universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

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4. Si aggiungono al medium completo 100 mL di FBS sterile (sotto cappa). Si conserva a 4°C. RPMI 1640 + 10% FBS-DCC Polvere pronta RPMI 1640 (Sigma) NaHCO3 2 g/L Glucosio 2,5 g/L Sodio piruvato 0,11 g/L Mix aminoacidi 10% Mix vitamine 10% Pennicillina-Streptomicina 5 mL/L di un mix da 10.000 UI FBS-DCC 10% Procedimento 1. Aggiungere la polvere pronta a 900 mL di acqua distillata, in una beuta da 1L e sciogliere bene la polvere su piastra agitante. Se il discioglimento dovesse risultare difficoltoso, aggiungere qualche goccia di HCl 1 M, facendo attenzione a non abbassare il pH al di sotto di 6,5. 2. Aggiungere il NaHCO3 e portare il pH a 7,2 con HCl 1 M, sempre mantenendo in agitazione. 3. Portare a volume di 1 L e prelevare 125 mL della soluzione, che andranno a costituire il medium incompleto. 4. Ai restanti 875 mL aggiungere tutti gli altri ingredienti. 5. Filtrare prima il medium incompleto e poi il completo utilizzando filtri disposable 0,22 μm da 500 mL. 6. Si conserva a 4°C. 88
STRIPAGGIO DEL SIERO DCC 24 ore prima disattivare il siero tenendolo in bagnetto per 1 ora a 56°C lasciare quindi a temperatura ambiente per 30 minuti. 1. Pesare 3 g di carbonio attivo e metterli nella bottiglia da 1 L apposta per DCC 2. Pesare 0,3 g di dextrano ed aggiungerlo al carbonio 3. Aggiungere 1 L di acqua distillata ed agitare per 30 minuti 4. Suddividere la soluzione in 4 recipienti da super centrifuga, mantenendola in agitazione 5. Centrifugare per 15 minuti a 2500g a temperatura ambiente 6. Scartare delicatamente il surnatante, in modo tale da non risospendere il pellet 7. Aggiungere il siero, suddividendolo in modo preciso nei 4 contenitori (500 mL di siero) 8. Agitare per 4 ore nell'incubatore agitante e termostatato a 37°C 9. Centrifugare per 15 minuti a 2500g a temperatura ambiente 10.Filtrare su filtro buchner, utilizzare 3 filtri della Whatman in sequenza D, A, C 11.Filtrare con filtro disposable 0,45 μm 12.Conservare a -20°C. 89
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INDICE Pagina INTRODUZIONE 1 1) Est
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3) Western blot Procedimento 93 93
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INTRODUZIONE GLI ESTROGENI E I LORO
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Estrogeni e progesterone sono i pri
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Struttura dei recettori degli estro
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A/B C D E F DBD LBD AF-1 AF-2 NLS d
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hERα hERβ N N AF-1 DNA LIGANDO C
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hanno un grado maggiore di omologia
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MECCANISMO D’AZIONE DEGLI ESTROGE
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A C E 2 E 2 nucleo nucleo E 2 R R i
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Fattori di modificazione degli isto
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sequenze similari al NR-box. Anche
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dell’IGF-I è mediata dalla PI3K
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mediata dall'interazione con altri
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ER e PI3K Uno degli effetti rapidi
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hanno proposto che i recettori di m
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INFIAMMAZIONE L’infiammazione, o
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anaerobica essi provocano nel terri
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le componenti dell'essudato, come l
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vacuolo attorno alla particella est
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Page 129 and 130: BIBLIOGRAFIA 1. Barnea, E.R., N.J.
Page 131 and 132: 33. Pike, A.C.W., A.M. Brzozowski,
Page 133 and 134: 63. Ignar-Trowbridge, D.M., M. Pime
Page 135 and 136: signaling in the cardiovascular sys
Page 137 and 138: to activation of the mitogen-activa
Page 139 and 140: 153. Firestein, G.S., The T cell co
Page 141 and 142: 185. Wang, D. and A.S. Baldwin, Act
Page 143 and 144: 217. Yin, M.J., Y. Yamamoto, and R.
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251. Wluka, A.E., F.M. Cicuttini, a
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estradiol-mediated protection again
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