Brochure CYPMED - Arsia

Scelta del materiale
Le gemme apicali di rami laterali sono prelevate dalla parte inferiore della chioma di cloni resistenti al
cancro, che hanno di conseguenza un’età compresa tra 9 e 12 anni. Il materiale scelto deve essere comunque
in uno stadio fisiologico di piena crescita ed essere costituito da tessuti giovani (età inferiore ad un anno). Se
si tratta di un cipresso in situ, occorre cercare di ringiovanire i tessuti sia per innesto (annotare le percentuali
di attecchimento dell’innesto) che per talea radicata controllandone il tasso di rizogenesi spontanea (ovvero
quella ottenuta senza trattamenti auxinici). Da prove effettuate dall’INRA ad Antibes, sembra che i valori
elevati per questi due caratteri indichino una certa predisposizione del clone alla rizogenesi in vitro. Se si
tratta, invece, di un clone allevato in vaso, è opportuno potare drasticamente la pianta a partire dalla base in
modo da ottenere la formazione di vegetazione “primaria”, ossia rametti con foglie lanceolate ed appuntite
come le foglie primarie.
Messa in coltura del materiale
Gli espianti, dopo essere stati lavati in acqua per 60 minuti, vengono sterilizzati con un trattamento a base di
70% di etanolo per 2 minuti, risciacquati in acqua sterile e poi immersi in una soluzione di ipoclorito di sodio
all’1,5% per 20 minuti. Infine il materiale viene risciacquato 4 volte in acqua sterile deionizzata.
La messa in coltura dell’espianto avviene su un mezzo minerale specifico (micro e macroelementi, carbonio
in forma organica, vitamine) in cui l’equilibrio tra i regolatori di crescita (citochinine ed auxine) è calibrato
in funzione dello stadio di sviluppo dell’espianto e dell’evento morfogenetico che si intende provocare.
Le tappe della micropropagazione possono essere in breve così indicate:
a) scelta e prelievo del materiale e sua sterilizzazione;
b) messa in coltura. L’introduzione in vitro (in tubi o vasi di coltura di dimensioni appropriate) può
essere fatta utilizzando una semplice soluzione agarizzata, con lo scopo di avere una conferma della
sterilità del materiale. In seguito, questo viene trasferito su mezzo minerale in grado di favorire:
- la crescita del tessuto aereo
- la proliferazione delle gemme
- la rizogenesi
c) acclimatazione, che prevede il passaggio dal vitro (costituito da un ambiente sterile, controllato e con
umidità ambientale vicina alla saturazione) all’esterno;
d) piantagione e controllo: può essere utile, infatti, testare l’adattabilità ad ambienti diversi delle piante
propagate ed eseguire prove comparative tra piante di uno stesso clone derivate da
micropropagazione e quelle ottenute attraverso radicazione di talea o innesto.
Germoglio di Cupressus sempervirens radicato in
vitro.
Risultati
Il risultato più evidente scaturito da nostre prove e confermato
dalla bibliografia, è l’evidente differenza nel comportamento di
espianti da tessuti di giovani semenzali rispetto a quello da
cipressi adulti. La capacità di organogenesi e di rigenerazione
della pianta, in genere, diminuisce passando dalla fase giovanile
vegetativa a quella adulta riproduttiva. Il tasso di proliferazione
è risultato alto per il materiale giovane di cipresso, mentre solo
pochissimi espianti da piante adulte hanno rigenerato. Inoltre gli
espianti da piante giovani si allungano rapidamente, mentre
quelli da piante adulte necessitano di numerose subcolture per
raggiungere un adeguato sviluppo che consenta successive
proliferazioni o il passaggio alla radicazione. L’uso di carbone
attivo è risultato efficace nelle fasi di allungamento perché viene
ridotto l’effetto negativo della BA (N6-benzyladenine) sullo
sviluppo del germoglio e sulla successiva radicazione.
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