XXII CNIE - Accademia nazionale italiana di Entomologia

Sessione VIII - Biotecnologie entomologiche
I TERATOCITI DI APHIDIUS ERVI SINTETIZZANO E RILASCIANO
UN’ENOLASI EXTRACELLULARE
P. Falabella 1 , M.L. De Stradis 1 , L. Riviello 1 , C. Stigliano 1 , P.Varricchio 2 , S.
Gigliotti 3 & F. Pennacchio 2
1
Dipartimento di Biologia, Difesa e Biotecnologie Agro-Forestali, Università della
Basilicata, Potenza
2
Dipartimento di Entomologia e Zoologia Agraria “F. Silvestri”, Università di Napoli
“Federico II”, Napoli
3
Istituto di Genetica e Biofisica, CNR, Napoli
I teratociti di Aphidius ervi Haliday (Hymenoptera, Braconidae) sintetizzano e
secernono diverse proteine nell’emocele dell’ospite, Acyrthosiphon pisum (Homoptera,
Aphididae), in particolare due proteine di peso molecolare pari a 15 kDa (p15) e 45 kDa
(p45). Una delle due proteine, p15, è risultata una “fatty acid binding protein” (Ae-
FABP) ed il gene che la codifica è stato isolato. Nel presente contributo, si riporta
l’isolamento e la caratterizzazione del gene che codifica la p45. Tale proteina è stata
ottenuta in vitro incubando i teratociti in terreno di coltura; le informazioni ottenute su
parte della sua sequenza aminoacidica sono state utilizzate per disegnare oligonucleotidi
degenerati, impiegati come inneschi in reazioni di RT-PCR su RNA totale estratto dai
teratociti. Il prodotto di amplificazione è stato utilizzato come sonda per analizzare una
genoteca di cDNA, preparata a partire da mRNA estratto dai teratociti. Questo approccio
ha condotto all’isolamento di un cDNA completo di 1599 nucleotidi, codificante una
putativa proteina di 434 aa, con una massa molecolare di circa 47 kDa, avente un’elevata
identità di sequenza con enolasi di diversi insetti. Questo gene risulta altamente trascritto
in ospiti parassitizzati, mentre è assente nei corrispondenti controlli (afidi sani), a partire
dal quarto giorno dopo la parassitizzazione. Livelli apprezzabili del trascritto del gene
p45 sono rilevabili, inoltre, negli adulti del parassitoide di entrambi i sessi. Il cDNA
completo p45 espresso in una linea di cellule di insetto ha evidenziato la presenza della
proteina ricombinante solo nel lisato cellulare, suggerendo, così, la presenza esclusiva
nei teratociti di un percorso secretivo particolare. La proteina ricombinante ottenuta in
batterio ha mostrato un’attività enolasica rilevante ed è stata utilizzata per la produzione
di un anticorpo policlonale.
Le enolasi extracellulari vengono riportate in letteratura come fattori di virulenza in
patogeni e parassiti di vertebrati, in quanto esse favoriscono l’adesione ai tessuti da
invadere o agiscono come fattori repressivi del sistema immunitario. Il loro possibile
ruolo nella regolazione dell’ospite da parte di A. ervi viene discusso alla luce di tali
informazioni.
Parole chiave: parassitoide, regolazione dell’ospite, membrane embrionali,
Hymenoptera, afidi.
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