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Atti delle Giornate di Coniglicoltura AsIC 2011 – 8-9 aprile 2011 – Forlì – Italia plesso maggiore d’istocompatibilità di classe ii (mhC ii) delle cellule presentanti l’antigene alla porzione variabile del recettore dei linfociti T. Questo processo causa una proliferazione policlonale ed aspecifica delle cellule T, con conseguente rilascio di interleuchine e l’instaurarsi di un processo infiammatorio a carico del tratto gastrointestinale, reso evidente dalle estese e gravi lesioni a carico dello stomaco e dell’intestino tenue (balaban et al., 2000; Wynn et al., 2006). scopo del presente lavoro è stato ricercare le enterotossine a, b, C, d in ceppi di staphylococcus aureus isolati nel coniglio. 162 mATERIALI E mETOdI novantotto ceppi di staphylococcus aureus isolati da mastite in conigli provenienti da dieci differenti allevamenti siti in Friuli Venezia Giulia sono stati sottoposti al protocollo di seguito descritto per la ricerca delle enterotossine stafilococciche a, b, C, d. i ceppi di staphylococcus aureus sono stati isolati a partire da agar sangue (as, fornito dal Centro servizi alla Produzione, CsP-iZsVe, istituto Zooprofilattico sperimentale delle Venezie) incubato in aerobiosi per 24-48 ore a 37 ± 2°C. i ceppi batterici con una morfologia riconducibile a staphylococcus spp. sono stati testati sul terreno mannitol salt agar (msa, Lab m Limited) e sottoposti al test della coagulasi, effettuato con plasma di coniglio. La crescita in msa e la reazione positiva alla coagulasi permetteva di identificare il ceppo come staphylococcus aureus. successivamente, i ceppi di staphylococcus aureus sono stati seminati in Tryptone soya broth (Tsb, CsP-iZsVe) ed incubati a 37°C ± 2°C per 18-24 ore. La brodocoltura è stata centrifugata a 900 g (sigma 3K10, 3000 rpm, Germany) a 4°C per 20 minuti. il surnatante ottenuto è stato sottoposto al test di agglutinazione passiva inversa utilizzando il kit Toxin detection (seT rPLa, oXoid) per la ricerca delle enterotossine stafilococciche a, b, C, d. i ceppi batterici sono stati testati in piastra microtitre utilizzando un test realizzato usando particelle di lattice sensibilizzate con antitossina, che sono in grado di agglutinare in presenza di tossine, fornendo risultati dopo 20-24 ore di incubazione a temperatura ambiente. RISULTATI E cONcLUSIONI Tutti i ceppi di staphylococcus aureus sottoposti ad indagine sono risultati non essere produttori di enterotossine di tipo a, b, C e d. La ricerca di ceppi enterotossigeni di staphylococcus aureus nelle fattrici con mastite costituisce un elemento importante per la possibilità dell’entrata nel ciclo produttivo di tossine potenzialmente agenti di tossinfezione alimentare. La carne di coniglio è infatti considerata fonte proteica di prima scelta in due categorie di età particolarmente a rischio, ossia la prima infanzia e i soggetti anziani. monitorare la presenza di ceppi di staphylococcus aureus enterotossigeni negli allevamenti equivale a ridurre la possibilità di una eventuale circolazione all’interno della catena alimentare dell’uomo.
Lavori scientifici - sessione Patologia il metodo sierologico adottato ha permesso di ottenere risultati in tempi rapidi ed in modo accurato, risultando un valido ausilio nella identificazione delle differenti enterotossine nei ceppi di staphylococcus aureus. bIbLIOgRAFIA balaban, n., rasooly, a., 2000. staphylococcal enterotoxins. int. J. microbiol. 61:1-10. bergdoll, m.s., 1967. The staphylococcal enterotoxins. in: r.i. mateles, G.n. Wogan (eds) biochemistry of some microbial toxins. miT Press, Cambridge, pp. 1-25. casman, e.P., bennett, r.W., dorsey, a.e., issa, J.a., 1967. identification of a fourth staphylococcal enterotoxin, enterotoxin d. J. bacteriol. 94:1875-1882. winn, W.Jr., allen, s., Janda, W., Koneman, e., Procop, G., schreckenberger, P., Woods, G., 2006. Koneman’s Color atlas and textbook of diagnostic microbiology. 6 th edition, Lippincott Williams & Wilkins baltimore, pp. 623-649. 163
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