universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

4. Si aggiungono al medium completo 100 mL di FBS sterile (sotto
cappa). Si conserva a 4°C.
RPMI 1640 + 10% FBS-DCC
Polvere pronta RPMI 1640 (Sigma)
NaHCO3 2 g/L
Glucosio 2,5 g/L
Sodio piruvato 0,11 g/L
Mix aminoacidi 10%
Mix vitamine 10%
Pennicillina-Streptomicina 5 mL/L di un mix da 10.000 UI
FBS-DCC 10%
Procedimento
1. Aggiungere la polvere pronta a 900 mL di acqua distillata, in una
beuta da 1L e sciogliere bene la polvere su piastra agitante. Se il
discioglimento dovesse risultare difficoltoso, aggiungere qualche
goccia di HCl 1 M, facendo attenzione a non abbassare il pH al di
sotto di 6,5.
2. Aggiungere il NaHCO3 e portare il pH a 7,2 con HCl 1 M, sempre
mantenendo in agitazione.
3. Portare a volume di 1 L e prelevare 125 mL della soluzione, che
andranno a costituire il medium incompleto.
4. Ai restanti 875 mL aggiungere tutti gli altri ingredienti.
5. Filtrare prima il medium incompleto e poi il completo utilizzando
filtri disposable 0,22 μm da 500 mL.
6. Si conserva a 4°C.
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