universita' degli studi di milano - Alessandro Guerini Rocco

Procedimento
1. Sciogliere la polvere in 900 mL di acqua distillata, mantenendo in
agitazione.
2. Aggiungere NaHCO3, lasciar sciogliere e quindi portare il pH a 7.2
con HCl 1N, mantenendo sempre in agitazione.
3. Portare a volume di 1 L con acqua bidistillata.
4. Prelevare 115 mL di soluzione, che costituiranno il medium
incompleto.
5. Ai restanti 885 mL, aggiungere gli altri ingredienti e lasciar agitare.
6. Sterilizzare per filtrazione, utilizzando filtri disposable 0,22 μm
(sotto cappa sterile). Si conserva a 4° C.
RPMI 1640 con rosso fenolo + 10% FBS
Polvere pronta RPMI 1640 con rosso fenolo (Invitrogen)
NaHCO3
2 g/L
Glucosio 2,5 g/L
Sodio piruvato 0,11 g/L
Penicillina-Streptomicina 5 mL/L di un mix da 10.000 UI
FBS 10%
Procedimento
1. Si scioglie la polvere per RPMI rosso in 1 L di acqua distillata,
mantenendo in agitazione. Si aggiunge NaHCO3 e si porta pH a 7,2
con HCl 1 N, sempre in agitazione.
2. Si prelevano 105 mL di soluzione, che costituiranno il medium
incompleto. Ai restanti 895 mL, si aggiungono tutti gli altri
ingredienti, tranne FBS, mantenendo sempre in agitazione.
3. Si filtra con filtro disposable 0,22 µm da 500 mL prima
l’incompleto e poi il medium completo.
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