good laboratory practice (glp) - università degli studi di catania

GOOD LABORATORY
PRACTICE (GLP)
BUONE PRATICHE di
LABORATORIO (BPL)

BUONA PRATICA DI LABORATORIO
• Le amministrazioni nazionali e l’industria
aspirano a garantire la qualità degli studi non
clinici sulla sicurezza di determinati prodotti in
riferimento alla salute umana e all’ambiente,
sui quali è basata la valutazione del rischio.
• Per evitare differenze nei programmi di
esecuzione degli studi, che potrebbero
ostacolare il commercio internazionale dei
prodotti chimici, gli stati dell’OCSE hanno
voluto armonizzare i metodi utilizzati per la
sperimentazione.

GLP / BPL
• La Buona Pratica di Laboratorio (B.P.L)
riguarda il processo organizzativo e le
condizioni in cui le ricerche di laboratorio
(studi) sono programmate, condotte,
controllate, registrate e comunicate, allo scopo
di ottenere dati sperimentali di elevata qualità.
• I principi di Buona Pratica di Laboratorio sono
stati adottati dall’OCSE (Organizzazione per la
Cooperazione e lo Sviluppo, OECD) per
promuovere la qualità e la validità dei dati
sperimentali utilizzati per determinare la
sicurezza di sostanze e prodotti chimici.

Perché è nata la GLP?
• La buona pratica di laboratorio è stata introdotta negli
Stati Uniti dalla US Food and Drug Administration
(FDA) nel 1976, al fine di assicurare un adeguato
controllo sulla qualità degli studi di laboratorio
comprovanti la non pericolosità dei prodotti (farmaci,
additivi alimentari ecc.) sottoposti a regime
autorizzativo.
• La regolamentazione per la GLP emanata dalla FDA è
stata utilizzata come base per lo sviluppo dei principi di
Buona Pratica di Laboratorio da parte dell’OCSE (GLP
OCSE, 1979-80, riveduto e aggiornato 1995-96). La
normativa in ambito comunitario e nazionale in materia
di Buona Pratica di Laboratorio fa riferimento alle
norme OCSE.

GLP
Tali norme hanno la finalità di
• Promuovere la generazione di dati
qualitativamente ineccepibili
• eliminare gli ostacoli di tipo nazionale e
garantire il libero scambio delle “merci” nei vari
paesi

La Storia (negli U.S.A.)
• Luglio 1975: Funzionari dell’ FDA rilevano
“irregolarità” nei laboratori della SEARLE
• Ottobre 1975: L’ FDA apre ufficialmente
un’inchiesta sui laboratori della SEARLE
• 1976-1978: Vengono ispezionati 78 altri laboratori
utilizzando come guida una prima bozza delle
G.L.P.
• Dicembre 1978: Vengono emanate le G.L.P. finali
• 20 Giugno 1979: Le G.L.P. entrano in vigore
• Le G.L.P. vengono emendate nel 1979, nel 1987 e
nel 1994

PRINCIPALI RILIEVI EMERSI NELLE INCHIESTE DELL’
FDA
• Numerosi errori di scrittura e trascrizione
• Uso di diversi test statistici, ma relazione solo di quelli più
favorevoli
• Errori nella immissione di dati al computer
• Dati originali delle necropsie non disponibili
• Personale dello studio non qualificato o opportunamente
addestrato
• Dati originali alterati per corrispondere alla relazione finale
• Animali trovati morti e putrefatti nelle gabbie
• Animali “semplicemente” scartati dopo essere stati trovati morti
• Animali dello studio (ratti/topi) scappati ed accoppiati con
roditori selvatici
• Procedure richieste dal protocollo non eseguite
• Animali in studio rimpiazzati senza documentazione della morte
• Dati perduti o prodotti ad arte

LE FRODI
• Alterazione dei Dati: generare dati
alterati o cambiare dati legittimati
• Omissione dei Dati: non riportare dati che
hanno un impatto sulla valutazione dello studio
• “Costruzione” dei Dati: generare risultati
senza aver eseguito lo studio

• La storia in Europa
• 1981: L’ OECD pubblica i “Principles of Good Laboratory
Practice” (emendati nel 1997)
• 1986: Convenzione del Consiglio d'Europa sulla protezione
degli animali vertebrati utilizzati ai fini sperimentali o altri
fini scientifici
• Direttive del Parlamento Europeo 88/320/CEE – 7 giugno
1988 e 90/18/CEE – 18 dicembre 1989: ispezione e
verifica delle BPL
• La Gazzetta della CE pubblica le direttive 1999/11 e
12/CEE: ispezione e verifica delle BPL
• Direttiva del Parlamento Europeo n. 10 – 11 febbraio
2004: applicazione dei principi di BPL; controllo della loro
applicazione per le prove sulle sostanze chimiche

• La storia in Italia
• 1986: Prima bozza delle G.L.P.
• D.L. 116 del 27/1/1992 : protezione degli animali utilizzati
a fini sperimentali
• Legge 12 ottobre 1993, n.413 (G.U. 16 Ottobre 1993,
n. 244)
(Norme su obiezione di coscienza)
• Circolare 22 aprile 1994, n. 8 e 14 maggio 2001 n. 6
(applicazione D.Lgs. 116/92) (G.U. 14 Luglio 1994, n.
163; 23 Giugno 2001, n. 144)
- Tabelle
- Spiegazione tabelle
- Procedura presentazione domanda
- Schema presentazione progetto

• D.M. 4 luglio 1997 e 4 agosto 1997. Procedure di
certificazione di conformità dei Centri di saggio; unità di
monitoraggio per la BPL
• D.M. 5 agosto 1999
Disposizioni relative all'ispezione e verifica della BPL
• D.M. 11 marzo 2004: Istituzione della Commissione
tecnico-scientifica di coordinamento
• D.L. 2 marzo 2007, n. 50: Attuazione delle direttive
2004/9/CE e 2004/10/CE, concernenti l'ispezione e la
verifica della BPL e il ravvicinamento delle disposizioni
legislative, regolamentari ed amministrative relative
all'applicazione dei principi di BPL e al controllo della loro
applicazione per le prove sulle sostanze chimiche

CAMPO DI APPLICAZIONE
• I principi di BPL devono essere applicati alle
sperimentazioni non cliniche destinate ad
appurare la sicurezza delle sostanze
contenute in prodotti farmaceutici,
antiparassitari, prodotti cosmetici, medicinali
ad uso veterinario, additivi alimentari, additivi
per mangimi e prodotti chimici industriali.

• La materia è di competenza del Ministero della
Salute, Dipartimento della Prevenzione e
Comunicazione - Direzione Generale della
Prevenzione Sanitaria
• Ufficio VI: Biotecnologie e prevenzione
secondaria; genetica; biotecnologie; buone
pratiche di laboratorio, screening preventivi.

• Definizioni (in accordo al D.L. n 50 – 2 marzo 2007)
• CENTRO DI SAGGIO:
• l’insieme di persone, locali e unità operative necessarie
per l’esecuzione di uno studio non clinico sulla sicurezza
umana e l’ambiente.
In caso di studi multicentro, ovvero eseguiti in più di un
sito di sperimentazione, si intende il luogo in cui opera il
direttore dello studio e tutti i singoli siti di sperimentazione
che possono essere considerati, individualmente o
cumulativamente, alla stregua di un centro di saggio.
• STUDIO NON CLINICO:
un esperimento o una serie di esperimenti, nei quali una
sostanza viene saggiata in laboratorio o nell'ambiente per
ottenere dati sulle sue proprietà e/o la sua sicurezza, che
verranno presentati alle competenti autorità di vigilanza.

CENTRO di SAGGIO
• Il Ministero della Salute rilascia una certificazione di
conformità alla Buona Pratica di Laboratorio, ai
centri di saggio (laboratori, istituti di ricerca, centri
di sperimentazione ecc.) che effettuano studi non
clinici.
• La conformità dei centri di saggio ai principi di
B.P.L. è verificata mediante le ispezioni dei centri
medesimi
• Il Certificato ha validità per due anni e per il suo
rinnovo è indispensabile un’ispezione di verifica da
parte del Ministero.

Ispezioni da Enti Regolatori
Accanto a queste ispezioni programmate con cadenza biennale,
sono sempre possibili, da parte ministeriale, ispezioni non
pianificate dettate da particolari richieste (es. mirate ad uno
studio oggetto di pratica registrativa, anche in un Paese
estero) o esigenze (es. in seguito ad una richiesta da parte di
un centro di saggio di estensione dei test certificati).
Il Gruppo Ispettivo è costituito da funzionari del Ministero della
Salute (di norma almeno due) e dell’Istituto Superiore di
Sanità. Tali funzionari vengono scelti tra quelli presenti su
una “lista nazionale di ispettori esperti di BPL”.

Ispezioni da Enti Regolatori
Gli accordi bilaterali/internazionali stipulati dall’Italia
permettono che:
• Uno Stato estero “deleghi” al Ministero della Salute italiano la
conduzione di una ispezione per suo conto.
• un Centro di Saggio possa essere ispezionato anche da
funzionari di Enti Regolatori esteri. In tal caso il Centro di
Saggio dovrà tempestivamente comunicare l’imminente visita
al Ministero della Salute, che provvederà ad inviare dei suoi
rappresentanti che parteciperanno all’ispezione come
“osservatori”.

• Il centro di saggio deve essere adeguato, in termini di
dimensioni, struttura degli edifici e ubicazione, alle
caratteristiche dello studio e tale da ridurre al minimo le
possibili interferenze con la corretta esecuzione dello studio.
• La struttura del centro di saggio deve essere concepita in
modo tale da consentire un'adeguata separazione tra le
diverse attività ivi svolte, onde garantire la corretta
esecuzione di ciascuno studio.
• Il centro di saggio deve disporre di un numero sufficiente di
locali e aree tali da garantire l'isolamento dei sistemi di saggio
e dei singoli progetti che implicano la manipolazione di
sostanze od organismi di cui si conosce o sospetta un rischio
biologico.

Il centro di saggio deve essere dotato di locali o aree adeguati per
tutte le forniture e le attrezzature. I locali adibiti a magazzino
devono essere separati da quelli che ospitano i sistemi di saggio e
garantiti contro infestazioni, contaminazioni e deterioramento.
Per evitare contaminazioni o confusioni, i locali o le aree destinati
al ricevimento e alla conservazione delle sostanze in esame e di
riferimento devono essere separati da quelli in cui le sostanze in
esame vengono mescolate ai veicoli (agenti vettori).
I locali o le aree di conservazione delle sostanze in esame devono
essere separati da quelli che contengono i sistemi di saggio ed
essere adatti a preservarne identità, concentrazione, purezza e
stabilità e a garantire il corretto immagazzinamento delle sostanze
pericolose.

La manipolazione e lo smaltimento dei rifiuti devono essere
tali da non inficiare l'integrità degli studi e quindi prevedere
sistemi adeguati di raccolta, immagazzinamento e
smaltimento e procedure di decontaminazione e trasporto.
In particolare il Centro di Saggio deve disporre di
idonei locali per gli ARCHIVI e di adeguati
LABORATORI per:
Chimica Clinica
Necropsia
Istologia

• SISTEMA DI SAGGIO:
qualunque sistema biologico, chimico o fisico o
qualunque combinazione di tali sistemi utilizzati in uno
studio.
• SOSTANZA IN ESAME:
sostanza messa allo studio.
• SOSTANZA DI RIFERIMENTO (SOSTANZA DI
CONTROLLO) : sostanza utilizzata ai fini di confronto
con la sostanza in esame.
• REPERTO : qualunque materiale derivato da un sistema
di saggio a scopo di esame, analisi o conservazione.

• Sostanza Test e Sostanza Controllo
• Le materie prime devono essere caratterizzate (identità,
purezza, ecc.)
• Deve esserne determinata la stabilità (scadenza, data di
rianalisi)
• Devono essere debitamente etichettate (nome, numero di
lotto, scadenza, condizioni di conservazione)
• I contenitori per la conservazione devono essere assegnati
ad una particolare sostanza test per tutta la durata dello
studio
• Un campione di ogni lotto di sostanza dovrebbe essere
prelevato e custodito in archivio
• Deve essere tenuta appropriata documentazione della
ricezione, dell’utilizzo ed eliminazione delle sostanze
• Devono essere garantite le idonee condizioni di
conservazione delle sostanze

PROGRAMMA o PROTOCOLLO DI
STUDIO
• il documento nel quale vengono definiti gli
obiettivi e il disegno sperimentale per
l'esecuzione dello studio, incluse eventuali
modifiche.
Le BPL impongono di seguire scrupolosamente il
protocollo dello studio e la sua precisa
documentazione.

PROTOCOLLO SPERIMENTALE
Nel protocollo si devono indicare:
• Titolo dell’esperimento
• Criteri di scelta della specie animale, sesso,
numero, dieta, via di somministrazione, dosi ecc.
• Disegno sperimentale
• Frequenza e tipo dei controlli (peso corporeo,
esami clinici)
• Metodo statistico di valutazione dei dati
Ogni cambiamento nel protocollo sperimentale
dovrà essere annotato e giustificato

Nel PROTOCOLLO sono indicate:
• DATA DI INIZIO DELLO STUDIO: giorno in cui il direttore dello studio firma il programma di il
• DATA DI CONCLUSIONE DELLO STUDIO: studio.
• DATA DI INIZIO DELLA dello studio firma la relazione finale.
SPERIMENTAZIONE: il giorno di raccolta dei primi dati specifici di un determinato il giorno in cui il direttore
relativi allo studio. dati di raccolta di giorno l'ultimo
• DATA DI CONCLUSIONE DELLA SPERIMENTAZIONE: studio.

DATI GREZZI o ORIGINALI
Tutti i dati e i documenti originali del centro di saggio
o le relative copie conformi che siano il risultato di
osservazioni originali e di attività realizzate
nell'ambito di uno studio, ad esempio i pesi
corporei, il numero dei globuli rossi, la
sintomatologia clinica, ecc.
I dati grezzi possono anche comprendere fotografie,
microfilm, microschede, supporti a lettura ottica,
osservazioni dettate, dati rilevati da strumentazioni
automatizzate o qualunque altro mezzo di
immagazzinamento di dati riconosciuto come
sicuro per la conservazione di informazioni per il
periodo di tempo indicato.

Il DATO ORIGINALE va registrato……
» In maniera diretta
» Prontamente
» In maniera leggibile
» Usando inchiostro indelebile nero o blu
» Datato al momento della raccolta
» Firmato o siglato dalla persona che
raccoglie il dato

Che valore ha il DATO ORIGINALE ?
• Dovrebbe permettere ad una persona non coinvolta nello
studio (es. il QAU) di ricostruire uno studio in ogni sua
parte
• Dovrebbe permettere di conoscere chi ha condotto
un’operazione, quando e come l’ha eseguita
• Dovrebbe documentare le richieste del protocollo
• Deve supportare tutte le affermazioni che sono fatte nella
relazione finale

Direzione dei laboratori —
Management
• Il management ha il compito di garantire che
le strutture, le apparecchiature, il personale, i
materiali e i metodi usati rispondano a quanto
richiesto dalle norme in vigore. Nomina uno o
più responsabili per la conduzione degli studi
(Study Director) ed una unità per il controllo
di qualità (Quality Assurance Unit). Le due
funzioni devono essere indipendenti l'una
dall’altra.

Direttore dello studio –
study director (SD)
Prima dell’inizio di ogni prova la direzione
dei laboratori nomina il responsabile
dell’esecuzione dello studio,
dell’interpretazione, dell’analisi dei risultati
e della stesura del rapporto finale.
Importanti compiti dello Study Director
sono:

Direttore dello studio – study
director (SD)
> definire il protocollo di studio;
> assicurarsi che le direttive indicate nel
protocollo siano eseguite e che le eventuali
modifiche siano state autorizzate dalla
direzione dei laboratori e opportunamente
registrate unitamente alle motivazioni;
> garantire alla fine dello studio che il
protocollo, il rapporto finale, i dati grezzi
(raw data), i campioni biologici (specimen)
ed i contro-campioni della sostanza in
esame siano archiviati.

Unità di controllo di qualità
– Quality Assurance (QAU)
• Il QAU potrà essere composto da una o più
persone, includendo consulenti esterni.
• L’unità di controllo, che dovrà essere indipendente
dal personale impiegato nella direzione e nella
conduzione dello studio, controllerà ogni prova
per assicurare la direzione dei laboratori che la
struttura, le apparecchiature, il personale, i
metodi e i controlli siano in conformità con le BPL.
Fondamentalmente, oltre alla verifica del
protocollo, i compiti del QAU sono due:

Unità di controllo di
qualità – Quality
Assurance (QAU)
• durante l’esperimento accertare che le prove siano
aderenti al protocollo;
• alla fine dello studio verificare che la relazione
realizzata dallo SD rispetti il protocollo, le procedure
operative standard e i dati grezzi.
• Altra funzione del QAU è quella di redigere e
sottoscrivere una dichiarazione, da accludere al
rapporto finale, che riporti le date in cui sono state
effettuate le ispezioni, le fasi o i segmenti di studio
ispezionati, ed il nome di chi ha provveduto
all’ispezione.

PROCEDURE OPERATIVE STANDARD
(POS)
Le POS rappresentano l’ordinata raccolta scritta delle
procedure di esecuzione degli studi o di altre attività
generalmente non specificate in dettaglio nei programmi
di studio o nelle linee guida per i saggi.
I principali benefici che ne derivano sono:
1. Controllo della standardizzazione di una serie di variabili
sperimentali;
2. Addestramento diretto del personale incaricato di
redigere le POS (scrivere ciò che si fa conduce sempre ad
una migliore razionalizzazione delle proprie mansioni);
3. Addestramento indiretto del personale che deve applicare
le POS o di nuovo personale del laboratorio;
4. Memoria storica delle procedure.

PROCEDURE OPERATIVE STANDARD
Ogni centro di saggio deve disporre di POS
approvate dalla direzione del centro, atte a
garantire la qualità e l'integrità dei dati ivi
prodotti
Eventuali revisioni di tali POS devono essere
approvate dalla direzione

PERCHÈ ABBIAMO BISOGNO DELLE POS
• Perché sono richiesti dalle BPL
• Perché ci sia uniformità di comportamento da
parte di tutti gli operatori
• Per potere ricostruire le modalità di operazione al
tempo in cui lo studio è stato condotto
• Per consentire alla direzione del centro di saggio di
valutare la qualità ed integrità dei dati raccolti nel
corso dello studio

Relativamente al contenuto le POS
possono essere convenzionalmente
ripartite in 4 categorie riferite a:
• Sostanza test e di riferimento (analisi chimica,
nome, lotto, titolo, granulometria,
conservazione, impurezze, modalità galeniche
per la preparazione farmaceutica)
• Strumentazioni, materiali e reagentii (impiego,
manutenzione, pulitura, taratura ecc.)
• Registrazione dati, relazioni, immagazzinamento
e recupero
• Sistema saggio (animali)
• Procedure di assicurazione della qualità

Animal Care
Sono necessarie POS relative a:
4Quarantena
4Identificazione
4Separazione delle Specie
4Pulizia e Disinfezione
4Analisi di mangimi ed acqua
4Lettiere
4Controllo degli infestanti

http://www.ministerosalute.it/promozione
/bpl/bpl.jsp