16) reazioni sierologiche

Un antigene è una molecola (proteica o polisaccaridica), o una sua parte, che
è in grado di stimolare una risposta specifica del sistema immunitario.
Affinché una molecola funga da antigene è necessario che raggiunga una
certa dimensione e complessità. Una macromolecola può anche possedere
diversi determinanti antigenici.
Un anticorpo è una proteina prodotta dai linfociti B in risposta
all’ingresso nell’organismo di un antigene.

REAZIONI SIEROLOGICHE
UNA REAZIONE SIEROLOGICA E’ UNA REAZIONE CHE CONSENTE
METTENDO A CONTATTO UN SIERO IMMUNE O PRESUNTO TALE CON UN
DETERMINATO Ag, DI APPREZZARE DIRETTAMENTE O INDIRETTAMENTE
L’AVVENUTA FORMAZIONE DI UN IMMUNOCOMPLESSO
LA FORMAZIONE DELL’IMMUNOCOMPLESSO, IN VITRO, SI ACCOMPAGNA
AD EPIFENOMENI DIRETTAMENTE APPREZZABILI AD OCCHIO NUDO O
PUO’ ESSERE INDIRETTAMENTE DIMOSTRATA CON VARI ARTIFICI.
LO STUDIO DELL’ IC PUO’ ESSERE UTILIZZATO IN PRATICA A SCOPO
DIAGNOSTICO MEDIANTE DIVERSE REAZIONI SIEROLOGICHE.
REAGENTI FONDAMENTALI: SIERO A CONTENUTO ANTICORPALE NOTO O
PRESUNTO TALE E L’ANTIGENE

REAZIONE Ag – Ab
• Forze elettrostatiche
• Forze di Van der Waals
• Ponti a idrogeno
• Legami idrofobici
Ag + Ab Complesso immune Epifenomeno o manifestazione
secondaria

LA RICERCA e L’UTILIZZO DEGLI ANTICORPI NELLA DIAGNOSI DA
INFEZIONE
LA COMPARSA DELLA RISPOSTA ANTICORPALE
Vantaggi
• E’ assolutamente specifica
Svantaggi
• E’ successiva alla stimolazione antigenica (non è utilizzabile
nella fase iniziale dell’infezione)
• Perdura anche quando il processo infettivo è concluso
• Determinazione del TITOLO ANTICORPALE e della classe di Ig
presenti: IgM= Infezione attiva

Caratteristiche
LE REAZIONI SIEROLOGICHE
• Basate sul riconoscimento specifico Antigene –Anticorpo
• Permettono di rilevare, direttamente o indirettamente, la
formazione di un Immunocomplesso
• Richiedono due reagenti: un siero a contenuto anticorpale noto
(o presunto) e l’antigene (ad es. proteine virali). In ogni caso
uno dei due deve essere noto
Applicazioni
• Disponendo di un antigene noto è possibile dimostrare in quel
siero la presenza di anticorpi specifici per quell’antigene
• Disponendo di un siero contenente un anticorpo noto è
possibile dimostrare in quel materiale la presenza di un
antigene riconosciuto dall’anticorpo

REAZIONI SIEROLOGICHE
• REAZIONE DI PRECIPITAZIONE
• REAZIONE DI AGGLUTINAZIONE
• REAZIONE DI FISSAZIONE DEL COMPLEMENTO
• REAZIONE DI NEUTRALIZZAZIONE
• REAZIONI IMMUNOENZIMATICHE
• IMMUNOBLOT
• IMMUNOFLUORESCENZA
• METODI RADIOIMMUNOLOGICI
• RADIOIMMUNOPRECIPITAZIONE
REAZIONI SIEROLOGICHE CHE
IMPIEGANO
Ab (o Ag) LEGATI AD UN TRACCIANTE

PRECIPITAZIONE
REAZIONE SIEROLOGICA IN CUI UN SIERO IMMUNE O PRESUNTO TALE VIENE
CIMENTATO CON UN ANTIGENE MACROMOLECOLARE SOLUBILE E NELLA
QUALE LA FORMAZIONE DELL’IMMUNOCOMPLESSO SI EVIDENZIA CON LA
FORMAZIONE DI UN PRECIPITATO INSOLUBILE VISIBILE

La reazione può essere visualizzata sia in mezzo
liquido che in mezzo solido
Metodo della precipitazione ad anello (RING TEST):
Immunodiffusione semplice: provetta
Immunodiffusione doppia: provetta
Immunodiffusione doppia bidimensionale:
deposizione di Ag e Ab in pozzetti separati in agar
(piastra petri o vetrino); comparsa di bande di
precipitazione nel tratto di agar compreso tra i due
pozzetti.

AGGLUTINAZIONE
Reazione sierologica in cui un siero immune o presunto tale viene cimentato con un Ag
corpuscolato e nella quale la formazione dell’immunocomplesso si manifesta con
l’agglutinazione dell’ antigene in ammassi voluminosi
Ag corpuscolato: Ag costituito da elementi cellulari (batteri, globuli rossi)
Fattori favorenti: elettroliti, agitazione, temperatura
Esempi: Reazione di Vidal (salmonellosi)
Reazione di Wright (brucellosi)
Reazione di Weil - Felix (rickettsiosi)
A questo scopo si mescolano, in una serie di provette, diluizioni scalari del siero in esame
con una quantità fissa della sospensione batterica e si indica come titolo agglutinante del
siero la più alta diluizione del siero alla quale si verifica ancora agglutinazione.
Si può eseguire:
su vetrino
in provetta

NEUTRALIZZAZIONE
REAZIONE SIEROLOGICA IN CUI UN SIERO IMMUNE O PRESUNTO TALE VIENE
CIMENTATO CON UN ANTIGENE DOTATO DI UNA ATTIVITA’ BIOLOGICA
SPECIFICA E NELLA QUALE LA FORMAZIONE DELL’IMMUNOCOMPLESSO E’
EVIDENZIATA DALLA PERDITA DELL’ATTIVITA’ BIOLOGICA DELL’ANTIGENE
Nelle reazioni di neutralizzazione la formazione dell’immunocomplesso si evidenzia
ricercando in appositi substrati la soppressione dell’attività biologica dell’Ag.

ANALISI SIEROLOGICHE e “Immunostaining”
Gli anticorpi vengono coniugati ad enzimi per substrati cromogeni o a marcatori fluorescenti
La presenza di un antigene virale viene evidenziata attraverso la comparsa di un prodotto colorato

TEST ELISA
Enzyme Linked Immunosorbent
Assay

IMMUNOBLOT (Western Blot)

IMMUNOFLUORESCENZA
DIRETTA E INDIRETTA

IMMUNOFLUORESCENZA
Borrelia spp

Giardia spp

Legionella pneumophila

contro EBV