenomatosa e la neoplasia 

follicolare possono a volte condividere la stessa citologia 

od altre volte le modificazioni nucleari classiche del carcinoma 

papillifero (PTC) possono essere sfumate (variante follicolare), 

difficilmente riconoscibili (variante ossifila), oscurate 

dalla colloide (variante cistica) o presenti in condizioni 

benigne (tiroidite di Hashimoto). In questi casi la citologia, 

pur non essendo autosufficiente, è comunque necessaria per 

riconoscere il quesito diagnostico ed indirizzare la scelta del 

test più adatto.

162 

Inoltre, nessuno dei marcatori usati fino ad oggi è espresso 

solo nei carcinomi; anche la molecola più promettente, la 

galectina-3 4 , è seppur raramente positiva negli adenomi 5 . Né 

pare probabile che le nuove metodiche di screening genomico 

possano risolvere del tutto il problema. Infatti, sebbene il 

profilo di espressione genica permetta in teoria di distinguere 

un adenoma da un carcinoma follicolare 6 , nella pratica i 

nuovi marker immunocitochimici ricavati dalle librerie genomiche, 

come DDIT3 ed ARG, mostrano anch’essi dei limiti 

7 . D’altro canto sono le stesse basi molecolari della neoplasia 

follicolare ad essere poco chiare; è infatti probabile 

che gli adenomi raccolgano entità biologicamente eterogenee, 

con una maggioranza di forme benigne ed una minoranza 

di forme potenzialmente maligne, ancora “in situ” al momento 

della diagnosi. Il riarrangiamento PPAR-gamma, presente 

sporadicamente negli adenomi 8 e più frequentemente 

nei carcinoma follicolari minimamente invasivi 9 , può essere 

di aiuto nella diagnosi su FNC di carcinoma follicolare incipiente. 

Se lo screening genomico è in grado di fornire nuovi marker 

immunocitochimici, sempre più specifici e sensibili, la loro 

introduzione diagnostica può essere vanificata da alcune difficoltà, 

insite nella natura stessa del campione citologico 3 . 

Infatti, l’immunocitochimica difficilmente genera risultati 

riproducibili su strisci decolorati; è quindi necessario utilizzare 

strisci freschi, che tuttavia non offrono garanzie precise 

circa la loro effettiva cellularità. D’altro canto, ciascun marcatore 

è dapprima testato in istologia e solo susseguentemente 

applicato in citologia. Tale validazione passa attraverso 

studi multicentrici. Tuttavia, le differenze inter-istituzionali 

sulle tecniche eseguite sia per l’allestimento del campione 

(cell-block vs. strisci vs. citocentrifugati) che per la fissazione 

(etanolo vs. acetone vs. formaldeide) possono ostacolare 

la interpretazione dei risultati 3 . È quindi necessario 

adottare procedure tecniche uniformi e riproducibili. A tal 

proposito un buon esempio sull’approccio metodologico da 

seguire è offerto dallo studio multicentrico, coordinato da Armando 

Bartolazzi, inerente la validazione della galectina-3 in 

citologia ed al quale partecipano numerose Istituzioni Italiane. 

Tale studio si basa sull’applicazione da parte di tutte le 

unità di un protocollo rigoroso basato sulla raccolta prospettica 

di campioni freschi, sull’allestimento di cell-blocks, sulla 

standardizzazione del trattamento di smascheramento antigenico 

e sull’utilizzo di un sistema di rilevamento del segnale 

biotin-free 10 . 

Alcune delle difficoltà sopraelencate possono essere superate 

con l’impiego di tecniche molecolari. Questo approccio appare 

soprattutto valido per la diagnosi di carcinoma papillifero. 

Tale tumore è contraddistinto nella maggioranza dei casi 

dalla presenza degli oncogeni chimerici RET/PTC od in alternativa 

dalla mutazione puntiforme del gene BRAF 

(V599E). Queste alterazioni molecolari possono essere evi- 


denziate a partire dagli stessi vetrini utilizzati per la diagnosi 

microscopica 11 . Se il re-arrangiamento RET/PTC può anche 

essere presente in alcuni casi di tiroidite di Hashimoto, riflettendo 

un limite condiviso anche da altri marcatori quali 

galectina-3 e p27Kip1 12 13 , al contrario BRAF è mutato solo 

nei carcinomi papilliferi (circa il 45%); quindi la dimostrazione 

della mutazione di BRAF in un cellule aspirate 

da un nodulo tiroideo può essere utile per convertire una diagnosi 

citologica di inconclusivo in una di carcinoma papillifero, 

dando così l’indicazione per una tiroidectomia totale e 

scongiurando la possibilità di un intervento chirurgico in due 

tempi 11 . 

Bibliografia 

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PATHOLOGICA 2004;96:163-166 

Apoptosi: controllo della crescita cellulare 

e cancro 

A. Giordano 

Dipartimento di Patologia Umana ed Oncologia, Università 

di Siena, Sbarro Institute for Cancer Research and Molecular 

Medicine, Temple University, Philadelphia USA 

L’apoptosi è il processo di morte cellulare programmata ed è 

parte integrante dello sviluppo embrionale e fetale dell’organismo 

e dell’omeostasi tissutale dell’adulto. La cellula 

muore in risposta a diversi stimoli ma questo avviene attraverso 

un processo finemente regolato dal punto di vista molecolare. 

Per tale motivo l’apoptosi si distingue da un’altra 

forma di morte cellulare, la necrosi, in cui la morte cellulare 

incontrollata, indotta ad esempio da sostanze tossiche, porta 

alla lisi della cellule e ad una successiva risposta infiammatoria. 

Al contrario l’apoptosi è un processo durante cui la cellula 

gioca un ruolo attivo nella propria morte: per questo motivo 

ci si riferisce alla apoptosi come ad un “suicidio della 

cellula”. 

La cellula in apoptosi presenta determinate caratteristiche 

morfologiche: diminuisce di volume, perde l’espressione di 

proteine di membrana ed espone sulla stessa membrana plasmatica 

componenti, normalmente nascosti o poco espressi. 

Questi verranno riconosciuti dalle cellule vicine o dai 

macrofagi, che opereranno la fagocitosi della cellula apoptotica. 

L’organizzazione interna è mantenuta, almeno nelle 

fasi precoci del processo, mentre a livello nucleare si osserva 

la disgregazione dei nucleoli, il taglio della lamina, la condensazione 

e il taglio diffuso della cromatina in frammenti di 

circa 200 paia di basi o multipli interi di questi numeri, 

lunghezza che corrisponde a quella dei tratti di DNA internucleosomale. 

Frammenti discreti di materiale nucleare raggiungono 

in seguito la membrana plasmatica, dove vengono 

circondati da evaginazioni della membrana stessa che conferiscono 

alla cellula un aspetto a bolle (blebbing). Queste 

blebs si staccano dal corpo cellulare trascinando con sé parte 

del citoplasma e del materiale nucleare, dando origine ai 

cosiddetti corpi apoptotici. Non verificandosi un versamento 

di contenuto citosolico nell’ambiente, l’apoptosi non è accompagnata, 

a differenza della morte cellulare per necrosi, da 

una risposta infiammatoria. 

L’innesco del programma apoptotico può avere diverse origini: 

1) via estrinseca o extracellulare, nel caso di un legame 

di specifiche molecole-segnale coi propri recettori posti sulla 

membrana plasmatica. Ne è un esempio il legame del recettore 

Fas col suo ligando Fas-L; 2) via intrinseca o intracellulare 

nel caso in cui lo stimolo del processo apoptotico 

abbia origine all’interno della cellula, come ad esempio nel 

caso di un danno a carico del DNA o della produzione di 

specie reattive dell’ossigeno. Questa via coinvolge i mitocondri 

ed in particolare la famiglia di proteine Bcl-2. In entrambe 

le vie di innesco del programma apoptotico sono 

coinvolte delle cistein-proteasi, le CASPASI, enzimi prote- 

CORSO BREVE 

L’Apoptosi. Dai meccanismi molecolari 

agli aspetti applicativi 

MODERATORI: B. AGOSTINI (NAPOLI), G. BEVILACQUA (PISA) 

olitici presenti nella cellula sotto forma di zimogeni, forme 

inattive che vengono attivate a loro volta da tagli proteolitici. 

Le caspasi si distinguono in INIZIATRICI, che sono attivate 

nelle fasi precoci del processo apoptotico e hanno generalmente 

la funzione di attivare altre caspasi, le EFFETTRICI, 

che hanno come target proteine cellulari che hanno un ruolo 

essenziale nella integrità funzionale della cellula come ad esempio 

proteine del citoscheletro, proteine coinvolte nel ciclo 

cellulare e proteine coinvolte nel riparo del DNA. 

Come già accennato, l’apoptosi ha un ruolo fisiologico nel 

regolare nel modo appropriato lo sviluppo di un organismo. 

Inoltre il processo dell’apoptosi gioca un ruolo fondamentale 

anche in altri ambiti come ad esempio nel sistema immunitario 

in cui viene indotta l’apoptosi di linfociti che siano in 

grado di riconoscere il self. Anche in numerosi processi patologici, 

quali, ad esempio infezioni virali, malattie autoimmuni 

e tumori, una deregolazione dell’apoptosi può essere la 

base (o una delle cause) della patogenesi della malattia. Nel 

caso dei tumori infatti può verificarsi uno sbilanciamento dei 

fattori che controllano il processo apoptotico, come ad esempio 

un incremento dei fattori anti-apoptotici o una diminuzione 

o inattivazione dei fattori pro-apoptotici. 

Recentemente sta emergendo il ruolo delle proteine della 

famiglia delle proteine del retinoblastoma (RB) non solo nella 

regolazione della progressione nel ciclo cellulare ma anche del 

processo apoptotico. La proteina pRb1/p105 è stato dimostrato 

come sia in grado di inibire il processo apoptotico in diversi 

modelli cellulari e murini. Inoltre pRb1/p105 subisce un taglio 

proteolitico da parte delle caspasi, il che rappresenta una conferma 

del suo possibile ruolo di proteina anti-apoptotica. Per 

quanto riguarda pRb2/p130 è stato dimostrato come possa 

avere rendere cellule di glioblastoma più sensibili all’apoptosi 

indotta dall’esposizione a radiazioni gamma. Al contrario, in 

un modello di carcinoma ovarico, pRb2/p130 è in grado di 

diminuire l’apoptosi indotta da camptotecina e doxorubicina, 

inibitori rispettivamente delle topoisomerasi I e II, ma non 

quella indotta da taxolo. Questo supporta l’idea che 

pRb2/p130 abbia un ruolo nel processo apoptotico, il quale 

dipende dal contesto cellulare e dal tipo di stimolo apoptotico, 

nella fattispecie dal tipo di agente chemoterapico utilizzato. Inoltre 

una valutazione del livello di espressione di pRb2/p130 

nel tumore può essere utile per individuare una terapia che 

potrebbe risultare più efficace per la cura del paziente. 

Apoptosi: approccio metodologico 

R. Monaco 

U.O.C. Anatomia ed Istologia Patologica, AORN “Cardarelli”, 

Napoli 

L’apoptosi è il risultato di un complesso sistema interno alla 

cellula, sempre presente, ma generalmente in “stand-by” e 

che entra rapidamente in attività a seguito di stimoli sia intra 

che extracellulari. Non sono molti i markers biochimici

164 

specifici di questo sistema regolato in maniera complessa ed, 

anche se ne sono descritti diversi regolatori, un esame critico 

dei dati della letteratura indica che non sempre c’è consenso 

sul loro valore di indicatori di apoptosi. 

Un punto critico per la quantificazione, inoltre, è dato dal fatto 

che, indipendentemente dallo stimolo iniziatore, il decorso 

temporale dell’apoptosi è molto rapido, come anche il 

processo di eliminazione dei residui cellulari da parte di 

macrofagi e/o cellule di derivazione non macrofagica. Non ci 

sono dati certi, ma il decorso apoptotico potrebbe completarsi 

in circa 1-2 ore. La rapidità di tale processo implica che, in 

ogni misurazione statica, anche pochissimi elementi in apoptosi 

potrebbero riflettere, in realtà, un turnover cellulare elevato. 

Inoltre, il tempo di apoptosi non è uguale per tutte le 

cellule ed in tutte le condizioni, e ciò ha importanti implicazioni 

nella quantificazione dell’apoptosi. L’approccio 

metodologico alla valutazione diretta dell’apoptosi richiede 

innanzitutto la scelta tra metodi statici e metodi dinamici, che 

dipende dal materiale di partenza e dall’obiettivo finale. Tra 

i metodi statici bisogna includere l’esame morfologico. 

Sebbene, storicamente, i metodi morfologici siano i favoriti, 

la scoperta che l’apoptosi era associata con la frammentazione 

del DNA, con rotture tra i nucleosomi, ha condotto 

alla possibilità di utilizzare tale evento come parametro di 

analisi. Sfortunatamente, i metodi di analisi del DNA che 

comportano elettroforesi, oltre a far perdere ogni informazione 

topografica, non permettono facili quantificazioni. 

Negli anni ’90 sono diventati popolari diverse metodologie, 

sempre basate sulla frammentazione del DNA associata all’apoptosi, 

ma praticabili su materiale citologico ed istologico. 

Questi metodi sono sicuramente utili nell’identificare 

corpi apoptotici, ma non sono scevri da problematiche (per 

esempio legate alla fissazione e processazione), ed è discutibile 

se abbiano più valore della sola morfologia. La frammentazione 

del DNA può essere utilizzata per identificare 

cellule in apoptosi poiché alcuni enzimi possono aggiungere 

nucleotidi marcati ai terminali dei frammenti di DNA. I nucleotidi 

marcati possono poi essere rivelati con metodi immunoistochimici. 

Tali metodiche comprendono il TUNEL 

(terminal deossynucleotidyl transferasi mediated UTP nick 

end labeling) e l’ISEL (in situ end labeling techniques). Diverse 

marcature, radioattive e non, possono essere utilizzate. 

Le marcature non radioattive sono preferibili per facilità d’uso, 

stabilità, semplicità e rapidità nell’identificazione e 

notevole risoluzione. Utilizzando questo approccio è stato 

chiaramente dimostrato che la quantità e la distribuzione 

delle cellule marcate è correlata con la quantità e distribuzione 

delle cellule riconosciute in apoptosi anche con altri 

metodi. La metodica può essere modificata utilizzando la 

fluorescenza, per la valutazione in situ o in citoflussimetria. 

Si può, inoltre, praticare un’immunoistochimica multiparametrica, 

per l’identificazione di specifici tipi cellulari. Le 

metodiche basate sul riconoscimento della frammentazione 

del DNA, tuttavia, hanno alcuni limiti; per esempio riconoscono 

solo l’apoptosi in fase tardiva, e possono evidenziare 

anche cellule in necrosi. Inoltre le tecniche in situ, effettuate 

su tessuti fissati ed inclusi in paraffina, possono essere 

condizionate dallo spessore delle sezioni e dai tempi occorsi 

dal prelievo di tessuto alla fissazione. Un diverso approccio, 

ovviamente legato al tipo di analisi che si vuole effettuare 

ed alla natura del tessuto utilizzato, è costituito dalla 

citoflussimetria. La citometria a flusso consente di analizzare 

grandi quantità di cellule in tempi rapidi, ma non fornisce informazioni 

topografiche sugli elementi in apoptosi, e 

richiede popolazioni cellulari omogenee. 


Metodi di studio dell’apoptosi in citometria a flusso comprendono: 

– l’analisi della distribuzione del DNA del picco sub-G1 (colorazione 

con Ioduro di Propidio); 

– la valutazione della perdita di asimmetria della membrana 

citoplasmatica (colorazione con Annexina V); 

– la valutazione della frammentazione del DNA (metodo 

TUNEL). 

Il test all’Annexina V è il metodo oggi che ha dimostrato 

migliore sensibilità, specificità e riproducibilità, e rivela la 

rilocazione della fosfatidilserina (PS) a livello della membrana 

citoplasmatica delle cellule in apoptosi. Nelle cellule integre, 

infatti, la distribuzione dei fosfolipidi è asimmetrica, in quanto 

il versante interno della membrana cellulare contiene fosfolipidi 

anionici (come la PS) ed il versante esterno fosfolipidi 

neutri. Nelle cellule in apoptosi, invece, la quantità di PS sul 

lato esterno della membrana citoplasmatica aumenta, e l’Annexina 

V, una proteina che si lega ai gruppi fosfolipidici in presenza 

di ioni Ca++ e che ha una forte affinità per la PS, può 

legarsi alla PS esposta sulla superficie cellulare, divenendo 

così un utile mezzo per l’evidenziazione di cellule in apoptosi. 

Essendo tali modificazioni della membrana cellulare eventi iniziali 

del processo apoptotico, il test all’Annexina V rivela cellule 

in fase precoce di apoptosi. È una metodica di 

preparazione semplice e rapida, applicabile su numerosi tipi 

cellulari; può essere molto utile soprattutto nella valutazione di 

modificazioni della cinetica apoptotica dopo induzione od in 

condizioni particolari, su specifiche e congrue popolazioni cellulari. 

L’Annexina V rivela anche cellule in necrosi, poiché si 

lega alla PS presente sul versante interno della membrana citoplasmatica 

alterata a causa della necrosi. Tuttavia una contemporanea 

colorazione con Ioduro di Propidio, che si lega al 

DNA ma non colora cellule in fase precoce di apoptosi in 

quanto non in grado di penetrare la membrana cellulare integra, 

consente in genere una distinzione tra cellule Annexina V 

positive, necrotiche o apoptotiche. 

Altri metodi sono descritti, ma una metodologia standardizzabile 

che consenta la rivelazione e la quantificazione del 

fenomeno apoptotico nei differenti tessuti ed in diverse condizioni, 

che sia di relativamente semplice effettuazione e di 

buona riproducibilità, non sembra ancora essere disponibile. 

Bibliografia 

Hall PA. Assessing apoptosis: a critical survey. Endocrine-related Cancer 

1999;6:3-8. 

Kumar S. Measurement of caspase activity in cells undergoing apoptosis. 

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Overbeeke R, et al. Early features of apoptosis detected by four different 

flow cytometry assays. Apoptosis 1998;3:115-21. 

L’apoptosi nei tumori neuroblastici 

S. Uccini1 , C. Colarossi1 , S. Scarpino1 , S. Bosco1 , O. Mannarino2 

, D. Cozzi2 , A. Clerico2 , M.R. Nicotra3 , P.G. Natali3 

2 4 

, C. Dominici 

1 2 Dipartimento di Medicina Sperimentale e Patologia, e Dipartimento 

di Pediatria, Università di Roma “La Sapienza”; 

3 Laboratorio di Immunologia, Istituto Nazionale dei Tumori 

“Regina Elena”; 4 Laboratorio di Oncologia, Ospedale Pediatrico 

IRCCS “Bambino Gesù”, Roma 

Introduzione. I tumori neuroblastici periferici sono considerati 

i tumori embrionali per antonomasia, in quanto si

CORSO BREVE: APOPTOSI 

sviluppano durante la vita fetale e nelle prime fasi della vita 

postnatale ad origine dalle cellule della cresta neurale. 

Nell’embriogenesi, a partire dalla 4 a -5 a settimana nidi di neuroblasti 

indifferenziati si organizzano in strutture nervose e 

gangliari paravertebrali, altri migrano nella parete dei visceri 

addominali dove differenziano in cellule gangliari dei plessi 

di Meissner ed Auerbach, altri ancora raggiungono la midollare 

del surrene dove differenziano in cellule neuroendocrine 

o cromaffini. Appartengono al sistema periferico autonomo 

anche le cellule gliali di Schwann e le cellule subtentacolari 

la cui funzione non è ancora perfettamente chiarita 1 . 

I tumori neuroblastici sono distinti in tre principali sottotipi 

morfologici: neuroblastoma (Schwannian stroma poor), ganglioneuroblastoma 

(Schwannian stroma rich) e ganglioneuroma 

(Schwannian stroma dominant) 2 . 

I neuroblastomi hanno caratteristiche biologiche uniche in 

quanto possono andare incontro sia ad involuzione e regressione 

spontanea che a maturazione spontanea o conseguente 

all’impiego di chemioterapia citotossica, fino a ganglioneuroblastoma 

o ganglioneuroma. Questi fenomeni sono stati 

correlati a processi apoptotici che sono frequentemente osservati 

nel normale sviluppo del sistema nervoso centrale e 

periferico, in parte forse dovuti all’assenza di produzione di 

fattori neurotropici quali il Nerve Growth Factor (NGF) tra 

gli altri. Molti neuroblastomi hanno invece un comportamento 

aggressivo fin dall’esordio. Fattori prognostici importanti 

sono l’età alla diagnosi, il tipo istologico, lo stadio clinico e 

le alterazioni genetiche quali l’amplificazione del gene MY- 

CN, la perdita allelica della banda 36 del braccio corto del 

cromosoma 1(1p36), le extracopie del braccio lungo del cromosoma 

17 (17q) e la di/tetraploidia. 

Per quanto concerne il gene MYCN localizzato nel braccio 

corto del cromosoma 2, esso può andare incontro a processi 

di amplificazione che danno luogo ad un numero di copie 

del gene per cellula che può arrivare a 400. Gli aumentati 

livelli di MYCN causerebbero l’attivazione transcrizionale 

di un subset di geni in grado di promuovere la proliferazione 

cellulare 3 . La delezione del braccio corto del cromosoma 

1 coinvolgerebbe invece un gene soppressore che 

risulterebbe quindi inattivato in un terzo circa dei neuroblastomi. 

Non sono noti invece i meccanismi tramite i quali 

la presenza di extracopie del braccio lungo del cromosoma 

17 e di di/tetraploidia è associata a maggiore aggressività 

tumorale. 

165 

L’apoptosi è una forma spontanea di morte cellulare con aspetti 

morfologici peculiari quali il rigonfiamento e la condensazione 

delle membrane nucleari e della cromatina nucleare, 

con clivaggio endonucleasico di regioni del DNA in 

frammenti della lunghezza di 180 bp nella fase finale. 

L’apoptosi viene attivata da diversi eventi, alcuni interni alla 

cellula quali un danno a carico del DNA, altri esterni quali le 

alterazioni della membrana cellulare ad opera di enzimi proteolitici 

o per attivazione dei cosiddetti “death receptors”, 

l’archetipo dei quali è il Fas (APO1, CD95). Tutti questi stimoli 

apoptotici hanno come evento finale l’attivazione di 

specifiche proteasi, dette caspasi, della famiglia delle endoproteasi 

in grado di clivare i legami peptidici contenenti un 

aspartato all’N-terminale. Un importante meccanismo di regolazione 

del segnale apoptotico è mediato dalla famiglia dei 

geni Bcl-2/Bax. Sono stati identificati finora 16 membri di 

questo gruppo di proteine, delle quali alcune come Bax e 

Mcl-1 sono attivatori dell’apoptosi, mentre altre come Bcl-2 

e Bcl-XL la inibiscono. 

Per quanto concerne la rilevanza dell’apoptosi nei tumori 

neuroblastici periferici, si ricorda che già nella classificazione 

INPC, l’indice mitotico-cariorressico (MKI) era stato 

introdotto tra gli elementi morfologici di rilevanza prognostica. 

Più recentemente, studi in vitro hanno dimostrato 

che i neuroblastomi esprimono elevati livelli di Bcl-2 e Bcl- 

XL e che tale sovraespressione correla con fattori prognostici 

negativi quali il tipo istologico sfavorevole ed amplificazione 

di MYCN 4 . Inoltre è stato riportato che 

Fas(APO1/CD95) è in grado di indurre apoptosi in vitro in linee 

cellulari di neuroblastoma 5 . Le alterazioni dell’apoptosi 

nel neuroblastoma sembrerebbero riguardare anche le caspasi 

con riduzione della caspasi 8 in linee cellulari di neuroblastomi 

MYCN-amplificati 6 . 

Nel presente lavoro ci siamo proposti di esaminare alcuni dei 

pathways apoptotici presenti nei tumori neuroblastici periferici 

e di correlare questi risultati con gli aspetti morfologici,il 

comportamento clinico e gli altri parametri molecolari. A 

questo scopo sono state utilizzate metodiche di immunoistochimica 

ed una metodica di recente acquisizione rappresentata 

dai macroarrays in grado di testare l’espressione nel 

tessuto di 96 geni coinvolti in senso positivo e negativo nei 

meccanismi apoptotici. 

Risultati e conclusioni. L’espressione di Bcl-2 e Bcl-XL, e 

Bax e Mcl-1 è stata studiata mediante immunoistochimica su 

Tab. I. Espressione immunoistochimica di fattori coinvolti nell’apoptosi in 71 casi di tumori neuroblastici periferici raggruppati per tipo 

istologico. 

Numero INPC BCL-2 BCL-XL BAX MCL-1 

casi 

1 GN 0/1 0/1 0/1 0/1 

14 GNB 10/14 5/14 5/14 6/14 

(71%) (36%) (36%) (43%) 

44 NB 36/44 28/44 30/44 22/44 

MYCN- (81%) (67%) (68%) (50%) 

12 NB 8/12 8/12 7/12 6/12 

MYCN+ (67%) (67%) (58%) (50%) 

GN: ganglioneuroma 

GNB: ganglioneuroblastoma 

NB MYCN-: neuroblastoma con MYCN in singola copia 

NB MYCN+: neuroblastoma con MYCN amplificato

166 

sezioni criostatiche di 71 tumori neuroblastici periferici osservati 

nel periodo 1990-tutt’oggi. Di essi, 56 erano neuroblastomi 

(NB) di cui 12 MYCN-amplificati (21%), 14 erano ganglioneuroblastomi 

(GNB) ed uno era un ganglioneuroma (GN). 

Come riportato nella Tabella I, l’espressione di Bax e Bcl-XL 

correlava con il tipo istologico, essendo entrambi nettamente 

più elevati nei NB che nei GNB. Infatti, il 36% dei GNB esprimeva 

Bax e Bcl-XL rispetto al 58/68% ed al 67% dei NB 

con o senza MYCN-amplificazione. In contrasto, l’espressione 

di Bcl-2 e Mcl-1 era sovrapponibile nei NB e nei GNB, 

essendo Bcl-2 espresso nel 71% dei GNB e nel 67/81% dei 

NB con o senza MYCN-amplificazione, e Mcl-1 era espresso 

nel 43% dei GNB e nel 50% dei NB con o senza MYCNamplificazione. 

Analogamente, non si è osservata alcuna differenza 

significativa nell’espressione di Bax, Bcl-XL, Bcl-2 

e Mcl-1 nei neuroblastomi MYCN-amplificati rispetto a 

quelli a singola copia. Quando l’espressione di Bcl-2/Bcl-XL 

e Bax/Mcl-1 è stata correlata con lo stadio clinico, non è stata 

identificata nessuna correlazione. 

Per meglio chiarire il ruolo dell’apoptosi nei neuroblastomi, 

4 tumori neuroblastici periferici sono stati studiati con la tecnica 

dei macroarrays. Tre di essi erano neuroblastomi con elevato 

indice mitotico-cariorressico ed uno era un ganglioneuroblastoma. 

Il nostro studio ha evidenziato che in tutti e quattro i casi vi 

era espressione di numerosi geni coinvolti nell’apoptosi ma 


che essi erano espressi in intensità e numero variabile. I geni 

coinvolti riguardavano Fas e Fas-ligand, le caspasi e le proteine 

della famiglia di Tumor Necrosis Factor Receptor 

(TNF-R). Ulteriori indagini su un più ampio numero di osservazioni 

sono necessarie per meglio chiarire i meccanismi 

coinvolti in questi processi. 

Bibliografia 

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periferico ortosimpatico umano e nel neuroblastoma. Patologica 

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F, et al. Amplified DNA with limited homology to myc cellular oncogene 

is shared by human neuroblastoma cell lines and a neuroblastoma 

tumor. Nature 1983;305:245-8. 

4 Caslte VP, Heidelberger KP, Bromberg J, Ou X, Dole M, Nunez G. 

Expression of the apoptosis-suppressing protein bcl-2, in neuroblastoma 

is associated with unfavorable histology and N-myc amplification. 

Am J Pathol 1993;143:1543-50. 

5 Takamizawa S, Okamoto S, Wen J, Bishop W, Kimura K, Sandler A. 

Overexpression of Fas-ligand by neuroblastomas: a novel mechanism 

of tumor-cell killing. J Pediatr Surg 2000;35:375-9. 

6 Teitz T, Wei T, Valentine MB, Vanin EF, Grenet J, Valentine VA, et al. 

Caspase 8 is deleted or silenced preferentially in childhood neuroblastomas 

with amplification of MYCN. Nat Med 2000;6:529-35.

PATHOLOGICA 2004;96:167-172 

Comparison of a RT-PCR for mammaglobin 

and cytologic examination for detection 

of breast cancer cells in effusions 

F. Fedeli, N. Gorji, P. Ferro, F. Fais1 , B. Bacigalupo, V. 

Gagliardi, L. Cortese, M. Moroni, P. Dessanti, A. Giannico, 

S. Roncella 

U.O. Anatomia ed Istologia Patologica, Ospedale Sant’Andrea 

La Spezia; 1 Sezione di Anatomia Umana, Di.Me.S, Università 

di Genova 

Introduction. Human mammaglobin (hMAM) was found to 

be a sensitive molecular marker for detecting micrometastases 

of breast cancer cells (BC) in peripheral blood, bone 

marrow and lymph-node. Some authors have proposed using 

this assay for screening effusions for BC micrometastatic disease. 

The detection of BC micrometastasis in effusions is difficult 

since the malignant cells are rare and spread amongst 

the normal population. 

In this study we investigate the potential application of RT- 

PCR for hMAM by comparing it with traditional cytological 

assessment for BC cells in effusions. 

Methods. We analyzed 19 cases from patients with breast 

malignancy (12 from pleural and 7 from peritoneal effusions). 

We also studied 93 cases of effusion without evidence 

of breast cancer (52 with another type of cancer, 28 with no 

malignant pathology, 13 of unknown causes). 

The samples were analyzed by staining with EE, Papanicolau 

technique, and by nested RT-PCR for hMAM. Cytological 

examination was performed in a parallel study with RT-PCR 

assay. 

Results. 16/19 (84%) cases of BC pathology were positive 

using nested RT-PCR for hMAM. 9/19 (47%) cases were 

positive by cytological study and these were also positives by 

nested RT-PCR. In contrast, 7 BC cases that were positive in 

the molecular test were negative according to the staining assay. 

hMAM was also detected in 19/52 (36%) specimens of 

other types of carcinoma (11/21 lung, 5/17 mesothelioma, 

1/2 ovarian, 2/3 renal, 0/6 lymphoma, 0/2 gastric, 0/1 endometrial) 

and only 1/41 (2.4%) samples of non-neoplastic 

origin. 

Conclusion. Preliminary data demonstrate that detection of 

BC in body fluid using hMAM mRNA amplification by PCR 

is a promising approach and that nested RT-PCR for hMAM 

was more sensitive than cytology in determining BC micrometastasis 

in effusions. However, positivity was not restricted 

to samples from BC patients as specimens from other 

types of tumors and 2.4% of patients without cancer were 

also positive. 

Our assay may be used in conjunction with routine cytopathological 

examination for screening of malignant BC 

effusion. 

COMUNICAZIONI 

1. Citodiagnostica, Ematopatologia, Patologia 

mammaria, Biologia molecolare 

MODERATORI: G. MASSARELLI (SASSARI), F.M. VECCHIO (ROMA) 

Ricerca di mutazioni puntiformi di BRAF 

e riarrangiamenti Ret/PTC in agoaspirati 

tiroidei come supporto diagnostico 

R. Giannini, G. Salvatore1 , P. Faviana, A. Caleo2 , I. Migliaccio2 

, G. Troncone2 , L. Palombini2 , V. Bussi, M. Santoro1 

, F. Basolo 

Dipartimento di Oncologia, Università di Pisa; 1 Dipartimento 

di Biologia e Patologia cellulare e molecolare, Università 

“Federico II” di Napoli; 2 Dipartimento di Scienze biomorfologiche 

e funzionali, Università “Federico II” di Napoli 

Introduzione. Le mutazioni puntiformi a carico del gene 

BRAF, che codifica per una serina/treonina protein-chinasi, 

sono un marcatore genetico specifico dei carcinomi tiroidei 

ben differenziati di istotipo papillare. Recentemente è stata, 

infatti, riportata una frequenza di mutazione che varia dal 29 

al 69% nei suddetti tumori. 

Tutte le mutazioni identificate sono a carico del nucleotide 

1796 dell’esone 15 di BRAF; una timina è sostituita da 

un’adenina (T1796A) con conseguente sostituzione di una valina 

con glutammato nel residuo 599 (V599E) della proteina. 

Scopo. Lo scopo di questo studio è di valutare se l’analisi 

mutazionale di BRAF può incrementare l’accuratezza diagnostica 

dell’agoaspirato tiroideo. 

Materiali e metodi. Il materiale utilizzato è costituito da 

campioni citologici ottenuti mediante agoaspirazione di 

noduli tiroidei e dai corrispondenti tessuti tumorali prelevati 

chirurgicamente inclusi in paraffina. 

In particolare è stata analizzata una serie di 96 neoplasie 

tiroidee comprendenti: 69 carcinomi ben differenziati di istotipo 

papillare (PTC), 19 adenomi follicolari e 8 gozzi 

multinodulari non tossici. L’analisi mutazionale è stata eseguita 

mediante analisi Single Strand Conformation Polymorphism 

(SSCP) e sequenziamento diretto del DNA genomico 

degli esoni 11 e 15 di BRAF. Il riarrangiamento di Ret/PTC 

è stato inoltre analizzato in 33 campioni di PTC, 19 adenomi 

e 8 gozzi multinodulari. 

Risultati. La mutazione di BRAF (V599E) è stata riscontrata 

nel 38% (26/69) dei carcinomi papillari. La prevalenza di 

mutazione di BRAF nelle varianti istologiche dei PTC è la 

seguente: 16/35 (45%) variante classica, 3/22 (15%) variante 

follicolare, 5/9 (55%) variante a cellule alte, 2/3 (66%) variante 

sclerosante. 

Il riarrangiamento di Ret è stato individuato in 6 dei 33 PTC 

analizzati (18%). 

In nessuna delle neoplasie benigne né nei gozzi multinodulari 

sono state rilevate mutazioni di BRAF o riarrangiamenti 

Ret/PTC. 

Conclusioni. I risultati ottenuti hanno dimostrato che il 46% 

dei carcinomi papillari presentano un’alterazione genica di 

BRAF o del gene Ret, suggerendo la possibilità che l’analisi 

molecolare di tali geni possa essere un valido supporto preoperatorio 

nella diagnosi dei tumori tiroidei. Tale metodica è 

risultata particolarmente utile nel 33% dei casi con diagnosi

168 

citologica preoperatoria indeterminata. Infatti, su 5 di 15 casi 

è stata trovata un’alterazione di uno dei 2 geni permettendo 

la possibilità di una diagnosi di carcinoma papillare sulla 

base dei dati molecolari. 

Efficacia dell’immunocitochimica 

nella citologia agoaspirativa su strato sottile 

E.D. Rossi, A. Mulè, C. Maggiore, M. Marino, A. Miraglia, 

G.F. Zannoni, F.M. Vecchio, G. Fadda 

Istituto di Anatomia e Istologia patologica, Università Cattolica 

del Sacro Cuore, Roma 

Introduzione. L’agoaspirato rappresenta il miglior strumento 

diagnostico per numerose patologie di organi superficiali e 

profondi. L’immunocitochimica (ICC) rappresenta un valido 

aiuto nella diagnostica citologica benché la sua applicazione 

ai preparati convenzionali sia talora problematica. Il presente 

studio analizza l’efficacia della ICC applicata alla citologia 

su strato sottile. 

Metodi. Nel periodo gennaio 2001-settembre 2003 sono stati 

presi in esame, su un totale di 3.573 agoaspirati consecutivi, 

109 casi che hanno richiesto l’applicazione della ICC, 

ottenuti sia con metodica convenzionale che con citologia su 

strato sottile. I preparati convenzionali sono stati fissati in 

etanolo mentre quelli su strato sottile sono stati processati 

secondo la metodica Thin Prep 2000 (Cytyc, Marlborough 

USA); la colorazione utilizzata è stata, per entrambe le 

metodiche, quella di Papanicoulau. L’ICC è stata impiegata 

quasi esclusivamente nella metodica su strato sottile ed è stata 

eseguita sui preparati convenzionali solo quando la qualità 

su strato sottile non è risultata ottimale. 

Risultati. I 109 casi sono stati raggruppati come segue: 32 

noduli tiroidei con 13 controlli istologici (CI); 23 patologie 

linfonodali (indipendentemente dalla sede) con 14 CI; 17 lesioni 

epatiche e pancreatiche (2 CI); 9 noduli polmonari (4 

CI); 5 lesioni renali e surrenaliche (0 CI); 6 lesioni addominali 

(2 CI) e 5 masse mediastiniche (2 CI); 5 lesioni delle ghiandole 

salivari (2 CI); 4 lesioni ossee (2 CI) e 3 lesioni sottocutanee 

(1 CI). 

L’applicazione dell’immunocitochimica sui preparati in strato 

sottile ha consentito di giungere ad una diagnosi citologica 

in 96 casi (89%), risultando non dirimente solamente in 13 

casi. La diagnosi citologica è stata confermata al successivo 

esame istologico in 40 casi su 41 (97,5%). 

Conclusioni. La ICC può essere applicata sulla citologia in 

strato sottile con risultati molto soddisfacenti rispetto alla 

citologia convenzionale e appare efficace per ottenere una 

corretta diagnosi citologica su agoaspirato. 

Bibliografia 

1 Dabbs DJ, et al. Diagn Cytopathol 1997;17:388-92. 

2 Leung CS, et al. Diagn Cytopath 1997;16:368-71. 

Citologia aspirativa di neoplasie rare della 

mammella 

A.M. Dalena, G. Melillo, P. Goglia, G. Ferrara 

UOC Anatomia Patologica, A.O. “Gaetano Rummo”, Benevento 

Introduzione. La biopsia aspirativa con ago sottile (FNAB) 

della mammella ha permesso di by-passare in numerosi cen- 


tri l’effettuazione degli esami al congelatore e delle biopsie 

incisionali. 

Metodi. In una valutazione retrospettiva della casistica di patologia 

mammaria della Anatomia Patologica dell’Azienda 

Ospedaliera “G. Rummo” di Benevento sono stati individuati 

3 casi di carcinoma mammario con istotipo speciale studiati 

in fase preoperatoria mediante FNAB: il carcinoma papillare 

solido, il carcinoma a cellule chiare ricche di glicogeno ed il 

carcinoma adenosquamoso di alto grado. 

Risultati. Su FNAB, il carcinoma papillare invasivo evidenziava 

una elevatissima cellularità con elementi neoplastici 

relativamente monomorfi, di aspetto plasmocitoide, talora 

organizzati in strutture papillari tridimensionali con un evidente 

“core” fibrovascolare. 

Il carcinoma a cellule chiare ricche di glicogeno mostrava aggregati 

di grosse cellule ovalari e rotondeggianti simili a cellule 

vegetali per l’abbondante citoplasma debolmente acidofilo 

provvisto di un evidente alone chiaro perinucleare. 

Il carcinoma adenosquamoso di alto grado si caratterizzava 

per la combinazione di cellule fusate fibroblast-like e di cellule 

epiteliali spiccatamente pleomorfe, alcune della quali 

cheratinizzanti. 

Conclusioni. I casi qui illustrati documentano la affidabilità 

della FNAB nella diagnostica preoperatoria delle neoplasie 

mammarie. 

Il carcinoma papillare solido può essere paradossalmente più 

semplice da riconoscere su preparati citologici che non su 

preparati istologici 1 . 

IL carcinoma a cellule ricche di glicogeno evidenzia aspetti 

citologici (cellule di aspetto simil-vegetale) assai peculiari, 

finora non segnalati in letteratura 2 . 

Il carcinoma adenosquamoso di alto grado è una neoplasia il 

cui carattere “bifasico” (epiteliale e mesenchimale) può essere 

agevolmente riconoscibile su materiale citologico. 

Bibliografia 

1 Lefkowitz M, Lefkowitz W, Wargotz ES. Intraductal (intracystic) papillary 

carcinoma of the breast and its variants: a clinico-pathological 

study of 77 cases. Hum Pathol 1994;25:802-9. 

2 Kern SB, Andera L. Cytology of glycogen-rich (clear cell) carcinoma 

of the breast. A report of two cases. Acta Cytol 1997;41:556-60. 

Primitive uterine cervix lymphoma. 

Case report 

N. Scibetta, G. Sciancalepore, L. Marasà 

U.O. di Anatomia Patologica, ARNAS “Civico-Di Cristina- 

Ascoli”, Palermo 

Introduction. The primitive uterine cervix lymphoma is very 

rare, it strikes females between 30 and 60 years old; clinically 

it starts with menometorrhagia and pelvicalgia. The more 

frequent histological types are follicular and diffuse large cell 

lymphomas. Rare cases of “MALT-Type”, sometimes with 

high grade, in cervical seat has been pointed out. 

Materials and methods. Our case regards a 41 years old patient, 

with metrorrhagia and left latus’ pain. Afterward clinical 

examination and echographia a cervical mass has been 

showed, with maximum diameter 9 cm, in uterine fibromyomatosis 

setting. The patient has been subjected to laparopanhysterectomy 

with left oophorosalpingectomy. The specimens 

sent were formalin 4% fixed and paraplast plus included. 

Sections of 3 µm thickness have been prepared; 

stained with HE, Giemsa, PAS and Reticulum. Other sections

ABSTRACTS DI COMUNICAZIONI 

have been set on slides, previously treated with Poli-l-lysin 

for the immunohistochemical stains. 

Results. Macroscopically a big and deformed uterus, because 

of multiple intramural leiomyomas, has been showed; while 

the cervix was taken by a mass, partly projected in uterocervical 

canal, with maximum diameter of 9 cm. The histological 

feature was characterized by diffuse population of large 

size lymphoid elements, with clear nuclei, large and pale cytoplasm, 

well-limited, high mitotic index and proliferative 

fraction > 50% (MIB 1), arranged in alveolar structures or in 

diffused pattern, fully infiltrating the uterine cervix, separating 

endocervical glands, but without attacking them. Such 

neoplastic elements were positive for CD45 RA, CD20, 

CD79a, CD23; only some of them were positive for BCL2; 

everyone was negative for CK AE1 and AE3, CD3, CD10, 

BCL6, Cyclin D1, CD5, CD43, EMA, ALK. The reached diagnosis 

was “Diffuse NH Lymphoma with large cells, derived 

from peripheral B Lymphocytes”. Immediately after 

the postoperative period, the patient has been subjected to 

haematochemical routine examination; LDH and β2 microglobulin 

determination; viral serological indagation for 

CMV, EBV, HIV, HCV and HSV Antibodies research; RMN; 

abdominal and thoracic TAC with negative outcome. The 

PET excluded illness with high metabolic activity, also the 

osteomedullary biopsy did not reveal any trace of disease. 

Conclusions. We report a rare case of primitive uterine 

cervix diffuse NH lymphoma, with large cells, derived from 

peripheral B lymphocytes, stadium I BULKI IPI O in RC The 

cellular monomorphism, the depth of paries’ invasion, the 

IIC examinations allowed us to exclude an inflammatory reaction 

with big lymphomatoid cells and leading us toward a 

lymphomatous process. The lack of lymphoepithelial injures 

excluded a MALT type lymphoma, whereas the CD10 negativity 

excluded such elements’ derivation from follicular centre. 

The patient has been subjected to 6 cycles of polychemotherapy 

with CHOP and Rituximab with consolidation 

Rt. Six months after the therapy, the clinical-instrumental 

check up and the vaginal cul-de-sac biopsy have not revealed 

any pathology. 

Ruolo dell’IL-12 nella patogenesi 

della linfoadenite di Kikuchi 

M.C. Giustiniani, S. Scarpino, A. Di Napoli, A. Stoppacciaro, 

S. Uccini, L.P. Ruco 

II Facoltà di Medicina e Chirurgia di Roma “La Sapienza”, 

Istopatologia, Ospedale “Sant’Andrea” 

La linfoadenite di Kikuchi è una rara malattia ad eziologia ignota 

caratterizzata dalla presenza di focolai di necrosi associata 

a macrofagi/cellule dendritiche CD68+/MPO+. Nel presente 

lavoro abbiamo studiato un caso di linfoadenite di 

Kikuchi di cui era disponibile materiale congelato. Sezioni 

del linfonodo sono state utilizzate per la caratterizzazione 

immunofenotipica delle componenti cellulari presenti nella 

lesione e per la microdissezione laser al fine di valutare il 

profilo di citochine prodotte nelle aree necrotiche. Come 

controllo sono stati microdissecati i centri germinativi dello 

stesso linfonodo. L’RNA estratto dai microdissecati è stato 

amplificato mediante kit specifici ed utilizzato in esperimenti 

di RT-PCR e analisi Macroarray per la definizione del profilo 

di espressione genica. 

I risultati del nostro studio hanno dimostrato che nelle aree di 

necrosi è presente una ricca popolazione di cellule den- 

169 

dritiche in parte positive per CD11c ed in parte per CD123, 

le prime disposte centralmente e le seconde in periferia; al di 

fuori della necrosi, nelle aree interfollicolari, sono inoltre 

presenti numerose cellule dendritiche DC-LAMP+ e rare 

CD1+. L’analisi della produzione di citochine effettuata con 

RT-PCR ha dimostrato che la quantità di IL-12 presente nelle 

aree necrotiche è circa 800 volte maggiore di quella presente 

nei centri germinativi. Al contrario i livelli di IFN-γ nella 

necrosi e nel centro germinativo sono paragonabili. L’analisi 

di espressione genica per citochine/chemiochine ha dimostrato 

un complesso pattern di produzione nell’ambito 

delle zone di necrosi, compatibile con una cascata indotta da 

IL-12. L’assenza di CD40 nelle cellule dendritiche della lesione 

suggerisce che l’induzione della produzione di IL-12 

avvenga attraverso un meccanismo diverso dall’interazione 

CD40-CD40L. In conclusione i nostri risultati suggeriscono 

che un’abnorme produzione di IL-12, indotta da cause 

sconosciute, possa avere un ruolo centrale nella patogenesi 

della malattia di Kikuchi verosimilmente attraverso l’attivazione 

della secrezione di IFN-γ da parte dei linfociti T CD8 

attivati e/o da parte di altre cellule. 

Un caso di linfoma di Hodgkin coesistente 

con un tumore di Warthin della parotide 

A. Mulè, C. Maggiore, E.D. Rossi, G. Fadda, L.M. Larocca 

Istituto di Anatomia Patologica Università Cattolica del Sacro 

Cuore di Roma 

Introduzione. I linfomi, la quasi totalità dei quali sono linfomi 

non-Hodgkin (NHL), rappresentano lo 0,6-5% di tutte 

le neoplasie parotidee. Viene qui riportato un insolito caso di 

linfoma di Hodgkin (HL) coesistente con un tumore di 

Warthin (WT) della parotide. 

Caso clinico. Nel settembre 2003 abbiamo eseguito un 

esame citologico aspirativo su una tumefazione parotidea di 

7 cm insorta da 6 mesi in un uomo di 52aa. per altro asintomatico. 

Il materiale ottenuto, ha rivelato la presenza di una 

cellularità linfoide mista con sparse cellule di aspetto sternbergoide, 

senza evidenza di elementi epiteliali. L’insieme di 

tali dati e delle indagini immunocitochimiche (CD30+ 

CD15+ LCA- CD20- CK-), ha suggerito la diagnosi di HL. 

L’esame istologico ed IIC su biopsia incisionale, ha confermato 

la diagnosi di HL, ma ha anche evidenziato un’area 

marginale di WT, intimamente commista alla componente 

linfomatosa. Una TC ha rivelato, oltre al massivo coinvolgimento 

parotideo, l’interessamento omolaterale tonsillare, 

orofaringeo e laterocervicale, quest’ultimo in forma di alcuni 

linfonodi patologici. La biopsia osteomidollare è risultata 

negativa. 

Discussione. Il WT è la seconda neoplasia più frequente della 

ghiandola parotide (10-15%) mentre il HL a localizzazione 

salivare è molto raro. La coesistenza delle due entità è stata 

descritta solo due volte 1 2 . Badve descrive un caso di HL 

coinvolgente il mediastino e un linfonodo intraparotideo adiacente 

ad un WT. La componente linfoide di quest’ultimo 

non mostrava alcuna atipia. Melato riporta un caso con un 

quadro istologico parotideo simile al nostro, ma clinicamente 

più aggressivo. 

La presenza di multiple localizzazioni extralinfonodali, 

sebbene limitate all’anello del Waldayer, e il minimo coinvolgimento 

linfonodale regionale, rende il caso qui descritto 

ancor più peculiare.

170 

Conclusioni. Noi descriviamo il terzo caso di coesistenza di 

WT e HL. Sulla base della più accreditata teoria patogenetica 

del WT (linfonodo nel cui contesto si accrescono degli inclusi 

epiteliali benigni policlonali), un HL primitivamente insortovi 

è da considerare intranodale. Tuttavia, nel nostro caso, 

l’intima coesistenza WT/HL e l’importante interessamento 

tonsillare ed orofaringeo, vs. un minoritario coinvolgimento 

linfonodale regionale, potrebbe celare un inusuale tropismo 

per il tessuto linfoide mucosa associato. 

Bibliografia 

1 Badve S, et al. Histopathol 1993;22:280-1. 

2 Melato M, et al. Pathol Res Pract 1986;181:615-20. 

Analisi mutazionale dei geni proapoptotici 

Bax, Bak e Bik nei linfomi a cellule B 

M. Martini, V. Arena, A. Evangelista, F. Pierconti, A. 

Capelli, L.M. Larocca 

Istituto di Anatomia Patologica, Università Cattolica del Sacro 

Cuore, Roma 

Introduzione. La disregolazione del processo apoptotico ed in 

particolare della Bcl-2 family, ha un ruolo cruciale nella patogenesi 

delle neoplasie dell’apparato emolinfopoietico. La Bcl- 

2 family è formata da un gruppo di geni pro o anti apoptotici 

con strette omologie strutturali in grado di formare etero o 

omodimeri. Sembra ormai chiaro che geni proapoptotici come 

Bax o Bak siano i veri esecutori del messaggio apoptotico, 

mentre i geni antiapoptotici come il Bcl-2 o il Bclx-L formando 

eterodimeri con i geni proapoptotici sarebbero in grado di 

bloccarne la funzione. Studi recenti hanno dimostrato come la 

disregolazione del processo apoptotico nelle neoplasie emolinfopoietiche 

è per lo più dovuta ad una iperespressione di geni 

anti-apoptotici, che potrebbe dipendere anche da una diminuita 

espressione di geni pro apoptotici quali Bax, Bak, Bik o altri 

a causa di alterazioni molecolari come le mutazioni. 

Metodi. Abbiamo studiato, tramite PCR-SSCP, la presenza 

di mutazioni in tre dei geni proapoptotici più importanti Bax, 

Bak e Bik, in 81 casi di linfoma non-Hodgkin di tipo B: 33 

casi di linfoma follicolare, 15 casi di linfoma della zona marginale, 

7 casi di linfoma mantellare, 7 casi di linfoma a piccoli 

linfociti, 15 casi di linfoma a grandi cellule B, 2 casi di 

linfoma plasmocitoide e 2 casi di linfoma di Burkitt. 10 casi 

si tonsilla palatina e 10 casi di linfonodi di soggetti sani sono 

stati utilizzati come controlli normali. I casi mutati sono stati 

sequenziati direttamente. 

Risultati. Non sono state osservate mutazioni strutturali nel 

gene Bax in nessuno dei linfomi studiati. Una mutazione 

silente del gene Bak (esone 2, codone 14, TGC → TGT) è stata 

osservata in 24 degli 81 linfomi (37% follicolari e 47% marginali) 

e in 4 delle 10 tessuti linfoidi iperplastici. Mutazioni del 

gene Bik con alterazione della sequenza amminoacidica sono 

state invece osservate in 2 su 27 (11%) dei linfomi follicolari 

(FL), in 2/13 (15%) dei linfomi della zona marginale (MZL) ed 

in 1/16 (6%) dei linfomi a grandi cellule B (DLBCL). 

Conclusioni. Le alterazioni molecolari del gene Bak, come 

per altri geni, suggeriscono una sua segregazione nei linfomi 

di origine dal centro germinativo a causa del meccanismo di 

somatic hypermutation che qui avviene. Le nostre ricerche 

hanno altresì evidenziato come le mutazioni del gene Bik appartenente 

alla famiglia delle BH3 only proteins possono essere 

coinvolte nella disregolazione del processo apoptotico 

presente nei linfomi non-Hodgkin a cellule B. 


Linfoadenite istiocitica necrotizzante 

(malattia di Kikuchi Fujimoto): descrizione 

di un caso 

A.V. Filardo, S. Squillaci1 , F. Pontieri, F. Tallarigo 

Servizio di Anatomia patologica Ospedale di Crotone, Catanzaro; 

1 Esine, Brescia 

Introduzione. La linfoadenite istiocitica necrotizzante è una 

malattia ad eziologia sconosciuta a decorso benigno molto 

più comune nel sud-est asiatico, descritta per la prima volta 

nel 1972 da Kikuchi-Fujimoto, interessante per lo più giovani 

donne. Si presenta generalmente con aumento della temperatura 

e linfoadenoparia localizzata, anche se sono stati descritti 

in letteratura casi con interessamento extralinfonodale. 

Generalmente la sintomatologia si risolve spontaneamente 

nell’arco di alcuni mesi. 

Materiali e metodi. Viene qui descritto il caso di una giovane 

donna di 28 anni che ha presentato uno sviluppo progressivo 

di malattia. L’esordio è coinciso con una linfoadenopatia 

latero-cervicale monolaterale. Dopo circa due 

settimane compariva aumento della temperatura con puntate 

febbrili fino a 39°C, brividi, malessere generalizzato, diminuzione 

dell’appetito. Gli esami ematochimici mostravano 

una modesta leucopenia. Il quadro morfologico linfonodale 

evidenziava necrosi sottocorticale con apoptosi, aggregati di 

monociti plasmocitoidi, istiociti con nuclei eccentrici, aumentati 

di volume, a citoplasma schiumoso, assenza di neutrofili, 

focali aggregati di immunoblasti. Alcuni centri germinativi 

del linfonodo erano conservati, come anche la capsula. 

Dal punto di vista immunoistochimico, la componente linfoide 

era rappresentata prevalentemente da elementi t maturi 

CD8+, con una minima quota di elementi B CD20+. Gli elementi 

istiocitari, hanno mostrato una intensa positività al cd 

68 e alla mieloperossidasi, quelli di tipo immunoblastico, 

sono risultati essere CD30-, CD15- E CD45+. Discreta la 

quota di elementi interdigitati dendritici positivi alla proteina 

s100, soprattutto a livello della zona paracorticale. Pertanto il 

quadro morfologico ed immunofenotipico ci indirizzava verso 

una diagnosi di linfoadenite istiocitica necrotizzante. 

Discussione. La malattia di Kikuchi Fujimoto si può osservare 

a tutte le età ma interessa, prevelentemente, i giovani adulti, 

con un rapporto uomini-donne di 1:4. Dal punto di vista clinico 

si manifesta con una linfoadenopatia principalmente laterocervicale 

in un contesto febbrile e di astenia. Talvolta si associa 

una leucopenia transitoria e una moderata sindrome infiammatoria. 

L’evoluzione è benigna, spontaneamente, nell’arco 

di alcuni mesi, possibili sono le ricadute. Dal punto di vista istologico 

molteplici sono le patologie con cui va in diagnosi 

differenziale, sia esse neoplastiche (linfoma) che non, ma che 

presentano lo stesso quadro morfologico, come malattie di tipo 

autoimmune (LES, malattia di Kavasaki), linfoadeniti infettive 

(Yersinia enterocolitica, malattia da graffio di gatto, citomegalovirus, 

virus Epstein Barr). Dal punto di vista eziologico, 

anche se la connessione tra questa malattia ed una infezione 

virale non è stata provata, quella autoimmunitaria sembra 

la più accreditata. Una reazione iperimmune dell’organismo 

indotta da un’infezione virale. 

Conclusioni. Sebbene la linfoadenite istiocitica necrotizzante 

sia una patologia rara, questo caso mostra come la 

malattia comparsa con una linfoadenite localizzata, laterocervicale, 

in una giovane donna, pone non pochi problemi di 

diagnosi differenziale. A volte tale compito può essere arduo 

per il patologo, se si utilizza il solo parametro morfologico. 

pertanto è sempre necessario effettuare indagini più appro-


fondite, come può essere quella immunoistochimica, supportate 

sempre dal quadro clinico. 

Leucemia linfatica cronica b insorta in 

leucemia mieloide cronica Ph+. descrizione 

di un caso 

L. Riccioni, A. Pragliola, F. Morigi, L. Guardigni1 , M. 

Maldini2 , A. Bondi 

U.O. di Anatomia Patologica, 1 Servizio di Ematologia, 2 Laboratorio 

Analisi, Ospedale “M. Bufalini”, Cesena 

Introduzione. La coesistenza di leucemia mieloide cronica 

(LMC) e leucemia linfatica cronica (LLC) B nello stesso 

paziente è una rara evenienza. Descriviamo il secondo caso 

presente in letteratura di LLC-B insorta nel decorso di una 

LMC Philadelphia positiva (Ph+). 

Caso clinico. Uomo di anni 71 affetto da LMC Ph+ in fase 

cronica, istologicamente e geneticamente accertata e trattata 

con idrossiurea. Dopo 4 anni, in cui le condizioni clinico-laboratoristiche 

erano rimaste stabili, il paziente iniziava Glivec, 

sospeso dopo tre settimane per severa trombocitopenia. Nel 

frattempo si evidenziava lieve linfocitosi (7,0x10 9 /L). Per 

questa ragione venivano ripetuti il cariotipo ed una biopsia osteomidollare, 

nella quale compariva accanto alla popolazione 

neoplastica mieloide un infiltrato linfoide patologico compatibile 

con LLC, immunofenotipicamente documentata su sangue 

periferico, con CD38 7%. Nessuna ulteriore terapia è stata data 

nei successivi 6 mesi, quando per un nuovo innalzamento 

della conta leucocitaria (leucociti 50,6x10 9 /L, con linfociti 

55%) il paziente riprendeva terapia con idrossiurea. 

Risultati. La prima biopsia osteomidollare appariva ipercellulata, 

con espansione della granulocitopoiesi, morfologicamente 

compatibile con LMC. La componente linfoide interstiziale 

non era aumentata. La seconda biopsia osteomidollare 

mostrava la persistenza della LMC, con lieve aumento 

della quota nucleolata immatura (< 10%). Era inoltre presente 

un infiltrato linfoide interstiziale e nodulare, costituito prevalentemente 

da piccoli linfociti immunoreattivi per CD20, 

CD5, CD23 e negativi per CD3, CD10 e TDT. Il secondo cariotipo 

mostrava la comparsa di ulteriori anomalie genetiche 

non canoniche per una progressione della LMC, quali la presenza 

di un nuovo clone Ph+ mostrante del (3p) e di uno Phcon 

perdita del cromosoma 21. 

Conclusioni. La comparsa di una proliferazione linfoide nel 

decorso clinico di una LMC impone di escludere una crisi 

blastica del disordine mieloproliferativo sottostante, che implicherebbe 

differenti scelte terapeutiche. Tuttavia gli aspetti 

morfologico ed immunoistochimico dell’infiltrato linfoide 

presente nella seconda biopsia osteomidollare, in accordo 

con quanto riportato in letteratura, depongono per una LLC- 

B, differente da una evoluzione blastica linfoide, quale possibile 

evoluzione tardiva della preesistente LMC. È possibile 

che l’insorgenza della LLC, analogamente a quanto riportato 

in corso di mielofibrosi idiopatica, trattata con idrossiurea 

(Bohm et al. Pathologie. 2002;23:480-5), sia dovuta ad un 

effetto leucemizzante della terapia od in alternativa ad una 

differente origine clonale delle due neoplasie (Salim et al. 

Leuk Lymphoma. 2002;43:2225-7). 

171 

Fattori predittivi delle metastasi nei linfonodi 

non sentinella nel cancro della mammella 

B. Bruni, S.G. Carinelli, M. Giroda, S. Poma, L. Runza 

Anatomia Patologica e Chirurgia Plastica, Istituti Clinici di 

Perfezionamento, Milano 

Introduzione. Abbiamo correlato i caratteri del tumore 

mammario (tipo, grado istologico e dimensioni) col Linfonodo 

Sentinella (LS) e il tipo delle metastasi del LS con lo stato 

dei linfonodi non sentinella (LNS), dopo linfoadenectomia 

(LAD). 

Metodi. L’analisi del LS di 108 pazienti è stata condotta secondo 

un protocollo (Am J Surg Pathol 2002;26:377-82) 5 

sezioni istologiche, 3 colorate con EE e 2 con CK. Le metastasi 

(M) sono state classificate in macro-M (nodulari e maggiori 

di 2 mm) e micro-M (cellule singole o aggregati di cellule 

tumorali di dimensioni ≤ 2 mm). 

Risultati. In due casi non è stato isolato il LS (1,8%). Nei 

restanti 106 è stato isolato un solo LS in 56 casi (53%), due 

in 28 casi (26%), tre o più in 21 casi (21%). Un caso era negativo 

per cancro ed il LS era negativo. Un caso di Tumore 

Fillode Maligno aveva il LS negativo. Dei 23 casi di carcinoma 

in situ (16) o in situ con microinvasione < 2 mm, inclusa 

una Malattia di Paget (7) il LS era positivo in uno dei 5 

casi di carcinoma duttale in situ con microinvasione, come 

microemboli nel seno marginale. Due dei 6 pazienti con carcinoma 

lobulare infiltrante (diametro 8-17 mm + due multinodulari) 

avevano il LS positivo; nell’unico caso con LAD i 

LNS erano diffusamente positivi. In 18 casi di carcinoma 

duttale infiltrante (CDI) G1 (diametro 2-19 mm) il LS è risultato 

positivo in 3 casi (di cui uno come micro-M) i cui LNS 

erano indenni; l’unico dei 9 con LAD che aveva LNS positivo 

era associato ad un LS negativo, anche dopo 21 sezioni istologiche. 

Nei 56 casi di CDI G2-3 (diametro 2-40 mm) il LS 

è risultato positivo in 22 (39%), di cui 7 come micro-M. Il diametro 

medio dei tumori con macro-M del LS era maggiore 

(17 mm) rispetto a quello dei tumori con micro-M del LS (12 

mm). Nei 24 casi con LAD, i LNS erano metastatici in 6 casi; 

in 5 il LS aveva macro-M e in uno micro-M; in 18 casi i LNS 

erano indenni e di questi 12 avevano il LS positivo, 9 come 

macro-M e 3 come micro-M. In nessun caso con LS negativo 

c’erano metastasi ai LNS. In un caso di CDI, la metastasi 

nel LS era negativa alla CK7, per cui è stata aggiunta una CK 

a largo spettro nella procedura. 

Conclusioni. Esiste una correlazione tra caratteri del cancro, 

stato del LS, caratteristiche della metastasi del LS e stato dei 

LNS. La negatività del LS è predittiva di negatività dei LNS, 

ma falsi negativi sono un limite della procedura. La CK 7 da 

sola è insufficiente per la procedura.

172 

L’assetto recettoriale tirosin-chinasico nei 

carcinomi mammari: valutazione di HER2-neu 

e EGFR in I.H.C. e F.I.S.H. correlata a parametri 

istomorfologici ed immunofenotipici 

L. Baron, M. Postiglione, A. Cesarano, P. Beltotti, F. 

Quarto 

S.O.C. di Anatomia ed Istologia Patologica e Citopatologia 

P.O. “S. Leonardo” ASL-NA5, Castellammare di Stabbia, 

Napoli 

Introduzione. Il pathway di crescita autocrino HER-guidato 

è implicato nello sviluppo e nella progressione del carcinoma 

mammario. 

Metodi. Avvalendoci di metodiche di immunoistochimica 

(IHC) e biologia molecolare (FISH) abbiamo studiato l’espressione 

singola e la co-espressione di 2 membri della 

famiglia dei recettori HER, l’EGFR e l’HER2, su 126 casi di 

carcinomi mammari. L’assetto dei 2 recettori è stato correlato 

a parametri morfologici quali: tipo istologico, dimensioni, 

stato linfonodale e a marcatori quali: indice di proliferazione 

cellulare (Ki67-Mib-1), espressione di p53 e l’assetto recettoriale 

ormonale. 

Risultati. Il 26% dei carcinomi presentano amplificazione 

genica di HER2 (FISH-PathVysion-Vysis) a fronte del 28% 

di casi con sovraespressione proteica all’IHC (punteggio 

2+/3+, HercepTest-DakoCytomation). La percentuale di concordanza 

del 92% indicherebbe che la sovraespressione proteica 

di HER2 può verificarsi anche in assenza di amplificazione 

genica, quale risultato di un’anomala regolazione 

trascrizionale o post-trascrizionale. 

L’EGFR (LSI EGFR/CEP7-Vysis) risulta amplificato nel 

22% dei casi con un corrispondente valore di sovraespressione 

proteica pari al 36% (EGFR pharmDx). La minore 

percentuale di concordanza tra i 2 test è dovuta al fatto che la 

sovraespressione è legata anche a mutazione puntiforme del 

gene che codifica per una forma del recettore priva del dominio 

extracellulare deputato al legame con il ligando e attivabile 

costitutivamente. 

Per lo studio della co-espressione dei due recettori abbiamo 

classificato le pazienti in 4 gruppi: EGFR-/HER2- (62%), 

EGFR+/HER2+ (10%), EGFR+/HER2- (12%), EGFR- 

/HER2+ (16%). Al pari dei due gruppi che presentano uno solo 

dei due recettori amplificati, la classe di co-amplificazione 

presenta una correlazione statisticamente significativa con il 

grado istologico e con uno stato linfonodale positivo ma non 

con le dimensioni del tumore. I 3 gruppi, d’altro canto, presentano 

una relazione di proporzionalità diretta con l’indice di 

proliferazione cellulare e con la sovraespressione della p53 e 

di proporzionalità inversa con l’assetto recettoriale ormonale. 


Conclusioni. Pertanto l’identificazione di un assetto recettoriale 

amplificato per EGFR e HER2, con valutazione in IHC 

(EGFR) e FISH (HER2) associa in un fenotipo più aggressivo 

neoplasie ER-, PG-, Ki67>, p53+ e EGFR+ e/o HER2+. 

Ciò a conferma dell’importanza della famiglia HER nell’iniziazione 

e progressione del carcinoma mammario, quindi 

la loro validità quali target terapeutici. 

L’espressione di p27kip1 nella sua forma 

fosforilata in treonina 187 

A. Iaccarino, A. Caleo, I. Migliaccio, C. Frangella, M. 

Russo, F. Esposito, J.C. Martinez1 , L. Palombini, G. Troncone 

Dipartimento di Scienze Biomorfologiche e Funzionali, Università 

“Federico II” di Napoli, Napoli; 1 Istituto Oftalmico, 

Università Autonoma, Madrid, Spagna 

Introduzione. La progressione G1/S del ciclo cellulare 

richiede la proteolisi di p27 Kip1 (p27) che è innescata dalla 

sua fosforilazione su treonina 187 (T187). Fino ad oggi, l’espressione 

di p27 è stata studiata esclusivamente analizzando 

la proteina nella sua forma non-fosforilata (“plain” p27). 

Lo scopo di questo studio è quello di descrivere il pattern 

immunocitochimico di espressione di p27 fosforilata 

(pT187-p27). 

Metodi/Risultati. Nei tessuti normali pT187-p27 evidenzia i 

compartimenti tessutali dove è attiva la proliferazione. Il segnale, 

particolarmente evidente nelle cellule con figure mitotiche, 

è abrogato dal pre-adsorbimento con il corrispondente 

fosfo-peptide. Anche nei tessuti displastici e neoplastici, 

pT187-p27 è correlato con la proliferazione cellulare, essendo 

significativamente correlato alla espressione di MIB-1 

(Spearman R = 0,88; p < 0,001), mentre risulta essere alternativo 

alla espressione di “plain” p27 (Spearman R = -0,61; 

p < 0,001). Le metodiche di doppia immunofluorescenza (IF) 

e di miscopia laser confocale (LSCM) mostrano in cellule 

reattive e neoplastiche la progressiva perdita della reattività 

di “plain” e la acquisizione della espressione di p27 nella forma 

pT187. 

Conclusioni. Nel complesso, i nostri dati suggeriscono che 

nelle cellule proliferanti, la proteina p27 può essere evidenziata 

dall’anticorpo diretto contro il sito di fosforilatione in 

T187. Quindi l’uso combinato degli anticorpi anti “plain” e 

ad anti pT187 è necessario per valutare in pieno l’espressione 

tessutale di p27 e per validarne l’uso come marker prognostico 

delle neoplasie umane.

PATHOLOGICA 2004;96:173-178 

Espressione e stato mutazionale di c-kit nel 

carcinoma polmonare a piccole cellule (SCLC) 

L. Boldrini, S. Ursino1 , S. Gisfredi1 , P. Faviana, V. Donati, 

T. Camacci1 , M. Lucchi2 , A. Mussi2 , F. Basolo1 , R. Pingitore, 

G. Fontanini1 Dipartimento di Chirurgia, 1 Dipartimento di Oncologia, 

Trapianti e Nuove Tecnologie in Medicina, 2 Dipartimento 

Cardio-Toracico, Università di Pisa, Pisa 

Introduzione. La proteina c-kit, anche conosciuta come 

CD117, appartiene alla famiglia dei recettori tirosin-chinasici 

di tipo III. Attività chinasiche sono state implicate nella fisio-patologia 

di molti tumori, tra cui il carcinoma polmonare 

a piccole cellule (SCLC). Attivazione paracrina e/o autocrina 

di c-kit ad opera del suo ligando è stata ipotizzata nel tumore 

polmonare, ma questo recettore può anche essere attivato da 

mutazioni a carico del gene c-kit. 

Abbiamo esaminato l’espressione e lo stato mutazionale di ckit 

in SCLC allo scopo di verificare la sua espressione e le 

eventuali alterazioni geniche, così come il suo possibile impatto 

prognostico. 

Metodi. Sono stati analizzati 60 campioni di SCLC per valutare 

la presenza di eventuali mutazioni a carico degli esoni 

9 e 11 mediante la tecnica di PCR-SSCP e successivo sequenziamento 

automatico. Inoltre, l’espressione della proteina 

c-kit è stata valutata in 55 campioni mediante metodica 

immunoistochimica. 

Risultati. L’espressione di c-kit è stata evidenziata in circa il 

40% dei campioni SCLC. Due mutazioni a carico dell’esone 

9 e tre a carico dell’esone 11 sono state riscontrate. L’analisi 

della sopravvivenza mediante curve di Kaplan-Meier non ha 

evidenziato alcun valore prognostico per c-kit. 

Conclusioni. Nella nostra serie di campioni, l’espressione di 

c-kit ed il suo stato mutazionale non sembrano avere rilevante 

impatto sulla sopravvivenza; ciò rende più difficile l’approccio 

terapeutico con inibitori della tirosin-chinasi in SCLC, almeno 

fino a quando una sicura dimostrazione della implicazione di 

c-kit in questo tipo di tumore non sia stata ottenuta. 

Correlazione tra espressione di IL-8, TNF-α, 

neovascolarizzazione e p53 nel carcinoma 

polmonare non a piccole cellule 

S. Ursino1 , L. Boldrini, S. Gisfredi1 , P. Faviana, V. Donati, 

T. Camacci1 , M. Lucchi2 , A. Mussi2 , F. Basolo1 , R. Pingitore, 

G. Fontanini1 Dipartimento Chir., 1 Dipartimento Oncol., Trap. e Nuove 

Tecn. in Med., 2 Dipartimento Cardio-Torac., Università di 

Pisa, Pisa 

Introduzione. L’angiogenesi è un processo necessario per lo 

sviluppo e la crescita tumorale ed il conteggio dei microvasi 

(MVC) rappresenta un valido indice angiogenetico nel carcinoma 

polmonare non a piccole cellule (NSCLC). L’angio- 

COMUNICAZIONI 

2. Patologia polmonare, Patologia varia 

MODERATORI: P. GALLO (ROMA), G. NUCIFORO (CATANIA) 

genesi è stimolata da vari fattori: un ruolo prominente svolge 

il Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF), ma altri fattori, 

quali interleuchina-8 (IL-8), p53 e Tumor Necrosis Factor 

(TNF-α), sembrano coinvolti. 

Metodi. La casistica include 88 pazienti, 73 maschi e 15 

femmine, età media 63,7 anni. In base al TNM, 18 pazienti 

erano classificati come T1, 60 T2, 10 T3; 29 presentavano 

metastasi linfonodali alla diagnosi (11 N1 e 18 N2), 59 no 

(N0). L’espressione di IL-8, VEGF e TNF-α mRNA era valutata 

mediante PCR-competitiva. Lo stato mutazionale del 

gene p53 veniva analizzato mediante PCR-SSCP e successivo 

sequenziamento automatico. L’espressione di IL-8 è stata 

correlata con VEGF, MVC, p53 e TNF-α. 

Risultati. In base al valore mediano, i campioni erano distinti 

in 43 a basso e 45 ad alto livello di IL-8 mRNA. Tali 

livelli non correlavano con nessuna delle caratteristiche 

clinico-patologiche della neoplasia. Il grado di espressione 

di IL-8 era correlato con MVC (χ 2 test; p = 0,02) e VEGF 

mRNA (χ 2 test; p = 0,02). Campioni con alterazioni di p53 

mostravano alti livelli di IL-8 (χ 2 test; p = 0,01). Le curve 

di sopravvivenza non evidenziavano differenze tra tumori a 

bassa ed alta espressione di IL-8, sia per sopravvivenza totale 

(OS), che per intervallo libero da malattia (DFI). Elevati 

livelli di IL-8 erano associati ad alta espressione di 

TNF-α (χ 2 test; p = 0,03). In analogia ad un nostro precedente 

studio, tumori con maggior contenuto di TNF-α erano 

caratterizzati da miglior prognosi (Log-rank test; p = 

0,03 per OS e p = 0,04 per DFI). 

Conclusioni. Dai risultati ottenuti, IL-8, analogamente a 

VEGF, sembra avere una funzione angiogenetica, regolata 

dallo stato di p53 in NSCLC. IL-8 e VEGF potrebbero però 

appartenere a pathways differenti; in particolare, IL-8 

potrebbe anche interagire con TNF-α nella regressione tumorale. 

Ulteriori studi saranno necessari per chiarire la funzione 

di IL-8 in NSCLC. 

Blastoma pleuropolmonare (PPb). 

Studio morfologico ed immunoistochimico 

di un caso 

N. Rizzo, C. Doglioni, G. Arrigoni 

Anatomia Patologica Istituto Scientifico “San Raffaele”, Milano 

Introduzione. Il blastoma pleuro-polmonare è una rara neoplasia 

aggressiva del bambino nei primi anni di vita, fa parte 

dei tumori disembrionali-disontogenetici (t. di Wilms, neuroblastoma 

e epatoblastoma) ed è l’unica neoplasia periferica 

polmonare o pleurica dell’età pediatrica distinta dal blastoma 

polmonare dell’adulto. Il PPb è costituito da un tessuto 

primitivo in cui gli elementi sarcomatosi e blastematosi sono 

variabilmente frammisti. Il PPb ha una base familiare o costituzionale 

nel 23% dei casi, può essere multifocale o associarsi 

ad altre neoplasie, displasie e/o iperplasie. Viene classificato 

in 3 tipi clinico-patologici, (Dehner), che rappresen-

174 

tano un continuum di progressione istologica e biologica: 

tipo I cistico, tipo II cistico e solido, tipo III solido. 

Caso clinico. Descriviamo un caso di blastoma pleuro-polmonare 

di tipo II in un bambino di 22 mesi diagnosticato, alla 

TC come cisti broncogena del lobo polmonare superiore di destra. 

La neoformazione, cistica, pluriloculata di cm 10 x 9 x 4 

con pareti di spessore da 0,2 a 1 cm, aderiva al polmone mediante 

un peduncolo ed era costituita da aree solide e cistiche, 

rivestite da epitelio respiratorio e separate da setti fibrosi talora 

mixoidi. Sotto l’epitelio vi sono cellule tumorali tonde o 

fusate, immature con aspetto simile allo strato cambiale del 

sarcoma botrioide accompagnate da un numero variabile di 

rabdomioblasti (poligonali o allungati con strie trasversali) e di 

cellule anaplastiche con nuclei pleomorfi ed ipercromici o 

multinucleate. Le aree solide hanno aspetti misti blastematosi 

e sarcomatosi con cellule blastematose immerse in aree simil 

fibrosarcoma o istiocitoma fibroso maligno. 

Immunofenotipo: CK+ nell’epitelio respiratorio; CK-, vimentina+ 

nelle cellule neoplastiche delle aree cistiche e 

solide; desmina+ nella componente rabdomioblastica; actina 

SM-, S100-, EMA-. 

Conclusioni. La peculiarità di questo caso risiede: 

• nella rarità del PPb; 

• nella difficoltà della diagnosi clinica, che spesso è di lesione 

benigna; 

• nella precisa definizione del tipo clinico-patologico (Dehner), 

in base al quale variano significativamente sopravvivenza 

e terapia. 

Bibliografia 

Dehner LP. Semin Diagn Pathol 1994;11:144-51. 

Priest JR, et al. Cancer 1997;80:147-61. 

Leiomiosarcoma EBV-associato in paziente 

HIV+, già affetto da linfoma primitivo 

del sistema nervoso centrale (PCNSL): 

identità molecolare dei tumori EBV associati 

F. Pierconti, M. Martini, A. Cingolani1 , L.M. Larocca 

Istituto di Anatomia Patologica, 1 Istituto di Clinica delle 

Malattie Infettive, Università Cattolica del S. Cuore, Roma 

Introduzione. Paziente HIV+, in terapia con HAART, lungosopravvivente 

dopo trattamento per PCNSL EBV-associato, 

sviluppa un leiomiosarcoma EBV-relato. Gli agenti etiologici 

virali identificati nei 2 tumori hanno medesime caratteristiche 

molecolari. 

Metodi. IIC: sezioni fissate in formalina, incluse in paraffina, 

metodo avidina-biotina perossidasi (Dako LSAB2, 

Dakopatts, Glostrup, Denmark), anticorpi monoclonali anti: 

CD20, CD79a, CD3, Bcl-6, Cd138/syndecan-1, Vimentina, 

Actina muscolo liscia, Desmina, S-100, HMB-45, CD31, 

CD34, (Ylem, Roma, Italia), LMP-1 (CS 1-4; Dakopatts). 

ISH: su sezioni fissate in formalina, sonda marcata con isotiocianato-fluoresceina 

complementare ad EBER-RNA (1/2; 

Dakopatts). 

Genotipo EBV: Estrazione DNA da paraffina con Qiamp 

DNA mini Kit (QIAGEN, Chatsworth, CA). PCR per regioni 

specifiche di EBNA 2 e EBNA 3, per la definizione 

del tipo di EBV (tipo 1 o tipo 2). Amplificazione e sequenziamento 

di una regione del gene EBNA-1, per i sottotipi di 

EBNA 1. Il genotipo di LMP-1 si determina mediante tecniche 

di PCR, con primers specifici per la regione C terminale 

di LMP-1. 


Risultati. Il linfoma primitivo cerebrale, viene classificato 

come linfoma diffuso a grandi cellule, (REAL; WHO) immunoblastico 

plasmocitoide (WF), EBER+ e LMP-1+. Il tumore 

mesenchimale appare desmina e actina muscolo liscia, 

EBER+ e LMP-1+. Ambedue le lesioni, mostrano la presenza 

di un identico tipo 1 di EBV e identico sottotipo 1 di 

EBNA, (P-ala). 

Conclusioni. Questo primo caso riportato di leiomiosarcoma 

EBV-associato in paziente HIV+ con precedente PCNSL 

EBV-associato, appare suggerire che: 

– Alti livelli di viremia, come quelli presenti in paziente con 

PCNSL EBV-associato possono determinare l’infezione di 

cellule normalmente non coinvolte, come quelle muscolari 

lisce. 

– La radioterapia, seguita da terapia HAART, elimina l’infezione 

di EBV, nelle cellule linfomatose cerebrali, ma non 

appare capace di ridurre i livelli di viremia sistemici e 

quindi nel caso specifico di bloccare a livello delle cellule 

muscolari lisce l’infezione latente di EBV e la conseguente 

capacità oncogenica di EBV stesso (Roychowdhury S, et 

al. Cancer Res 2003;63:965-71; Ling PD, et al. Clinical Infectious 

Disease 2003;37:1244-9). 

Sindrome di Gorlin-Goltz: un caso clinico 

N. Forte, E. Tomaselli, D. Parente, I. Ardovino 1 , L. Pastorino 

2 , G. Bianchi Scarrà 2 

Dipartimento dei Servizi Diagnostici, U.O. di Anatomia Patologica, 

Ospedale “Fatebenefratelli” di Benevento; 1 Ginecologia 

ed Ostetricia, Ospedale “Fatebenefratelli” di Benevento; 

2 Università di Genova, Dipartimento di Oncologia, 

Biologia e Genetica 

La Sindrome di Gorlin-Goltz o Sindrome del Carcinoma Nevo 

Basocellulare (NBCCS) è una rara condizione a trasmissione 

autosomica dominante a penetranza completa, caratterizzata 

dalla presenza di un’ampia variabilità di segni clinici 

che in base alla loro frequenza-percentuale vengono distinti 

in criteri maggiori e minori. Sono da considerarsi criteri maggiori: 

carcinomi basocellulari (70% dei casi); cheratocisti 

odontogene mandibolo-mascellari, (75% dei casi); calcificazioni 

della falce cerebrale (90% dei casi), anomalie costali 

bifide, ipoplasiche, sinostosiche), cifoscoliosi. Sono criteri 

minori, le malformazioni congenite: palatoschisi e/o 

labioschisi, ipertelorismo, anomalie dentarie. Altre anomalie 

scheletriche: fronte alta e larga, radice del naso larga, bozze 

frontali (“facies rude”, dall’inglese “coarse face”); deformità 

scapolare di Sprengel, deformità toraciche, sindattilia. 

Anomalie radiologiche: “ponte” della sella turcica, fusione o 

allungamento dei corpi vertebrali; fibromi ovarici, medulloblastoma. 

Nei soggetti di sesso maschile si può avere agenesia 

o iposviluppo gonadico. 

La presenza di almeno due dei criteri maggiori o di uno maggiore 

e due minori, consentono di fare diagnosi di Sindrome di 

Gorlin. Studi genetici dimostrano che la Sindrome riconosce la 

presenza di una mutazione sul braccio corto del cromosoma 9 

in posizione 22.3; tale gene PTCH, omologo umano del 

patched Drosophila (PTC) è un anti-oncogene, codificante per 

una proteina transmembrana, la cui inattivazione si traduce in 

una alterazione dei meccanismi di controllo della proliferazione 

e trasformazione cellulare. Pertanto un’alterazione di 

questo pathway non può che determinare anomalie strutturali 

e di sviluppo. Gli Autori, considerato, la rarità di tale Sindrome, 

in Italia l’incidenza è pari a 1/256.000, ritengono utile


la segnalazione di un Caso: giovane donna di anni 23 era sottoposta, 

nel dicembre 2003 ad intervento chirurgico per voluminose 

masse ovariche bilaterali. Macroscopicamente di aspetto 

fibromatoso, esse mostravano aree cistiche e resistenza al 

taglio per verosimile presenza di calcificazioni. L’esame microscopico 

deponeva per fibroma ovarico bilaterale con estese 

aree calcifiche. L’anamnesi remota accurata, rivelava intervento 

chirurgico nel 1995 per una neoformazione cistica del mascellare, 

istologicamente diagnosticata come cisti dentigena o 

follicolare. Nel 2001 nuovo intervento per recidiva locale. 

Questa volta la diagnosi microscopica era di cheratocisti. Alla 

luce di tale dato la diagnosi, per gli Autori, ultimi arrivati, era 

quasi certa, mancava solo uno dei criteri maggiori o uno dei 

minori. Una RM cerebrale, eseguita, mostrava calcificazioni 

della falce cerebrale. La rarità della Sindrome e probabilmente 

la scarsa conoscenza di essa non aveva permesso la diagnosi 

anni prima. 

Paraganglioma del corpo carotideo: 

descrizione di un caso 

S. Squillaci, F. Tallarigo1 , F. Pontieri1 , F. Vittimberga1 Servizio di Anatomia Patologica, Ospedale di Vallecamonica, 

Esine; 1 Servizio di Anatomia Patologica, Ospedale “S. 

Giovanni di Dio”, Crotone 

Introduzione. Il riscontro di una neoformazione dei tessuti 

molli del collo pone il problema della diagnostica differenziale 

tra lesioni di natura neoplastica benigna e maligna. In 

corso di indagini per lo studio di una massa espansiva di tale 

regione, deve essere sempre considerata la possibilità di un 

paraganglioma, entità infrequente e con caratteristiche 

cliniche non specifiche. Qui descriviamo un raro caso di 

paraganglioma del corpo carotideo. 

Donna di 41 anni a causa della comparsa di un nodulo nella regione 

laterocervicale destra eseguiva ecografia che evidenziava 

una massa ovalare ipoecogena di circa 3 cm; la RMN ne confermava 

la presenza in stretta adiacenza con la biforcazione 

carotidea. L’angiografia metteva in luce il carattere ipervascolare 

della lesione che veniva successivamente asportata. 

Metodi. Lo studio immunoistochimico è stato condotto con i 

seguenti antisieri: citocheratine AE1/AE3 e Cam 5,2, vimentina, 

cromogranina, sinaptofisina, actina, Myo-D1, S- 

100. Sezioni sono state disaggregate e sottoposte a colorazione 

con propidio ioduro per la determinazione citofluorimetrica 

del contenuto cellulare di DNA. 

Risultati. La neoformazione di cm 2,8 x 2,3 x 1,4 appariva 

al taglio di colorito rosso-brunastro e consistenza duro-elastica. 

Istologicamente era delimitata da una capsula da cui si 

irradiavano tralci fibrovascolari di spessore variabile che 

ramificandosi al suo interno la scomponevano in nidi. Questi 

erano costituiti da cellule epiteliomorfe, negative al PAS e 

positive al Grimelius, con citoplasma ampio, granulare ed 

eosinofilo, nucleo a contorni regolari e piccolo nucleolo. Alcuni 

elementi presentavano vacuolizzazioni citoplasmiche, 

altri inclusioni nucleari, multinucleazioni e atipie. Rare le 

figure mitotiche. Le cellule neoplastiche erano negative alle 

citocheratine e ai markers miogenici e positive alla vimentina 

e ai marcatori endocrini. L’S-100 era espressa in elementi 

fusati disposti alla periferia degli alveoli. L’analisi citofluorimetrica 

evidenziava diploidia. 

Conclusioni. Nella diagnosi differenziale rientrano tumori 

quali il liposarcoma, il sarcoma alveolare delle parti molli, 

l’emangiopericitoma, il carcinoma midollare tiroideo e sec- 

175 

ondarismi di melanomi, di carcinomi renali e di neoplasie 

neuroendocrine epiteliali. Approssimativamente 1 su 30.000 

tumori della testa e del collo è un paraganglioma. Ciò sottolinea 

la rarità di queste lesioni che hanno un basso potenziale 

di malignità e una prognosi per lo più favorevole. 

Osteopontina: marker tumorale per i 

carcinomi squamosi del distretto testa collo? 

P. Somma, M. Santoro1 , S. Staibano, G. Mansueto, C. 

Mignogna, D. Testa2 , R. Iovine2 , G. De Rosa, A. Celetti1 Dipartimento di Scienze Biomorfologiche e Funzionali, Sezione 

di Anatomia Patologica; 1 Dipartimento di Biologia e 

Patologia Cellulare e Molecolare; 2 Istituto di Otorinolaringoiatria, 

Università “Federico II”, Napoli 

Introduzione. I carcinomi a cellule squamose della testa e 

del collo rappresentano la quinta causa di morte tumorale al 

mondo e nonostante i fattori di rischio siano ben conosciuti, 

poco è tuttora noto circa i meccanismi molecolari responsabili 

per questa patologia. 

Appare pertanto necessario identificare nuovi marcatori per i 

tumori di questo distretto per una diagnosi precoce delle lesioni 

precancerose e per il monitoraggio di neoplasie conclamate. 

Metodi. Abbiamo analizzato attraverso Immunoblot ed Immunoistochimica 

i livelli di espressione della glicoproteina Osteopontina 

in una serie di cinquantotto tumori primitivi e 

metastatici del distretto testa collo (carcinoma a cellule 

squamose di laringe, ipofaringe e cavo orale) a differente grado 

di malignità confrontati ai corrispondenti tessuti normali. Abbiamo, 

inoltre, studiato in ventinove tessuti displastici l’espressione 

di osteopontina correlandola con il grado di displasia. 

Risultati. Abbiamo potuto osservare up-regolazione di osteopontina 

in tutti i carcinomi invasivi studiati, paragonati ai 

corrispondenti tessuti normali. 

Conclusioni. Il trattamento con osteopontina ricombinante esogena 

incrementa la proliferazione e la motilità cellulare in un 

ampio pannello di cellule in linea continua di carcinoma 

epiteliale squamoso. Dimostriamo, infine, che l’osteopontina è 

in grado di indurre i suoi effetti in vivo ed in vitro grazie all’espressione 

specifica del recettore CD44v6 nelle cellule neoplastiche. 

In conclusione, riteniamo che i nostri risultati chiaramente 

identificano l’osteopontina come un effettivo marker tumorale 

per i carcinomi squamosi del distretto testa collo; dobbiamo 

altresì stressare che il maggiore risultato del nostro studio 

è rappresentato dal fatto che l’osteopontina appare essere un 

marker di rilevamento precoce delle displasie epiteliali. 

Il carcinoma a cellule squamose del cavo 

orale: espressione dei geni coinvolti 

nella regolazione dell’apoptosi mediante 

SuperArray GEArray Q Series Human 

Apoptosis Gene Array 

C. Mignogna, L. Lo Muzio1 , M. Emanuelli2 , G. Mansueto, 

P. Somma, M. Mascolo, G. De Rosa, S. Staibano 


di Patologia, Università “Federico II”, Napoli; 1 Istituto 

di Scienze Odontostomatologiche e 2 Istituto di Biotecnologie 

Biochimiche, Università Politecnica delle Marche 

Introduzione. L’apoptosi è un processo geneticamente determinato 

che gioca un ruolo di fondamentale importanza

176 

nell’omeostasi cellulare, nella morfogenesi e nella eliminazione 

delle cellule danneggiate o self-reactive che possono 

essere potenzialmente dannose per l’ospite. Normalmente i 

processi apoptotici, inducendo la morte programmata delle 

cellule tumorali, precludono lo sviluppo delle patologie tumorali. 

A volte, tuttavia, tali processi vengono alterati con 

conseguente immortalizzazione delle cellule, rapido aumento 

della progressione tumorale e formazione di metastasi. A 

livello molecolare la trasformazione di cellule normali in cellule 

neoplastiche è controllata da diversi geni, alcuni dei 

quali hanno assunto un’importanza notevole come inibitori 

dell’apoptosi. Lo scopo di questo studio è stato quello di 

analizzare l’espressione dei principali geni coinvolti nella regolazione 

del processo apoptotico nel carcinoma orale, mediante 

una valutazione dell’entità dei rispettivi RNA messaggeri. 

Metodi. La popolazione studiata è costituita da 4 pazienti affetti 

da carcinoma insorto in sedi diverse del cavo orale e con 

un grading differente. Da ogni soggetto sono stati prelevati 2 

campioni di tessuto: uno dalla mucosa normale ed uno dal 

carcinoma. Si è poi proceduto all’estrazione dell’RNA e al 

suo esame con il kit della SuperArray GEArray Q Series Human 

Apoptosis Gene Array. Tale kit è progettato per esaminare 

l’espressione di 96 geni che codificano per proteine 

coinvolte nel processo apoptotico, tra cui componenti della 

famiglia bcl-2, come bcl-2, bad, bax, bcl-10, bcl-2 related 

protein A1, HRK, componenti della famiglia IAP, come survivina, 

IAP-1, IAP-2, IAP-6, XIAP, caspasi 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 

TNF superfamily members, TRAIL, Fas ligand. I frammenti 

di cDNA sono posizionati in spot separati su una membrana 

di nylon di 3,8 x 4,8 cm (tetra-spot format). L’RNA purificato 

dai campioni è stato assoggettato ad una reazione di retrotrascrizione 

e marcato con dUTP biotinilato. Successivamente 

è stata effettuata dapprima l’incubazione con un substrato 

chemiluminescente e poi la rivelazione del segnale con 

tecniche autoradiografiche. La valutazione quantitativa dell’espressione 

di ciascuno dei geni è stata ottenuta da un’analisi 

computerizzata condotta con un software specifico. 

Risultati. L’accurata analisi dei risultati numerici e grafici ha 

rivelato che ci sono alcuni geni che sono maggiormente 

espressi nel carcinoma, come la p63 (3/4), ed altri che sono 

invece maggiormente espressi nei tessuti sani, quali il 

CRADD (4/4), il TNFRSF6 (3/4), il MCL1 (4/4), il RIPK1 

(2/4) ed il RIPK2 (4/4). Inoltre, si è riscontrato un aumento 

statisticamente significativo nel carcinoma del mRNA di alcuni 

geni responsabili del blocco dell’apoptosi, quali bcl-2, 

bax, Apollon, survivina, TRAIL confermando dati ottenuti 

con l’immunoistochimica. 

Conclusioni. La valutazione dell’espressione genica differenziale 

a livello trascrizionale realizzata con tale metodica 

sembra essere di rilevante ausilio per l’individuazione di 

markers rappresentativi dell’attività oncogenetica nel cavo 

orale. Tali dati sembrano confermare nei campioni di carcinoma 

una più intensa attività trascrizionale a carico dei geni 

coinvolti nel blocco dell’apoptosi anche se, dato l’esiguo numero 

di pazienti esaminati, è necessario effettuare ulteriori 

studi su casistiche più ampie. 


Deregolazione del processo di apoptosi, 

TIL e caratteristiche biologiche del melanoma 

maligno dell’uvea 

M. Mascolo, E. Mezza, G. Mansueto, P. Somma, C. 

Mignogna, F. Tranfa, L. Nugnes, G. De Rosa, S. Staibano 


di Patologia, e Dipartimento di Oftalmologia, Università 

“Federico II”, Napoli 

Introduzione. La possibilità di regressione spontanea e la riportata 

comparsa tardiva di metastasi supportano l’ipotesi 

che processi immunologici abbiano un ruolo significativo 

nell’evoluzione clinica del melanoma maligno uveale 

(UMM). 

Metodi. È stata analizzata la correlazione fra presenza e 

fenotipo dei linfociti tumore-infiltranti (TIL), l’espressione 

di Fas e del suo ligando Fas-L nella popolazione neoplastica 

e nei TIL, ed il comportamento biologico degli UMM. La valutazione 

è stata effettuata con metodiche immunoistochimiche 

su sezioni paraffinate di una serie selezionata di 

66 UMM. I risultati sono stati comparati con i dati di followup 

dei pazienti. 

Risultati. I TIL hanno mostrato solo in 3 casi una prevalenza 

di CD 56+ Natural Killer. La maggior parte dei TIL ha invece 

mostrato una prevalenza dei T linfociti CD 8+, o espressione 

equivalente di CD 4+ e CD 8+. La subunità CD3 zeta 

del T-cell receptor (TCR) complex, coinvolta nella trasduzione 

del segnale ed attivazione dei T linfociti, è risultata 

espressa nella maggior parte dei casi. Tuttavia, in un sottogruppo 

di casi, l’espressione della ß-chain è risultata ridotta 

o assente. Dal 30 all’80% dei T-linfociti CD3+ intra- e peritumorali 

di tutti gli UMM hanno mostrato espressione di 

Fas, con livelli più elevati significativamente associati a 

riduzione/assenza della TCR ß-chain. Questo sottogruppo è 

risultato caratterizzato da un comportamento clinico sfavorevole. 

Conclusioni. Dal momento che la perdita di espressione di ßchain 

è correlata ad una risposta immune inefficiente ed alla 

progressione neoplastica, è ipotizzabile, in base ai risultati di 

questo studio, che un danno della risposta immune di tipo 

citotossico possa essere responsabile del comportamento aggressivo 

di un sottogruppo di UMM. 

Pararectal angiomyofibroblastoma. 

Case report 




Introduction. The AMF is a rare myofibroblastic benign 

neoplasm, recently described, arising in pelvi-perineal region, 

especially in females between menarche and 

menopause. The preferential seat is vulva, but in 10% of cases 

they appear in paravaginal seat. The AMF is a well-limited 

mesenchymal tumor, without capsula, locally not aggressive, 

which is not inclined to relapse after surgical exeresis. 

This is often smaller than 5 cm, or unusually bigger than 10 

cm. Histologically it is characterized by splindle-shaped or 

plasmacytoid cells, without atypia and mitosis; prevalently 

localized around small blood-vessel, in a flail and oedematous 

stromale setting. We report a case of AMF, which is


characterized by above-average size and perineal seat with 

pararectal manifestation. 

Materials and methods. For some months a 42 years old patient, 

suffering from Sjögren’s syndrome, has noticed, when she 

was erect an asymmetry in perineal region, with pain and difficulty 

in evacuating. Inferior region of the abdomen’s TAC and 

RM showed a splindle-shaped well-limited mass. The above 

mentioned mass from left para anal subcutaneous tissue extended 

as far as pararectal seat. The patient has been subjected 

to surgical exeresis of such neoformation with conjoint abdominoperineal 

manoeuvre. The specimen sent was formalin at 

4% fixed and paraplast plus included. Sections of 3 µm thickness 

have been prepared; stained with HE, Alcian-PAS and 

Reticulum. Other sections have been set on slides previously 

treated with Poli-l-lysin for the immunohistochemical stains. 

The immunohistochemistry has been performed with Avidinbiotin 

peroxidase technique and APAAP method. The used Antibodies 

have been Vimentin, Desmin, S100, CD34, Smooth 

Muscular Actin, EMA, Progesteron and Estrogen Receptors. 

Pathologic distinctive features. Macroscopically the neoformation 

of maximum diameter 9 cm, appeared well-limited 

without capsula, softish. Microscopically it showed the alternation 

of hypocellular and hypercellular areas, with small 

power. There were many small ectasic, and with thin walls 

blood-vessel in oedematous matrix, where splindle-shaped or 

epithelioid cells, especially in perivascular seat were dipped. 

They were positive for Vimentin, Desmin, Progesteron and 

Estrogen Receptors; negative for EMA, S100, Smooth Muscular 

Actin, CD34 and Fast Myosin. Perivascular mast cells 

and lymphocytes, mature adipocytes’ areas were noticed. 

Conclusions. The AMF is a tumor that arises in pelvi-perineal 

subcutaneous tissue, with dubious hystogenesis. It 

shows a variety of ultrastructural distinctive features from fibroblastic 

to myofibroblastic differentiation. In our case the 

tumor was correlated with perineal subcutaneous tissue and it 

was equipped with adipose tissue and heterogeneous elements 

in central and peripheral seat. Such features confirm 

the possible angiomyofibroblastoma’s origin by primitive 

mesenchymal cells, with potentiality of development towards 

various line of differentiation. The AMF is a benign tumor, 

differently from aggressive angiomyxoma described by J. 

Rosai. The differential diagnosis between first and second 

one is essential for the different prognosis and therapy. 

Valutazione immunoistochimica 

del c-Kit (CD117) negli ameloblastomi orali 

L. Ventura, A. Ranieri, M. Sarra, F. Calista1 , V. Ceppa2 U.O. di Anatomia Patologica e di 1 Oncologia Medica, Azienda 

USL, L’Aquila; 2 Novartis Farma 

Introduzione. L’ameloblastoma è una neoplasia dei tessuti 

odontogeni, caratterizzata da lenta crescita ed invasività locale, 

con elevata incidenza di recidive e scarsa tendenza alla 

metastatizzazione. 

La tirosinchinasi recettoriale c-Kit è coinvolta nella proliferazione 

di numerose cellule normali (staminali emopoietiche, 

mastociti ed altre). La sua iperespressione è documentata in 

diverse neoplasie, che presentano sue mutazioni attivanti 1 . 

La densità mastcellulare assume valore prognostico in numerose 

forme tumorali 2 . 

Scopo del presente studio è valutare l’espressione immunoistochimica 

di c-Kit nell’ameloblastoma ed il ruolo dei mastociti 

nello sviluppo di questa neoplasia. 

177 

Materiale e metodi. Abbiamo valutato l’espressione di c-Kit 

in 19 ameloblastomi primitivi o recidivi, relativi a 15 pazienti 

(8 maschi e 7 femmine) di età compresa tra 17 e 82 anni. 

L’analisi immunoistochimica delle lesioni è stata effettuata 

con anticorpo policlonale DAKO, metodo LSAB/perossidasi 

ed immunocoloratore LabVision, utilizzando controlli positivi 

e negativi. 

La densità mastcellulare è stata valutata contando il numero 

massimo di mastociti/mm 2 . Espressione di c-Kit e densità 

mastcellulare sono stati correlati con i dati clinico-patologici 

dei soggetti (età, sesso, sede, tipo macroscopico, istotipo, recidive). 

Risultati. Positività citoplasmatica è stata osservata in 2 casi, 

ma appariva limitata al 10% delle cellule stellate, con preameloblasti 

negativi. I restanti casi risultavano negativi. 

La presenza di mastociti è stata riscontrata in prossimità dei 

vasi stromali e, talora, delle cellule neoplastiche. Le densità 

erano comprese tra 0 e 141 mastociti/mm 2 ; il valore medio di 

43 è stato utilizzato come cut-off per dividere le lesioni in 

due gruppi. Valori elevati di densità mastcellulare erano 

prevalenti in sesso femminile, tipo solido/multicistico ed istotipi 

non follicolari. Non sono state rilevate differenze in 

base ad età, sede e recidive. 

Conclusioni. L’assenza di espressione significativa nelle cellule 

neoplastiche suggerisce che c-Kit non riveste alcun ruolo 

nella genesi degli ameloblastomi orali. 

Evidenziando qualsiasi forma evolutiva e funzionale dei 

mastociti, l’immunocolorazione con CD117 costituisce un 

metodo valido per la loro conta. Gli elevati valori di densità 

mastcellulare in sesso femminile, tipo solido/multicistico ed 

istotipo non follicolare indicano un possibile ruolo dei mastociti 

nei rapporti tumore-ospite e nel determinismo della 

morfologia tumorale. 

Bibliografia 

1 Miettinen M, et al. Eur J Cancer 2002;38(Suppl 5):S39-S51. 

2 Erkiliç S, et al. J Dermatol 2001;28:312-5. 

Granuloma prostatico da corpo estraneo 

(pelo). Presentazione di un caso e revisione 

della letteratura 

L. Ventura, E. Martini1 , G. Di Nicola2 , T. Ventura 

U.O. di Anatomia Patologica e di 1 Urologia, Azienda USL 

L’Aquila; 2 U. O. Urologia, Azienda USL Avezzano-Sulmona 

Introduzione. Numerosi agenti eziologici possono causare 

reazione granulomatosa nella prostata. Tra questi, rari esempi 

di granuloma da corpo estraneo sono riportati in letteratura 

1 . Presentiamo un caso di granuloma prostatico da pelo osservato 

nel corso di uno studio retrospettivo sul carcinoma 

prostatico 2 , unitamente ai dati della revisione di letteratura. 

Caso clinico. Un uomo di 70 anni giungeva all’osservazione 

presso l’Ospedale di Avezzano in seguito a riscontro di elevati 

livelli di PSA sierico totale e veniva sottoposto ad 

ecografia, con reperto di area ipoecogena destra del diametro 

di 11 mm in ghiandola di 29 x 39 x 20 mm. L’esame istologico 

di 9 frustoli agobioptici prelevati in entrambi i lobi per 

via perineale e transrettale evidenziava adenocarcinoma 

Gleason 3 + 3 = 6 presente in tutti i frustoli, con invasione 

perineurale. La scintigrafia ossea non mostrava accumuli patologici 

del tracciante. Il paziente veniva quindi sottoposto a 

terapia con antiandrogeni per 5 settimane ed a prostatectomia 

radicale, effettuata presso l’Ospedale di L’Aquila 43 giorni

178 

Autore Anno Età Campione Precedenti 

dopo l’esecuzione delle biopsie. L’esame istologico della 

prostata evidenziava adenocarcinoma Gleason 3 + 4 = 7 in 

entrambi i lobi, 30% del peso ghiandolare, con invasione perineurale, 

stadio pT2b pN0 pMX secondo TNM (UICC, 

1997). Nelle porzioni posteriori del lobo destro erano presenti 

aree di flogosi granulomatosa a cellule giganti del tipo 

da corpo estraneo, inglobanti segmenti di fusto pilifero. 

Conclusioni. Quattro esempi di granulomi prostatici da inclusione 

di peli secondaria a biopsia, TUR o cateterizzazione 

prolungata sono stati descritti in letteratura 1 . Il caso in esame 

rappresenta il terzo riscontro su prostatectomia radicale ed il 

quarto osservato dopo biopsia transrettale. 


White, et al. 1994 79 TUR-P Cateterizzazione 3 anni 

Day, et al. 1996 78 TUR-P TUR-P 6 mesi prima 

Curtis, et al. 1998 73 Prostatectomia Biopsie 16 mesi prima 

Ramìrez-Tortosa, et al. 1998 69 Prostatectomia Biopsie 5 mesi prima 

Nostro Caso 2004 70 Prostatectomia Biopsie 1,5 mesi prima 

L’introduzione di peli perineali attraverso l’iniezione con ago 

bioptico o le manovre strumentali (TUR, cateterizzazione) 

rappresenta il meccanismo patogenetico di questa peculiare 

forma di prostatite granulomatosa focale da corpo estraneo. I 

granulomi da pelo costituiscono una condizione asintomatica, 

priva di complicanze, di riscontro istologico occasionale, 

sebbene verosimilmente sottostimato. 

Bibliografia 

1 Humphrey PA. Prostate Pathology. Chicago: ASCP Press 2003;4:86- 

94. 

2 Ventura L, et al. Arch Ital Urol Androl 2003;75:208-13.

PATHOLOGICA 2004;96:179-184 

Pretrattamento automatico di sezioni 

per immunoistochimica 

F.P. Morigi, C. Toni, A. Bondi 

Anatomia, Istologia Patologica, Citodiagnostica e Citogenetica, 

Azienda USL di Cesena 

Il pretrattamento delle sezioni da colorare con immunoistochimica 

è una fase indispensabile per ottenere preparati 

adeguati. Alcune Aziende che producono immunocoloratori 

li corredano anche con processatori automatici per alcune 

fasi o per l’intero procedimento di preparazione. 

L’U.O. di Anatomia Patologica di Cesena ha condotto una 

valutazione delle performances relative alla nuova strumentazione 

automatica A. Menarini per la fase pre-analitica della 

reazione immunoistochimica: il GenoMx i1000. 

Lo strumento in oggetto, provvede alla completa automazione 

delle seguenti due fasi operative: 

– sparaffinatura delle sezioni (Dewaxing); 

– recupero antigenico dei tessuti (Antigen Retrieval). 

Lo strumento è composto da una camera operativa e da un PC 

esterno, è in grado di processare fino a 288 vetrini per routine 

in modalità bar-code; un braccio robotico (X-Y-Z) gestisce 

fino a 12 rack portavetrini attraverso le varie fasi procedurali. 

Le operazioni avvengono in quattro distinti alloggiamenti interni 

a pressione, temperatura e pH strettamente controllati. 

Una volta processati i vetrini vengono posizionati in una 

soluzione di stoccaggio. La colorazione immunoistochimica 

può essere effettuata immediatamente dopo il pretrattamento. 

Sono stati testati circa 300 vetrini rappresentativi di diverse 

tipologie di tessuto: nervoso, gastrointestinale, mammario, 

muscolare, midollare, linfonodale, cutaneo e ghiandolare. Su 

questi tessuti sono stati valutati 50 anticorpi, confrontando in 

doppio per ciascuno di essi, i risultati ottenuti col pretrattamento 

manuale e l’uso del GenoMx i1000. 

Nel pretrattamento manuale vengono utilizzati tamponi a differente 

concentrazione ionica (pH 6.0, pH 7.0, pH 8.0) a seconda 

dell’anticorpo testato; con lo strumento testato si è impiegata 

una soluzione unica pH 6.2 per tutti gli anticorpi. 

COMUNICAZIONI 

3. Procedure tecniche, Patologia gastroenterologica, 

Dermatopatologia 

MODERATORI: R. FIOCCA (GENOVA), P. ANGRISANI (SALERNO) 

Tab. I. Classificazione pit pattern sec. S. Kudo e correlazioni con i tipi istologici 

I risultati ottenuti con GenoMx i1000 sono stati comparati 

con la metodica standard manuale e valutati in termini di 

specifica localizzazione tissutale ed intensità di segnale. 

La colorazione immunoistochimica è risultata comparabile 

(ed il almeno il 5% migliore) rispetto a quella ottenuta con 

pretrattamento standard. 

In base a questa esperienza preliminare, si può pertanto affermare 

che il GenoMx i1000 incrementa positivamente la 

performance del Laboratorio perché semplifica e standardizza 

le fasi di preparazione del tessuto da analizzare e migliora 

la produttività. 

Lavoro parzialmente supportato da A. Menarini Diagnostics. 

Le lesioni elementari del colon alla 

cromoendoscopia e magnificazione, 

“pit pattern”: correlazioni istopatologiche 

e molecolari 

L. Baron, M.A. Bianco1 , M. Postiglione, A. Cesarano, P. 

Beltotti, F. Quarto 

S.O.C. di Anatomia ed Istologia Patologica e Citopatologia 

P.O. “S. Leonardo” ASL-NA5, Castellammare di Stabbia, 

Napoli; 1 S.O.C. di Gastroenterologia e Endoscopia Digestiva 

P.O. “Maresca” ASL-NA5 Torre del Greco, Napoli 

Introduzione. L’identificazione di due possibili meccanismi 

patogenetici del carcinoma colo-rettale, legati ad indipendenti 

pattern morfologici e genetici (“mutatore” e “soppressore”), 

ha suggerito la necessità di rivedere i classici modelli 

di progressione ed i relativi pathway molecolari. 

Una spinta importante è venuta dall’identificazione di due 

modelli di crescita e di maturazione dell’epitelio criptico, differentemente 

legati alle vie di cancerogenesi. Il modello 

“top-down”, legato al fenotipo “mutatore” ed il modello 

“bottom-up”, legato al fenotipo “soppressore”. Un ruolo importante 

può avere l’identificazione precoce di tali fenotipi 

grazie all’utilizzo di metodiche endoscopiche quali la “cro- 

Classificazione Istologia Iperplasia Iperplasia Adenomi Adenomi con 

pit pattern non iperplasica/ con displasia senza con 

non adenomatosa displasia displasia 

BG AG BG AG 

I 48 0 0 0 0 0 0 

II 0 34 0 0 0 0 0 

III 0 0 5 0 15 6 2 

IV 0 0 0 1 2 1 1 

V 0 0 0 2 0 0 1

180 

moendoscopia e la magnificazione” (CM) che, con l’utilizzo 

dell’ingrandimento e di una colorazione vitale della mucosa, 

possono consentire l’identificazione di lesioni precoci, quali 

le “cripte aberranti” (ACF). Sono stati identificati 5 modelli 

endoscopici “pit pattern” (PP), abbinati ad aspetti istologici 

caratteristici, che comprendono il normale, il serrato, l’adenoma 

e il carcinoma. 

Metodi. Su 120 pazienti esaminati in CM con pit pattern 

classificati sec. Kudo, si è valutata la corrispondenza al tipo 

istologico, il pattern di crescita con Ki67, il comportamento 

di hMLH1 e hMSH2 con metodiche immunoistochimiche. 

Risultati. Il 40% ha presentato un’istologia “non iperplastica/non 

adenomatosa” con PP tipo I. Il fenotipo iperplastico 

(35%) è associato prevalentemente a PP II (85%) ed ai tipi III, 

IV e V in presenza di displasia: fenotipo “serrato” (III: 12%; 

IV: 1%; V: 2%). Il fenotipo adenomatoso (25%) è associato ai 

P.P. III (80%), IV (16%), V (4%) proporzionalmente al grado 

di displasia. La distribuzione del Ki67 è basale e/o estesa nella 

cripta “iperplastica”, mentre è invertita nella cripta “adenomatosa”, 

sempre con incremento quantitativo. L’espressione 

di hMLH1 è ridotta nell’8% delle sole lesioni serrate (sempre 

multiple); mentre l’hMSH2 è sempre espresso. 

Conclusioni. L’identificazione endoscopica precoce di lesioni 

potenzialmente evolutive, necessita di un ulteriore supporto 

diagnostico, immunoistochimico e molecolare, per il riconoscimento 

ed il monitoraggio di lesioni associate o meno 

ad istologia significativa (vedi Tab. I). 

Valutazione comparativa tra la citologia su 

brushing e l’esame istologico nella diagnosi 

di infezione gastrica da Helicobacter Pylori 

in corso di dispepsia non ulcerosa 

F. Tallarigo, F. Vinciguerra, R. Patarino1 , S. Mirone, C. 

Frandina2 , E. Ciliberto2 , P. Cotronei1 , M.G. Scalia 

Servizio di Anatomia patologica, 1 Divisione di Geriatria, 2 

Servizio di Endoscopia digestiva, Ospedale “San Giovanni 

di Dio” Crotone 

Introduzione. Helicobacter Pylori (HP) è un microrganismo 

che si associa a gastrite cronica e ulcera peptica. Esso ha rapporti 

ben definiti con la mucosa gastrica localizzandosi 

prevalentemente sulla superficie delle cellule epiteliali gastriche 

e negli spazi intercellulari. Numerose sono le tecniche 

di cui si dispone per la sua identificazione, tutte estremamente 

differenti per sensibilità e specificità, sia esse invasive 

e non. Scopo di questo lavoro è stato quello di mettere a confronto 

due metodiche, quella istologica e quella citologica su 

brushing. 

Materiali e metodi. Sono stati arruolati, 140 pazienti (pz.) 

(93 maschi e 47 femmine) di età compresa tra 24 e 86 anni 

(media 53,76), affetti da dispepsia non ulcerosa (nud) con associata 

gastrite cronica. Durante l’esame endoscopico tutti i 

pz. sono stati sottoposti a prelievo di mucosa gastrica con 

biopsie a livello dell’antro e del corpo-fondo. Parallelamente 

veniva eseguito ampio spazzolato della mucosa antrale, che 

veniva strisciato su vetrino e immediatamente fissato in 

soluzione di metanolo al 95%, dopodiché colorato in giemsa 

e letto al microscopio. Le biopsie venivano poste in provette 

contenente formalina tamponata al 10%, successivamente incluse 

in paraffina ed eseguito l’esame istologico. 

Risultati. Come si può osservare dalla Tabella I, c’è stata una 

significativa differenza tra le due metodiche, in quanto 75 

(53,5%) sono stati i casi in cui l’HP era presente sia all’esame 


istologico che al citologico, ventotto (20%) sono stati quelli 

in cui l’HP è risultato essere contemporaneamente negativo. 

I negativi all’esame istologico e positivi al brushing sono stati 

32 (23%), mentre i positivi all’esame istologico e negativi 

al brushing sono stati 5 (3,5%). 

Discussione. La coltura su biopsia rappresenta il gold standard 

per la ricerca dell’HP ma, sebbene molto specifica, rimane 

indaginosa, costosa, poco sensibile ed implica lunghi 

tempi di attesa per la risposta. Solo il test rapido all’ureasi, la 

touch cytology e la citologia su brushing, possono fornire 

risultati in tempi molto brevi. Tuttavia, a parte l’ultima, 

queste metodiche consentono un campionamento molto limitato 

di mucosa gastrica. Per quanto riguarda l’esame istologico 

e la citologia su brushing, dai dati presenti in letteratura, 

emerge una significativa discordanza, quando le due 

metodiche vengono impiegate per valutare l’eradicazione da 

HP. La stessa situazione compare quando si valuta la presenza 

di colonizzazione gastrica da HP nei pz. con nud e gastrite 

associata. Anche in questo caso emerge, come dai dati del 

nostro lavoro, una significativa discordanza imputabile, 

probabilmente, alla bassa densità batterica sulla mucosa gastrica 

di questi pz. questo è dovuto al fatto che la citologia su 

brushing consente il campionamento di un’area più ampia di 

superficie mucosa e di raccogliere lo strato di muco nel quale 

sono contenuti numerosi batteri. 

Conclusioni. Dai risultati di questo studio si evince che la 

citologia su brushing si è dimostrata metodica rapida, poco 

costosa e con risultati più affidabili rispetto all’istologia. 

Questo non giustifica certo che si possa fare a meno della 

biopsia, in quanto questa consente, oltre alla ricerca dell’HP, 

la valutazione dell’eventuale danno alla mucosa. Pertanto la 

citologia su brushing potrebbe essere considerata come la 

metodica fondamentale, almeno nella valutazione dell’eradicazione 

dell’HP subito dopo terapia e nella diagnosi di colonizzazione 

gastrica di HP nei pz. con nud e gastrite associata. 

Infatti in queste condizioni la densità batterica sulla mucosa 

sembra relativamente bassa e l’esame istologico non si 

mostra adeguato a escludere la presenza dell’HP. 

Tab. I. 

N. Casi N. Casi N. Casi N. Casi N. Casi 

Complessivi Cito + Cito - Cito + Cito - 

Isto + Isto - Isto - Isto + 

140 75 28 32 5 

Carcinoma endocrino ben differenziato 

dello stomaco, adenocarcinoma colico 

e gist multipli gastrici in paziente 

con neurofibromatosi tipo 1 

L. Ventura, F. Calista1 , M. Sarra, V. Ceppa2 U.O. di Anatomia Patologica e di 1 Oncologia Medica, Azienda 

USL L’Aquila, 2 Novartis Farma 

Introduzione. La neurofibromatosi tipo 1 (malattia di von 

Recklinghausen) può associarsi ad una varietà di neoplasie 

epiteliali o stromali del tratto gastrointestinale 1 . Il caso in 

esame riguarda un uomo di 71 anni con neurofibromatosi,


operato per carcinoma endocrino gastrico, con riscontro di 

adenocarcinoma colico e GIST multipli sottosierosi dello 

stomaco. 

Caso clinico. Il paziente, sottoposto a gastroscopia per epigastralgia, 

presentava neoformazione ulcerata antro-pilorica 

diagnosticata come adenocarcinoma poco differenziato all’esame 

istologico delle biopsie. Contestualmente alla gastrectomia 

totale veniva effettuata emicolectomia destra in seguito 

al riscontro di neoformazione vegetante del colon ascendente. 

L’esame macroscopico evidenziava neoplasia ulcerata gastrica 

del diametro di 8 cm, noduli sottosierosi multipli gastrici 

del diametro compreso tra 0,2 e 0,4 cm e neoformazione vegetante 

di 6,5 cm situata 3 cm a valle della valvola ileociecale. 

Erano inoltre presenti polipo sessile di 1,5 cm posto 2 cm a 

valle della neoplasia vegetante e diverticoli multipli colici. 

L’esame istologico consentiva di diagnosticare: carcinoma 

endocrino gastrico ben differenziato infiltrante il colon 

trasverso, con metastasi a 5/16 linfonodi (AE1AE3 +, cromogranina 

A +, sinaptofisina +, proteina S-100 -, Ki-67 + nel 

40%); GIST multipli sottosierosi gastrici a cellule fusate, 

senza mitosi (vimentina +, CD34 +, CD117 +, actina muscolo 

liscio -, proteina S100 -); adenocarcinoma G2 colico con 

metastasi a 3/7 linfonodi; adenoma tubulovilloso colico. 

Il paziente è deceduto un mese dopo l’intervento con quadro 

clinico di pancitopenia e metastasi polmonari bilaterali. Non 

è stato richiesto esame autoptico. 

Conclusioni. La neurofibromatosi tipo 1 è una malattia autosomica 

dominante a penetranza variabile, caratterizzata da 

tipiche lesioni cutanee, con un’incidenza di circa 1/3.000 2 . 

La malattia è causata da alterazioni del gene NF-1, localizzato 

nel cromosoma 17, che gioca un ruolo importante nel controllo 

della proliferazione cellulare di numerosi tessuti 1 . Nel 

25% dei casi la neurofibromatosi tipo 1 può associarsi ad una 

varietà di neoplasie gastrointestinali 2 , comprendenti tumori 

mesenchimali, endocrini o altre neoplasie maligne 1 . La presenza 

di neoplasie sincrone a differente potenziale evolutivo 

è responsabile dei seri problemi diagnostico-terapeutici nella 

gestione di questi pazienti 1 . 

Bibliografia 

1 Behranwala KA, et al. World J Surg Oncol 2004;2:1-4. 

2 Usui M, et al. J Gastroenterol 2002;37:947-53. 

Adenocarcinoma scarsamente differenziato 

del pancreas, con aspetti solido-midollari. 

Studio morfologico ed immunoistochimico 

di un caso 

L. Albarello, G. Arrigoni, C. Doglioni 

Anatomia Patologica, Istituto Scientifico “San Raffaele”, 

Milano 

Introduzione. Recenti studi identificano il carcinoma midollare 

del pancreas come una nuova e rara variante dell’adenocarcinoma 

duttale, con morfologia sovrapponibile a quella 

del carcinoma midollare del grosso intestino. I casi descritti 

in letteratura presentano morfologia scarsamente differenziata 

con pattern di tipo sinciziale, margini espansivi, necrosi, 

immunofenotipo hMLH1-, hMSH2+, SYN-, CROM- e presentano 

elevata instabilità dei microsatelliti (MSI-H). 

Caso clinico. Maschio, 71 anni, dolore e massa in epigastrio. 

TC e US preoperatorie documentavano lesione espansiva di 

cm 13 della testa pancreatica, senza secondarismi. Familiar- 

ità neoplastica negativa. Exitus 2 mesi dopo l’intervento, per 

metastasi epatiche. Duodenocefalopancreasectomia con neoplasia 

della testa, di cm 10, biancastra, a margini regolari, 

mammellonati, infiltrante pancreas e duodeno con metastasi 

linfonodali (pT3, pN1). Microscopicamente, la componente 

midollare è costituita da cellule organizzate in cordoni o 

lamine solide, con confini cellulari poco netti, citoplasma abbondante 

ed eosinofilo, nuclei grandi e vescicolosi, nucleoli 

prominenti, crescita espansiva ed estesa necrosi; si osservano 

cordoni microghiandolari con piccoli lumi centrali contenenti 

materiale amorfo eosinofilo e focale produzione di muco; è 

costante un marcato infiltrato di linfociti intraepiteliali (IEL). 

Immunofenotipo: hMLH1-, hMSH2+, CK20+ (focale), 

SYN-, CROM-, CK7-. 

Conclusioni. Si possono trarre le seguenti considerazioni 

anatomo-cliniche: 

– Il caso presenta inusuali aspetti “misti” di tipo midollare e 

microghiandolare con infiltrato IEL, peculiare dei carcinomi 

midollari colici sporadici con MSI-H. 

– L’immunofenotipo è hMLH1-, hMSH2+, che i dati di letteratura 

associano a fenotipo MSI-H; la neoplasia esprime 

marcatori a differenziazione intestinale (CK20+) e non 

pancreato-biliare (CK7-). 

– Mentre l’istotipo midollare colico correla con prognosi favorevole, 

l’esigua letteratura sui carcinomi pancreatici con 

aspetti midollari ed il caso presente, operato in stadio avanzato, 

non consentono di evidenziare un simile comportamento 

biologico. 

Bibliografia 

Goggins M, et al. Am J Pathol 1998;152:1501-7. 

Wilentz RE, et al. Am J Pathol 2000;156:1641-51. 

181 

Incremento della proliferazione 

e dell’apoptosi nelle cellule epiteliali di colon 

di pazienti affetti da colite ulcerativa cronica 

in follow-up clinico/patologico 

nella progressione di malattia 

F.P. D’Armiento, A.M. Anniciello, C. Mignogna, A. Iacono, 

M. D’Armiento 

Dipartimento di Scienze Biomorfologiche Funzionali, sez. 

Anatomia Patologica e Citopatologia, Università “Federico 

II” di Napoli 

Introduzione. La variabilità clinico/patologica di presentazione 

della colite ulcerativa cronica (CUC) ha posto problemi 

diagnostici in relazione alla prognosi. Il nostro studio 

ipotizza un ruolo dell’apoptosi e di fattori di regolazione della 

proliferazione cellulare quali elementi essenziali del mantenimento 

di un normale equilibrio omeostatico cellulare. 

Nella CUC non solo in rapporto alle sue complicanze (displasia/cancro-megacolon) 

ma anche all’andamento di malattia 

(colon sinistro vs. pancolite). 

Metodi. Lo studio è stato effettuato su 40 pazienti (M = 25; 

F = 15 con età media all’esordio di malattia M = 43; F = 38) 

con biopsia all’esordio e con controlli successivi (intervallo 

mediano di 8 anni: r = 4-6 anni); nessuno dei casi studiati è 

complicato con displasia o megacolon. Su tutte le biopsie è 

stato effettuato studio immunoistochimico di Ki67 e P53 (anticorpi 

DAKO) e studio istochimico dell’apoptosi mediante 

TUNEL (apopTag Plus Kit Chemicon International USA). La 

conta di positività cellulare per Ki67 e P53 (n%) ha considerato 

2 aree della ghiandola 1 : basale e superficiale e in soli

182 

tre casi abbiamo osservato positività superficiale. Analoga 

conta è stata effettuata per l’apoptosi (n%) dove si assiste ad 

una positività superficiale della ghiandola rispetto alla profonda 

2 . I dati ottenuti sono stati correlati tra loro e alle diverse 

condizioni cliniche con analisi statistica secondo test di 

Mann-Whitney U-test. 

Risultati. I valori mediani di Ki67, P53 e TUNEL sono significativamente 

diversi se valutati all’esordio di malattia 

rispetto alla fine del follow-up. Sussiste infatti un incremento 

dei 3 marcatori adottati (Ki67 9 vs. 14 p = 0,031; P53 10 

vs. 16 p = 0,046; apoptosi 12 vs. 24 p = 0,015). Il confronto 

multivariato non ha mostrato significatività in rapporto ad età 

di esordio della malattia e al sesso. L’aumentano dei marcatori 

nel tempo in maniera proporzionale si associa a malattia 

stazionaria confinata al retto o come colite sinistra; un decremento 

o stazionarietà di Ki 67 con incremento di indice 

apoptotico e P53 si associa ad una estensione della malattia 

(colite sinistra vs. pancolite p = 0,048) e tale significatività è 

maggiore se l’individuo ha un’età inferiore ai 40 anni. 

Conclusioni. I risultati confortano l’ipotesi prospettata che 

un equilibrio omeostatico cellulare non più regolato da fattori 

della regolazione della proliferazione e dell’apoptosi sono 

condizionanti sull’andamento clinico della malattia come 

l’estensione e l’intensità dei sintomi prima delle sue complicanze. 

Bibliografia 

1 Skinozaki M, et al. Proliferative activity is associated with displasia 

in ulcerative colitis. Dis Colon Rectum 2000;10. 

2 Chigara H, et al. Apoptosis in ulcerative colitis and surgery. J Gastroenterol 

Hepatol 2002;17:758-64. 

Immunohistochemical expression 

of metallothionein in primary hepatocellular 

carcinoma and liver metastases 

D. Villari, G. Giuffrè, A. Simone, G. Tuccari 

Department of Human Pathology, University of Messina 

Metallothionein (MT) is a low molecular weight protein (6-7 

kD) with strong affinity for heavy metal ions, which has been 

involved in various processes such as storage of essential 

metals, binding of large amounts of potentially toxic metal 

ions, scavenging of free radicals. In human neoplastic pathology, 

the presence of MT has been immunocytochemically 

demonstrated in both the nucleus and the cytoplasm of cells 

in many carcinomas of different organs, although a definite 

clinicopathological significance of MT has not yet been assessed 

in tumours, in reference to histological stage and 

grade, patient survival and local recurrence. 

In the present study, we have investigated the expression of 

MT in 34 histological specimens of primary human hepatocellular 

carcinoma and liver metastases, taken from files of 

our Department; in addition 5 samples of gallbladder and 1 

hepatic angiomyolipoma have been also analysed. The immunoreaction 

was performed by a monoclonal mouse anti- 

MT reactive against a single and highly conserved epitope 

shared by the I and II isoforms (MT-E9, Dako, w.d. 1:100) 

applied overnight at 4 °C. To test the specificity of MT staining, 

negative and positive control procedures were carried 

out. Immunostained sections were estimated by light microscopy 

using a x20 and x40 objective lenses and x10 eyepiece 

and the relative assessment was performed on a consensus 

basis using a double-headed microscope. The percent- 

age of stained cells was graded for semiquantitative purposes 

as follows: 0 (no staining); 1 (> 0 to 5%); 2 (> 5 to 25%); 

3 (> 25 to 50%); 4 (> 50%). The possible correlations between 

immunohistochemical data and morphological characteristics 

of tumours were investigated using non-parametric 

methods. 

MT immunoexpression was found in 15/34 cases (44.1%), 11 

hepatocellular carcinomas and 4 metastases, with a staining 

score ranging from 1 to 3; none exhibited a MT score graded 

as 4. The intensity of MT staining was variable; it was mainly 

localized in the cytoplasm, although a combined nuclear/cytoplasmic 

reactive pattern was sometimes seen in 

neoplastic elements, especially in differentiated areas. Frequently 

immunoreactive neoplastic cells were found in direct 

contact with negative ones, mainly in metastatic samples in 

which the immunostaining was sporadic and less intense. 

Gallbladder samples and angiomyolipoma were always unstained, 

while peri-neoplastic liver tissue was strongly reactive. 

No correlations between MT expression and age, sex, 

tumour size and clinical stage were appreciable. 

AgNOR analysis of gastric carcinoids 


G. Giuffrè, F. Mormandi 1 , V. Barresi, C. Bordi 1 , G. Tuccari 

Department of Human Pathology, University of Messina, 1 

Department of Pathology and Laboratory Medicine, Section 

of Anatomic Pathology, University of Parma 

The AgNOR analysis allows to visualize at the light microscopic 

level a set of argyrophilic non-histone proteins (AgN- 

OR proteins) localized in the nucleolar organizer regions 

which are associated with ribosomal genes. The quantity of 

these argyrophilic proteins may be determined by video image 

analysis and it has been demonstrated to be strictly related 

to the rapidity of cell proliferation; however, the prognostic 

value of the quantity of AgNOR proteins as an independent 

variable in various kinds of tumours is well known. 

We report herein the personal experience concerning the applications 

of standardized AgNOR analysis in 24 human gastric 

carcinoids (13 type I, 1 type II, 10 type III), 8 of which 

exhibited a tumour size > 1 cm; the main clinico-pathological 

data of studied cases were also available. 4 µm thick sections 

were submitted to the AgNOR technique according to 

guidelines of the Committee on AgNOR Quantification. By 

an image analysis system, the mean area (µm 2 ) of AgNORs 

per cell (NORA) was evaluated on neoplastic cells at one focal 

plane with a x40 objective lens in at least 100 nuclei per 

specimens; a specific software was utilized to determine 

mean NORA values per cell and per case, respectively. 

By AgNOR method, all neoplastic specimens showed an adequate 

silver-staining intensity, homogeneously present 

throughout the whole section, which allowed us to correctly 

perform the evaluation. Mature lymphocytes, whenever present, 

exhibited a single round-shaped, centrally localized 

AgNOR. The mean NORA value of all cases was 1.279 µm 2 ; 

SD ± 0.404); moreover, significantly higher mean NORA 

values were encountered in the group of patients with higher 

tumour size (> 1 cm). Therefore, since histologic criteria 

failed to precisely distinguish the likelihood of aggressive or 

metastatic potential in gastric carcinoids, we retain the AgN- 

OR analysis may have a good rank order of prognostic influence 

in the identification of tumours with uncertain biological 

behaviour.


Combined small cell carcinoma 

of the stomach. A case report 




Introduction. The combined neuroendocrine small cell carcinoma 

“Combined SCC” is a rare malignant tumor characterized 

by two different neoplastic components, a undifferentiated 

neuroendocrine one (> 30%), and an adenocarcinomatous 

one, they are deeply mixed, with appearance of transition 

between two histotypes, also in the lymph nodal metastasis. 

Such aspects do not appear in collision tumors, where 

two different neoplastic populations are only contiguous. The 

“Combined SCC” is a very malignant neoplasm, with severe 

prognosis, response to chemotherapy. It has rarely been noticed 

cases in the stomach (about 30 cases related in literature). 

More often it arises in about 69 years old males; frequently 

it is localized in pyloric antrum and corpus ventriculi. 

We report a case of “Combined SCC” of stomach, which 

showed mixed appearance of mucinous adenocarcinoma. 

Materials and methods. For about 6 months a 84 years old 

patient, suffering from hypertension, macrocytic anaemia, 

has noticed epigastralgia and emesis, with a contemporaneous, 

considerable thinning. EGDS revealed a voluminous 

vegetating mass, with diameter of 6 cm, in gastric antrum. 

Thoracic Rx appeared negative, whereas abdomen TAC, with 

and without MDC, showed probably metastatic multiple 

roundhish areas in VI and VIII hepatic segments. The patient 

has been subjected to gastroduodenal resection; after histological 

diagnosis she was introduced to chemotherapy. The 

gastroduodenal resected was formalin at 4% fixed and paraplast 

plus included. Sections of 3 µm thickness have been 

prepared, stained with HE, Alcian-PAS, Grimelius, Masson- 

Fontana. Other sections of the same thickness have been set 

on slides for immunohistochemical stains. The used Antibodies 

have been CK AE1/AE3, EMA, Chromogranin A, Synaptophysin, 

NSE, CD57, CEA, B72.3. 

Results. Macroscopically the gastroduodenal resected was 

characterized by a vegetating, ulcerated neoformation, with 

diameter of 6 cm, in antral seat; which revealed fully infiltrating 

gastric parietis as far as peritoneal serosa. Histologically 

two deeply mixed neoplastic components have been 

showed; the bigger share (about 70%) was constituted by 

SCC, the remaining one by mucinous adenocarcinoma. The 

adenocarcinomatous component was constituted by cystic 

enlarged glands, filled with mucus, partly flowed into the interstitium, 

covered by an mucosecreting columnar epithelium, 

which appeared negative for Grimelius stain, and also 

for other neuroendocrine tested markers; while it was positive 

for CEA and B72.3 stains. Here and there, along the coat 

epithelium, argentophil, not argentaffin, positive for neuroendocrine 

markers, negative for CEA and B72.3 cells were 

been inserted. The SCC component showed a population of 

small, lymphocytoid elements, with poor cytoplasm, hyperchromatic 

nuclei, without nucleoli, argentophil, not argentaffin. 

They were arranged in solid fields, nests and cords with 

mucosecreting glandular structures and large necrotic areas. 

They were positive for neuroendocrine markers and CK 

AE1/AE3, negative for CEA and B72.3. Metastasis have 

been noticed in 5/11 perivisceral lymph nodes isolated, with 

both histotypes in the same lymph node. The remaining gastric 

tunica mucosa showed chronic atrophic gastritis, with 

183 

diffuse intestinal metaplasia and hyperplasia of argentophil 

endocrine cells. 

Conclusions. The hystogenesis of such tumors is dubious. In 

our case the histological aspects support the theory of a only 

cellular precursor, common to neuroendocrine and adenocarcinomatous 

share; it agrees with the recovery of p53 punctiform 

mutation, recently described, in both histotypes of 

“Combined SCC”. 

Lo spettro clinicopatologico 

della parapsoriasi a chiazze/micosi 

fungoide iniziale 

G. Ferrara, G. Argenziano1 , P. Goglia, A. Di Blasi 

UOC Anatomia Patologica, A.O. “Gaetano Rummo”, Benevento; 

1 Clinica Dermatologica Seconda Università di Napoli 

Introduzione. La parapsoriasi a (grandi) chiazze/micosi fungoide 

iniziale (PC-MFI) costituisce una entità clinicopatologica 

che tradizionalmente pone grandi difficoltà terminologiche, 

concettuali e pratiche 1 . Un diagnosi basata sulla sola 

istologia può risultare virtualmente impossibile; il contributo 

dell’immunoistochimica è in genere marginale. 

Metodi. Sono stati studiati 24 casi, selezionati in base a criteri 

clinici (lesioni eritematodesquamanti fisse da almeno 3 

mesi, evolutive, relativamente simmetriche, relativamente reversibili 

con steroidi). Ciascun caso è stato studiato mediante 

documentazione clinica, istologia convenzionale, immunoistochimica 

(anticorpi anti CD3, CD4, CD5, CD7 e CD8) e biologia 

molecolare (riarrangiamento del TCR-gamma mediante 

PCR-heteroduplex 2 ). 

Risultati. Sono state osservate diverse manifestazioni 

cliniche atipiche di PC/MFI (intertriginosa, a chiazze infiltrative 

d’emblée, simil-eczema xerotico, simil-acanthosis nigricans). 

Le modificazioni istologiche più frequenti sono 

state riscontrate a livello del derma superficiale (fibrosi ed 

infiltrazione linfocitaria lichenoide o “patchy”); in almeno 14 

casi sono state osservate modificazioni più o meno sfumate a 

tipo ”dermatite dell’interfaccia” (vacuolizzazione dei cheratinociti 

basali). L’epidermotropismo è stato osservato incostantemente 

e per lo più in forma modesta e focale. L’immunofenotipo 

dell’infiltrato è risultato CD3+ CD4+ CD5+ 

CD8-, con la eccezione di tre casi a fenotipo CD4- CD8+; solo 

in due casi è stata osservata delezione di CD7. Tredici casi 

hanno evidenziato riarrangiamento clonale del TCR-gamma. 

Conclusioni. La PC/MFI è contraddistinta da un grande 

polimorfismo di manifestazioni clinicopatologiche. Non esiste 

un golden standard diagnostico, ma piuttosto una costellazione 

di caratteristiche cliniche, istologiche, immunofenotipiche 

e biomolecolari che possono orientare la diagnosi. 

Occorre sottolineare come modificazioni istologiche 

compatibili con PC/MFI si osservino più spesso nel derma 

superficiale che non nell’epidermide. 

Bibliografia 

1 Willemze R, et al. EORTC classification of primary cutaneous 

lymphomas: a proposal from the Cutaneous Lymphoma Study Group 

of the European Organization for Research and Treatment of Cancer. 

Blood 1997;90:554-71. 

2 Kohler S, et al. PCR-hereroduplex analysis of T-cell receptor gamma 

gene rearrangement in paraffin-embedded skin biopsies. Am J Dermatopathol 

2000;22:321-7.

184 

Neoplasie melanocitiche con regressione: 

studio clinicopatologico di 158 casi 

G. Ferrara, G. Argenziano1 , A. Dalena, A. Di Blasi 

UOC Anatomia Patologica, A.O. “Gaetano Rummo”, Benevento; 

1 Clinica Dermatologica Seconda Università di Napoli 

Introduzione. Per regressione si intende la parziale o totale 

scomparsa di una neoplasia in assenza di adeguata terapia. 

Il nevo-alone e il melanoma sono gli esempi stereotipici di 

lesioni melanocitiche con regressione. Tuttavia, l’introduzione 

della dermoscopia nella pratica clinica ha evidenziato 

come la regressione – in forma di strutture biancastre e/o 

bluastre (BWS) – sia osservabile anche nel nevo comune non 

alonato. È stato osservato come neoplasie melanocitiche con 

regressione possano dar luogo a disaccordo diagnostico tra 

istopatologi 1 . 

Metodi. Sono state studiate 158 neoplasie melanocitiche escisse 

esclusivamente a causa della evidenza dermoscopica di 

BWS in assenza di altri criteri dermoscopici melanomaspecifici. 

I preparati istologici sono stati esaminati indipendentemente 

da 4 istopatologi. Le immagini dermoscopiche 

sono state infine riesaminate alla luce dei dati istologici. 

Risultati. Le lesioni in studio sono state asportate da 145 

pazienti (75 maschi e 70 femmine) di età compresa tra 12 e 

84 anni (età media: 36 anni); la localizzazione di gran lunga 

più frequente è risultata il dorso (51,3%). Globalmente, 

135/158 lesioni sono state giudicate unanimemente benigne, 

mentre solo una è stata diagnosticata come melanoma da tutti 

gli osservatori. Le lesioni istologicamente dubbie erano 

contraddistinte alla demoscopia da regressione interessante 

più del 50% della superficie lesionale ovvero da regressione 

con commistione di aree biancastre con aree bluastre. 

Conclusioni. La regressione è un fenomeno relativamente 

comune nelle lesioni melanocitiche del dorso e probabilmente 

imputabile a fotoesposizione acuta intermittente. In 

assenza di altri criteri clinico-dermoscopici di melanoma, 

queste lesioni sono per lo più benigne. Tale evenienza deve 

essere tenuta in considerazione tanto dal Clinico quanto dal 

Patologo onde evitare una overdiagnosi di melanoma. È stato 

proposto il solo follow-up clinico-dermoscopico per neoplasie 

melanocitiche con regressione inferiore al 10% della 

superficie lesionale ovvero con regressione compresa tra il 10 

e il 50% ma senza commistione di aree biancastre con aree 

bluastre 2 . 

Bibliografia 

1 Ferrara G, et al. Dermoscopic and histopathologic diagnosis of equivocal 

melanocytic skin lesions. An interdisciplinary study on 107 cases. 

Cancer 2002;95:1094-100. 

2 Zalaudek I, et al. Clinically equivocal melanocytic skin lesions with 

features of regression: A dermoscopic-pathological study. Br J Dermatol 

2004;154:64-71. 


Ossifying juvenile xanthogranuloma 

M. De Vito, G. Coletti, A.R. Vitale, S. Di Rito, P. Leocata 

Dept. of Experimental Medicine University of L’Aquila 

Introduction. Ossifying Xanthogranuloma was first described 

by Salamanca et al. in 2003 1 on the trunk of a 41 year 

old woman. Xanthogranuloma is a benign histiocytic process 

of uncertain nature characterized by solitary or multiple redbrown 

papulo-nodes growing on the head and neck and upper 

parts of the trunk. We investigated the case of an ossifying 

juvenile xanthogranuloma arising on the left gluteus of a 

14 year old boy with the exceptional feature of exuberant 

bone formation. A 14 year old boy visited the department of 

surgery of S. Salvatore hospital, complaining of a nodule on 

his gluteus of 2-3 months duration. Clinical examination revealed 

an ulcerated, hard, brown, 0.5 cm nodule, with surface 

crust formation. Pruritus was present. The lesion was locally 

excised for histologic examination. 

Methods. The entire biopsy specimen measured 1 x 0.7 x 0.5 

cm; on gross examination the cut surface was greyish. The 

biopsy was routinely fixed, processed and stained with hematoxylin-eosin. 

Other sections were cut for immunohistochemical 

examination. 

Results. Microscopic examination revealed that the tumor 

was entirely confined within the dermis. It was characterized 

by a diffuse proliferation of eosinophilic mononucleated and 

multinucleated histiocytes (Touton like) admixed with rare 

foamy histiocytes and sparse inflammatory infiltrate. The 

epidermis overlying the lesion was ulcerated. The central part 

of the lesion showed bone formation, represented by mineralised 

osteoids with central lacunae housing osteocytes and 

surrounded by osteoblasts. The tumor cells were strongly 

positive for vimentin, CD68; CD34 and Actin were negative. 

The histologic diagnosis was Ossifying Juvenile Xanthogranuloma. 

Conclusions. Xanthogranuloma refers to a group of benign 

cutaneous or subcutaneous lesions that affect adolescents and 

adults. In about 15% of cases lesions are solitary tumors as in 

the present case. Previous works have described special clinical 

variants including pulmonary and visceral involvment. 

Cases with unusual histologic findings such as ulceration, absence 

of foamy and giant cells, increased mitotic activity 

have been described. The present case is the 2 nd one reporting 

bone formation within Xanthogranuloma and the 1 st affecting 

an adolescent. 

References 

1 Salamanca J, et al. Ossifying adult xanthogranuloma. Arch Pathol 

Lab Med 2003;127:409-10.

pag. 143-184 - Siapec

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