XXII CNIE - Accademia nazionale italiana di Entomologia

Sessione VIII - Biotecnologie entomologiche
SELEZIONE DI SEQUENZE EST DIFFERENZIALMENTE ESPRESSE IN
OLIVO IN RISPOSTA ALL’ATTACCO DELLA MOSCA
P. Varricchio 1 , A. Imperato 1 , L. Baldoni 2 , R. Rao 1 & G. Corrado 1
1 Dipartimento di Scienze del Suolo della Pianta, dell’Ambiente e delle Produzioni
Animali , Facoltà di Scienze Biotecnologiche, Università degli Studi di Napoli “Federico
II”, Portici
2 Istituto di Genetica Vegetale, CNR, Perugia
La mosca Bactrocera oleae (Gm.) è uno dei principali stress biotici dell’olivo nei paesi
del bacino del Mediterraneo. I danni a carico dell’oliva sono dovuti, successivamente
alla puntura e all’ovideposizione dell’adulto, alla galleria larvale scavata nella polpa
della drupa [Iannotta et al., 2007]. La risposta delle varietà di olivo alla mosca, è
differente a seconda del livello di resistenza/tolleranza sviluppata, ma molto poco si
conosce sulle basi molecolari della risposta dell’olivo alla mosca.
L’obiettivo di questo lavoro è l’analisi di trascritti differenziali, mediante Suppression
Subtractive Hybridization (SSH), in risposta all’attacco della B. oleae. La libreria
sottrattiva di cDNA è stata costruita, usando come stampo per la driver RNA da drupe
sane della varietà Moraiolo (bassa sensibilità alla mosca) e per la tester RNA da drupe
con galleria larvale. Un inserto sequenziabile è stato presente in ca il 75% dei cloni
plasmidici della libreria sottratta. La dimensione media degli inserti è di ca 400 bp (min.
150 bp; max. 797 bp). La similarità locale è stata calcolata con gli algoritmi tblastx e
tblastn (NCBI). Abbiamo focalizzato la nostra attenzione sulle sequenze aventi un evalue
inferiore a 0.001 (66%). E’ stato possibile annotare funzionalmente il 20% delle
sequenze EST in base alla loro funzione biologica cellulare mediante il software
Blast2Go. Il 31% delle EST risulta coinvolto in processi fisiologici di base, mentre il
16% nella risposta a stress biotici. Sono stati selezionati alcuni trascritti più interessanti
in base alla loro putativa funzione di difesa (e.g cDNA della β-glucosidase, chitinase e
inibitori della tripsina e chimotripsina). Di queste EST è stato ottenuto l’intero trascritto
tramite tecnica RACE ed iniziata l’analisi di espressione tramite Real-Time PCR. Alcuni
dei geni selezionati come coinvolti nella difesa contro la mosca sono stati descritti essere
coinvolti nella risposta ad insetti anche di altre specie , quali orzo, tabacco , riso e d
Arabidopsis.
I dati, infine, suggeriscono che diverse classi biologiche di geni potrebbero essere
associate ai meccanismi di difesa della drupa, indicando che la risposta molecolare
dell’olivo sia in realtà molto complessa.
Parole chiave: Olea europea, Bactrocera oleae, resistenza ad insetti.
Bibliografia:
Iannotta et al. (2007). J Env Sc H 42, 789-793.
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